CC BY
5
ческие рекомендации по оценке потенциальной мутагенной опасности пестицидов. — М., 1980. 6. Саноцкий И. В., Фоменко В. И. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм. — М., 1979.
7. Штабский Б. М. // Гиг. труда. 28.
Поступила 27.12.85
1974, — № 2, —С. 26-
УДК 613.630:667.621.72]-099:[579.В42.14:579.253.2
3. А. Гафиева, В. А. Чудин
ОЦЕНКА МУТАГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ТРИБУТИЛФОСФАТА НА SALMONELLA TyPHIMURIUM
Трибутилфосфат (ТБФ) широко используется в промышленности в качестве пластификатора и растворителя для экстракции металлов, а также в технологии производства некоторых радиоактивных элементов. В связи с этим возникает необходимость оценки мутагенной и канцерогенной активности ТБФ.
Целью нашей работы являлось изучение его мутагенной активности методом полуколичсствснного учета генных мутаций у бактерий.
Мутагенность ТБФ определяли с помощью 1еста Эймса на Salmonella typhimurium. В опытах использовали дна индикаторных штамма, относящихся к группе гистидимо-вых ауксотрофов: ТА 1535 и ТА 1538. Мутагенный эффект химических соединений обнаруживается в результате реверсии исходных штаммов от ауксотрофности по гистнди-ну к прототрофности. Штамм ТА 1535 ревертирует путем замены пар оснований, штамм ТА 1538 — по типу сдвига рамки считывания. Кроме того, оба штамма имеют дополнительные мутации, значительно повышающие их чувствительность к действию мутагенов. Это rfa мутация, увеличивающая проницаемость клеточной мембраны, и мутация wrb, вызывающая нарушение системы эксцизион-ной репарации.
Мутагенную активность изучали с метаболической активацией и без нее. Для метаболической активации Т5Ф использовали постмитохокдриальный супернатант гомоге-ната печени крыс-самцов Внстар, получавших индуктор мнкросом — фенобарбитал. Исследуемое вещество вносили вместе с тест-культурой и постмнтохондрнальным суперна-тантом (при метаболической активации) в слой верхнего полужидкого агара с последующим наслоением на минимальный агар. Для повышения чувствительности пробы перед посевом проводили 30-минутную преинкубацию при температуре 37°С. Результаты опытов учитывали путем сравнения числа выросших колоний ревертантов на опытных и контрольных чашках. Контролем являлся спонтанный фон мутаций. Каждую серию опытов повторяли трижды.
Испытывали следующие концентрации ТБФ: 1000, 500 и 100 и 10 мкг на 1 чашку. Ставили опыты и оценивали их результаты согласно методическим указаниям [2].
Данные, представленные в таблице, свидетельствуют о том, что ТБФ без метаболической активации проявляет
мутагенную активность на обоих тестерных штаммах. Наблюдается прямая зависимость индукции обратных мутаций от концентрации исследуемого вещества. Наибольший мутагенный эффект обнаруживается при дозе 1000 мкг на 1 чашку, с уменьшением дозы до 500 мкг на 1 чашку мутагенность ТБФ снижается и в дозах 100— 10 мкг на 1 чашку не проявляется. Вещество считается мутагенным, если 1 мг его дает увеличение числа обратных мутаций более чем в '2,5 раза но сравнению с фоном спонтанных мутаций [1, 2]. В наших опытах максимальное превышение числа индуцированных ревертантов над спонтанными мутациям!: в такой дозе составляет 80 раз на штамме ТА 1535 и 24 раза на штамме ТА 1538. Следовательно, ТБФ является прямым мутагеном, преимущественно индуцирующим в геноме бактерий замену пар оснований, а также мутации по типу сдвига рамки считывания.
В результате метаболизма ТБФ в организме крыс образуются 12 фосфорсодержащих метаболитов, из них сснов-нымн являются дибутилфосфат, бутилфосфат, бутил-бис(3-оксибутнл) фосфат [3]. Во всех вариантах опытов с метаболической активацией количество колоний ревертантов находится на уровне спонтанного фона мутаций, что свидетельствует об отсутствии мутагенной активности. Однако с учетом бактерицидности больших концентраций ТБФ выявляются признаки мутагенности его метаболитов: частота мутаций в дозах 1000 и 500 мкг на 1 чашку в условиях метаболической активации превышает контроль в 7 и 3 раза соответственно. Следовательно, полностью исключить канцерогенный эффект трнбутилфосфата при его инкорпорации нельзя. Для решения этого вопроса необходимы специальные исследования на животных.
Литература
1. Методы общей бактериологии / Под ред. Ф. Герхардта и др.: Пер. с англ. —М., 1984.— Т. 2. — С. 48—55.
2. Фонштейн Л. М., Калинина J1. М., Полухина Г. М. Тест-система оценки мутагенной активности загрязнителей среды на Salmonella typhimurium: Метод, указания. — М„ 1976.
3. Suzuki Takashi, Sasaki Kumiko, Takeda Mitsuliari, Uchiyama Mitsuru. // J. Agricult. Food Chem. — 1984.— Vol. 32, —P. 603—610.
Поступила 06.11.85
Результаты оценки мутагенной активности ТБФ на Salmonella typhimurium
Без метаболической активации С метаболической активацией
ТА 1535 ТА 1538 ТА 1535 ТА 1538
Вещество, мкг на 1 чашку
число колоний число колоний частота мутаций число колоний частота мутаций
1000 923 162 15,0 1,08-10-(- 17 1,4-10-в
500 528 30 5,3 0,44-10-« 10,7 0,89-Ю-6
100 8 7 6,7 0,1510-« 12,3 0,19-10-°
10 7,7 4,7 8,7 0,15-10_<' 6- 0,14-Ю-6
Контроль 12 6,7 6,7 0,15-10-« 12,3 0,19- Ю-6
