CC BY
42
УДК617.7-089:611.84
Стадников* А.А., Канюков** В.Н., Трубина** О.М., Горбунов** А.А., Подопригора** Р.Н., Ломухина** Е.А., Казеннов** А.Н., Яковлева Н.А.* *ГОУВПО «Оренбургская государственная медицинская академия Росздрава», **Оренбургский филиал ФГУ МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова
Росмедтехнологии»
E-mail: nauka@ofmntk.ru
ГИСТОЛОГИЧЕСКОЕ И ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ДОНОРСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ЦЕЛЕЙ ПЛАСТИЧЕСКОЙ ОФТАЛЬМОХИРУРГИИ
Изучен феномен программированной гибели эпителиоцитов, фибробластов роговицы (экспрессия синтеза протеинов р53,Ьс12,каспаз), консервированной в вакууме и среде Борзенка-Мороз, в т.ч. в условиях культивирования ¡п угоо.Установлена большая резистентность к условиям консервации роговичных эпителия (среда Борзенка-Мороз) и клеток фибробластического дифферона (условия вакуума).
Ключевые слова: культивирование тканей, пластическая офтальмохирургия.
Актуальность. Современная клеточная биология характеризуется усилением тесных ее взаимосвязей с клиникой. При этом постепенно ликвидируется тот разрыв, который до последнего времени существовал между специальными гистологическими проблемами, с одной стороны, и запросами клинической, в том числе и офтальмохирургической практики [1]. В русле обозначенной тенденции научных изысканий, представленная статья, как раз направлена на установление органической связи между базисными гистобластическими и органотипическими закономерностями классической гистологии и специфическими проблемами пластической офтальмохирургии, которые «тем самым приобретают новую прочную общебиологическую, последовательно материалистическую основу [2]».В современной интерпретации это означает реализацию принципов доказательной медицины на основе использования комплекса методик (прежде всего электронномикроскопических и иммуноцитохимических,включая идентификацию апоптозных клеток).
Цель. Разработать морфофункциональные критерии биологической полноценности роговицы, консервированной в вакууме и в среде Борзенка-Мороз.
Материалы и методы. На светооптическом (включая иммуноцитохимическую идентификацию протеинов р53, Ьс12, каспаз 3,9;оценку фрагментации ДНК) и ультраструк-турном уровнях изучена структурно-функци-
ональная характеристика 56 донорских роговиц (роговично-склеральные диски свежеэнук-леированных глаз свиньи), консервированных в вакууме при гипотермии [ t'° + 2 ± 4° С] (44 объекта) и в среде Борзенка-Мороз (12 объектов). Срок консервации: 3, 7, 10 и 30 сут. Экспериментально-гистологически роговичные трансплантаты исследованы в условиях их культивирования in vivo по методу Ф.М.Лазаренко (1959)[36 имплантатов у 12 кроликов породы Шиншилла-реципиентов; сроки культивирования: 3, 6, 10, 15 сут].
Результаты исследования и их обсуждение. Светооптический и ультраструктурный анализ роговиц, консервированных в разных условиях (в вакууме, либо среде Борзенка-Мо-роз) показал хорошую сохранность переднего эпителиалия и эндотелия [при консервации по Борзенку-Мороз] и соединительнотканных элементов [при косервации в вакууме при гипотермии] донорских роговиц. Данное заключение также подтверждено сведениями, касающимися оценки уровня апоптозной доминанты эпи-телиоцитов и фибробластов консервируемой роговицы (по показателям экспрессии синтеза протеинов р53 и bck 2), в том числе и в условиях культивирования по Ф.М. Лазаренко [3].
Так, при использовании донорского материала, консервированного в вакууме, отмечены морфологические признаки, характеризующие механические, прочностные характеристики роговицы (фибриллярные пластины, сохранность десцеметовой мембраны, активиза-
ВЕСТНИКОГУ №12 декабрь 2010 217
ция клеток фибробластического дифферона). С другой стороны, при культивировании роговицы в среде Борзенка-Мороз, происходит пролиферативная активизация переднего эпителия и кровеносных сосудов микроциркуля-торного русла на фоне отека и дискомплекса-ции фибриллярных структур собственного вещества роговицы с образованием полиморфноклеточных локальных инфильтратов в пе-риваскулярных зонах.
В поздние сроки культивирования (15 сут.) на месте подобных инфильтратов образуются кистозные полости, расслаивающие соединительнотканные пластинки, что нарушает прочностные качества используемого материала. Полученные данные имеют немаловажное значение в аспекте клинической оценки роговицы и роговично-склерального соединения при развитии воспалительных процессов [4].
При консервации (в обоих вариантах) наблюдается подавление синтеза про- и анти-апоптотических протеинов. Соотношение экспрессии bcl 2/р53 у эпителиоцитов, фибробластов утрачивает гомеостатический характер, что
в большей мере отмечено при консервации объектов в вакууме. При этом преобладает экспрессия проапоптотических генов, включая показатель уровня каспазной активности.
Полученные результаты показали, что изучение феномена программированного умирания клеток эпителия, фибробластического диф-ферона консервированной в разных условиях роговицы, а также их идентификация в условиях культивирования in vivo, не менее важно, чем оценка их жизнеспособности [5].Такой подход поможет избежать усилий и затрат времени на поддержку жизнеспособности клеток, в которых активизирована программа апоптоза и их элиминация из тканевых структур.
Заключение. Установлены дифференцированная ответная (на условия консервации) реакция различных клеток роговицы, а также тка-неспецифичность синтезов про- и антиапопто-тических протеинов. Показана большая резистентность в условиях консервации эпителиоцитов (среда Борзенка-Мороз) и фибробластов (условия вакуума).
Список использованной литературы:
1.Канюков В.Н.,Стадников А.А. Экспериментально-гистологические основы новых технологий в офтальмохирургии.-Оренбург:ОАО «ИПК Южный Урал», 2009. - 104с.
2.Хлопин Н.Г. Общебиологические и экспериментальные основы гистологии. - Л.:АНСССР, 1946. - 490 с.
3.Лазаренко Ф.М. Закономерности роста и превращения тканей и органов в условиях культивирования их в организме.-М.: Медгиз,1959. - 400 с.
4.Жункейра Л.К., Карнейро Ж. Гистология /пер.с англ.под ред.В.Л.Быкова. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - 576 с.
5.Новиков В.С. Программированная клеточная гибель. - СПб.: Наука, 1996. - 276 с.
218 ВЕСТНИКОГУ№12 декабрь 2010
