CC BY
175
УДК 619:618:591.4:591.81
О. С. ЕПАНЧИНЦЕВА Т. С. ДУДОЛАДОВА Ю. М. ГИЧЕВ
№
Омский государственный аграрный университет им. П. А. Столыпина Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных
ГИСТОМОРФОЛОГИЯ ВЛАГАЛИЩА КОРОВ И ЦИТОЛОГИЯ ВАГИНАЛЬНОЙ СЛИЗИ ПРИ ОВАРИАЛЬНОЙ ГИПОФУНКЦИИ
Проведены гистологические и цитологические исследования по изучению слизистой оболочки влагалища у коров с клиническими признаками гипофункции яичников. Установлены дистрофические, некробиотические, а также иммуно-реактивные изменения в эпителии влагалища и цитограмме вагинальной слизи. Ключевые слова: влагалище, коровы, гипофункция яичников, гистологические и цитологические исследования.
Введение. Для эффективного ведения животноводства большое значение имеет высокий уровень воспроизводства животных, без чего нельзя обеспечить потребность хозяйств необходимым поголовьем [1].
Многие работы отечественных и зарубежных ученых [2 — 7] посвящены изучению этиологических факторов, патогенеза, а также разработке эффективных методов диагностики и терапии при симптоматическом бесплодии у коров, однако ги-стоморфологическим, и особенно цитологическим исследованиям половых органов, авторами уделяется недостаточно внимания [8—10].
По мнению авторов [11 — 13], одной из главных причин симптоматического бесплодия у коров является гипофункция яичников, которая составляет от 17,8 до 19,5 % от общего числа животных с нарушением плодовитости.
Целью настоящей работы являлось изучение ги-стоморфологии влагалища и цитологии вагинальной слизи при гипофункции яичников у коров.
Материал и методы. Исследования выполнены в период с 2012 по 2013 год на кафедре диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П. А. Столыпина, в лаборатории диагностических исследований и биотехнологии ФГБНУ ВНИИБТЖ и в СПК «Пушкинский» Омского района Омской области.
Объектом исследования служили коровы черно-пестрой породы, принадлежащие СПК «Пушкинский», в возрасте 4 — 6 лет с клиническими признаками гипофункции яичников.
Для гистологических исследований использовали пробы слизистой оболочки влагалища, полученные биотомом у коров (n=10), которые фиксировали в 4 %-ном забуференном растворе формальдегида, затем заключали в парафин и получали гистологи-
ческие срезы толщиной 4 мм. Для изучения гисто-морфологии срезы депарафинировали, окрашивали гематоксилином и эозином.
Для цитологических исследований отбирали пробы (n=10) вагинальной слизи с помощью устройства на основе цитологической щетки [14].
Из проб готовили мазки, которые высушивали на воздухе в течение 10—15 минут, фиксировали 960 этиловым спиртом, окрашивали гематоксилином и эозином и по Романовскому-Гимзе, подсчитывали 200 — 500 соматических клеток. Затем выводили цитологические критерии: индекс созревания, эозинофильный индекс и кариопикнотический индекс.
Микроскопию, морфометрию и микрофотографирование гистологических препаратов и мазков проводили на исследовательском микроскопе проходящего и отраженного света для медико-биологических исследований K. Zeiss AXIO Imager А1 с биометрической обработкой в программе AXIO Vision версии 4.7.
Собственные исследования. В результате проведенного морфологического исследования установлено, что при односторонней гипофункции яичников строение эпителия слизистой оболочки влагалища у коров неоднородно, имеются участки, состоящие из трех-четырех рядов клеток. Клетки поверхностного слоя в этих участках имеют оксифильную цитоплазму и подвернутый, обращенный в просвет край. Ядра этих клеток преимущественно овальные и расположены параллельно базальной мембране. Некоторые из них содержат вакуоли (рис. 1).
В базальном слое этих участков признаки пролиферации отсутствуют. Ядра большинства клеток крупные, со светлой кариоплазмой, сами клетки крупные, по строению похожи на парабазальные клетки. Здесь же обнаруживаются клетки в состоянии цито- и кариопикноза (рис. 2).
Рис. 1. Эпителий влагалища. Корова 5 лет, черно-пестрая. 1 — поверхностный слой эпителия подвернут. Гематоксилин-эозин. Ув. 600
Рис. 2. Базальный слой эпителия влагалища. Корова 5 лет, черно-пестрая. 1 — «бокаловидные» клетки. Гематоксилин-эозин. Ув. 600
Рис. 3. Базальный слой эпителия влагалища. Корова 5 лет, черно-пестрая. 1 — микрокиста; 2 — сегментоядерный лейкоцит; 3 — плазмоцит. Гематоксилин-эозин. Ув. 600
Рис. 4. Эпителий влагалища. Корова 5 лет, черно-пестрая. 1 — столбчатое расположение клеток; 2 — пикноз ядер. Гематоксилин-эозин. Ув. 600
Парабазальные клетки имеют разнообразное строение. Часть из них окрашивается оксифильно и имеет маленькое пикнотизированное ядро. Часть окрашена менее интенсивно, ядра относительно крупные, некоторые с вакуолями. Непосредственно под слоем поверхностных клеток цитоплазма отдельных клеток набухает, становится ячеистой, ядра оттесняются к базальному полюсу. Эти клетки напоминают бокаловидные клетки железистого эпителия. При разрушении этих клеток в толще эпителия образуются микрокисты, в которых, в ряде случаев, обнаруживаются плазмоциты и сег-ментоядерные лейкоциты (рис. 3).
Имеются также участки, где отсутствует типичный для плоского многослойного эпителия слой поверхностных плоских клеток. Вместо них видны набухшие, местами разрушающиеся, «бокаловидные» клетки. В отдельных участках в результате дистрофии и десквамации клеток всех слоев обнажалась подлежащая соединительная ткань собственного слоя слизистой оболочки.
В некоторых участках дистрофические изменения в клетках поверхностного и парабазального
слоев сочетались с активной пролиферацией клеток базального слоя. В результате интенсивного деления клетки с гиперхромными ядрами, прижимались друг к другу, принимали вытянутую форму и рас-пологались перпендикулярно базальной мембране. Одновременно с активной пролиферацией в этих клетках отмечаются некробиотические и некротические изменения, ядра пикнотичны или отсутствуют (рис. 4). В наиболее измененных участках слизистой оболочки, где эпителий находится в состоянии дистрофии или десквамирован базальная мембрана отсутствует. В связи с этим, граница с подлежащей соединительной тканью незаметна. В этих участках, в прилегающей к эпителию соединительной ткани, имеются скопления гистиоцитов и плазмоцитов.
В мазках вагинальной слизи коров обнаруживали нейтрофилы, вакуоли в ядрах промежуточных (44 — 56 %) клеток, которые наряду с базальными (30 — 43 %) превалировали над поверхностными (20 — 21 %) и парабазальными (3 — 6 %). ЭИ — 32 — 33 %, КИ — 37-38 % (рис. 5).
При двусторонней гипофункции яичников, так же как и при односторонней, отмечается разно-
Рис. 5. Цитология мазка вагинальной слизи при односторонней гипофункции яичников. Корова 5 лет, черно-пестрая. 1 — промежуточные клетки; 2 — вакуоли в ядрах. Романовский-Гимза. Ув. 400
Рис. 6. Поверхностный слой эпителия влагалища. Корова 5 лет, черно-пестрая. 1 — перицеллюлярный отек; 2 — «бокаловидные» клетки. Гематоксилин-эозин. Ув. 900
№
Рис. 7. Цитология мазка вагинальной слизи при двусторонней гипофункции яичников. Корова 5 лет, черно-пестрая. 1 — промежуточные клетки; 2 — поверхостные клетки. Романовский-Гимза. Увел. 400
Таблица 1
Результаты цитологических исследований вагинальной слизи коров при гипофункции яичников
Мазки из влагалища
Патология Индекс созревания, % ЭИ, % КИ, %
Базальные Пара-базальные Промежуточные Поверхностные
Гипофункция яичников односторонняя 3-43 3-6 44-56 20-21 32-33 37-38
Гипофункция яичников двусторонняя 12-26 4-5 36-55 30-33 0-2 37-38
родность строения эпителия слизистой оболочки влагалища. В поверхностном слое также имеются участки с плоскими оксифильными клетками. В некоторых клетках имеются гранулы кератогиалина. В базальном слое этих участков отсутствуют признаки пролиферации. Часть ядер клеток этого слоя пикнотичны, в других же они набухшие или отсутствуют.
В участках, где имеются признаки пролиферации клеток базального слоя, отсутствует специфическая дифференцировка промежуточных и поверхностных клеток. Поверхностные клетки хотя
и становятся оксифильными, но сохраняют полиэдрическую форму, характерную для клеток промежуточного слоя. Ядра некоторых из них пикнотичны. В промежуточном слое также обнаруживаются микрокисты. Во многих участках, так же как и при односторонней гипофункции, но в большем количестве, в поверхностном слое обнаруживаются «бокаловидные» клетки. Здесь также выражен перицеллюлярный отёк (рис. 6).
В большинстве участков слизистой оболочки ба-зальная мембрана не заметна и, поэтому, граница между эпителием и собственным слоем слизистой
оболочки не видна. В соединительной ткани, прилегающей к эпителию, имеются более интенсивные скопления плазмоцитов, лимфоцитов и гистиоцитов.
В мазках вагинальной слизи (рис. 7) много разрушенных клеток эпителия, промежуточные (3б-55 %) с разрушающимися, либо вакуолизи-рованными ядрами, и поверхностные (30-33 %) клетки расположены пластами; 12-2б % базальных и 4-5 % парабазальных клеток. Эозинофильный индекс — 0- 2 %, кариопикнотический индекс — 38-42 % (табл. 1).
Заключение. Таким образом, гистологическое исследование показало, что при односторонней и двусторонней гипофункции яичников в слизистой оболочке отмечается нарушение регенерации и дифференцировки эпителия, дистрофические, не-кробиотические, а также иммунореактивные изменения, которые более выражены при двустороннем поражении половых желез. Эти изменения согласуются с результатами цитологических исследований вагинальной слизи, в цитограмме которой повышается количество промежуточных клеток в состоянии вакуольной дистрофии, а эозинофильный и ка-риопикнотический индексы снижаются.
Библиографический список
1. Рекомендации по стабилизации поголовья крупного рогатого скота и реализации его генетического потенциала в хозяйствах Российской Федерации I В. И. Фисинин [и др.]. -М. : Росинформагротех. - 200б. - б0 с.
2. Метриты крупного рогатого скота I И. H. Зюбин [и др.]. -Швосибирск, 2007. - 232 с.
3. Колчина, А. Ф. Лечебная эффективность Пребиостима при гипофункции яичников у коров I А. Ф. Колчина, О. В. Соколова, П. А. Ильиных II Российский ветеринарный журнал. -
2007. - Спец. вып. - С. 25-2б.
4. Семиволос, С. А. Функциональные нарушения яичников у коров I С. А. Семиволос II Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития : сб. ст. -Саратов : ИЦ Шука, 2010. - Ч. 2. - С. 77-79.
5. Williams, E. J. Clinical evaluation of postpartum vaginal mucus reflects uterine bacterial infection and the immune response in cattle I E. J. Williams, D. P. Fischer, D. U. Pfeiffer, G.C.W. England, D. E. Noakes, H. Dobson, I. M. Sheldon II Theriogenology. - 2005. - Vol. б3. - P. 102-117.
6. Tsousis, G. Associations between the clinical signs of chronic endometritis with ovarian cysts and body condition loss in German Holstein Friesian cows I G. Tsousis, R. Sharifi, M. Hoedemaker II J. Veterinary Science. - 2009. - № 10 (4). -P. 337-341.
7. Сковородин, E. H. Морфофункциональные изменения яичников и некоторых желез внутренней секреции у коров при их гипофункции I E. H. Сковородин II Диагностика, патоморфология, патогенез и профилактика болезней в промышленном животноводстве. - Саратов, 1990. - С. 84-87.
8. Баженова, H. Б. Фагоцитарная реакция эндометрия при изучении метаспирата в течение послеродового периода у
коров в норме и при патологии / Н. Б. Баженова // Актуальные проблемы ветеринарной медицины. — СПб., 1999. — С. 39-41.
9. Животягина, Е. В. Цитологическая предикция субинволюции матки у коров в послеродовой период по состоянию ядер влагалищных эпителиальных клеток / Е. В. Животягина // Аграрная наука — сельскому хозяйству / Алтайский гос. аграр. ун-т. — Барнаул, 2008. — Кн. 2. — С. 286 — 289.
10. Панков, Б. Г. Проблемы воспроизводства на молочных фермах / Б. Г. Панков, Н. А. Соколова, А. М. Хуранов // Опыт создания и работы сервисных центров по воспроизводству сельскохозяйственных животных в рамках реализации Гос. программы развития сельского хозяйства : материалы Все-рос. семинара. — Дубровицы, 22 — 24 сентября. — Дубровицы, 2009. — С. 73 — 77.
11. Дюльгер, Г. П. Терапевтическая эффективность ову-лина при гипофункции яичников у коров / Г. П. Дюльгер, Е. С. Седлецкая // Российский ветеринарный журнал. Сер. Сельскохозяйственные животные. — 2012. — № 4. — С. 15—17.
12. Полянцев, Н. И. Гипофункция яичников у коров. Диагностика, лечение, профилактика / Н. И. Полянцев, В. Д. Слободской // Ветеринария. — 1984. — № 11. — С. 47 — 49.
13. Berger, G. Häufigkeit und Therapie von Ovarialzysten beim Rind — Ergebnisse aus der Zuchthygienischen Betreund einer groben Milchvienherde / G. Berger // Vet. — Med. — 1985. — Jg. 40. — № 1. — S. 433 — 436.
14. Пат. 129385 Российская Федерация, МПК А6107/00. Устройство для получения содержимого матки у коров / О. С. Епанчинцева, А. А. Жерносенко, А. Ю. Максимовская; Е. И. Грибкова, Е. К. Абетов ; заявитель и патентообладатель Омский гос. аграр. ун-т им. П. А. Столыпина. — № 2013102059/13 ; заявл. 16.01.13 ; опубл. 27.06.13, Бюл. № 18. — 6 с.
ЕПАНЧИНЦЕВА Ольга Степановна, доктор ветеринарных наук, доцент (Россия), доцент кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства Омского государственного аграрного университета им. П. А. Столыпина.
Адрес для переписки: [email protected] ДУДОЛАДОВА Татьяна Сергеевна, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории диагностических исследований и биотехнологии Всероссийского научно-исследовательского института бруцеллеза и туберкулеза животных. Адрес для переписки: [email protected]. ГИЧЕВ Юрий Матвеевич, кандидат ветеринарных наук, доцент (Россия), доцент кафедры анатомии, гистологии, физиологии и патологической анатомии Омского государственного аграрного университета им. П. А. Столыпина.
Статья поступила в редакцию 10.02.2015 г. © О. С. Епанчинцева, Т. С. Дудоладова, Ю. М. Гичев
