CC BY
28
© Коллектив авторов, 2023
Шокина В.А.1, Матюшкина Д.С.1, Кривонос Д.В.1, Манувера В.А.2, Широков Д.А.2, 3, Харлампиева Д.Д.2, Лазарев В.Н.2, 4, Павленко А.В.1, Ильина E.^1, Румянцев А.Г.5, 6, Румянцев С.А.6, Иванов К.П.7, Хромова П.А.8, Баклаушев В.П.9, Корицкий А.В.7, Куропаткин В.А.10, Москалева Е.В.8, Огарков О.Б.8, Орлова Е.А.8, Петрова А.Г.8, Поженько Н.С.7, Пушкарь Д.Ю.11, Колонтарев К.Б.11, Колышкина Н.А.9, Рычкова Л.В.8, Самойлов А.С.10, Синьков В.В.8, Соловьева С.В.10, Троицкий А.В.9, Удалов Ю.Д.10, Юсубалиева Г.М.9, Говорун В.М.1
Гуморальный иммунный ответ на линейные и конформационные эпитопы SARS-CoV-2 у пациентов с COVID-19
1 Федеральное бюджетное учреждение науки «Научно-исследовательский институт системной биологии и медицины» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 117246, г. Москва, Российская Федерация
2 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины имени академика Ю.М. Лопухина Федерального медико-биологического агентства», 119435, г. Москва, Российская Федерация
3 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К. И. Скрябина» Министерства сельского хозяйства Российской Федерации, 109472, г. Москва, Российская Федерация
4 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Московский физико-технический институт (Национальный исследовательский университет)» Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, 141701, г. Долгопрудный, Российская Федерация
5 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии имени Дмитрия Рогачева» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация
6 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация
7 Научно-клинический центр № 3 Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Российский научный центр хирургии имени академика Б.В. Петровского» Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, 108840, г. Троицк, Российская Федерация
8 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека» Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, 664003, г. Иркутск, Российская Федерация
9 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный научно-клинический центр специализированных видов медицинской помощи и медицинских технологий Федерального медико-биологического агентства», 115682, г. Москва, Российская Федерация
10 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Государственный научный центр Российской Федерации - Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна» Федерального медико-биологического агентства, 123098, г. Москва, Российская Федерация
11 Государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Городская клиническая больница имени С.И. Спасокукоцкого Департамента здравоохранения города Москвы», 127206, г. Москва, Российская Федерация
Для корреспонденции
Матюшкина Дарья Сергеевна -кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории простых систем ФБУН НИИ СБМ Роспотребнадзора, Москва, Российская Федерация E-mail: d.matyushkina@gmail.com https://orcid.org/0000-0001-9535-5792
Резюме
Введение. СОУГО-19, вызванный коронавирусом тяжелого острого респираторного синдрома 2 (8ЛЯ8-СоУ-2), распространился по всему миру и кардинально изменил нашу привычную жизнь. Хотя 8ЛЯ8-СоУ-2 не обладает высокой летальностью по сравнению с возбудителями других вирусных заболеваний, такими как возбудитель атипичной пневмонии или возбудитель геморрагической лихорадки Эбола, он привел к развитию пандемии и к самому высокому числу смертей от инфекции за последние 20 лет. Основную роль в элиминации вируса из организма играют антитела, направленные против структурных белков 8ЛЯ8-СоУ-2, в первую очередь против белка шипа (8-белка).
Цель работы - анализ гуморального иммунного ответа пациентов с СОУГО-19 на уровне ^в-антител к линейным и конформационным эпитопам основных структурных белков 8ЛЯ8-СоУ-2 - нуклеокапсидного (М-белка) и белка шипа (8-белка).
Материал и методы. С помощью иммуноблоттинга и иммуноферментного анализа были определены и проанализированы уровни сывороточных ^в-антител к М- и 8-белкам 8ЛЯ8-СоУ-2 в 153 образцах сывороток, полученных от пациентов с диагнозом «СОУЮ-19».
Колонтарев К.Б., Колышкина Н.А., Рычкова Л.В., Самойлов А.С., Синьков В.В., Соловьева С.В., Троицкий А.В., Удалов Ю.Д., Юсубалиева Г.М., Говорун В.М. 39 Гуморальный иммунный ответ на линейные и конформационные эпитопы SARS-CoV-2 у пациентов с COVID-19
Результаты. Выявлены взаимосвязи между значениями коэффициента позитивности (КП) антител к N-белку и RBD-домену S-белка SARS-CoV-2 и возрастом пациента, потребностью пациента в кислороде и артериальной гипертонией. Мы показали: чем больше значение (КП) IgG-антител к RBD-домену S-белка, тем быстрее наступает выздоровление, что подтверждает роль RBD-домена как мишени для протективного иммунного ответа.
Заключение. Проведенное исследование показало, что для понимания течения заболевания COVID-19, прогнозирования развития у пациента пролонгированной формы и возможных осложнений, таких как переход на искусственную вентиляцию легких, необходим не только качественный, но и количественный анализ значений КП IgG-антител к линейным и конформационным эпитопам N- и S-белков SARS-CoV-2.
Ключевые слова: COVID-19; SARS-CoV-2; диагностика; антитела; иммуноглобулины
Статья получена 28.11.2022. Принята в печать 16.01.2023.
Для цитирования: Шокина В.А., Матюшкина Д.С., Кривонос Д.В., Манувера В.А., Широков Д.А., Харлампиева Д.Д., Лазарев В.Н., Павленко А.В., Ильина Е.Н., Румянцев А.Г., Румянцев С. А., Иванов К.П., Хромова П.А., Баклаушев В.П., Корицкий А.В., Куропаткин В.А., Москалева Е.В., Огарков О.Б., Орлова Е.А., Петрова А.Г., Поженько Н.С., Пушкарь Д.Ю., Колонтарев К.Б., Колышкина Н.А., Рычкова Л.В., Самойлов А.С., Синьков В.В., Соловьева С.В., Троицкий А.В., Удалов Ю.Д., Юсубалиева Г.М., Говорун В.М. Гуморальный иммунный ответ на линейные и конформационные эпитопы SARS-CoV-2 у пациентов с COVID-19. Иммунология. 2023; 44 (1): 38-52. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2023-44-1-38-52
Финансирование. Работа выполнена при поддержке государственного задания .№ 122030900051-9 Роспотреб-надзора «Создание отраслевой платформы для оценки протективности антигенов и потенциальных вакцинных препаратов».
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Вклад авторов. Концепция и дизайн исследования - Говорун В.М., Матюшкина Д.С.; постановка экспериментов - Шокина В.А., Манувера В. А., Широков Д.А., Харлампиева Д.Д., Лазарев В.Н.; сбор биологических образцов - Павленко А.В., Ильина Е.Н., Румянцев А.Г., Румянцев С.А., Иванов К.П., Хромова П.А., Баклаушев В.П., Корицкий А.В., Куропаткин В.А., Москалева Е.В., Огарков О.Б., Орлова Е.А., Петрова А.Г., Поженько Н.С., Пушкарь Д.Ю., Колонтарев К.Б., Колышкина Н.А., Рычкова Л.В., Самойлов А.С., Синьков В.В., Соловьева С.В., Троицкий А.В., Удалов Ю.Д., Юсубалиева Г.М.; статистическая обработка - Кривонос Д.В.; написание текста, редактирование - Шокина В.А., Матюшкина Д.С.; окончательный вариант и целостность текста - Матюшкина Д. С.
Shokina V.A.1, Matyushkina D.M.1, Krivonos D.V.1, Manuvera V.A.2, Shirokov D.A.2' 3, Kharlampieva D.D.2, Lazarev V.N.2' 4, Pavlenko A.V.1, Ilina E.N.1, Rumyantsev A.G.5' 6, Rumyantsev S.A.6, Ivanov K.P.7, Khromova P.A.8, Baklaushev V.P.9, Koritsky A.V.7, Kuropatkin V.A.10, Moskaleva E.V.8, Ogarkov O.B.8, Orlova E.A.8, Petrova A.G.8, Pozhenko N.S.7, Pushkar D.Yu.11, Kolontarev K.B.11, Kolyshkina N.A.9, Rychkova L.V.8, Samoilov A.S.10, Sinkov V.V.8, Solovieva S.V.10, Troitsky A.V.9, Udalov Yu.D.10, Yusubalieva G.M.9, Govorun V.M.1
Humoral immune response to linear and conformational epitopes of SARS-CoV-2 in patients with COVID-19
1 Scientific Research Institute for Systems Biology and Medicine (RISBM) of the Russian Federal Consumer Rights Protection and Human Health Control Service, 117246, Moscow, Russian Federation
2 Yu.M. Lopukhin Federal Research and Clinical Center of Physical-Chemical Medicine of Federal Medical Biological Agency, 119435, Moscow, Russian Federation
3 Moscow state Academy of Veterinary Medicine and Biotechnology - MVA by K.I. Skryabin of the Ministry of Agriculture of the Russian Federation, 109472, Moscow, Russian Federation
4 Moscow Institute of Physics and Technology (National Research University) of the Ministry of Science and High Education of the Russian Federation, 141701, Dolgoprudny, Moscow Region, Russian Federation
5 Dmitry Rogachev National Medical Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology of the Ministry of Health of the Russian Federation, 117997, Moscow, Russian Federation
6 N.I. Pirogov Russian National Research Medical University of the Ministry of Health of the Russian Federation, 117997, Moscow, Russian Federation
7 Russian Scientific Center for Surgery named after Academician B.V. Petrovsky of the Ministry of Science and High Education of the Russian Federation, 108840, Troitsk, Russian Federation
8 Scientific Centre for Family Health and Human Reproduction Problems of the Ministry of Science and High Education of the Russian Federation, 664003, Irkutsk, Russian Federation
9 Federal Clinical and Research Center for Specialized Medical Care and Technologies, Federal Medical and Biological Agency, 115682, Moscow, Russian Federation
10 State Research Center - A.I. Burnasyan Federal Medical Biophysical Center of Federal Medical Biological Agency, 123098, Moscow, Russian Federation
11 City Clinical Hospital named after S.I. Spasokukotsky of Moscow Healthcare Department, 127206, Moscow, Russian Federation
Abstract
Introduction. Coronavirus disease 2019 (COVID-19) is caused by infection with the severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2), spread all over the world and changed our daily lives. Although SARS-CoV-2 does not have a high lethality compared to other viruses such as virus of atypical pneumonia or Ebola virus, it has nevertheless led to the development of a pandemic and a very high numbers of deaths from the infection in the last 20 years. Antibodies against structural proteins, primarily to the spike protein of the SARS-CoV-2, play a main role in the elimination of the virus from the body.
Aim - analysis of the humoral immune response of patients with COVID-19 at the level of IgG antibodies to linear and conformational epitopes of the main structural proteins of the SARS-CoV-2 -nucleocapsid (N) and spike (S) proteins.
Material and methods. Using Western blot and enzyme immunoassay, IgG binding from the sera of 153 patients diagnosed with COVID-19 and conducted a correlation analysis with demographic and clinical indicators.
Results. Direct correlations were found between the values of the coefficient of positivity (CP) of antibodies to the N protein and RBD and the age of the patient, the patient's need for oxygen and arterial hypertension. We have shown that the greater the CP value of IgG antibodies to the RBD domain of the S protein the faster the recovery occurs, which confirms the role of the RBD domain as a target for the protective immune response.
Conclusion. The study showed that in order to understand the course of the COVID-19 disease, predict the development of a prolonged form in a patient, and possible complications, such as switching to artificial lung ventilation, it is necessary not only to qualitatively but also quantitatively analyze the values of the CP of IgG antibodies to conformational and linear epitopes of the N and S proteins of the SARS-CoV-2.
Keywords: COVID-19; SARS-CoV-2; diagnostics; antibodies; immunoglobulins
Received 28.11.2022. Accepted 16.01.2023.
For citation: Shokina V.A., Matyushkina D.M., Krivonos D.V., Manuvera V.A., Shirokov D.A., Kharlampieva D.D., Lazarev V.N., Pavlenko A.V., Ilina E.N., Rumyantsev A.G., Rumyantsev S.A., Ivanov K.P., Khromova P.A., Bak-laushev V.P., Koritsky A.V., Kuropatkin V.A., Moskaleva E.V., Ogarkov O.B., Orlova E.A., Petrova A.G., Po-zhenko N.S., Pushkar D.Yu., Kolontarev K.B., Kolyshkina N.A., Rychkova L.V., Samoilov A.S., Sinkov V.V., So-lovieva S.V., Troitsky A.V., Udalov Yu.D., Yusubalieva G.M., Govorun V.M. Humoral immune response to linear and conformational epitopes of SARS-CoV-2 in patients with COVID-19. Immunologiya. 2023; 44 (1): 38-52. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2023-44-1-38-52 (in Russian)
Funding. The study was supported by the State task No. 122030900051-9 of the Rospotrebnadzor «Creation of an industry platform for assessing the protectiveness of antigens and potential vaccine preparations».
Conflict of interests. The authors declare no conflict of interests.
Authors' contribution. The concept and design of the study - Govorun V.M., Matyushkina D.S.; performing experiments - Shokina V. A., Manuvera V.A., Shirokov D.A., Kharlampieva D.D., Lazarev V.N.; collection of biological samples - Pavlenko A.V., Ilyina E.N., Rumyantsev A.G., Rumyantsev S.A., Ivanov K.P., Khromova P. A., Baklaushev V.P., Koritsky A.V., Kuropatkin V.A., Moskaleva E.V., Ogarkov O.B., Orlova E.A., Petrova A.G., Pozhenko N.S., Pushkar D.Yu., Kolontarev K.B., Kolyshkina N.A., Rychkova L.V., Samoilov A.S., Sinkov V.V., Solovieva S.V, Troitsky A.V., Udalov Yu.D., Yusubalieva G.M.; statistical processing - Krivonos D.V.; draft writing, editing - Shokina V.A., Matyushkina D.S.; the final version and the integrity of the text - Matyushkina D.S.
For correspondence
Daria S. Matyushkina -PhD, Leader Researcher of Simple Systems Lab. of the RISBM, Rospotrebnadzor, Moscow, Russian Federation E-mail: d.matyushkina@gmail.com https://orcid.org/0000-0001-9535-5792
Введение
В конце 2019 г. мир столкнулся с новым инфекционным агентом - коронавирусом тяжелого острого респираторного синдрома-2 (8ЛЯ8-СоУ-2). Вызываемое им заболевание получило обозначение СОУГО-19. В марте 2020 г. Всемирной организацией здравоохранения была объявлена пандемия СОУШ-19.
По состоянию на январь 2023 г. в мире COVID-19 диагностирован у более чем 667,9 млн человек, более 6,7 млн человек умерли (https://coronavirus.jhu.edu/map. html).
Степень тяжести заболевания COVID-19 варьирует от бессимптомной и легкой степени до тяжелого течения с дальнейшим смертельным исходом. Хотя стати-
Колонтарев К.Б., Колышкина Н.А., Рычкова Л.В., Самойлов А.С., Синьков В.В., Соловьева С.В., Троицкий А.В., Удалов Ю.Д., Юсубалиева Г.М., Говорун В.М. 41 Гуморальный иммунный ответ на линейные и конформационные эпитопы SARS-CoV-2 у пациентов с COVID-19
стика показывает меньшую летальность при СОУГО-19 по сравнению с другими опасными инфекционными заболеваниями [1], переболевшие пациенты с СОУГО-19 встречаются с длительными тяжелыми последствиями данной болезни, симптомы которых объединяет новый термин - постковидный синдром. Самые частые симптомы постковидного синдрома - одышка, усталость, сердечные осложнения, нарушение функции легких, реже аутоиммунные реакции вследствие чрезмерного иммунного ответа, инсульт и др. [2, 3].
Мультисистемный воспалительный синдром (МВС), который может проявляться как во время инфекции, вызванной 8ЛЯ8-СоУ-2, так и после нее, хоть и является редким, затрагивает сразу несколько органов, включая сердце, легкие, почки и головной мозг [4]. Показано, что МВС чаще встречается у детей, чем у взрослых [5]. Исследователи и врачи пытаются выявить маркеры -предикторы развития тяжелого течения СОУГО-19 [6], но это направление все равно нуждается в дальнейших исследованиях.
8ЛЯ8-СоУ-2 представляет собой оболочечный вирус с несегментированным одноцепочечным РНК-геномом [7], являющийся членом семейства Согопттйае (СоУ). Геном коронавирусов составляет примерно 26-32 т.п.н., и они являются самыми крупными из известных в настоящее время РНК-вирусов.
В геноме 8ЛЯ8-СоУ-2 содержатся гены, кодирующие 4 основных структурных белка - белок шипа (8), белок оболочки (Е), мембранный белок (М) и белок нуклеокапсида (№), а также 15 неструктурных белков (М8Р1-10, ШР12-16) и 8 вспомогательных белков [7].
8-белок, который состоит из двух субъединиц - 81 и 82, играет важную роль в проникновении корона-вируса в клетки хозяина для дальнейшей репликации. В состав 81-субъединицы входят внеклеточный М-концевой домен (N70) и рецептор-связывающий домен (ИВО). 82-субъединица состоит из пептида слияния (РР), гептадных повторов НЯ1 и НЯ2, трансмембранного домена (ТМО) и короткого внутриклеточного С-концевого домена (СМО) [8]. ИВО-домен 8-белка коронавируса связывается с рецептором - ангиотен-зин-превращающим ферментом 2-го типа (ЛСЕ2) на поверхности клеток хозяина, способствуя прикреплению вируса, а 82 обеспечивает слияние и проникновение вируса в клетку. М-белок вируса 8ЛЯ8-СоУ-2 необходим для упаковки РНК и сборки нуклеокапсида вируса.
Хотя большинство антител у пациентов с СОУШ-19 направлены против М-белка, они не являются нейтрализующими по сравнению с антителами, направленными против 8-белка [9, 10]. М-белок, а также ИВО-и 82-домены 8-белка являются важными молекулами для осуществления жизненного цикла 8ЛЯ8-СоУ-2 и проявляют себя в качестве сильных иммуногенов.
Цель настоящего исследования - анализ содержания сывороточных IgG-антител к линейным и конформаци-онным эпитопам основных структурных белков (М-белка и 8-белка) 8ЛИ8-СоУ-2 у пациентов с СОУГО-19.
По результатам данной работы с помощью имму-ноферментного анализа и вестерн-блоттинга была охарактеризована российская выборка пациентов, находящихся в стационаре с диагнозом «COVID-19», и найдена зависимость между значениями коэффициента позитивности (КП) антител к линейным и кон-формационным антигенам структурных белков ко-ронавируса (N-белку, RBD- и 82-доменам S-белка) и клинической картиной заболевания.
Определение зависимости между симптомами, наблюдаемыми у пациентов, и наличием антител против линейных и конформационных антигенов разных структурных белков SARS-CoV-2 потенциально может послужить основой для профессиональных и клинических рекомендаций в отношении требований к вакцинации и прогнозированию течения заболевания у пациентов с COVID-19.
Материал и методы
Участники исследования. Исследование проведено в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» (WMA Declaration of Helsinki -Ethical Principles for Medical Research Involving Human Subjects, 2013) и действующими в Российской Федерации нормативными документами, регламентирующими порядок проведения исследований с привлечением добровольцев. От участников исследования получено добровольное информированное согласие. Исследование одобрено локальным этическим комитетом ФГБУ «Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины Федерального медико-биологического агентства» (протокол № 2020/07).
В данной работе представлены результаты обследования 153 пациентов с COVID-19. Диагноз «COVID-19» верифицировали по положительному ПЦР-тесту на РНК SARS-CoV-2 и наличию поражения легких, выявленному с помощью компьютерной томографии (КТ).
У каждого пациента с COVID-19 сбор образцов сыворотки проводили в 4 временные точки. Точка первая (t1) - при поступлении в стационар (в среднем это был 10-12-й день от начала заболевания); точка вторая (t2) -через 48 ч после поступления в стационар; точка третья (t3) - через 7 дней после поступления в стационар; четвертая точка (t7) - день выписки из стационара. Все результаты по анализу различий между группами проводили для точки t7.
Сыворотки пациентов с COVID-19 получали в больнице ФГБУ РАН (г. Троицк), клинике ФГБНУ НЦ ПЗСРЧ (г. Иркутск), ФГБУ ФНКЦ ФМБА России (г. Москва), ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России (г. Москва) и ГКБ им. С.И. Спасокукоцкого (г. Москва). При сборе сыворотку аликвотировали и хранили при температуре -80 оС.
Получение рекомбинантных вирусных белков. Плазмиды для экспрессии в эукариотической системе
Распределение по возрасту пациентов женского пола
Распределение по возрасту пациентов мужского пола
12—1
10-
м 8' о
и ц
а 6-
п
и
* 4
2-
0-1
□
30 40 50 60 70 80 90 Возраст
10 -1
8-
6-
п о
исло 4
2-
0-1
20 30 40 50 60 70 80 90 100 Возраст
Рис. 1. Распределение по возрасту женщин (п = 73) и мужчин (п = 80) в обследованной выборке пациентов с СОУ1Б-19
белков SARS-Cov-2 (N-белка, RBD- и 82-доменов S-белка) были любезно предоставлены Дэвидом Гордо -ном [11].
Для выделения целевых белков собирали транс-фецированные клетки Expi293 c площади 75 см2 (использовали Cell dissociation buffer enzyme-free Hanks' based, Gibco, Life technologies, США) и 15 мл культу -ральной среды. Полученную суспензию обрабатывали ультразвуком (Branson Sonifier 250, VWR Scientific, Канада, Duty cycle 90, output 4, 15 пульсов). Центрифугировали при 11 000 g 5 мин при 4 °С. К осветленному лизату добавляли 100 мкл подготовленного сорбента Ni Sepharose High Performance (GE Healthcare, США), инкубировали 15 мин при комнатной температуре, периодически помешивая. Белки элюировали с помощью буфера с 8 М мочевиной, 20 мМ Трис-HCl, 500 мМ NaCl, 500 мМ имидазолом, pH = 7,5. Центрифугировали при 1000 g 1 мин, 4 °С. Супернатант, содержащий целевые белки, переносили в новые пробирки. Выделенные белки анализировали при помощи электрофореза в полиакриламидном геле в денатурирующих условиях.
Иммуноферментный анализ. Уровень IgG-антител в образцах сыворотки крови пациентов с COVID-19 определяли с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) «SARS-CoV-2 IgG» (нПФ «Литех», Россия) и «SARS-CoV-2-IgG-ИФА» («Центр инноваций биотехнологии Аллель», Россия). Непрямой ИФА выполняли согласно инструкции производителя. В работе использовали коммерческие наборы, включающие 96-луноч-ные планшеты с сорбированными рекомбинантными N-белком, S2- или RBD-доменом S-белка SARS-CoV-2. В каждую лунку добавляли раствор для разведения сыворотки и сыворотку от пациента с COVID-19 в разведении 1 : 11, а затем инкубировали при 37 °С в течение
30 мин. Лунки с образцами промывали 5 раз промывочным буфером. После промывки добавляли 100 мкл конъюгата (моноклональные антитела к IgG человека, конъюгированные с пероксидазой хрена, GE Healthcare, США) и инкубировали при 37 °С в течение 30 мин, после чего добавляли тетраметилбензидин гидрохлорид в объеме 100 мкл и инкубировали при 37 °С в течение 10 мин в темноте. После этого в каждую лунку добавляли по 100 мкл стоп-раствора и сразу же измеряли оптическую плотность (ОП) лунок с образцами при 450 и 620-650 нм.
Расчет ОП = ОП (K-) + 0,2, где ОП (K-) -
крит v 'среднее ^ ^ v 'среднее
среднее значение оптической плотности отрицательного контроля (K-) по двум лункам.
Результат анализа был представлен коэффициентом позитивности (КП):
КП = ОП R / ОП
образца крит.
Результат анализа был положительным при КП > 1,1 и отрицательным при КП < 0,9. КП в пределах 0,91,1 считается пограничным результатом.
Вестерн-блот-анализ. Структурные рекомбинант-ные белки (N, RBD, S2) SARS-CoV-2 растворяли в буфере Лэммли для нанесения образцов (BioRad, страна) и разделяли в денатурирующих условиях с помощью одномерного белкового электрофореза в полиакрил-амидном геле с добавлением додецилсульфата натрия (1D SDS-ПААГ, 10 % ПААГ, гели длиной 7 см.
Гель переносили на предварительно активированную 100 % метанолом поливинилиденфторидную (ПВДФ) мембрану (Amersham Hybond P 0,45 PVDF, GE Healthcare Life Sciences, США) при постоянной силе тока 100 мА. Мембрану блокировали фосфатным буфе-
Колонтарев К.Б., Колышкина Н.А., Рычкова Л.В., Самойлов А.С., Синьюэв В.В., Соловьева С.В., Троицкий А.В., Удалов Ю.Д., Юсубалиева Г.М., Говорун В.М. 43 Гуморальный иммунный ответ на линейные и конформационные эпитопы SARS-CoV-2 у пациентов с COVID-19
Э
у
80 -1
60-
40-
Щ 20-
& С
0J
Э
30 -,
25-
20-
=
У
15-
10-
5-
0J
3
20-39 40-59 60-90
Возрастные диапазоны, годы
20-39 40-59 60-90
Возрастные диапазоны, годы
э
=
у
8-1
6-
4-
2-
0-1
♦
20-39 40-59 60-90
Возрастные диапазоны, годы
Рис. 2. А - зависимость процента поражения легочной ткани от возраста пациента с СОУШ-19 (п = 153, р < 0,01); Б - зависимость значений коэффициента позитивности (КП) ^в-антител к М-белку от возраста пациента с СОУШ-19 (п = 93, р = 0,36); В - зависимость значений КП ^в-антител к ИВО-домену 8-белка от возраста пациента с СОУГО-19 (п = 95,р < 0,03)
ром, содержащим 0,05 % Твин-20 и 3 % обезжиренного молока (Blotting-Grade Blocker, Bio-Rad, США) при 4 oC в течение ночи.
Образцы сыворотки, полученные от пациентов, разводили 1 : 50 и инкубировали с мембранами при комнатной температуре в течение 1 ч. После отмывки мембраны от несвязавшихся антител ее инкубировали с козьими антителами против IgG человека, конъюги-рованными с пероксидазой хрена (Millipore, США) в разведении 1 : 50 000 и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч.
Детектирование связавшихся с первичными антителами белковых полос проводили с помощью детектирующего буфера (ECL Plus Western Blotting Detection System, GE Healthcare, США) и прибора ChemiDoc XRS+ (BioRad, США). При детекции сигнала на каждой мембране хемилюминесцентный сигнал получали при одинаковом времени экспозиции. Наличие сигнала определяли с помощью программы Quantity One 1-D Analysis Software. Если детектируемый сигнал выше уровня фона, он автоматически считывается программой как положительный «+», в противном случае - как отрицательный «-».
Э
30 -,
25-
20-
§ 15
10-
5-
0-1
Да Нет
Потребность в дополнительной оксигенации
э
8-,
7-
6-
5-
П
« 4-\
3-
2-
1-
0-1
jjiL
^Sff*
«ЙГ
-tauaa-
Да Нет
Потребность в дополнительной оксигенации
Рис. 3. А - зависимость потребности в дополнительной оксигенации от значений коэффициента позитивности (КП) антител к Ы-белку (п = 93; />-уа1ие = 0,0158); Б - зависимость потребности в дополнительной оксигенации от значений КР антител к КВБ-домену Б-белка (п = 95; />-уа1ие = 0,00043)
Статистический анализ. Для оценки статистической значимости различий между возрастными группами по проценту поражения легких и по значениям КП антител к Ы-белку и КВБ-домену Б-белка использовали непараметрический тест Краскела-Уоллиса, для попарного сравнения - тест ^/-критерия Манна-Уитни с поправкой на множественное тестирование Бенджа-мини-Хохбега.
Оценка различий между группами курящих и некурящих людей по значениям КП антител к конфор-мационным и линейным формам белков N, S2, RBD проводилась с помощью точного теста Фишера. Для оценки различий между группами по значениям КП антител в разных временных точках использовали односторонний дисперсионный анализ (one way ANOVA) с поправкой на множественное сравнение
8 -j
6-
S 4Н
2-
0J
Э
8 -| 76543210-
г
••
•
•
От 3 до 8 дней От 9 до 22 дней
Дни болезни
1-я волна
2-я волна
Волна
Рис. 4. А - зависимость числа дней, которые пациент провел стационаре, от значений коэффициента позитивности (КП) антител к RBD-домену S-белка (p < 0,005); Б - значения КП антител к RBD-домену S-белка пациентов 1-й и 2-й волн пандемии COVID-19 (Р < 0,03)
Шокина В.А., Матюшкина Д.С., Кривонос Д.В., Манувера В.А., Широков Д.А., Харлампиева Д.Д., Лазарев В.Н., Павленко А.В., Ильина Е.Н., Румянцев А.Г., Румянцев С.А., Иванов К.П., Хромова П.А., Баклаушев В.П., Корицкий А.В., Куропаткин В.А., Москалева Е.В., Огарков О.Б., Орлова Е.А., Петрова А.Г., Поженько Н.С., Пушкарь Д.Ю., Колонтарев К.Б., Колышкина Н.А., Рычкова Л.В., Самойлов А.С., Синьюэв В.В., Соловьева С.В., Троицкий А.В., Удалов Ю.Д., Юсубалиева Г.М., Говорун В.М.
Гуморальный иммунный ответ на линейные и конформационные эпитопы SARS-CoV-2 у пациентов с COVID-19
э
30-
20-
=
У
10-
Э
8п
6-
§ 4-
2-
0J
••
■t •
1 f
9 ♦ I
• r
•
•i
Э
Результаты вестерн-блота
Результаты вестерн-блота
Результаты вестерн-блота
Рис. 5. Зависимость значений коэффициента позитивности (КП) ^в-антител, полученных с помощью ИФА, и наличия антител к линейным эпитопам (р < 0,005): А - М-белка (п = 94); Б - ИВО-домена 8-белка (п = 96); В - 82-домена 8-белка (п = 81)
0
+
+
+
Бенджамини-Хохберга. В остальных случаях оценки значимость между группами оценивали с использованием ^/-критерия Манна-Уитни. Все графики построены с помощью библиотек Seaborn и Matplotlib в Python 3.
Результаты
В первую очередь исследуемая выборка (n = 153) была охарактеризована по основным демографическим признакам (пол и возраст) (рис. 1).
Кроме того, был проведен анализ на наличие взаимосвязи между поражением легочной ткани и возрастом пациентов с COVID-19 (рис. 2А). Были определены значимые различия между возрастными группами (20-39 лет) и (60-90 лет), p = 0,01, а также между группами (20-39 лет) и (40-59 лет), p = 0,03, в связи с чем можно сделать вывод, что у пациентов в возрастной
группе от 20 до 39 лет при поступлении в стационар процент поражения легочной ткани был ниже по сравнению с пациентами от 40 до 90 лет.
Различия значений КП ^в-антител к М-белку между возрастными группами пациентов с СОУ1О-19 были статистически недостоверны (р = 0,36) (рис. 2Б). По результатам ИФА были выявлены различия между группами в уровне антител к ИВО-домену 8-белка с возрастом пациента (рис. 2В). Были определены значимые различия между возрастными группами 20-39 и 60-90 лет, р = 0,04. Таким образом, чем выше возраст пациента, тем выше титр антител к ИВО-домену 8-белка. Кроме того, мы обнаружили зависимость между значениями КП ^в-антител к М-белку и ИВО-домену 8-белка и потребностью пациентов в кислороде (рис. 3): чем выше значения КП, тем чаще пациенты нуждались в дополнительной оксигенации.
Сопутствующие заболевания у пациентов с COVID-19 (n = 153)
Сопутствующее заболевание Число пациентов Доля пациентов с сопутствующими заболеваниями среди всех пациентов, %
Ожирение 36 23,5
Артериальная гипертония 84 54,9
Ишемическая болезнь сердца 112 19,6
Хроническая сердечная недостаточность 12 7,8
Фибрилляция предсердий 4 2,6
Сахарный диабет 27 17,6
Курение в настоящее время 6 3,9
Курение в прошлом 17 11,1
Хроническая обструктивная болезнь легких 5 3,3
Бронхиальная астма 1 0,7
Ревматоидный артрит 2 1,3
Туберкулез 2 1,3
Воспалительные заболевания кишечника 1 0,7
Цирроз печени 1 0,7
Пациенты без описанных выше заболеваний в анамнезе 39 25,5
30 -,
20-
=
У
10-
0-1
•• •
•1 с
••• •и«*
ПГ
Э
8 -1
6-
В 4-
2-
0-1
№
1
э
8 -I
6-
В 4"!
2-
0-1
* 1 •1 • * ••
ч
Да
Нет
Да
Нет
Да
Нет
Рис. 6. А - зависимость значений коэффициента позитивности (КП) ]^0-антител к ЯВБ-домену Б-белка от наличия артериальной гипертонии (п = 94; р < 0,005); Б - зависимость значений КП антител к Ы-белку от наличия артериальной гипертонии (п = 96; р < 0,005); В - зависимость значений КП антител к ЯВБ-домену Б-белка от курения табака (п = 92; р < 0,005)
Время пребывания пациентов с СОУГО-19 в стационаре ГКБ им. С.И. Спасокукоцкого от момента поступления до выписки варьировало от 3 до 21 дня. Мы проанализировали значения КП антител, связывающих ЯВБ-домен Б-белка, из сывороток пациентов с СОУЮ-19 на момент выписки (17). По результатам ИФА была выявлена зависимость значений КП антител, связывающих ЯВБ-домен Б-белка, от количества дней, которые пациент с СОУЮ-19 провел в стационаре (рис. 4 А).
Чем выше уровень против ЯВБ-домена Б-белка, тем быстрее наступает выздоровление. Это связано с тем, что именно ЯВБ-домен Б-белка вируса БАЯБ-СоУ-2 непосредственно участвует в прикреплении вируса к клетке хозяина, а нейтрализующие антитела, направленные на ЯВБ-домен Б-белка, блокируют связывание вируса, не давая ему возможности продолжить свой жизненный цикл [11].
В рамках одной больницы мы имели данные пациентов 1-й (весна 2020 г.) и 2-й (осень 2020 г.) волн пандемии СОУГО-19. Мы обнаружили, что значение КП ^в-антител к ЯВБ-домену Б-белка было меньше у пациентов 1-й волны пандемии по сравнению со 2-й волной. Это может быть связано с тем, что во время 2-й волны пациенты могли ранее переболеть СОУГО-19 или сделать прививку против этого заболевания. Более того, 2-я волна пандемии была вызвана дельта-вариантом коронавируса, который был более контагиозным, чем вариант, вызвавший 1-ю волну заболеваемости. Данные факторы могли служить причинами более выраженного гуморального иммунного ответа.
Значимых соответствий между антителами, направленными только против линейных эпитопов белков 8АЯБ-СоУ-2, и тяжестью течения заболевания, а также процентом поражения ткани легких пациентов не обнаружено. Однако определена взаимосвязь с результатами, полученными с помощью ИФА: чем выше значение КП ^в-антител к ЯВБ- и Б2-доменам Б-белка и к
Ы-белку, тем чаще у пациентов с СОУГО-19 при выписке были обнаружены антитела против линейных эпи-топов структурных белков вируса (рис. 5). Отчасти это может быть связано с тем, что с помощью ИФА могут детектироваться антитела и к линейным эпитопам.
Нам не удалось обнаружить статистически значимых различий между значениями КП антител и сопутствующими заболеваниями пациентов, такими как ожирение, сахарный диабет и др. (см. табл.). Однако мы обнаружили, что у курящих пациентов с СОУШ-19 уровень к ЯВБ-домену Б-белка достоверно ниже, чем у некурящих (рис. 6В). Помимо этого, значения КП ^в-антител к ЯВБ-домену Б-белка и к Ы-белку, был выше у пациентов с СОУГО-19, имеющих также артериальную гипертонию (рис. 6А, Б).
Чтобы проследить динамику уровней ^в-антител к структурным белкам 8АЯБ-СоУ-2, нами были отобраны 33 пациента, у которых образцы сыворотки была собрана на всех четырех временных точках. Медиана значений КП антител к структурным белкам БАЯБ-СоУ-2 показывает, что значение КП ^в-антител выходит на плато через 7 дней (13) после госпитализации и не снижается на момент выписки (17), при этом у пациентов с СОУТО-19 наибольшее значение КП наблюдается для ^в-антител к Ы-белку, ниже - для ^в-антител к Б2-домену Б-белка, а меньше всего - для ^в-антител к ЯВБ-домену Б-белка (рис. 7).
Обсуждение
Последствия пандемии СОУГО-19 показали, что важно не только элиминировать возбудителя из организма, но и наиболее корректно прогнозировать течение уже развившегося заболевания для выбора наиболее правильной тактики лечения и ведения пациентов. В связи с этим нами был проведен анализ гуморального иммунного ответа пациентов с СОУГО-19 на линейные и конформационные эпитопы вирусных белков с помощью ИФА и вестерн-блоттинга.
Колонтарев К.Б., Колышкина Н.А., Рычкова Л.В., Самойлов А.С., Синьков В.В., Соловьева С.В., Троицкий А.В., Удалов Ю.Д., Юсубалиева Г.М., Говорун В.М. 47 Гуморальный иммунный ответ на линейные и конформационные эпитопы SARS-CoV-2 у пациентов с COVID-19
Э
t2 t3 t7
Временная точка - Медиана титра антител к RBD-домену S-белка (33 пациента)
t2 t3
Временная точка - Медиана титра антител к N-белку (33 пациента)
э
30-
25-
20-
15
10
t7
t2 t3 t7
Временная точка - Медиана титра антител к S2-домену S-белка (33 пациента)
Рис. 7. Динамика уровней ^в-антител к ИВО-домену 8-белка (А), 82-домену 8-белка (В) и М-белку (Б) вируса 8ЛИ8-СоУ-2 у пациентов с СОУ1О-19: И - при поступлении в стационар; И - через 48 ч после поступления в стационар; 13 - через 7 дней после поступления в стационар; 17 - день выписки из стационара
5
0
t1
t1
t1
Большему риску осложнений и тяжелому течению СОУ1О-19 подвержены пациенты пожилого возраста [12, 13]. Действительно, повреждение легочной ткани выше у старшего поколения (см. рис. 2Л). По результатам ИФА выявлена взаимосвязь между значениями КП ^в-антител к ИВО-домену 8-белка и возрастом пациента (см. рис. 2В), пациенты с СОУ1О-19 от 40 лет имели КП ^в-антител к ИВО-домену 8-белка выше, чем пациенты 20-39 лет. С возрастом интенсивность иммунных реакций снижается, процесс распознавания собственных и чужеродных антигенов становится менее точным, в связи с этим у пожилых людей могут накапливаться антитела, не оказывающие положительного эффекта на нейтрализацию вируса. Интересно, что пациенты, которые нуждались в дополнительном кислороде при поступлении в стационар, на момент выписки из стационара имели КП антител к М-белку и ИВО-домену 8-белка выше по сравнению с теми, кто не нуждался в дотации кислорода (рис. 3).
Показано, что курение сигарет повышает риск сердечно-сосудистых заболеваний и развития инфекционных респираторных заболеваний. У курящих пациентов с СОУ1О-19 показана более высокая вирусная нагрузка в организме по сравнению с некурящими пациентами [14]. Это связывают с тем, что у курящих людей увеличивается экспрессия ЛСЕ2-рецептора и ТМРИ882, однако полученные данные подвергаются критике [15]. В нашем исследовании также выявлена за-
висимость между низкими значениями КП ^в-антител к ИВО-домену 8-белка и курением табачной продукции (см. рис. 6В). Поскольку антитела против ИВО-домена 8-белка в основном являются вирус-нейтрализующими, курение может считаться существенным неблагоприятным фактором течения СОУГО-19.
В исследуемой выборке выявлена зависимость между значениями КП ^в-антител к М-белку и ИВО-домену 8-белка и наличием у пациента артериальной гипертонии (см. рис. 6А, Б). Текущие клинические данные свидетельствуют о том, что у пациентов с СОУГО-19 артериальная гипертония является одним из наиболее частых сердечно-сосудистых сопутствующих заболеваний, которое способствует неблагоприятному прогнозу при СОУГО-19, однако вызывающий такой исход механизм пока плохо изучен [16].
Заключение
В связи с полученными результатами можно сделать вывод, что для понимания течения СОУГО-19, прогнозирования развития у пациента пролонгированной формы и возможных осложнений, таких как переход на искусственную вентиляцию легких, необходим не только качественный, но и количественный анализ КП ^в-антител к М-белку и доменам 8-белка 8ЛЯ8-СоУ-2. Кроме того, более полную картину может дать информация о наличии антител не только к конформационным, но и к линейным эпитопам антигенов.
■ Литература
1. Wilder-Smith A. COVID-19 in comparison with other emerging viral diseases: risk of geographic spread via travel. Trop Dis Travel Med
Vaccines. 2021; 7 (3): 1-11. DOI: https://www.doi.org/10.1186/s40794-020-00129-9
2. Zhao Y., Yang C., An X., Xiong Y., Shang Y., He J., Qiu Y., Zhang N., Huang L., Jia J., Xu Q., Zhang L., Zhao J., Pei G., Luo H., Wang J., Li Q., Gao Y., Xu A. Follow-up study on COVID-19 survivors one year after discharge from hospital. Int J Infect Dis. 2021; 112: 173-82. DOI: https://www.doi.org/10.1016/j.ijid.2021.09.017
3. Qil B., Kabak M. Persistent Post-COVID Symptoms and the Related Factors. Turk Thorac J. 2022; 23 (1): 6-10. DOI: https://www.doi. org/10.5152/TurkThoracJ.2022.21112
4. Османов И.М., Хегай И.М., Трунина И.И., Чеботарева Т.А., Чебуркин А.А., Шумилов П.В. Иммунопатогенез мультисистемного воспалительного синдрома, связанного с COVID-19, у детей. Иммунология. 2022; 43 (1): 217-23. DOI: https://www.doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-1-217-223
5. Bayram Y.E., Yildiz-Sevgi D., Yavuz A., Cancetin M., Yavuz Gurler M. Management skin manifestation of multisystem inflammatory syndrome associated with SARS-CoV-2. Virology J. 2022; 19 (1): 1-9. DOI: 10.1186/s12985-021-01736-4
6. Сизякина Л.П., Закурская В.Я., Скрипкина Н.А., Антонова Е.А. Уровень ферритина как предиктор тяжелого течения COVID-19. Иммунология. 2021; 42 (5): 518-25. DOI: https://www.doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-4-518-525
7. Su S., Wong G., Shi W., Liu J., Lai A., Zhou J., Liu W., Bi Y., Gao G.F. Epidemiology, genetic recombination, and pathogenesis of coronaviruses. Trends Microbiol. 2016; 24 (6): 490-502. DOI: 10.1016/j.tim.2016.03.003
8. Бруякин С.Д., Макаревич Д.А. Структурные белки коронави-руса SARS-CoV-2: роль, иммуногенность, суперантигенные свойства и возможности использования для терапевтических целей. Вестник ВолгГМУ. 2021; 2 (78): 18-27. DOI: https://www.doi.org/10.19163/1994-9480-2021-2(78)-18-27
9. Takahashi M., Ai T., Sinozuka K., Baba Y., Igawa G., Nojiri S., Yamamoto T., Yuri M., Takei S., Saito K., Horiuchi Y., Kanno T., Tobi-ume M., Khasawneh A., Paran F., Hiki M., Wakita M., Miida T., Suzuki T., Okuzawa A., Takahashi K., Naito T., Tabe Y. Activation of SARS-CoV-2 neutralizing antibody is slower than elevation of spike-specific IgG, IgM, and nucleocapsid-specific IgG antibodies. Scientific Reports. 2022; 12 (1): 1-10. DOI: https://www.doi.org/10.1038/s41598-022-19073-z
10. Piccoli L., Park Y.J., Tortorici M.A., Czudnochowski N., Walls A.C., Beltramello M., Silacci-Fregni C., Pinto D., Rosen L.E., Bowen J.E., Acton O.J., Jaconi S., Guarino B., Minola A., Zatta F., Spru-gasci N., Bassi J., Peter A., De Marco A., Nix J.C., Mele F., Jovic S., Rodriguez B.F., Gupta S.V., Jin F., Piumatti G., Lo Presti G., Pellanda A.F., Biggiogero M., Tarkowski M., Pizzuto M.S., Cameroni E., Havenar-Dau-ghton C., Smithey M., Hong D., Lepori V., Albanese E., Ceschi A., Ber-nasconi E., Elzi L., Ferrari P., Garzoni C., Riva A., Snell G., Sallusto F., Fink K., Virgin H.W., Lanzavecchia A., Corti D., Veesler D. Mapping neutralizing and immunodominant sites on the SARS-CoV-2 spike receptor-binding domain by structure-guided high-resolution serology. Cell. 2020; 183 (4): 1024-42. DOI: https://www.doi.org/10.1016/j.cell.2020.09.037
11. Gordon D.E., Jang G.M., Bouhaddou M., Xu J., Obernier K., White K.M., O'Meara M.J., Rezelj V.V., Guo J.Z., Swaney D.L., Tummi-no T. A., Hüttenhain R., Kaake R.M., Richards A.L., Tutuncuoglu B., Fous-sard H., Batra J., Haas K., Modak M., Kim M., Haas P., Polacco B.J., Bra-
berg H., Fabius J.M., Eckhardt M., Soucheray M., Bennett M.J., Cakir M., McGregor M.J., Li Q., Meyer B., Roesch F., Vallet T., Kain A., Miorin L., Moreno E., Naing Z. Z., Zhou Y., Peng S., Shi Y., Zhang Z., Shen W., Kir-by I.T., Melnyk J.E., Chorba J.S., Lou K., Dai S.A., Barrio-Hernandez I., Memon D., Hernandez-Armenta C., Lyu J., Mathy C.P., Perica T., Bharath Pilla K., Ganesan S.J., Saltzberg D.J., Rakesh R., Liu X., Rosenthal S.B., Calviello L., Venkataramanan S., Liboy-Lugo J., Lin Y., Huang X., Liu Y., Wankowicz S.A., Bohn M., Safari M., Ugur F.S., Koh C., Savar N.S., Tran Q.D., Shengjuler D., Fletcher S.J., O'Neal M. C, Cai Y., Chang J.C., Broadhurst D.J., Klippsten S., Sharp P.P., Wenzell N.A., Kuzuoglu-Ozturk D., Wang H., Trenker R., Young J.M., Cavero D.A., Hiatt J., Roth T.L., Rathore U., Subramanian A., Noack J., Hubert M., Stroud R. M., Frankel A.D., Rosenberg O.S., Verba K.A., Agard D.A., Ott M., Emerman M., Jura N., Zastrow M., Verdin E., Ashworth A., Schwartz O., Enfert C., Mukherjee S., Jacobson M., Malik H.S., Fujimori D.G., Ideker T., Craik C.S., Floor S.N., Fraser J.S., Gross J.D., Sali A., Roth B.L., Ruggero D., Taunton J., Kortemme T., Beltrao P., Vignuzzi M., Garcia-Sastre A., Shokat K.M., Shoichet B.K., Krogan N.J. A SARS-CoV-2 protein interaction map reveals targets for drug repurposing. Nature. 2020; 583 (7816): 459-68. DOI: https://www.doi.org/10.1038/s41586-020-2286-9
12. Zhang H., Wu Y., He Y., Liu X., Liu M., Tang Y., Li X., Yang G., Liang G., Xu S., Wang M., Wang W. Age-related risk factors and complications of patients with COVID-1 https://www.doi.org/9: a population-based retrospective study. Front Med. 2022; (8): 1-12. DOI: https://www.doi. org/10.3389/fmed.2021.757459
13. Андреев А.И., Андреев И.В., Нечай К.О., Есаулова Д.Р., Баклакова О.С., Вечорко В.И., Шиловский И.П., Кофиади И.А., Гудима Г.О., Мартынов А.И., Смирнов В.В., Кудлай Д.А., Хаитов М.Р. Взаимосвязь между возрастом и напряженностью поствакцинального гуморального иммунного ответа у лиц, ранее переболевших CO-VID-19. Иммунология. 2022; 43 (5): 583-92. DOI: https://www.doi. org/10.33029/0206-4952-2022-43-5-583-592
14. Nakayama T., Lee I.T., Jiang S., Matter M.S., Yan C.H., Over-devest J.B., Wu C.T., Goltsev Y., Shih L.C., Liao C.K., Zhu B., Bai Y., Lidsky P., Xiao Y., Zarabanda D., Yang A., Easwaran M., Schürch C.M., Chu P., Chen H., Stalder A.K., McIlwain D.R., Borchard N.A., Gall P.A., Dholakia S.S., Le W., Xu L., Tai C.J., Yeh T.H., Erickson-Direnzo E., Duran J.M., Mertz K.D., Hwang P.H., Haslbauer J.D., Jackson P.K., Men-ter T., Andino R., Canoll P.D., DeConde A.S., Patel Z.M., Tzankov A., Nolan G.P., Nayak J.V. Determinants of SARS-CoV-2 entry and replicat ion in airway mucosal tissue and susceptibility in smokers. Cell Rep Med. 2021; 2 (10): 1-21. DOI: https://www.doi.org/10.1016/j.xcrm.2021. 100421
15. Paleiron N., Mayet A., Marbac V., Perisse A., Barazzutti H., Brocq F.X., Janvier F., Dautzenberg B., Bylicki O. Impact of tobacco smoking on the risk of COVID-19: a large-scale retrospective cohort study. Nicotine Tob Res. 2021; 23 (8): 1398-404. DOI: https://www.doi. org/10.1093/ntr/ntab004
16. Kamyshnyi A., Krynytska I., Matskevych V., Marushchak M., Lushchak O. Arterial hypertension as a risk comorbidity associated with COVID-19 pathology. Int J Hypertens. 2020; 1-7. DOI: https://www.doi. org/10.1155/2020/8019360
■ References
1. Wilder-Smith A. COVID-19 in comparison with other emerging viral diseases: risk of geographic spread via travel. Trop Dis Travel Med Vaccines. 2021; 7 (3): 1-11. DOI: https://www.doi.org/10.1186/s40794-020-00129-9
2. Zhao Y., Yang C., An X., Xiong Y., Shang Y., He J., Qiu Y., Zhang N., Huang L., Jia J., Xu Q., Zhang L., Zhao J., Pei G., Luo H., Wang J., Li Q., Gao Y., Xu A. Follow-up study on COVID-19 survivors one year after discharge from hospital. Int J Infect Dis. 2021; 112: 173-82. DOI: https:// www.doi.org/10.1016/j.ijid.2021.09.017
3. Qil B., Kabak M. Persistent Post-COVID Symptoms and the Related Factors. Turk Thorac J. 2022; 23 (1): 6-10. DOI: https://www.doi. org/10.5152/TurkThoracJ.2022.21112
4. Osmanov I.M., Khegay I.M., Trunina I.I., Chebotareva T.A., Che-burkin A.A., Shumilov P.V. Immunopathogenesis of multisystem inflammatory syndrome associated with COVID-19 in children. Immunology. 2022; 43 (1): 217-23. DOI: https://www.doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-1-217-223 (in Russian)
5. Bayram Y.E., Yildiz-Sevgi D., Yavuz A., Cancetin M., Yavuz Gurler M. Management skin manifestation of multisystem inflammatory syndrome associated with SARS-CoV-2. Virology J. 2022; 19 (1): 1-9. DOI: https://www.doi.org/10.1186/s12985-021-01736-4
6. Sizyakina L.P., Zakurskaya V.Y., Skripkina N.A., Antonova E.A. Ferritin level as a predictor of COVID-19 severe course. Immunologiya. 2021; 42 (5): 518-25. DOI: https://www.doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-4-518-525 (in Russian)
7. Su S., Wong G., Shi W., Liu J., Lai A., Zhou J., Liu W., Bi Y., Gao G.F. Epidemiology, genetic recombination, and pathogenesis of coro-naviruses. Trends Microbiol. 2016; 24 (6): 490-502. DOI: https://www. doi.org/10.1016/j.tim.2016.03.003
8. Bruyakin S.D., Makarevich D.A. Structural proteins of the SARS-CoV-2 coronavirus: role, immunogenicity, superantigenic properties and potential use for therapeutic purposes. Vestnik VolgGMU. 2021; 2 (78): 18-27. DOI: https://www.doi.org/10.19163/1994-9480-2021-2(78)-18-27 (in Russian)
Колонтарев К.Б., Колышкина Н.А., Рычкова Л.В., Самойлов А.С., Синьков В.В., Соловьева С.В., Троицкий А.В., Удалов Ю.Д., Юсубалиева Г.М., Говорун В.М. 49 Гуморальный иммунный ответ на линейные и конформационные эпитопы SARS-CoV-2 у пациентов с COVID-19
9. Takahashi M., Ai T., Sinozuka K., Baba Y., Igawa G., Nojiri S., Yamamoto T., Yuri M., Takei S., Saito K., Horiuchi Y., Kanno T., Tobi-ume M., Khasawneh A., Paran F., Hiki M., Wakita M., Miida T., Suzuki T., Okuzawa A., Takahashi K., Naito T., Tabe Y. Activation of SARS-CoV-2 neutralizing antibody is slower than elevation of spike-specific IgG, IgM, and nucleocapsid-specific IgG antibodies. Scientific Reports. 2022; 12 (1): 1-10. DOI: https://www.doi.org/10.1038/s41598-022-19073-z
10. Piccoli L., Park Y.J., Tortorici M.A., Czudnochowski N., Walls A.C., Beltramello M., Silacci-Fregni C., Pinto D., Rosen L.E., Bowen J.E., Acton O.J., Jaconi S., Guarino B., Minola A., Zatta F., Spru-gasci N., Bassi J., Peter A., De Marco A., Nix J.C., Mele F., Jovic S., Rodriguez B.F., Gupta S.V., Jin F., Piumatti G., Lo Presti G., Pellanda A.F., Big-giogero M., Tarkowski M., Pizzuto M.S., Cameroni E., Havenar-Daugh-ton C., Smithey M., Hong D., Lepori V., Albanese E., Ceschi A., Bernasco-ni E., Elzi L., Ferrari P., Garzoni C., Riva A., Snell G., Sallusto F., Fink K., Virgin H.W., Lanzavecchia A., Corti D., Veesler D. Mapping neutralizing and immunodominant sites on the SARS-CoV-2 spike receptor-binding domain by structure-guided high-resolution serology. Cell. 2020; 183 (4): 1024-42. DOI: https://www.doi.org/10.1016/j.cell.2020.09.037
11. Gordon D.E., Jang G.M., Bouhaddou M., Xu J., Obernier K., White K.M., O'Meara M.J., Rezelj V.V., Guo J.Z., Swaney D.L., Tum-mino T.A., Hüttenhain R., Kaake R.M., Richards A.L., Tutuncuoglu B., Foussard H., Batra J., Haas K., Modak M., Kim M., Haas P., Polacco B.J., Braberg H., Fabius J.M., Eckhardt M., Soucheray M., Bennett M.J., Cakir M., McGregor M.J., Li Q., Meyer B., Roesch F., Vallet T., Kain A., Miorin L., Moreno E., Naing Z.Z., Zhou Y., Peng S., Shi Y., Zhang Z., Shen W., Kirby I.T., Melnyk J.E., Chorba J.S., Lou K., Dai S.A., Barrio-Hernandez I., Memon D., Hernandez-Armenta C., Lyu J., Mathy C.P., Perica T., Bharath Pilla K., Ganesan S.J., Saltzberg D.J., Rakesh R., Liu X., Rosenthal S.B., Calviello L., Venkataramanan S., Liboy-Lugo J., Lin Y., Huang X., Liu Y., Wankowicz S.A., Bohn M., Safari M., Ugur F.S., Koh C., Savar N.S., Tran Q.D., Shengjuler D., Fletcher S.J., O'Neal M.C, Cai Y., Chang J.C., Broadhurst D.J., Klippsten S., Sharp P.P., Wenzell N.A., Ku-zuoglu-Ozturk D., Wang H., Trenker R., Young J.M., Cavero D.A., Hiatt J., Roth T.L., Rathore U., Subramanian A., Noack J., Hubert M., Stroud R.M., Frankel A.D., Rosenberg O.S., Verba K.A., Agard D.A., Ott M., Emer-man M., Jura N., Zastrow M., Verdin E., Ashworthworth, A., Schwartz O.,
Enfert C., Mukherjee S., Jacobson M., Malik H.S., Fujimori D.G., Ideker T., Craik C.S., Floor S.N., Fraser J.S., Gross J.D., Sali A., Roth B.L., Ruggero D., Taunton J., Kortemme T., Beltrao P., Vignuzzi M., Garcia-Sastre A., Shokat K.M., Shoichet B.K., Krogan N.J. A SARS-CoV-2 protein interaction map reveals targets for drug repurposing. Nature. 2020; 583 (7816): 459-68. DOI: https://www.doi.org/10.1038/s41586-020-2286-9
12. Zhang H., Wu Y., He Y., Liu X., Liu M., Tang Y., Li X., Yang G., Liang G., Xu S., Wang M., Wang W. Age-related risk factors and complications of patients with COVID-19: a population-based retrospective study. Front Med. 2022; (8): 1-12. DOI: https://www.doi.org/10.3389/ fmed.2021.757459
13. Andreev A.I., Andreev I.V., Nechay K.O., Esaulova D.R., Bakla-kova O.S., Vechorko V.I., Shilovskiy I.P., Kofiadi I.A, Gudima G.O., Mar-tynov A.I., Smirnov V. V., Kudlay D.A., Khaitov M.R. between age and the intensity of the post-vaccination humoral immune response in individuals passed COVID-19. Immunologiya. 2022; 43 (5): 583-92. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-5-583-592 (in Russian)
14. Nakayama T., Lee I.T., Jiang S., Matter M.S., Yan C.H., Over-devest J.B., Wu C.T., Goltsev Y., Shih L.C., Liao C.K., Zhu B., Bai Y., Lidsky P., Xiao Y., Zarabanda D., Yang A., Easwaran M., Schürch C.M., Chu P., Chen H., Stalder A.K., McIlwain D.R., Borchard N.A., Gall P.A., Dholakia S.S., Le W., Xu L., Tai C.J., Yeh T.H., Erickson-Direnzo E., Duran J.M., Mertz K.D., Hwang P.H., Haslbauer J.D., Jackson P.K., Menter T., Andino R., Canoll P.D., DeConde A.S., Patel Z.M., Tzankov A., Nolan G.P., Nayak J.V. Determinants of SARS-CoV-2 entry and replication in airway mucosal tissue and susceptibility in smokers. Cell Rep Med. 2021; 2 (10): 1-21. DOI: https://www.doi.org/10.1016/j.xcrm.2021. 100421
15. Paleiron N., Mayet A., Marbac V., Perisse A., Barazzutti H., Brocq F.X., Janvier F., Dautzenberg B., Bylicki O. Impact of tobacco smoking on the risk of COVID-19: a large-scale retrospective cohort study. Nicotine Tob Res. 2021; 23 (8): 1398-404. DOI: https://www.doi. org/10.1093/ntr/ntab004
16. Kamyshnyi A., Krynytska I., Matskevych V., Marushchak M., Lushchak O. Arterial hypertension as a risk comorbidity associated with COVID-19 pathology. Int J Hypertens. 2020; 1-7. DOI: https://www.doi. org/10.1155/2020/8019360
Сведения об авторах
Шокина Варвара Александровна - мл. науч. сотр. лаб. простых систем ФБУН НИИ СБМ Роспотребнад-зора, Москва, Российская Федерация E-mail: varvaramys@gmail.com https://orcid.org/0000-0003-0219-9052
Матюшкина Дарья Сергеевна - канд. биол. наук, вед. науч. сотр. лаб. простых систем ФБУН НИИ СБМ Роспотребнадзора, Москва, Российская Федерация E-mail: d.matyushkina@gmail.com https://orcid.org/0000-0001-9535-5792
Кривонос Даниил Вадимович - лаборант-исследователь лаб. математической биологии и биоинформатики ФБУН НИИ СБМ Роспотребнадзора, Москва, Российская Федерация
E-mail: danil01060106@gmail.com https://orcid.org/0000-0002-3851-5873
Манувера Валентин Александрович - канд. биол. наук, ст. науч. сотр. лаб. генной инженерии ФГБУ ФНКЦ ФХМ им. акад. Ю.М. Лопухина ФМБА России, Москва, Российская Федерация E-mail: vmanuvera@yandex.ru https://orcid.org/0000-0002-2471-0563
Authors' information
Varvara A. Shokina - Junior Researcher of Simple Systems Lab. of the RISBM, Rospotrebnadzor, Moscow, Russian Federation
Е-mail: varvaramys@gmail.com https://orcid.org/0000-0003-0219-9052
Daria S. Matyushkina - PhD, Leader Researcher of Simple Systems Lab. of the RISBM, Rospotrebnadzor, Moscow, Russian Federation E-mail: d.matyushkina@gmail.com https://orcid.org/0000-0001-9535-5792
Daniil V. Krivonos - Laboratory Researcher of Mathematical Biology and Bioinformatics Lab. of the RISBM, Rospotrebnadzor, Moscow, Russian Federation Е-mail: danil01060106@gmail.com https://orcid.org/0000-0002-3851-5873
Valentin A. Manuvera - PhD, Senior Researcher of Genetic Engineering Lab., Yu.M. Lopukhin FRCC PCM, FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation Е-mail: vmanuvera@yandex.ru https://orcid.org/0000-0002-2471-0563
Широков Дмитрий Алексеевич - канд. биол. наук, ст. науч. сотр. лаб. генной инженерии ФГБУ ФНКЦ ФХМ им. акад. Ю.М. Лопухина ФМБА России, Москва, Российская Федерация E-mail: dmitry.a.shirokov@gmail.com https://orcid.org/0000-0001-6080-3348
Харлампиева Дарья Дмитриевна - канд. биол. наук, науч. сотр. лаб. генной инженерии ФГБУ ФНКЦ ФХМ им. акад. Ю.М. Лопухина ФМБА России, Москва, Российская Федерация E-mail: harlampieva_d@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-3514-2303
Лазарев Василий Николаевич - д-р биол. наук, доцент, зав. лаб. генной инженерии ФГБУ ФНКЦ ФХМ им. акад. Ю.М. Лопухина ФМБА России, Москва, Российская Федерация E-mail: lazar0@mail.ru https://orcid.org/0000-0003-0042-966X
Павленко Александр Владимирович - науч. сотр. лаб. математической биологии и биоинформатики ФБУН НИИ СБМ Роспотребнадзора, Москва, Российская Федерация E-mail: pavav@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-9549-0289
Ильина Eлена Николаевна - член-корр. РАН, д-р биол. наук, зав. лаб., гл. науч. сотр. ФБУН НИИ СБМ Роспотребнадзора, Москва, Российская Федерация E-mail: ilinaen@gmail.com https://orcid.org/0000-0003-0130-5079.
Румянцев Александр Григорьевич - акад. РАН, д-р мед. наук, проф., президент ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Д. Рогачева» Минздрава России; проф. кафедры онкологии, гематологии и лучевой терапии педиатрического факультета ФГАОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: mvgurkina@gmail.com https://orcid.org/0000-0002-1632-4822
Румянцев Сергей Александрович - член-корр. РАН, д-р мед. наук, проф., зав. кафедрой онкологии, гематологии и лучевой терапии педиатрического факультета ФГАОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: s_roumiantsev@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-7418-0222
Иванов Константин Павлович - канд. мед. наук, зав. центром кардиологии и терапии НКЦ № 3 ФГБНУ «РНЦХ им. акад. Б.В. Петровского», Троицк; науч. сотр. ФГБУ «НМИЦК им. ак. Е.И. Чазова» МЗ РФ, Москва, Российская Федерация E-mail: doctorivanov@list.ru
Хромова Полина Андреевна - мл. науч. сотр. лаб. эпидемиологически и социально значимых инфекций ФГБНУ НЦ ПЗСРЧ, Минобрнауки России, Иркутск, Российская Федерация E-mail: polina.and38@gmail.com https://orcid.org/0000-0002-6449-5060
Dmitry A. Shirokov - PhD, Senior Researcher of Genetic Engineering Lab., Yu.M. Lopukhin FRCC PCM, FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation Е-mail: dmitry.a.shirokov@gmail.com https://orcid.org/0000-0001-6080-3348
Daria D. Kharlampieva - PhD, Researcher of Genetic Engineering Lab., Yu.M. Lopukhin FRCC PCM, FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation Е-mail: harlampieva_d@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-3514-2303
Vasily N. Lazarev - Dr.Sci, PhD, Associate Prof., Head of Genetic Engineering Lab., Yu.M. Lopukhin FRCC PCM, FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation Е-mail: lazar0@mail.ru https://orcid.org/0000-0003-0042-966X
Alexander V. Pavlenko - Researcher of Mathematical Biology and Bioinformatics Lab. of the RISBM, Rospotrebnad-zor, Moscow, Russian Federation E-mail: pavav@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-9549-0289
Elena N. Ilyina - Corresponding Member of RAS, Dr.Sci., PhD, Head of Laboratory, Chief Researcher of the RISBM, Rospotrebnadzor, Moscow, Russian Federation E-mail: ilinaen@gmail.com https://orcid.org/0000-0003-0130-5079
Alexander G. Rumyantsev - Academician of RAS, MD, PhD, Prof., President of the D. Rogachev NMRCPHOI; Prof. of the Oncology, Hematology and Radiation Therapy Dept., Pediatric Faculty of the RNRMU, MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: mvgurkina@gmail.com https://orcid.org/0000-0002-1632-4822
Sergey A. Rumyantsev - Corresponding Member of Russian Academy of Sciences, MD, Prof., Head of the Oncology, Hematology and Radiation Therapy Dept., Pediatric Faculty of the RNRMU, MOH of Russia, Moscow, Russian Federation
E-mail: s_roumiantsev@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-7418-0222
Konstantin P. Ivanov - PhD, Head of the Cardiology and Therapy Center, «RNTCH named after acad. B.V. Petrov-sky», MSHE of Russia, Troitsk; Researcher, SMRCC, MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: doctorivanov@list.ru
Polina A. Khromova - Junior Researcher, Epidemiologi-cally and Socially Significant Infections Lab., FHHRP, MSHE of Russia, Irkutsk, Russian Federation Е-mail: polina.and38@gmail.com https://orcid.org/0000-0002-6449-5060
Колонтарев К.Б., Колышкина Н.А., Рычкова Л.В., Самойлов А.С., Синьков В.В., Соловьева С.В., Троицкий А.В., Удалов Ю.Д., Юсубалиева Г.М., Говорун В.М. 51 Гуморальный иммунный ответ на линейные и конформационные эпитопы SARS-CoV-2 у пациентов с COVID-19
Баклаушев Владимир Павлович - зам. генерального директора по научной работе и медицинским технологиям ФГБУ ФНКЦ ФМБА России, Москва, Российская Федерация
E-mail: baklaushev.vp@fnkc-fmba.ru https://orcid.org/0000-0003-1039-4245
Корицкий Андрей Владимирович - главный врач нКц № 3 ФГБНУ «РНЦХ им. акад. Б.В. Петровского», Минобрнауки России, Троицк, Российская Федерация E-mail: a.v.koritskiy@gmail.com
Куропаткин Вячеслав Александрович - зам. зав. отд. организации медицинской помощи ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России, Москва, Российская Федерация
E-mail: vakuropatkin@fmbcfmba.ru
Москалева Екатерина Владимировна - канд. мед. наук, науч. сотр. лаб. инфектологии и иммунопрофилактики в педиатрии ФГБНУ НЦ ПЗСРЧ, Минобрнауки России, Иркутск, Российская Федерация Е-mail: mkatena@mail.ru https://orcid.org/0000-0003-4196-0713
Огарков Олег Борисович - д-р мед. наук, руководитель отд. эпидемиологии и микробиологии ФГБНУ НЦ ПЗСРЧ, Минобрнауки России, Иркутск, Российская Федерация
E-mail: obogarkov@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-3168-1983
Орлова Елизавета Андреевна - мл. науч. сотр. лаб. эпидемиологически и социально значимых инфекций, аспирант ФГБНУ НЦ ПЗСРЧ, Минобрнауки России, Иркутск, Российская Федерация Е-mail: elizaveta.a.orlova@gmail.com https://orcid.org/0000-0003-2169-0242
Петрова Алла Германовна - д-р мед. наук, гл. науч. сотр., зав. лаб. инфектологии и иммунопрофилактики в педиатрии ФГБНУ НЦ ПЗСРЧ, Минобрнауки России, Иркутск, Российская Федерация Е-mail: rudial75@gmail.com https://orcid.org/0000-0002-7965-8061
Поженько Наталия Сергеевна - зав. лаб., врач клинической лаб. диагностики № 3 ФГБНУ «РНЦХ им. акад. Б.В. Петровского», Минобрнауки России, Троицк, Российская Федерация Е-mail: 7323_nsp@mail.ru
Пушкарь Дмитрий Юрьевич - акад. РАН, д-р мед. наук, зав. кафедрой урологии ФГБОУ ВО «МГМСУ им. А.И. Евдокимова» Минздрава России; ГБУЗ «ГКБ им. С.И. Спасокукоцкого ДЗМ», Москва, Российская Федерация
Е-mail: pushkardm@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-6096-5723
Vladimir P. Baklaushev - Deputy General Director for Research and Medical Technologies, FSCC FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation Е-mail: baklaushev.vp@fnkc-fmba.ru https://orcid.org/0000-0003-1039-4245
Andrey V. Koritsky - Chief Physician of the «RNTCH named after acad. B.V. Petrovsky», MSHE of Russia, Troitsk, Russian Federation Е-mail: a.v.koritskiy@gmail.com
Vyacheslav A. Kuropatkin - Deputy Head of the SRC-FMBC, FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation Е-mail: vakuropatkin@fmbcfmba.ru
Ekaterina V. Moskaleva - PhD, Researcher of Lab. of In-fectology and Immunoprophylaxis in Pediatrics, FHHRP, MSHE of Russia, Irkutsk, Russian Federation E-mail: mkatena@mail.ru https://orcid.org/0000-0003-4196-0713
Oleg B. Ogarkov - MD, PhD, Head of the Epidemiology and Microbiology Dept., FHHRP, MSHE of Russia, Irkutsk, Russian Federation E-mail: obogarkov@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-3168-1983
Elizaveta A. Orlova - PhD Student, Junior Researcher of Epidemiologically and Socially Significant Infections Lab., FHHRP, MSHE of Russia, Irkutsk, Russian Federation
E-mail: elizaveta.a.orlova@gmail.com https://orcid.org/0000-0003-2169-0242
Alla G. Petrova - MD, PhD, Chief Researcher, Head of the Lab. of Infectology and Immunoprophylaxis in Pediatrics, FHHRP, MSHE of Russia, Irkutsk, Russian Federation E-mail: rudial75@gmail.com https://orcid.org/0000-0002-7965-8061
Natalia S. Pozhenko - Head of Laboratory, Clinical Laboratory Diagnostics Physician, «RNTCH named after acad. B.V. Petrovsky», MSHE of Russia, Troitsk, Russian Federation
E-mail: 7323_nsp@mail.ru
Dmitry Yu. Pushkar - Academician of RAS, MD, PhD, Head of the Urology Dept., A.I. Evdokimov MSMSU, MOH of Russia; «CCH after S.I. Spasokukotsky MHD», Moscow, Russian Federation E-mail: pushkardm@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-6096-5723
Колонтарев Константин Борисович - д-р мед. наук, проф. кафедры урологии ФГБОУ ВО «МГМСУ им. А.И. Евдокимова» Минздрава России; зав. онкоуро-логическим отд. ГБУЗ «ГКБ им. С.И. Спасокукоцкого ДЗМ», Москва, Российская Федерация Е-шаЛ: kb80@yandex.ru https://orcid.org/0000-0003-4511-5998
Колышкина Надежда Александровна - канд. мед. наук, зав. КДЛ ФГБУ ФНКЦ ФМБА России, Москва, Российская Федерация Е-шаП: baklab_83@mail.ru https://orcid.org/0000-0003-4486-5412
Рычкова Любовь Владимировна - д-р мед. наук, проф. РАН, директор ФГБНУ НЦ ПЗСРЧ, Минобрнауки России, Иркутск, Российская Федерация Е-mail: iphr@sbamsr.irk.ru https://orcid.org/0000-0003-2910-0737
Самойлов Александр Сергеевич - член-корр. РАН, д-р мед. наук, генеральный директор ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России, Москва, Российская Федерация
Е-mail: dircsm1@aim.com https://orcid.org/0000000292417238
Синьков Вячеслав Владимирович - канд. мед. наук, ст. науч. сотр. лаборатории эпидемиологически и социально значимых инфекций ФГБНУ НЦ ПЗСРЧ, Мин-обрнауки России, Иркутск, Российская Федерация Е-mail: vsinkov@gmail.com https://orcid.org/0000-0003-3396-9590
Соловьева Светлана Владимировна - старшая медсестра ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России, Москва, Российская Федерация Е-mail: afana71@mail.ru
Троицкий Александр Витальевич - д-р мед. наук, проф., генеральный директор ФГБУ ФНКЦ ФМБА России, Москва, Российская Федерация Е-mail: dr.troitskiy@gmail.com https://orcid.org/0000-0003-2143-8696
Удалов Юрий Дмитриевич - д-р мед. наук, зам. генерального директора по медицинской части, доцент кафедры терапии ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России, Москва, Российская Федерация Е-mail: udalov@fmbcfmba.ru https://orcid.org/0000-0001-7108-1774
Юсубалиева Гаухар Маратовна - канд. мед. наук, ст. науч. сотр. лаборатории клеточных технологий ФГБУ ФНКЦ ФМБА России, Москва, Российская Федерация Е-mail: gaukhar@gaukhar.org https://orcid.org/0000-0003-3056-4889
Говорун Вадим Маркович - акад. РАН, д-р биол. наук, проф., директор ФБУН НИИ СБМ Роспотребнадзора, Москва, Российская Федерация Е-mail: vgovorun@yandex.ru https://orcid.org/0000-0003-0837-8764
Konstantin B. Kolontarev - MD, Prof. of the Urology Dept., A.I. Evdokimov MSMSU, MOH Russia; Head of Oncourological Dept., «CCH after S.I. Spasokukotsky MHD», Moscow, Russian Federation E-mail: kb80@yandex.ru https://orcid.org/0000-0003-4511-5998
Nadezhda A. Kolyshkina - PhD, Head of CDL, FSCC, FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: baklab_83@mail.ru https://orcid.org/0000-0003-4486-5412
Lyubov V. Rychkova - MD, PhD, Prof. of RAS, Director of the FHHRP, MSHE of Russia, Irkutsk, Russian Federation
E-mail: iphr@sbamsr.irk.ru https://orcid.org/0000-0003-2910-0737
Alexander S. Samoilov - Corresponding Member of RAS, MD, PhD, General Director of the SRC-FMBC, FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: dircsm1@aim.com https://orcid.org/0000000292417238
Vyacheslav V. Sinkov - PhD, Senior Researcher of Epi-demiologically and Socially Significant Infections Lab., FHHRP, MSHE of Russia, Irkutsk, Russian Federation E-mail: vsinkov@gmail.com https://orcid.org/0000-0003-3396-9590
Svetlana V. Solovieva - Senior Nurse of the SRC-FMBC, FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: afana71@mail.ru
Alexander V. Troitsky - MD, PhD, Prof., General Director of the FSCC FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: dr.troitskiy@gmail.com https://orcid.org/0000-0003-2143-8696
Yury D. Udalov - MD, PhD, Deputy General Director for Medical Affairs, Associate Prof. of the Therapy Dept., SRC-FMBC, FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: udalov@fmbcfmba.ru https://orcid.org/0000-0001-7108-1774
Gaukhar M. Yusubalieva - PhD, Senior Researcher of Cellular Technologies Lab., FSCC FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: gaukhar@gaukhar.org https://orcid.org/0000-0003-3056-4889
Vadim M. Govorun - Academician of RAS, Dr.Sci., PhD, Prof., Director of the RISBM, Rospotrebnadzor, Moscow, Russian Federation E-mail: vgovorun@yandex.ru https://orcid.org/0000-0003-0837-8764
