CC BY
66
УДК 577.2:577.21+616.9:616.981.49+614.4
ГЕТЕРОГЕННОСТЬ ПЛАЗМИД МОЛЕКУЛЯРНОЙ МАССОЙ 1,4 МДа В ШТАММАХ SALMONELLA ENTERITIDIS
Алексей Владимирович РАКОВ, Феликс Николаевич ШУБИН, Наталья Анатольевна КУЗНЕЦОВА
ФГБУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.П. Сомова СО РАМН 690087, г. Владивосток, ул. Сельская, 1
Выполнено ПЦР-типирование 100 штаммов S. Enteritidis, содержащих плазмиду молекулярной массой 1,4 МДа (2100 пар оснований), описанную нами ранее в штаммах микроба. Показано ее родство представленной в GenBank плазмиде pJ S. Enteritidis, описанной в Чехии. Установлено, что данная плазмида в течение 16 лет присутствует в штаммах S. Enteritidis, изолированных от больных, из пищевых продуктов и из смывов с объектов внешней среды на административных территориях большинства субъектов РФ в Сибири и на Дальнем Востоке, что подтверждает ее трансконтинентальное распространение.
Ключевые слова: Salmonella Enteritidis, плазмида, плазмидный анализ, полимеразная цепная реакция.
Сальмонеллезная инфекция распространена во всех странах мира, причем в последние двадцать пять лет вспышки этой болезни участились, а спорадическая заболеваемость не имеет тенденции к снижению. В большинстве стран мира ведущее значение в заболеваемости сальмонел-лезом имеет Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis (S. Enteritidis).
Для внутривидовой дифференциации сальмонелл используется ряд методов, основанных на исследовании плазмидной и хромосомной ДНК [23]. К первой группе относятся плазмидный анализ и рестрикционный анализ плазмидных ДНК [18, 23]. Вторая группа включает риботи-пирование [13], ^200-типирование [23], RAPD-типирование [20], пульс-электрофоретическое типирование [23], VNTR-типирование [15] и мультилокусное сиквенс-типирование [12]. При исследовании S. Enteritidis методами второй группы была показана высокая клональность популяции микроба [21], что вместе с относительной их дороговизной ограничивает распространение данной группы методов. Поэтому для эпидемиологических исследований часто применяется метод плазмидного анализа [6, 16, 17, 24]. Суть метода состоит в том, что он позволяет дифференцировать бактерии внутри одного серо-вара по содержанию имеющихся в них мобиль-
ных генетических элементов - плазмид. Каждый отличающийся набор плазмид называется плаз-мидным типом. При этом 5". Enteritidis, согласно исследованиям, отличается достаточно большим разнообразием плазмидных типов [5, 14, 17-19]. Плазмидный анализ для типирования сальмонелл характеризуется хорошей воспроизводимостью результатов, достаточной разрешающей силой, сравнительной легкостью выполнения и интерпретации полученных данных, а плазмиды содержатся у большинства штаммов сальмонелл [5, 17]. Была показана устойчивость наследования плазмид в штаммах 5. Enteritidis на протяжении длительного периода наблюдений [5, 18]. Однако некоторые исследователи утверждали, что плазмиды, являясь мобильными генетическими элементами, могут утрачиваться, приобретаться и передаваться от сальмонелл и обратно к другим видам семейства ЕПешЬаСейасеае [7, 22].
Все плазмиды условно можно разделить на высоко- и низкомолекулярные. К высокомолекулярным плазмидам относятся, например, плаз-мида вирулентности массой 38 МДа (57 000 пар оснований (п. о.)), встречающаяся у большинства штаммов 5. Enteritidis [4, 8, 9], и плазмиды анти-биотикорезистентности, которые у 5. Enteritidis выявляются редко [5, 16, 18]. Наибольший интерес представляют низкомолекулярные плазмиды,
Раков А.В. - к.м.н., старший научный сотрудник лаборатории молекулярной эпидемиологии, e-mail: vokar@mail333.com
Шубин Ф.Н. - д.м.н., проф., зав. лабораторией молекулярной эпидемиологии, e-mail: shubin@inbox.ru Кузнецова Н.А. - к.м.н., старший научный сотрудник лаборатории молекулярной эпидемиологии, е-mail: kuznetsovanata@mail.ru
которые могут играть роль эпидемиологических маркеров возбудителя [5, 17, 18]. Наиболее часто встречающейся из них является небольшая плаз-мида молекулярной массой 1,4 МДа (2100 п. о.) [5, 10, 24]. Данная плазмида была исследована нами методом рестрикционного анализа с использованием эндонуклеазы рестрикции TaqI. Был показан одинаковый рестрикционный профиль этой плазмиды как в составе плазмидно-го типа 38:1,4 МДа, так и в штаммах микроба, содержащих единственную плазмиду 1,4 МДа (2100 п. о.) [5].
Штаммы 5". Enteritidis, содержащие плазми-ду с похожей молекулярной массой, выделялись также в Чехии [10], Турции [24] и Пакистане [19]. Все это свидетельствует о широкой распространенности плазмид данной молекулярной массы в штаммах микроба, однако, несмотря на схожесть по молекулярной массе, их нуклеотидная последовательность может отличаться.
D. Gregorova и соавт. [10] изучали структуру и функции низкомолекулярных плазмид 5. Enteritidis с использованием методов ДНК-гибридизации и секвенирования. Они разделили их на три группы - Со1Е1, Со1Е2 и плазмиды, реплицирующиеся по механизму «катящегося круга». При этом две родственные плазмиды третьей группы рВ и pJ с молекулярной массой соответственно 1983 и 2096 п. о. были отнесены к самым маленьким из обнаруженных плазмид у серовара 5. Enteritidis. Они были похожи по нуклеотидным последовательностям, содержали значительные по протяженности общие консервативные фрагменты, но отличались между собой наличием замен отдельных нуклеотидов и нескольких деле-ций у плазмиды рВ.
Целью настоящего исследования являлось сравнительное изучение плазмид рВ и pJ, описанных в GenBank, и выявленных нами плазмид с молекулярной массой 1,4 МДа (2100 п. о.), а также их распространение в штаммах 5. Enteritidis, изолированных из различных экологических источников в разное время на территории Сибири и Дальнего Востока.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Для исследования было отобрано 100 штаммов 5. Enteritidis, содержащих плазмиду с молекулярной массой 1,4 МДа (2100 п. о.), что было выявлено путем плазмидного анализа. Штаммы были выделены от больных (72 штамма), из пищевых продуктов предприятий промышленного птицеводства и из полуфабрикатов в розничной торговле (20 штаммов), из смывов с объектов внешней среды (8 штаммов) в период с 1997 по
2012 г. в Приморском крае (37 штаммов), Магаданской (1 штамм), Иркутской (56 штаммов), Новосибирской (1 штамм), Омской (1 штамм) областях, Республике Саха (Якутия) (3 штамма) и Республике Бурятия (1 штамм). Идентификацию сальмонелл проводили общепринятыми методами [1].
Определение спектра плазмид в штаммах сальмонелл проводили методом щелочного лизиса [11]. Известные плазмиды RP4 (38 МДа), pBR322 (2,9 МДа) и pVM82 (82 МДа) использовали как стандарты для молекулярной массы.
Плазмидную ДНК для ПЦР выделяли с использованием наборов AxyPrep Plasmid Miniprep Kit (AxyGen Scientific Inc., США). ПЦР проводили в амплификаторе «Терцик» (ООО «ДНК-Технология», Россия). Реакцию выполняли в объеме 25 мкл с использованием набора GoTaq PCR Core System II (Promega Inc., США). Программа состояла из следующих этапов: 1 цикл 94 0С 5 минут, 30 циклов 94 0С 1 минута, 50 оС 1 минута, 72 оС 1 минута и 1 цикл 72 оС 5 минут. Электрофорез продуктов ПЦР вели в 1 % агароз-ном геле (Serva Electrophoresis GmbH, ФРГ) и в 1 х трисборатном буфере. Гели окрашивали в бромистом этидии и фотографировали в УФ-свете на трансиллюминаторе Vilber Lourmat TFX-20M (Франция). В качестве маркера молекулярного веса использовали 100bp+2kb+3kb DNA ladder (СибЭнзим, Россия). В качестве отрицательных контролей для ПЦР было использовано 11 штаммов S. Enteritidis плазмидных типов, не содержащих плазмиду 1,4 МДа (2100 п. о.).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Исследование штаммов S. Enteritidis в плаз-мидном анализе показало, что они относились к 11 плазмидным типам. Из них 78 штаммов относились к плазмидному типу 38:1,4 МДа, 4 штамма - 38:26:1,4 МДа, 3 штамма - 38:30:1,4 МДа, 2 штамма - 38:2,6:1,4 МДа, 3 штамма -38:3,2:2,9:1,4 МДа, 2 штамма - 38:3,0:1,4 МДа, 4 штамма - 60:38:1,4 МДа и по 1 штамму плазмидных типов 50:38:1,4 МДа, 38:3,5:1,4 МДа, 2,3:1,4 МДа, 3,4:1,4 МДа. Общим для всех исследованных штаммов было присутствие в них плаз-миды молекулярной массой 1,4 МДа (2100 п. о.).
Проведенный анализ базы данных GenBank показал наличие в нем двух плазмид с молекулярной массой, схожей с нашей плазмидой. Это плазмиды pB и pJ молекулярной массой 1983 п. о. (Acc. No. AY178821) и 2096 п. о. (Acc. No. AF268389) соответственно. Их последовательности из GenBank в дальнейшем были использованы для подбора праймеров.
Для первичного исследования, относится ли плазмида молекулярной массой 1,4 МДа (2100 п. о.) из исследуемых штаммов 5. Enteritidis к какой-либо из плазмид pJ или рВ, мы подобрали пары праймеров, расположенные в различных областях плазмид (табл. 1). Подобранные пары праймеров можно разделить на три группы: 1) 2 пары праймеров, общих для обеих плазмид (pBJ1F/pBJ1R и pBJ2F/pBJ2R); 2) специфические праймеры на каждую из плазмид (pBF/pBR и pJF/pJR); 3) дифференцирующие праймеры (pBpJF/pBpJR). Дифференцирующие праймеры были подобраны таким образом, что они находились в консервативных для обеих плазмид областях, а амплифицируемый фрагмент содержал вариабельную часть, варьирующую по молекулярной массе в зависимости от того, какая плаз-мида содержится в штамме микроба - для плаз-миды рВ размер ампликона составил 469 п. о., а для плазмиды pJ - 574 п. о. Эти различия длины ампликонов обусловлены наличием у плазмиды рВ нескольких делеций.
Для проверки специфичности всех пар праймеров были отобраны три штамма 5. Enteritidis, содержащих единственную плазмиду массой 1,4 МДа (2100 п. о.). Эти штаммы выделены в Приморском крае и в Омской области в 2010 г. от больного и из двух проб продуктов. Все они давали положительную реакцию с праймерами, специфическими для плазмиды pJ, и не реагировали со специфическими праймерами на плаз-миду рВ. Реакция с обоими общими праймера-ми также дала положительный результат. ДНК всех трех исследованных штаммов 5. Enteritidis в ПЦР с дифференцирующими праймерами pBpJ давала фрагмент молекулярной массой 574 п. о.,
характерный для плазмиды pJ. Таким образом, выделенные нами плазмиды из трех штаммов 5. Enteritidis являются родственными ранее описанной плазмиде pJ, а не плазмиде рВ.
Следующим этапом было исследование оставшихся отобранных 97 штаммов 5. Enteritidis. Для этой цели нами была использована пара дифференцирующих праймеров pBpJ. Исследование штаммов 5. Enteritidis с дифференцирующими праймерами pBpJ показало, что во всех штаммах амплифицировался фрагмент массой 574 п. о., характерный для плазмиды pJ, и ни один из штаммов не дал амплификации фрагмента массой 469 п. о., свойственного плазмиде рВ (табл. 2). Следовательно, плазмида массой 1,4 МДа (2100 п. о.), содержащаяся во всех исследованных штаммах 5. Enteritidis 11 плазмидных типов, относится к плазмиде pJ. Для проверки специфичности реакции ПЦР с дифференцирующими праймерами было исследовано 11 штаммов 5. Enteritidis других плазмидных типов, не содержащих плазмиду массой 1,4 МДа:38 МДа, 38:2,3 МДа, 38:2,6 МДа. Ни с одним из этих штаммов не выявили амплификации какого-либо фрагмента.
Плазмида массой 1,4 МДа (2100 п. о.) достаточно широко распространена в штаммах 5. Enteritidis, выделенных на территории Сибири и Дальнего Востока [2, 5, 6]. Наиболее полно ее распространение можно проследить на штаммах, выделенных в Приморском крае. Плазмида массой 1,4 МДа обнаружена у 30,9 % от всех исследованных штаммов за весь период наблюдений с 1995 г., когда впервые она была выявлена у приморских штаммов [3]. При этом основным плаз-мидным типом, содержащим данную плазмиду,
Таблица 1
Праймеры, использованные для анализа плазмиды 1,4 МДа
Название праймера Последовательность Фрагмент / Место расположения в плазмиде Характеристика
pBJ1F CGCGCATCCCCACTTCCACACC 505 п. о. / 580-1086 п. о. Общие для рВ и р1
pBJ1R CCCGACACCCCGCTAGCCTGATTC
pBJ2F GGGGTGAAAGTCTGTGGATG 500 п. о. / 1701-215 п. о. Общие для рВ и р1
pBJ2R GCCCCGTAGCGCTCATATTC
pBF TTCAGGGCTGGATCCGCACAA 732 п. о. / 532-1264 п. о. Специфичные для рВ
pBR AACTGGCAGTCGGGGAATCTCACG
pJF ACCGCACGACAAACGAACCTAA 236 п. о. / 1200-1435 п. о. Специфичные для р1
pJR CCCACATAATCACCCACAACTC
pBpJ-F AATTCCCGCCGTTTCTCG 469 п. о. для рВ, 574 п. о. для р1 / 1164-1738 п. о. Дифференцирующие рВ и р1
pBpJ-R TTTTCCCGTGCCGTCGTCAATC
Примечание. Праймеры подобраны в лаборатории в соответствии с нуклеотидными последовательностями плазмид рВ (Асс. N0. AY178821) и р1 (Асс. N0. АЕ268389).
Таблица 2
Характеристика исследованных штаммов S. enteritidis, содержащих плазмиду
молекулярной массой 1,4 МДа
Плазмидные типы (МДа) Количество штаммов Источник выделения Размеры ампликонов, образующихся с дифференцирующими праймерами, рВ - 469 п. о. / р1 - 574 п. о.
Год больные продукты внешняя среда
1997 38:1,4 3 3 0 0 574
1998 38:3,0:1,4 1 1 0 0 574
1999 38:1,4 1 0 0 1 574
2000 38:1,4 4 2 2 0 574
2001 38:1,4 6 0 6 0 574
2003 38:1,4 5 2 2 1 574
38:26:1,4 1 1 0 0 574
38:3,5:1,4 1 1 0 0 574
38:3,2:2,9:1,4 1 1 0 0 574
2004 38:2,6:1,4 1 1 0 0 574
2005 38:1,4 2 2 0 0 574
38:26:1,4 1 1 0 0 574
2006 38:1,4 1 0 1 0 574
2007 38:1,4 27 17 5 5 574
38:26:1,4 1 1 0 0 574
2008 38:1,4 2 1 1 0 574
2009 38:1,4 3 3 0 0 574
2010 38:1,4 8 6 2 0 574
38:30:1,4 1 1 0 0 574
38:2,6:1,4 1 1 0 0 574
38:3,2:2,9:1,4 2 2 0 0 574
60:38:1,4 1 1 0 0 574
2,3:1,4 1 1 0 0 574
2011 38:1,4 16 14 1 1 574
38:30:1,4 1 1 0 0 574
60:38:1,4 3 3 0 0 574
3,4:1,4 1 1 0 0 574
2012 38:3,0:1,4 1 1 0 0 574
38:26:1,4 1 1 0 0 574
38:30:1,4 1 1 0 0 574
50:38:1,4 1 1 0 0 574
Всего 11 100 72 20 8 574
является тип 38:1,4 МДа (28,71 % от всех исследованных штаммов). В ПЦР нами исследовано 23 штамма микроба, выделенные в Приморском крае с 1997 по 2011 г. из различных экологических источников - от больных (10 штаммов), из продуктов (11 штаммов) и из смывов с объектов внешней среды (2 штамма). Кроме того, исследовано 55 штаммов, выделенных в других субъектах Сибири и Дальнего Востока на протяжении 9 лет. Во всех случаях в штаммах плазмидного типа 38:1,4 МДа, изолированных от больных, из пищевых продуктов и из объектов внешней среды во всех изученных регионах, они были родственны именно плазмиде pJ.
Кроме того, исследованы штаммы 10 других плазмидных типов, содержащих плазмиду массой 1,4 МДа (см. табл. 2). При этом все 22 штамма были выделены от больных с 1998 по 2011 г., из них 14 штаммов - от больных в Приморском крае, 6 штаммов - от больных в Иркутской области, по одному - от больных из Магаданской области и из Республики Саха (Якутия). Плазми-да 1,4 МДа (2100 п. о.) прослежена в штаммах микроба плазмидного типа 38:1,4 МДа на протяжении 16 лет, а в штаммах остальных плазмид-ных типов - в основном более 3-8 лет. Во всех случаях исследование штаммов в ПЦР с дифференцирующими праймерами pBpJ приводило к
амплификации фрагмента ДНК массой 574 п. о., что указывало на родство плазмиды 1,4 МДа именно плазмиде pJ.
Таким образом, разработанные нами прайме-ры доказали свою специфичность для плазмиды pJ молекулярной массой 2096 п. о. Все исследованные штаммы S. Enteritidis независимо от плазмидного спектра штаммов, времени, места и источника выделения содержали плазмиду массой 1,4 МДа, родственную ранее описанной плаз-миде pJ.
Следовательно, можно говорить о трансконтинентальном распространении данной плазми-ды на евразийском континенте, поскольку штаммы, содержащие плазмиду pJ, выделены в Чехии, а родственные ей штаммы с плазмидой молекулярной массой 1,4 МДа - в Сибири и на Дальнем Востоке России.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Полученные данные позволяют нам говорить о том, что плазмида молекулярной массой 1,4 МДа, обнаруженная в штаммах различных плазмидных типов S. Enteritidis, выделенных в Сибири и на Дальнем Востоке, является родственной плазмиде pJ. При этом плазмида 1,4 МДа обнаружена в штаммах S. Enteritidis различного происхождения (больные, продукты питания, внешняя среда) на протяжении 16 лет наблюдений. Учитывая тот факт, что плазмида pJ выделена от больных в Чехии, а исследованные нами штаммы - от больных и из продуктов животного происхождения в Сибири и на Дальнем Востоке, можно полагать, что ареал распространения данной плазмиды носит трансконтинентальный характер.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Голубева И.В., Килессо В.А., Киселева Б.С. и др. Энтеробактерии. Руководство для врачей. М., 1985. 320 с.
2. Кузнецова Н.А., Шубин Ф.Н., Раков А.В. и др. Возрастная структура сальмонеллеза, вызванного доминирующими плазмидоварами Salmonella enteritidis, в г. Владивостоке // Тихоокеан. мед. журн. 2006. (3). 80-82.
3. Раков А.В., Шубин Ф.Н., Иванис В.А. и др. Сравнительная характеристика сальмонеллеза, вызванного различными плазмидоварами Salmonella enteritidis // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2001. (5). 50-54.
4. Раков А.В. Микробиолого-клинические параллели при сальмонеллезной инфекции: автореф. дис. ... канд. мед. наук. Владивосток, 2003.
5. Шубин Ф.Н., Ковальчук Н.И., Кузнецова Н.А. и др. Микробиологический мониторинг за Salmo-
nella enteritidis в Приморском крае. Фенотипиче-ская и плазмидная характеристика возбудителя // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2002.
(1). 36-40.
6. Шубин Ф.Н., Раков А.В., Кузнецова Н.А. Микробиологический молекулярно-генетический мониторинг за возбудителями кишечных инфекций как составная часть эпидемиологического надзора // Бюл. СО РАМН. 2011. (4). 100-106.
7. Boyd E.F., Hartl D.L. Recent horizontal transmission of plasmids between natural populations of Escherichia coli and Salmonella enterica // J. Bacteriol.
1997. 179. (5). 1622-1627.
8. Boyd E.F., Hartl D.L. Salmonella virulence plasmid. Modular acquisition of the spv virulence region by an F-plasmid in Salmonella enterica subspecies I and insertion into the chromosome of subspecies II, IIIa, IV and VII isolates // Genetics. 1998. 149. (3). 1183-1190.
9. Chiu C.H., Ou J.T. Rapid identification of Salmonella serovars in feces by specific detection of virulence genes, invA and spvC, by an enrichment broth culture-multiplex PCR combination assay // J. Clin. Microbiol. 1996. 34. (10). 2619-2622.
10. Gregorova D., Matiasovicova J., Sebkova A. et al. Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis harbours ColE1, ColE2, and rolling circlelike replicating plasmids // Can. J. Microbiol. 2004. 50.
(2). 107-112.
11. Kado C.I., Liu S.T. Rapid procedure for detection and isolation of large and small plasmids // J. Bacteriol. 1981. 145. (3). 1365-1373.
12. Kotetishvili M., Stine O.C., Kreger A. et al. Multilocus sequence typing for characterization of clinical and environmental Salmonella strains // J. Clin. Microbiol. 2002. 40. (5). 1626-1635.
13. Landeras E., Mendoza M.C. Evaluation of PCR-based methods and ribotyping performed with a mixture of PstI and SphI to differentiate strains of Salmonella serotype Enteritidis // J. Med. Microbiol.
1998. 47. (5). 427-434.
14. Liebana E., Garcia-Migura L., Breslin M.F. et al. Diversity of strains of Salmonella enterica serotype enteritidis from English poultry farms assessed by multiple genetic fingerprinting // J. Clin. Microbiol. 2001. 39. (1). 154-161.
15. Ramisse V., Houssu P., Hernandez E. et al. Variable number of tandem repeats in Salmonella enterica subsp. enterica for typing purposes // J. Clin. Microbiol. 2004. 42. (12). 5722-5730.
16. Ridley A.M., Threlfall E.J., Rowe B. Genotypic characterization of Salmonella enteritidis phage types by plasmid analysis, ribotyping, and pulsed-field gel electrophoresis // J. Clin. Microbiol. 1998. 36. (8). 2314-2321.
17. Rivera M.J., Rivera A., Castillo J. et al. Plasmid profile in epidemiological studies of human Salmonella infections // J. Chemother. 1993. 5. (Suppl. 1). 288-290.
18. Rychlik I., Karpiskova R., Faldynova M. et al. Computer-assisted restriction endonuclease analysis of plasmid DNA in field strains of Salmonella enteritidis // Can. J. Microbiol. 1998. 44. (12). 1183-1185.
19. Sajid S.U., Schwarz S. Plasmid fingerprinting and virulence gene detection among indigenous strains of Salmonella enterica serovar enteritidis // J. Ayub. Med. Coll. Abbottabad. 2009. 21. (2). 83-86.
20. Soto S.M., Guerra B., Gonzälez-Hevia M.A. et al. Potential of three-way randomly amplified polymorphic DNA analysis as a typing method for twelve Salmonella serotypes // Appl. Environ. Microbiol. 1999. 65. (11). 4830-4836.
21. Spratt B.G., Maiden M.C.J. Bacterial population genetics, evolution and epidemiology // Philos.
Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 1999. 354. (1384). 701-710.
22. Winokur P.L., Vonstein D.L., Hoffman L.J. et al. Evidence for transfer of CMY-2 AmpC beta-lactamase plasmids between Escherichia coli and Salmonella isolates from food animals and humans // Antimicrob. Agents Chemother. 2001. 45. (10). 2716-2722.
23. Winokur P.L. Molecular epidemiological techniques for Salmonella strain discrimination // Front Biosci. 2003. (8). c14-c24.
24. Us E., Erdem B., Tekeli A. et al. Investigation of Salmonella serotype Enteritidis isolates by plasmid profile analysis and pulsed field gel electrophoresis // Mikrobiyol. Bul. 2011. 45. (2). 210-227.
HETEROGENEITY OF 1.4 MDA PLASMIDS IN SALMONELLA ENTERITIDIS STRAINS
Aleksey Vladimirovich RAKOV, Feliks Nikolayevich SHUBIN, Natalia Anatolievna KUZNETSOVA
FSBI «RI for Epidemiology and Microbiology named after G.P. Somov» of SB RAMS 690087, Vladivostok, Selskaya str., 1
The PCR typing of 100 S. Enteritidis strains containing plasmid 1.4 MDa (2.100 bp) described earlier in microbe strains has been carried out. Its relatedness to S. Enteritidis pJ plasmid from GenBank described in Czech Republic has been revealed. It has been established that this plasmid presents within 16 years in S. Enteritidis strains isolated from patients, food, and environmental swabs at administrative territories of majority of Siberia and the Far East of Russian Federation subjects that confirms its transcontinental distribution.
Key words: Salmonella Enteritidis, plasmid, plasmid analysis, polymerase chain reaction.
Rakov A.V. - candidate of medical sciences, senior researcher of the laboratory of molecular epidemiology, e-mail: vokar@mail333.com
Shubin F.N. - doctor of medical sciences, professor, head of the laboratory of molecular epidemiology, e-mail: shubin@inbox.ru
Kuznetsova N.A. - candidate of medical sciences, senior researcher of the laboratory of molecular epidemiology, e-mail: kuznetsovanata@mail.ru
