CC BY
54
6. Yang Y., Miks-Krajnik M., Zheng Q., et al. Biofilm formation of Salmonella enteritidis under food-related environmental stress conditions and its subsequent resistance to chlorine treatment. Food Microbiology, 2016; 54: 98-105.
7. Stanley N.R., Lazazzera B.A. Environmental signals and regulatory pathways that influence biofilm formation. Mol. Microbiol., 2004; 52(4): 917-924.
8. Aoudia N., Rieu A., Briandet R., et al. Biofilms of Lactobacillus plantarum and Lactobacillus fermentum: Effect on stress responses, antagonistic effects on patho-
gen growth and immunomodulatory properties. Food Microbiology, 2016; 53: 51-59.
9. Christensen G.D., Simpson W.A., Younger J.J., et al. Adherence of coagulase-negative staphylococci to plastic tissue culture plates: a quantitative model for the adherence of staphylococci to medical devices. J Clin Microbiology, 1985; 22(6): 996-1006.
10. Джашеев К.А.-М., Джашеева З.А.-М. Номо-граммный метод анализа результатов многофакторного эксперимента // Современные наукоемкие технологии. 2008; 8: 19-28.
Сведения об авторах
Пономарева Анна Леонидовна - научный сотрудник экологии патогенных бактерий, Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова», e-mail: giston@list.ru;
Бузолева Любовь Степановна - д.б.н., главный научный сотрудник экологии патогенных бактерий, Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова», e-mail: buzoleva@mail.ru.
© Коллектив авторов, 2017 г. doi: 10.5281/zenodo.817853
Удк 577.2:577.21+616.981.21/.958.7
Ф.Н. Шубин, А.В. Раков, А.С. Соловьева
плазмида p30 и её участие в формировании плазмидных типов
SALMONELLA ENTERITIDIS
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова», Владивосток
Цель. Изучение биологических особенностей штаммов Salmonella Enteritidis, содержащих плазмиду р30, и молекулярной эпидемиологии сальмонеллеза, вызванного плазмидными типами микроба, включающими эту плазмиду. Материалы и методы. Изучена плазмидная характеристика штаммов Salmonella Enteritidis, выделенных от 11873 больных из 7 краев и областей Сибирского и Дальневосточного федеральных округов и из 381 пробы пищевых продуктов. Определение спектра плазмид - по методу Kado C.I. и Liu S.T., (1981). Результаты. Установлено, что среди штаммов микроба, выделенных от больных, 6,2% культур, а среди выделенных из продуктов 3,1% культур содержали плазмиды р30 с молекулярной массой около 48000 п.о. Показано, что плазмиды р30 российских штаммов микроба родственны между собой, и они родственны плазмиде pSE34 по присутствию в них двух исследованных генов pir и pilX6. Выводы. Получены данные, позволяющие считать, что плазмиды р30, как и pSE34, кодируют систему секреции IV типа у микроба. При этом плазмида р30 не несет детерминант резистентности к антимикробным препаратам.
Ключевые слова: Salmonella Enteritidis, плазмидный анализ, плазмида p30.
F N. Shubin, A.V. Rakov, A.S. Solovyeva
plasmide p30 and its participation in formation of plasmid types
SALMONELLA ENTERITIDIS
Somov Institute of Epidemiology and Microbiology, Vladivostok, Russia
Aims. Study of biological features of Salmonella Enteritidis strains containing plasmid p30 and molecular epidemiology of salmonellosis caused by plasmid types including this plasmid. Materials and methods. The plasmid characterization of Salmonella Enteritidis strains isolated from 11873 patients from 7 regions of the Siberian and Far Eastern Federal Districts and from 381 food samples was studied. Determination of the plasmid profiles by the method of Kado C.I., Liu S.T., (1981). Results. It was found that among the strains of the microbe isolated from patients of 6.2% of the strains, and among the isolated from products, 3.1% of the strains contained plasmids p30 with a molecular weight of about 48,000 bp. It is shown that the plasmids p30 of Russian strains of the microbe are related to each other and they are related to plasmid pSE34 by the presence of the two genes pir and pilX6 in them. Conclusions. Data have
been obtained that allow us to consider that the plasmids p30, like pSE34, code for a type IV secretion system in the microbe. In this case, plasmid p30 does not bear the determinant of resistance to antimicrobial drugs.
Keywords: Salmonella Enteritidis, plasmid analysis, plasmid p30.
Введение
Сальмонеллез, вызванный Salmonella enterica serovar Enteritidis (Salmonella Enteritidis), остается значимой проблемой для многих стран мира, включая Российскую Федерацию. При этом в России на долю Salmonella Enteritidis приходится свыше 70% всей заболеваемости населения сальмонеллезом. В силу актуальности проблемы, исследования по характеристике природных популяций микроба широко выполняются во многих странах мира. Естественно, что плазмиды сальмонелл, являясь частью бактериального генома и играя важную роль в формировании свойств микроба, также интенсивно изучаются. Плаз-миды Salmonella Enteritidis можно условно разделить на низко- и высокомолекулярные. Низкомолекулярные плазмиды в штаммах микроба изучены недостаточно. Некоторые из них несут гены, повышающие резистентность клеток хозяина к фагам [1], а небольшая плазмида pC содержит rom и mbeA гены, ответственные за систему рестрикции модификации [2].
Высокомолекулярные плазмиды привлекли к себе больший интерес. Среди них значительное внимание уделяется серовароспецифической плазмиде вирулентности, которая включает spvRABCD оперон, а также pef локус, несущий фимбриальные гены, rsk и rck гены резистентности к комплементу и сыворотке. С ней связано развитие системной инфекции у больных [3]. Однако большинство штаммов Salmonella Enteritidis, изолированных в России от больных и из животных продуктов, несут более чем одну плазми-ду [4]. Наше внимание привлекла плазмида pSE34, выявленная в 2003-2006 гг. в штаммах Salmonella Enteritidis у больных в Тайване [5]. Данная плазмида кодирует систему секреции IV типа (T4SS) у штаммов Salmonella Enteritidis фаготипа PT34, и ее молекулярная масса составляет 32950 п.о. В России выявлена близкая по молекулярной массе плазмида p30 (около 48000 п.о.) в штаммах Salmonella Enteritidis [6], которая получила распространение у больных на Дальнем Востоке, в Сибири и других регионах России.
Цель исследования. Изучение биологических особенностей штаммов Salmonella Enteritidis, содержащих плазмиду р30, и молекулярной эпидемиологии сальмонеллеза, вызванного плазмидными типами микроба, включающими эту плазмиду.
Материалы и методы исследования. Для оценки частоты распространения у больных плазмидных типов Salmonella Enteritidis, содержащих плазмиды с молекулярной массой 48 kb (p30), изучены плазмидные характеристики штаммов микроба, изолированных от 11873 больных. Распределение больных по территориям было следующим: 7349 больных из Приморского
края, 1075 - из Хабаровского края, 369 - из Камчатского края, 245 - из Сахалинской области, 1536 - из Новосибирской области, 423 - из Томской области и 876 - из Иркутской области. Кроме того, выполнен анализ штаммов микроба, выделенных из 381 пробы пищевых продуктов, и 285 штаммов Salmonella Enteritidis, изолированных от больных во время 7 вспышек саль-монеллеза в Удмуртской Республике (80 больных), Мурманской области (111 больных) и в Еврейской автономной области (94 человека).
Идентификацию сальмонелл и анализ антигенной характеристики штаммов микроба проводили общепринятыми методами с использованием агглютинирующих сывороток производства ФГУП «Санкт-Петербургский НИИ вакцин и сывороток». Чувствительность к антимикробным препаратам 30 штаммов Salmonella Enteritidis изучена диско-диффузионным методом в соответствии с Клиническими рекомендациями «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Версия 24/10/2014». Изучена чувствительность к ампициллину (30 мкг), цефалексину (30 мкг), цефуроксиму (30 мкг), цефотаксиму (30 мкг), цефепиму (30 мкг), стрептомицину (10 мкг), кана-мицину (30 мкг), гентамицину (10 мкг), амикацину (30 мкг), тетрациклину (30 мкг), налидиксовой кислоте (30 мкг), ципрофлоксацину (5 мкг), имипене-му (10 мкг), левомицетину (30 мкг) и триметоприм/ сульфаметоксазолу (1,25/23,75 мкг).
Для контроля качества исследования использован штамм Escherichia coli ATCC 25922. Определение спектра плазмид проводили у свежевыделенных штаммов микроба по методу Kado и Liu [6]. Электрофорети-ческое разделение плазмидных ДНК, их визуализацию и определение молекулярной массы проводили, как описано ранее [7]. ПЦР проводили в амплификаторе «Терцик» (ООО «ДНК-Технология», Россия). Реакцию выполняли в объеме 25 мкл с использованием набора ScreenMix-HS (ЗАО «Евроген», Россия) в соответствии с методикой, описанной ранее [8]. Гели окрашивали в бромистом этидии и фотографировали в УФ-свете на трансиллюминаторе Vilber Lourmat TFX-20M. В качестве маркера молекулярной массы использовали 100 bp Ladder DNA marker (Axygen).
Результаты обработаны статистически с использованием критериев Стьюдента. Индекс биоразнообразия Симпсона (D) рассчитан по методике Hunter и Gaston [9].
Результаты
Изучение плазмидной характеристики штаммов Salmonella Enteritidis, изолированных от 11873 больных в Сибирском и Дальневосточном регионах, по-
HEALTH. MEDiCAL ECOLOGY. SCiENCE 3 (70) - 2017 47
казало, что плазмида р30 присутствовала в штаммах микроба, изолированных от 736 (6,2%) больных и эти штаммы относились к 31 плазмидному типу. Наряду с плазмидой р30 все штаммы включали серова-роспецифическую плазмиду вирулентности массой p38. Наиболее часто выявляемыми были три основных плазмидных типа 38:30:2,3 MDa, 38:30:1,4 MDa и 38:30 MDa, на долю которых пришлось 615 (5,2%) штаммов микроба. Вместе с тем степень доминирования данных плазмидных типов в популяциях Salmonella Enteritidis у больных в регионах Дальнего Востока и Сибири различна.
Так в административных образованиях Дальневосточного федерального округа (Приморский, Хабаровский, Камчатский края и Сахалинская область) штаммы микроба, содержащие плазмиду р30, выявлены у 581 больного. Среди них доля штаммов трех основных плазмидных типов составила 87,4±1,4%. В Сибирском федеральном округе (Новосибирская, Томская и Иркутская области) плазмидные типы микроба, включающие плазмиду р30, выявлены у 155 больных, но штаммы основных типов составили лишь 68,4 ±3,7% (различия достоверны p<0,001). Имеются различия и по распространению у больных в Сибири и на Дальнем Востоке отдельных основных плазмидных типов. В областях Сибирского федерального округа у 155 больных доминируют штаммы плазмидного типа 38:30:1,4 MDa и на их долю пришлось 60,4±3,9% штаммов, тогда как штаммы плазмидного типа 38:30:2,3 MDa выявлены лишь у единичных больных. Напротив, у 581 больного в административных образованиях Дальневосточного федерального округа чаще встречаются штаммы плазмидного типа 38:30:2,3 MDa, которые выявлены у 334 (57,5±2,05%) больных, а штаммы плазмидного типа 38:30:1,4 MDa выявлены лишь у 18,3±1,6% больных (различия достоверны p<0,001).
Остальные 28 редко выявляемых плазмидных типов Salmonella Enteritidis включают 121 штамм микроба, которые помимо представленных плазмид p38, p30, р2,3 и р1,4, содержали дополнительные плазмиды массой 60 Mda, 50 MDa, 26 MDa, 20 MDa, 9 MDa, 6 MDa, 4,4 MDa, 3,3 MDa, 3,0 MDa, 2,6 MDa и 2,0 MDa. Основные особенности редко выявляемых плазмидных типов микроба заключались в том, что они выявлялись лишь на отдельных территориях Сибири и Дальнего Востока, у ограниченного числа больных, и каждый из них не имел существенного значения в этиологии сальмонеллеза. По этой причине дальнейшие исследования выполнены с использованием только основных плазмидных типов микроба.
Близкие результаты получены при плазмидном анализе штаммов Salmonella Enteritidis, изолированных из 381 пробы пищевых продуктов. Штаммы основных плазмидных типов микроба, содержащих плазмиду р30, выявлены в 12 (3,1%) пробах продук-
тов, в том числе и в пробах продукции птицефабрик, что указывает на связь заболеваемости населения с продукцией птицеводства.
Штаммы основных плазмидных типов явились причиной шести вспышек сальмонеллеза, зарегистрированных в Приморском крае, Еврейской автономной области, Мурманской области и в Удмуртской Республике. Четыре вспышки были обусловлены плазмидным типом 38:30:2,3 MDa и по одной - 38:30 MDa и 38:30:1,4 MDa.
Анализ антибиотикорезистентности основных плазмидных типов Salmonella Enteritidis, содержащих плазмиду р30, выполнен с использованием 30 штаммов микроба, в том числе 18 штаммов плазмидного типа 38:30:2,3 MDa, 9 - 38:30:1,4 MDa и 3 - 38:30 MDa. Установлено, что все штаммы микроба независимо от спектра плазмид были чувствительны к цефалексину, цефуроксиму, цефотаксиму, цефепиму, канамицину, гентамицину, тетрациклину, имипенему, левомицетину и триметоприм/сульфаметоксазолу. Резистентность к 1 и более антибиотикам выявлена у 15 (50,0%) штаммов. Резистентность к ампициллину выявлена у 4 штаммов, к стрептомицину - у 1, к налидиксовой кислоте - у 13 и к ципрофлоксацину - у 1 штамма. Среди изученных штаммов микроба 12 были резистентными к одному антимикробному препарату, из них 10 - к налидиксовой кислоте и 2 - к ампициллину. Два штамма были резистентными к двум препаратам: один - к стрептомицину и налидиксовой кислоте и второй - к ампициллину и налидиксовой кислоте. Резистентность к трем препаратам была выявлена у одного штамма (ампициллин, налидиксовая кислота, ципрофлоксацин).
Присутствие в штаммах Salmonella Enteritidis O:1 антигена и способность бактерий агглютинироваться диагностической сальмонеллезной адсорбированной О:1 сывороткой проверена у 24 штаммов основных плазмидных типов, включающих плазми-ду р30. Показано, что все штаммы независимо от спектра содержащихся плазмид не агглютинировали в сыворотке О:1, что указывало на отсутствие данного антигена у микроба, т.е. изученные штаммы имели антигенную формулу О:9,12; H:g.m. Качество использованной O:1 сыворотки подтверждено положительной реакцией агглютинации с двумя штаммами Salmonella enterica serovar Hamburg, имеющими антигенную формулу 0:1,9,12; H:g.m.t.
Для первичного исследования возможности родства плазмиды р30 с выявленной в штаммах Salmonella Enteritidis у больных в Тайване плазмидой pSE34 [6], были подобраны две пары праймеров в разных участках плазмиды pSE34. Сведения о плаз-миде pSE34 получены из GenBank, где она представлена под номером EU219533 и ее молекулярная масса составила 32950 п.о. Первая пара праймеров pilX6 (pilX6F 5-AGAATACAGGGGGAATACTTACAT-3' и
pilX6R 5-TTATTCCCGGAGACTGACCAAFCC-3) располагалась в структуре гена pilX6, который участвует в кодировании системы секреции IV типа у бактерий. Размер ампликона составляет 717 п.о. Вторая пара праймеров pir (pirF 5- CACAAAACGCAGTCAGGTTCA-3' и pirR 5 -TCATCGTTGCCTTTGTCTGC-3 ) находилась в структуре гена pir, который кодирует инициатор RepB протеина. Размер амплификата составил 310 п.о.
Для исследования плазмиды p30 были выбраны 20 штаммов Salmonella Enteritidis основных плазмидных типов, в том числе 2 штамма плазмидного типа 38:30 MDa, 15 - 38:30:2,3 MDa и 3 штамма - 38:30:1,4 MDa. Исследование данных штаммов в ПЦР с праймера-ми pir во всех случаях дало положительный результат - амплифицировался фрагмент ДНК массой 310 п.о. Амплификация фрагмента ДНК массой 717 п.о. с праймерами pilX6 получена только у 19 штаммов, включая все штаммы плазмидных типов 38:30 MDa и 38:30:1,4 MDa и у 14 из 15 исследованных штаммов типа 38:30:2,3 MDa. У штамма S-14704 плазмидного типа 38:30:2,3 MDa амплификация специфического фрагмента ДНК массой 717 п.о. не получена.
Обсуждение
Первые случаи сальмонеллеза в Приморском крае, вызванного плазмидными типами Salmonella Enteritidis, включающими плазмиду р30, были зарегистрированы в октябре 1995 г. и штаммы относились к плазмидному типу 38:30 MDa. В 1996 г. у больных были выделены штаммы плазмидного типа 38:30:2,3 MDa, и лишь в 2003 г. были выявлены первые больные с микробом 38:30:1,4 MDa. Однако систематическое обнаружение больных, от которых изолировались штаммы микроба, содержащие плаз-миду р30, началось только с 2006 г. В дальнейшем штаммы микроба трех основных плазмидных типов выявлены у больных на всех изученных административных территориях Сибирского и Дальневосточного федеральных округов, что и явилось основанием для организации мониторинга.
Для внутривидового типирования Salmonella Enteritidis использован плазмидный анализ, который позволил дифференцировать 31 плазмидный тип среди штаммов микроба, содержащих плазмиду р30. Представленные результаты позволили прийти к заключению, что штаммы, содержащие плазми-ду р30, гетерогенны по плазмидным характеристикам и имеют индекс гетерогенности D=0,698. При этом гетерогенность популяций микроба выявлена у больных на всех изученных территориях Сибири и Дальнего Востока. В данном аспекте исследование родства плазмид р30, содержащихся в разных плазмидных типах микроба, имеет определяющее значение для характеристики популяций. Выполненные исследования показали, что плазмиды р30 российских штаммов родственны плазмиде pSE34,
выявленной у больных в Тайване, хотя они и отличаются по молекулярной массе. Основываясь на результатах исследования плазмиды р30 методом ПЦР с pir и pilX6 праймерами к плазмиде pSE34, можно полагать, что плазмида р30 во всех исследованных штаммах микроба содержит pir ген, который кодирует инициатор RepB протеина. Более того в плазмиде р30 у 19 из 20 исследованных штаммов установлено присутствие гена pilX6.
Следовательно, в большинстве изученных штаммов плазмиды р30 родственны между собой и с плаз-мидой рSE34, как минимум, по двум представленным генам. Однако полученные данные о том, что в одном из изученных штаммов не выявлено присутствие гена pilX6, позволяют говорить о гетерогенности плазми-ды р30 в штаммах микроба различных плазмидных типов. Учитывая, что pilX6 ген является составной частью pilX оперона, можно полагать, что плазмида р30 из российских штаммов, как и плазмида pSE34 из тайваньских, участвует в кодировании системы секреции IV типа Salmonella Enteritidis.
Биологические особенности штаммов Salmonella Enteritidis определяются, прежде всего, их отношением к антимикробным препаратам. Проведенные нами ранее исследования показали, что большинство штаммов микроба были чувствительными к антибиотикам, а резистентность к 1 и более препаратов отмечена лишь у 8,9% штаммов [11]. Изучение чувствительности к антимикробным препаратам у штаммов микроба, изолированных от больных в последние годы, выявило значительное увеличение процента штаммов резистентных к хинолонам, и появление среди них пока единичных штаммов резистентных к фторхинолонам. Вместе с тем, имеются основания считать, что плазмида р30 не несет детерминант резистентности к антимикробным препаратам.
Выводы
1. Штаммы Salmonella Enteritidis, содержащие плазмиды р30, гетерогенны по присутствию других плазмид. В популяции микроба дифференцированы 31 плазмидный тип, которые выявлены у 6,2% больных.
2. Плазмиды р30 российских штаммов микроба родственны между собой, и они одновременно родственны плазмиде pSE34, как минимум, по присутствию в них двух генов pir и pilX6.
3. Получены данные, позволяющие считать, что плазмиды р30, как и pSE34, кодируют систему секреции IV типа у микроба. Имеются основания полагать, что плазмида р30 не несет детерминант резистентности к антимикробным препаратам.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Финансирование. Исследование выполнено без привлечения спонсорских средств.
HEALTH. MEDICAL ECOLOGY. SCiENCE 3 (70) - 2017 49
ЛИТЕРАТУРА
1. Rychlik I., Gregorova D., H. Hradecka. Distribution and function of plasmids in Salmonella enterica. Vet. Microbiol. 2006; 112: 1-10. doi: 10.1016/j.vet-mic.2005.10.030
2. Gregorova D., Pravcova M., Karpiskova R., Rychlik I. Plasmid pC present in Salmonella enterica serovar Enteritidis PT14b strains encodes a restriction modification system // FEMSMicrobiology Letters. 2002. 214. P. 195-198.
3. Boyd E.F., Hartl D.L. Salmonella virulence plasmid. Modular acquisition of the spv virulence region by an F-plasmid in Salmonella enterica subspecies I and insertion into the chromosome of subspecies II, IIIa, IV and VII isolates // Genetics. 1998. 149. (3). 1183-1190.
4. Шубин Ф.Н., Раков А.В., Кузнецова НА., Яку-бич Т.В., Снеткова И.П. Формирование заболеваемости населения сальмонеллезом, вызванным Salmonella Enteritidis, в районах с неполным обеспечением населения местной продукцией птицеводства // Журн. микробиол. 2017; 1: 61-67.
5. Chen C.L., Wang C.Y., Chu C., Su L.H., Chiu C.H. Functional and molecular characterization of pSE34 encoding a type IV secretion system in Salmonella enterica serotype Enteritidis phage type 34. FEMS Immunol Med Microbiol. 2009; 57: 274-283. doi: 10.1111/j.1574. 695X.2009.00612.x
6. Шубин Ф.Н., Маслов Д.В., Кузнецова Н.А. и др. Сальмонеллез в Сибири и на Дальнем Востоке: молекулярные и эпидемиологические аспекты / Перспективы сотрудничества государств-членов ШОС в противодействии угрозе инфекционных болезней. -Новосибирск: ЦЭРИС. 2009. С. 215-219.
7. Kado C.I., Liu S.T. Rapid procedure for detection and isolation of large and small plasmid. J Bacteriol. 1981;145: 1365-1373.
8. Раков А.В., Шубин Ф. Н., Кузнецова Н. А. Гетерогенность плазмид молекулярной массой 1,4 MDa в штаммах Salmonella Enteritidis // Бюллетень СО РАМН. 2013; 33(2): 10-15.
9. Соловьева А.С., Раков А.В., Кузнецова Н.А., Шубин Ф.Н. Эпидемиологическая характеристика сальмонеллеза, вызванного Salmonella Enteritidis 38:3,0:1,4 MDA // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2016; 2 (65): 36-38.
10. Hunter P.R., Gaston M.A. Numerical index of the discriminatory ability of typing systems: an application of Simpson's index of diversity. J Clin Microbiol. 1988. 26. 2465-2466.
11. Шубин Ф.Н., Ковальчук НИ., Кузнецова НА. и др. Микробиологический мониторинг за Salmonella Enteritidis в Приморском крае. Фенотипическая и плазмидная характеристика возбудителя // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2002; 1: 36-40.
Сведения об авторах
Шубин Феликс Николаевич, д.м.н., профессор, ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярной эпидемиологии и микробиологии ФГБУН «НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.П. Сомова», г. Владивосток; тел. 8(423)2442604, e-mail: shubin@inbox.ru;
Раков Алексей Владимирович, к.м.н., старший научный сотрудник, заведующий лабораторией молекулярной эпидемиологии и микробиологии ФГБУН «НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.П. Сомова», г. Владивосток; тел. 8(423)2442604, e-mail: vokar@mail333.com;
Соловьева Алина Сергеевна, младший научный сотрудник лаборатории молекулярной эпидемиологии и микробиологии ФГБУН «НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.П. Сомова», г. Владивосток; тел. 8(423)269-45-82, e-mail: dj_svet8525@mail.ru.
© Коллектив авторов, 2017 г. doi: 10.5281/zenodo.817783
Удк 615.076.7, 615.371
И.В. Должикова1, А.И. Тухватулин1, Н.М. Тухватулина1, И.П. Исачкова1, И.Ф. Зотова1, А.Ш. Джаруллаева1, И.М. Евграфова1, С.А. Попов2, Д.Ю. Логунов1
новый метод количественного определения жизнеспособных МИкоБАктерИй БЦЖ С использованием системы BACTEC MGIT 320
1 ФГБУ «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» МЗ РФ, г. Москва;
2 ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» МЗ РФ, Научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии, г. Москва
Количество жизнеспособных клеток бациллы Кальмета-Герена (БЦЖ) в различных образцах обычно исследуется методом посева на плотные питательные среды, в ходе которого анализируют количество колониеобразующих единиц (КОЕ). Однако, несмотря на то, что этот метод является общепринятым стандартом, результаты исследований с его использованием могут широко варьировать из-за характерных особенностей микобактерий образовывать агломераты. Более того, поскольку микобактерии БЦЖ относятся
