CC BY
29
2003.-200 с.
5. Биохимия плацентарной недостаточности
[Текст]/Радзинский В.Е [и др.].-Киев: Наукова думка, 1987.-120 с.
6. Биохимия плацентарной недостаточности
[Текст]/Радзинский В.Е [и др.].-М., 2001.-256 с.
7. Физиологическое значение гуанилатциклазы и
роль оксида азота и нитросоединений в регуляции активности этого фермента [Текст]/Реутов В.П. [и др.]//Физиол. человека.-1993.-Т.19, №1.-С.124-137.
8. Оксид азота. Роль растворимой гуанилатцик-лазы в механизмах его физиологических эффектов [Текст]/И.С.Северина//Вопросы медицинской хи-мии.-2002.-Т.48, Вып.1.-С.3-31.
п □ □
УДК 618.2/.36:616.523-018:574.922 И.В. Довжикова
ГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕВАЛОНАТА В ПЛАЦЕНТЕ ПРИ БЕРЕМЕННОСТИ,
ОСЛОЖНЕННОЙ ГЕРПЕТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИЕЙ
ГУ Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания СО РАМН
РЕЗЮМЕ
Посредством нового гистохимического метода обследованы образцы зрелых плацент, взятых при родах и ворсинчатого хориона, полученного при абортах на сроке от 4 до 10 недель от практически здоровых женщин и перенесших во время беременности обострение герпетической инфекции. Выявлен фермент, маркирующий процесс преобразования мевалоната в области хориального эпителия. Показано изменение интенсивности его окраски при активации вирусной инфекции.
SUMMARY
I.V.Dovgikova
DEHIDROCHOLESTERINE EXCHANGE ACTIVITY IN PLACENTAS OF PATIENTS
WITH HERPETIC INFECTION DURING GESTATION PERIOD
We used new histo-chemical method to study samples of term placenta and villous chorion from healthy patients with herpetic infection during different gestation periods. The aim of the study was to determine 7dehidrocholesterine. We revealed an enzyme marking this steroid transformation process in the region of chorion epithelium. It was found that histo-chemical reaction intensity changed due to virus infection. Steroid-genesis inhibition was attributed to conformation reconstruction of molecules due to virus effect.
Вирусная инфекция играет важную роль в патологии беременных, плода и новорожденного. Большое значение имеют персистирующие формы, наличие которых в организме не всегда сопровождается проявлением клинических признаков болезни, и все же с ними могут быть связаны тяжелые поражения. Особое место среди персистирующих инфекций принадлежит вирусам семейства герпес. Эти возбудители имеют тенденцию к обострению во время беременности. Вирус простого герпеса обнаруживается у 90% населения и считается наиболее распространенным среди вирусных заболеваний. Многочисленные исследования, проводимые учеными как нашей лаборатории, так и другими, позволили установить, что
обострение герпетической инфекции приводит к серьезным изменениям, в том числе и в гормональном фоне [3, 4]. Константированы значительные сдвиги в продукции гормонов, в том числе и стероидных. Возникает естественный вопрос, какова причина этих нарушений. Для ответа на него мы решили проанализировать самое начало процессов синтеза стероидных гормонов, источником которых, как известно, является холестерин. Ранее было выявлено снижение содержания холестерина, диагностируемое как при биохимических исследованиях, так и при гистохимическом изучении плаценты при беременности, осложненной активацией вирусного процесса [1]. Оценка плаценты, которая будучи посредником в создании гормонального комплекса системы мать-плод, играет значимую роль железы внутренней секреции и синтезирует гормоны, очень важна. Одну из ключевых стадий на пути создания холестерина символизирует мевало-нат, образование которого неизбежно приводит в конечном счете к синтезу этого предшественника стероидов. Целью нашей работы было выявление фермента, маркирующего процессы преобразования мева-лоната и влияние на него герпетической инфекции.
Материалы и методы
Материалом для исследования послужило 12 зрелых плацент, взятых при родах от матерей, перенесших обострение герпетической инфекции во время беременности, и не имевших таковой (5 случаев вошли в состав контрольной группы), а также 14 ворсинчатых хорионов, полученных при проведении абортов на сроке от 4 до 10 недель (8 из которых вошли в контрольную группу, а 6 имели обострение герпеса).
Для выполнения поставленной цели в лаборатории механизмов этиопатогенеза и восстановительных процессов дыхательной системы при НЗЛ ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН был разработан оригинальный гистохимический способ для определения мевалоната. Как известно, все вещества подвергаются биологическому окислению в тканях посредством включения промежуточных переносчиков водорода. Наш метод основан на восстановлении акцептора, в качестве которого использовался нитросиний тетразолий. Определяемый фермент условно назвали «мевалонатде-гидрогеназа». Работа выполнялась на криостатных срезах свежезамороженной ткани.
Результаты и их обсуждение
Было проведено выявление активности мевалонат-дегидрогеназы. В плацентах контрольной группы локализация фермента определялась темно-синими гранулами в области хориального эпителия. В соединительнотканной строме и сосудах каких-либо следов гистохимической реакции не было обнаружено. При исследовании ворсинчатого хориона отмечалось возрастание интенсивности окраски зоны трофобласта по мере увеличения срока гестации. Изучение материала от женщин, перенесших во время беременности обострение герпетической инфекции, показало тенденцию к изменению активности выявляемого энзима, которое выявлялась не во всех случаях. В большей части плацент, число которых составило примерно две трети от общего количества, наблюдалось некоторое увеличение активности превращений мевалоната. Приблизительно у одной трети обследованных плацент из этой группы степень интенсивности гистохимической реакции не отличалась от таковой в контрольной группе. Дальнейший анализ показал, что активность фермента мало изменялась в тех случаях, когда вспышка герпетической инфекции сопровождалась низкими титрами иммуноглобулина в к вирусу простого герпеса (до 1:3200).
Для того, чтобы лучше понять, почему мы сосредоточились на исследовании мевалоновой кислоты, остановимся немного на холестериновом обмене.
В середине прошлого века в целом был расшифрован процесс биосинтеза холестерина в животном организме, что явилось триумфом биологической химии. Стали известны основные реакции, приводящие к его образованию, которых насчитывается не менее двадцати пяти [2, 5]. В первом приближении синтез холестериновой молекулы можно разделить на три стадии: I - биосинтез мевалоновой кислоты, II - образование сквалена из мевалоновой кислоты, III -циклизация сквалена и образование холестерина.
Все углеродные атомы холестерина берут свое начало из ацетил-СоА. На первом этапе синтеза две молекулы этого вещества конденсируются под действием цитозольного фермента тиолазы с образованием ацетоацетил-СоА. Затем в работу вступает другой фермент, катализирующий соединение ацетоацетил-СоА с ацетил-СоА с образованием промежуточного вещества 3-гидрокси-3-метилглутарил-СоА, сокращенно ГМГ-СоА. Фермент называется ГМГ-СоА-синтаза. Следующим этапом будет превращение ГМГ -СоА в мевалонат путем двухступенчатого восстановления за счет НАДФН. Этот этап катализируется мик-росомальным ферментом ГМГ-СоА-редуктазой. Молекула мевалоната содержит шесть атомов углерода, две гидроксильные и одну карбоксильную группы [5].
На следующей стадии синтеза холестерина происходит фосфорилирование при участии АТФ декарбок-силирование с образованием продукта изопентилпиро-фосфата. После чего происходит конденсация трех молекул изопентилпирофосфата с получением фарнизил-пирофосфата. Две молекулы которого, в свою очередь, соединяются концами несущими пирофосфатные группы и превращаются в сквален [2, 5].
В череде всех этих последовательных превращений, протекающих на начальных этапах, остановимся на восстановлении ГМГ-СоА в мевалонат. Это практически первая необратимая реакция в цепи биосин-
теза холестерина, происходит она со значительной потерей свободной энергии, и является важным регуляторным этапом. Было показано, что здесь возможно воздействие со стороны ряда факторов. Наиболее интересной находкой явилось установление того факта, что синтез холестерина регулируется в целом по принципу отрицательной обратной связи. Предполагается, что сам холестерин и особенно продукты его окисления могут угнетающе действовать на этот этап, тормозя восстановление мевалоната, что незамедлительно сказывается на синтезе холестерина в целом. Показательно, что некоторые окисленные производные холестерина, такие как, 24-, 25- и 27-гидроксихолестерины ингибируют в гораздо более меньших концентрациях, чем нативный холестерин [2]. Синтез этого стероида подавляется также холестеринсодержащими ЛПНП при их связывании с соответствующими рецепторами [5].
Различными исследователями было обнаружено, что образование мевалоната активируется под воздействием ионизирующей радиации, инсулина и ти-реоидных гормонов. Угнетение наступает в присутствии глюкокортикоидов, глюгогана, больших доз никотиновой кислоты, а также метаболитов грибов -компактина и мевинолина [2, 5].
Таким образом, мы видим, что по оценке активности обмена мевалоната можно судить о синтезе холестерина. То, что интенсивность этого обмена повышается по мере роста срока беременности вполне закономерно, так как нуждаемость в холестерине и продуктах его превращения все время растет. Изменение степени окраски в результате гистохимической реакции в плаценте от женщин, перенесших обострение герпеса, свидетельствовало о том, что нарушение синтетических процессов при синтезе холестерина могло происходить уже на ранних стадиях биосинтеза этого стероида. Ранее уже было показано, что при беременности, осложненной обострением вирусного инфекционного процесса, отмечается снижение содержания холестерина [3, 4]. Данный стероид, как уже упоминалось выше, регулирует стадию образования мевалоната по принципу отрицательной обратной связи.
Вполне вероятно, что пониженный уровень холестерина не позволял в достаточной мере контролировать накопление мевалоновой кислоты, в результате чего и произошло отмеченное нами некоторое повышение активности выявляемого фермента.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гистохимическая характеристика холестерина в плаценте при беременности, осложненной герпесом [Текст]/И.В.Довжикова//Бюл. физиол. и патол. дыха-ния.-2006.-Вып.22.-С.42-44.
2. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения [Текст]/А.Н.Климов, Н.Г.Никульчева.-СПб.: Питер Ком,1999.-512 с.
3. Фетоплацентарная система при ОРВИ [Текст]/ Луценко М.Т. [и др.].-Благовещенск, 2000.-168 с.
4. Фетоплацентарная система при герпесной инфекции [Текст]/Луценко М.Т. [и др.].-Благовещенск, 2003.-200 с.
5. Биохимия человека [Текст]/Мари Р. [и др.].-М.:Мир,1993.-384с.
