CC BY
5
УДК 614.777:615.285.7.012+628.191:1)15.285.7.012
А. К. Маненко, М. И. Гоюегоцкий, А. Д. Видзиш, Л. М. Романюк, Б. Т. Заброцкий, О. П. Иванова
ГИГИЕНИЧЕСКОЕ РЕГЛАМЕНТИРОВАНИЕ ПОЛУПРОДУКТОВ ПРОИЗВОДСТВА ЭТСАНА - ХЛОРГИДРАТ-ЦИКЛОГЕКСАНА И ХЛОРГИДРАТ-ЭТИЛЦИКЛОГЕКСИЛАМИНА В ВОДЕ ВОДНЫХ ОБЪЕКТОВ
Львовсхий медицинский ииститут
Хлоргидрат-циклогексиламин (х-ЦГА) и хлоргидрат-этнлциклогекснламни (х-ЭЦГА) — полупродукты синтеза этсана — гербицида отечественного производства, применяемого для борьбы с сорняками на посевах сахарной и кормовой свеклы. В процессе производства возможно попадание этих веществ с промышленными стоками в водоемы хозяйственно-бытового назначения, что и послужило основанием для проведения экспериментальных исследований с целью разработки ПДК этих веществ в воде водных объектов.
х-ЦГА и х-ЭЦГА представляют собой порошки белого цвета со специфическим запахом, с температурой плавления 206—207 °С, хорошо растворимые в воде.
При органолеитической оценке воды, содержащей х-ЦГА и х-ЭЦГА, установлено, что они придают воде «хлорный» запах, пороги ощущения (1 балл) которого соответственно равны 75,1 и 1860 мг/л, практический предел (2 балла) — 130,7 и 3914 мг/л. Нагревание водных растворов этих веществ до 60 °С и хеширование приводят к повышению интенсивности запаха в 2—2,5 раза. Изучаемые продукты придают воде привкус, порсг восприятия которого соответствует концентрации 0,586 мг/л для х-ЦГА и 5,42 мг/л для х-ЭЦГА. Водные растворы препаратов в концентрациях, пороговых по запаху и привкусу, бесцветны, не вызывают пенообразования.
Стабильность веществ изучали косвенным (по изменению интенсивности запаха) методом. Запах х-ЦГА и х-ЭЦГА в 1—2 балла исчезает на 7—14-е сутки, что позволяет отнести их к стабильным веществам [2]. х-ЦГА в концентрациях 0,75—750 мг/л, а х-ЭЦГА — 18,6— 1860 мг/л снижают биохимическое потребление кислорода и уровень растворенного кислорода (на 20—56 % по сравнению с контролем), стимулируют процессы нитрификации и аммонификации (20—50 % по сравнению с контролем), тормозят рост микроорганизмов. Пороговой по влиянию на санитарный режим водоемов является концентрация 0,75 мг/л для х-ЦГА и 18,6 мг/л для х-ЭЦГА.
По параметрам острой токсичности оба вещества умеренно токсичны. LD50 х-ЦГА для белых крыс составляет 720 (554—936) мг/кг, для белых мышей — 760 (672— 858,8) мг/кг, для морских свинок — 520 (281,1—720) мг/кг, LDso х-ЭЦГА — соответственно 700 (551,2—889) мг/кг, 740 (632—765,8) мг/кг и 400 (270,3—592) мг/кг. Различия в видовой н половой чувствительности не выражены, характер действия изучаемых веществ на организм одинаков. После внутрижелудочного введения препаратов животные становились вялыми, малоподвижными, неопрятными; в последующем отмечались клоннко-тоническне судороги, коматозное состояние, параличи. Гибель животных наступала через 50 мин — 4 ч после затравки при явлениях адинамии и угнетении дыхания. По результатам острого опыта был рассчитан индекс кумуляции для белых крыс, который для обоих веществ равен нулю, что свидетельствует о средней степени их кумулятивности
[7]-
В подостром эксперименте х-ЦГА и х-ЭЦГА вводили белым крысам внутрикелудочно в дозах, равных Чю, '/so. У250 LDso [1]- У животных на 5, 10, 20, 30-е сутки изучали следующие показатели: поведение, массу тела, морфологический состав периферической крови, содержание ге-
моглобина, p-липопротеидов и мочевины в крови, активность щелочной фосфатазы, альдолазы, аминотрансфераз, холинэстеразы, содержание SH-групп в крови.
Полученные результаты показали статистически достоверное снижение содержания эритроцитов, гемоглобина, активности холинэсгеразы в цельной крови, тканях печени и почек, повышение количества лейкоцитов, активности альдолазы, щелочной фосфатазы, аминотрансфераз у животных, получавших х-ЦГА и х-ЭЦГА в дозах 1/ю и '/so LDso- При воздействии этих веществ в дозе '/250 LDi0 наблюдалось лишь увеличение количества лейкоцитов, изменения остальных тестов были статистически недостоверными. С учетом полученных данных в хроническом сани-тарно-токсикологическом эксперименте на белых крысах изучено действие препаратов в дозах 1, 0,1, 0,01 мг/кг.
При введении х-ЦГА и х-ЭЦГА в дозе 1 мг/кг выявлены лейкоцитоз, эрнтропення и снижение содержания гемоглобина в крови во второй половине опыта. Снижение активности холинэстеразы носило фазовый характер, и нормализация этого показателя происходила к концу эксперимента. Дозы веществ 0,1 и 0,01 мг/кг не вызывали статистически достоверных изменений изучаемых показателей. Результаты хронического опыта позволяют считать дозу 1 мг/кг пороговой, а 0,1 мг/кг — недействующей для обеих веществ. С целью оценки специфического действия, начиная с 5-го месяца хронического эксперимента, изучали влияние соединений на генеративную функцию животных (самцов и самок) [3], а также раззнтне их потомства [6]. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии гонадо- к эмбриотоксического эффекта при действии веществ в дезах 1 и 0,1 мг/кг. В этих же дозах препараты не обладают мутагенной активностью, изученной на белых мышах методом анатслофазного анализа клеток костного мозга [5]. Аллергенного действия изучаемые вещества также не оказывали [4].
Комплексная оценка полученных результатов и срав нение пороговых концентраций по всем установленным признакам вредности позволили предложить в качестве ПДК х-ЦГА 0,586 мг/л (лимитирующий признак вредности — органолептическин), ПДК х-ЭЦГА 2 мг/л (лимитирующий признак вредности — саннтарно-токсикологиче-скнй).
Литература
1. Красовский Г. Н. и др.//Гиг. и сан. — 1970. — № 3.—
С. 83-88.
2. Мазаев В. Т. Гигиенические аспекты охраны водоемов при производстве и применении оловоорганнческнх соединений: Авторео. дне. докт. мед. наук. — М., 1978.
3. Милованов В. К. Биология воспроизводства и искусственного осеменения животных.—М., 1962. — С. 419— 479.
4. Петрус В. С., Го/сегоцкий М. И., Маненко Л. К. и др. // Проблемы гигиены и токсикологии пестицидов. — Киев, 1981, —Ч. 2, —С. 157—158.
5. Пилинская М. А., Куринный А. И. Временные методи-
ческие рекомендации по оценке потенциальной мутагенной опасности пестицидов. — М., 1980. 6. Саноцкий И. В., Фоменко В. И. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм. — М., 1979.
7. Штабский Б. М. // Гиг. труда. 28.
Поступила 27.12.85
1974, — № 2, —С. 26-
УДК 613.630:667.621.72]-099:[579.В42.14:579.253.2
3. А. Гафиева, В. А. Чудин
ОЦЕНКА МУТАГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ТРИБУТИЛФОСФАТА НА SALMONELLA TyPHIMURIUM
Трибутилфосфат (ТБФ) широко используется в промышленности в качестве пластификатора и растворителя для экстракции металлов, а также в технологии производства некоторых радиоактивных элементов. В связи с этим возникает необходимость оценки мутагенной и канцерогенной активности ТБФ.
Целью нашей работы являлось изучение его мутагенной активности методом полуколичсствснного учета генных мутаций у бактерий.
Мутагенность ТБФ определяли с помощью 1еста Эймса на Salmonella typhimurium. В опытах использовали дна индикаторных штамма, относящихся к группе гистидимо-вых ауксотрофов: ТА 1535 и ТА 1538. Мутагенный эффект химических соединений обнаруживается в результате реверсии исходных штаммов от ауксотрофности по гистнди-ну к прототрофности. Штамм ТА 1535 ревертирует путем замены пар оснований, штамм ТА 1538 — по типу сдвига рамки считывания. Кроме того, оба штамма имеют дополнительные мутации, значительно повышающие их чувствительность к действию мутагенов. Это rfa мутация, увеличивающая проницаемость клеточной мембраны, и мутация wrb, вызывающая нарушение системы эксцизион-ной репарации.
Мутагенную активность изучали с метаболической активацией и без нее. Для метаболической активации Т5Ф использовали постмитохокдриальный супернатант гомоге-ната печени крыс-самцов Внстар, получавших индуктор мнкросом — фенобарбитал. Исследуемое вещество вносили вместе с тест-культурой и постмнтохондрнальным суперна-тантом (при метаболической активации) в слой верхнего полужидкого агара с последующим наслоением на минимальный агар. Для повышения чувствительности пробы перед посевом проводили 30-минутную преинкубацию при температуре 37°С. Результаты опытов учитывали путем сравнения числа выросших колоний ревертантов на опытных и контрольных чашках. Контролем являлся спонтанный фон мутаций. Каждую серию опытов повторяли трижды.
Испытывали следующие концентрации ТБФ: 1000, 500 и 100 и 10 мкг на 1 чашку. Ставили опыты и оценивали их результаты согласно методическим указаниям [2].
Данные, представленные в таблице, свидетельствуют о том, что ТБФ без метаболической активации проявляет
мутагенную активность на обоих тестерных штаммах. Наблюдается прямая зависимость индукции обратных мутаций от концентрации исследуемого вещества. Наибольший мутагенный эффект обнаруживается при дозе 1000 мкг на 1 чашку, с уменьшением дозы до 500 мкг на 1 чашку мутагенность ТБФ снижается и в дозах 100— 10 мкг на 1 чашку не проявляется. Вещество считается мутагенным, если 1 мг его дает увеличение числа обратных мутаций более чем в '2,5 раза но сравнению с фоном спонтанных мутаций [1, 2]. В наших опытах максимальное превышение числа индуцированных ревертантов над спонтанными мутациям!: в такой дозе составляет 80 раз на штамме ТА 1535 и 24 раза на штамме ТА 1538. Следовательно, ТБФ является прямым мутагеном, преимущественно индуцирующим в геноме бактерий замену пар оснований, а также мутации по типу сдвига рамки считывания.
В результате метаболизма ТБФ в организме крыс образуются 12 фосфорсодержащих метаболитов, из них сснов-нымн являются дибутилфосфат, бутилфосфат, бутил-бис(3-оксибутнл) фосфат [3]. Во всех вариантах опытов с метаболической активацией количество колоний ревертантов находится на уровне спонтанного фона мутаций, что свидетельствует об отсутствии мутагенной активности. Однако с учетом бактерицидности больших концентраций ТБФ выявляются признаки мутагенности его метаболитов: частота мутаций в дозах 1000 и 500 мкг на 1 чашку в условиях метаболической активации превышает контроль в 7 и 3 раза соответственно. Следовательно, полностью исключить канцерогенный эффект трнбутилфосфата при его инкорпорации нельзя. Для решения этого вопроса необходимы специальные исследования на животных.
Литература
1. Методы общей бактериологии / Под ред. Ф. Герхардта и др.: Пер. с англ. —М., 1984.— Т. 2. — С. 48—55.
2. Фонштейн Л. М., Калинина J1. М., Полухина Г. М. Тест-система оценки мутагенной активности загрязнителей среды на Salmonella typhimurium: Метод, указания. — М„ 1976.
3. Suzuki Takashi, Sasaki Kumiko, Takeda Mitsuliari, Uchiyama Mitsuru. // J. Agricult. Food Chem. — 1984.— Vol. 32, —P. 603—610.
Поступила 06.11.85
Результаты оценки мутагенной активности ТБФ на Salmonella typhimurium
Без метаболической активации С метаболической активацией
ТА 1535 ТА 1538 ТА 1535 ТА 1538
Вещество, мкг на 1 чашку
число колоний число колоний частота мутаций число колоний частота мутаций
1000 923 162 15,0 1,08-10-(- 17 1,4-10-в
500 528 30 5,3 0,44-10-« 10,7 0,89-Ю-6
100 8 7 6,7 0,1510-« 12,3 0,19-10-°
10 7,7 4,7 8,7 0,15-10_<' 6- 0,14-Ю-6
Контроль 12 6,7 6,7 0,15-10-« 12,3 0,19- Ю-6
