CC BY
14
минеральных кормовых добавок с адсорбирующим действием актуально и имеет большое практическое значение. Установлено положительное влияние применения минеральных кормовых добавок. Лучшие показатели продуктивности имели коровы 3 группы, которые в качестве минеральной добавки получали Минерал Актив. От них за весь период лактации было получено 9815,0±189,34 кг молока, что больше, чем в других группах на700 - 413 кг или на 8,0 - 4,0% больше, чем в других группах. Разница достоверна между 1 и 3 группами при Р<0,05 в пользу 3 группы. Установлена достоверная разница и между 1 и 2 группами при Р<0,05 в пользу 2 группы (кормовая добавка ПроСид).Оценка лактационной деятельности коров показал, что во всех группах она оказалась высокой спадающей. Это видно по коэффициентам равномерности, устойчивости и полноценности.Коэффициент молочности составил 1536,3 - 1622,3. У коров 3 группы разница по этому показателю была достоверна относительно 1 (контрольной) группы при Р<0,05. Разницы между 1 и 2 группами практически не было. В молоке коров опытных групп наблюдается достоверное повышение МДЖ и МДБ на 0,35 - 0,51% при Р<0,001 и на 0,13 - 0,23% при Р<0,01 - Р<0,001 соответственно по показателям. Установлена достоверная разница и между 2 и 3 группами в пользу 3 группы при Р<0,05.
THE INFLUENCE OF MINERAL FEED SUPPLEMENTS ON MILK PRODUCTION OF COWS
Gibert K. V., Kharlap S. Yu.
Summary
Farms in the quality of feed used for feeding of cows is often low and, especially in hay and forage there are mycotoxins that are affecting the body of the animals lead to poisoning and as a result reduce productivity. In this regard, the use of feeding cattle, including dairy cows mineral feed additives from adsorbing activity is important and has great practical importance. The positive influence of application of mineral feed additives. The best yields were cows 3 groups that received mineral supplements, the Mineral Asset. From them for the whole period of lactation was obtained 9815,0±189,34 kg of milk more than the other groups on the 700 413 kg or 8.0 to 4.0% more than in the other groups. The difference accurate between 1 and 3 groups at P<0.05 in favor of the 3 groups. There is a significant difference between 1 and 2 groups at P<0.05 in favor of group 2 (feed additive Procid). Assessment activities lactation cows showed that in all groups she was a tall falling. This is evident in the coefficients of uniformity, stability, and usefulness. The coefficient of milk yield amounted to 1536,3 - 1622,3. In cows of 3 groups, the difference for this indicator was accurate relative to 1 (control) group at P<0.05. The difference between 1 and 2 groups almost was not. In the milk of cows of the experimental group observed a significant increase in MJ and IHOP on 0,35 - 0,51% at P<0.001 and 0.13 - 0.23 percent at P<0.01 - P<0.001, respectively according to the indicators. There is a significant difference between 2 and 3 groups in favor of group 3 at P<0,05.
DOI 10.31588/2413-4201-1883-235-3-34-40 УДК: 619:57.065:578.828
ГЕНОТИПИЧЕСКАЯ ПРИНАДЛЕЖНОСТЬ ИЗОЛЯТОВ ВИРУСА БЫЧЬЕГО ЛЕЙКОЗА, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ В ПОПУЛЯЦИЯХ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
РЕСПУБЛИКИ ТАТАРСТАН
Гильманов Х.Х. - аспирант, *Вафин Р.Р. - д.б.н., профессор РАН, Шаева А.Ю. - к.б.н., Закирова З.Р. - к.в.н., **Тюлькин С.В. - к.с/х.н.
ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»
*ФГБНУ ФНЦ Пищевых систем им. В.М. Горбатова РАН **ФГБОУ ВО «Казанский государственный аграрный университет»
Ключевые слова: ВБЛ, генотип, идентификация, ПЦР, ПДРФ, секвенирование, филогенетический анализ.
Key words: BLV, genotype, identification, sequencing, phylogenetic analysis, PCR, RFLP.
Вирус бычьего лейкоза (ВБЛ) -этиологический агент лейкоза крупного рогатого скота - хронического инфекционного заболевания, наносящего существенный экономический ущерб отрасли молочного и мясного скотоводства вследствие падежа животных, недополучения продукции и снижения ее качества, а также затрат на осуществление противо-лейкозных мероприятий [3].
Молекулярно-генетические методы исследования, позволяющие оценить генетическое разнообразие ВБЛ, являются наиболее информативными инструментами геноидентификации, как на основе использования филогенетического анализа секвенированных последовательностей провирусной ДНК возбудителя, так и ПЦР-ПДРФ-анализа, согласующегося с его филогенетической классификацией [2].
Современная филогенетическая классификация ВБЛ регламентирует наличие десяти генотипов, первые семь из которых впервые описаны аргентинскими учеными в 2009 г. [12], восьмой генотип -исследователями из России [4, 5, 1], Хорватии [6] и коллаборацией европейских ученых [13] в 2011-2013 гг., девятый генотип - группой японских, чилийских и аргентинских ученых в 2016 г. [11], и десятый генотип - группой исследователей из Южной Кореи и Тайланда [9], в том же году.
Цель настоящего исследования -установить генотипическую принадлежность изолятов ВБЛ, циркулирующих в популяциях крупного рогатого скота Республики Татарстан, используя филогенетический анализ секвенированных последовательностей локуса еиу-гена возбудителя и ПЦР-ПДРФ-анализ, согласующийся с филогенетической классификацией изучаемого вирусного патогена.
Материал и методы исследований. Молекулярно-генетическому исследованию подвергнуто 179 проб крови РИД-позитивных коров сельхозпредприятий 21 района Республики Татарстан на
предмет геноидентификации выявленных представителей вируса бычьего лейкоза (ВБЛ), как на основе филогенетического анализа секвенированных последовательностей локуса env-гена возбудителя, так и ПЦР-ПДРФ-генотипирования, согласующегося с филогенетической классификацией инфекционного агента. Выделение ДНК из цельной крови крупного рогатого скота осуществлено коммерческим набором «ДНК-сорб Б» (ЦНИИ Эпидемиологии МЗ РФ). При постановке nested ПЦР с выделенными образцами провирусной ДНК ВБЛ применены «внешние» («env5032» и «env5608») и «внутренние» («env5099» и «env5521») праймеры, инициирующих на
заключительном этапе реакции амплификацию локуса env-гена возбудителя длиной 444 bp [7]. Эндонуклеазы рестрикции, использованные при ПЦР-ПДРФ-генотипировании ВБЛ в соответствии с филогенетической классификацией
возбудителя: PvuII, SspI, Hphl (изошизомер ^suHPI), HaeIII, BstYl (изошизомер BstX2I). ПЦР-ПДРФ-моделирование: NEBcutter v.2.0.
Детекция результатов ПЦР- и ПЦР-ПДРФ-анализа выполнена методом горизонтального электрофореза в 2,5% агароз-ном геле в буфере TBE (рН 8,0), содержащем этидий бромид, с последующей визуализацией результатов в ультрафиолетовом трансиллюминаторе (Х=310 нм).
Размеры генерируемых фрагментов ДНК оценены по подвижности в сравнении со стандартными ДНК маркерами (ООО «СибЭнзим»).
Секвенирование продуктов амплификации локуса env-гена выявленных изо-лятов провируса ВБЛ проведено на генетическом анализаторе «ABl PRISM 3100» (Applied. Biosystems, США) в НПК «Син-тол» (Россия) с применением «внутренних» («env5099» и «env5521») праймеров в качестве сиквенсных.
Выравнивание секвенированных последовательностей локуса env-гена изо-
лятов провируса ВБЛ c соответствующими нуклеотидными последовательностями референтных изолятов ВБЛ, ранее депонированных в GenBank, осуществлено с использованием программ BLAST и MEGA-4 с последующим филогенетическим анализом.
Результаты исследований. ПЦР-
ПДРФ-генотипированием и сравнительным филогенетическим анализом выравненных нуклеотидных последовательностей локуса env-гена изолятов провируса
ВБЛ, выявленных у крупного рогатого скота животноводческих хозяйств 21 района Республики Татарстан, установлена их генотипическая принадлежность.
Так, из 179 идентифицированных изолятов 10 относились к 1-му генотипу ВБЛ, 106 принадлежали кластеру 4-го генотипа, 55 характеризовались признаком 7-го генотипа, а остальные 8 происследованных образцов провируса являлись представителями 8-го генотипа возбудителя (таблица 1).
Таблица 1 - Распределение 179 генотипированных образцов провирусной ДНК ВБЛ по 21 исследованным районам Республики Татарстан РФ
Район Республики Татарстан Исследовано ГЕНОТИП ВБЛ
1-й 2-й 3-й 4-й 5-й 6-й 7-й 8-й 9-й 10-й
1 Азнакаевский 10 - - - 9 - - 1 - - -
2 Алькеевский 13 - - - 5 - - 8 - - -
3 Арский 7 - - - 6 - - 1 - - -
4 Буинский 7 - - - 2 - - 3 2 - -
5 Высокогорский 4 - - - 4 - - - - - -
6 Дрожжановский 12 - - - 4 - - 7 1 - -
7 Заинский 8 - - - 7 - - - 1 - -
8 Кайбицкий 7 - - - 7 - - - - - -
9 Лаишевский 13 - - - 12 - - 1 - - -
10 Лениногорский 19 - - - 15 - - 4 - - -
11 Мамадышский 10 10
12 Мензелинский 6 - - - 6 - - - - - -
13 Муслюмовский 4 - - - - - - 4 - - -
14 Нижнекамский 14 - - - 8 - - 5 1 - -
15 Пестречинский 1 - - - 1 - - - - - -
16 Рыбнослободский 8 - - - 8 - - - - - -
17 Сармановский 2 - - - 2 - - - - - -
18 Спасский 9 - - - 3 - - 6 - - -
19 Тукаевский 9 - - - 4 - - 3 2 - -
20 Тюлячинский 6 - - - - - - 6 - - -
21 Чистопольский 10 - - - 3 - - 6 1 - -
ВСЕГО ОБРАЗЦОВ 179 10 - - 106 - - 55 8 - -
На основании полученных результатов можно констатировать факт циркуляции в популяциях крупного рогатого скота Республики Татарстан изолятов четырех из десяти известных генотипов ВБЛ, идентифицированных ПЦР-ПДРФ-геноти-пированием и филогенетическим анализом секвенированных последовательностей локуса еиу-гена как представители 1-го, 4-го, 7-го и 8-го генотипов возбудителя.
Дополнительно, сравнительным анализом нуклеотидных последовательностей локуса еиу-гена 505 депонированных в GenBank NCBI представителей ВБЛ на предмет их типизации в зависимости от выбранных стратегий геноидентификаций подтверждено, что ряд применяемых ранее способов ПЦР-ПДРФ-типизации возбудителя [7, 8, 10] не согласуются с современным подходом к оценке его генотипиче-
ского разнообразия на основе филогенетического анализа еиу-гена.
Так, изоляты ВБЛ, идентифицированные по стратегии М. Ьюига е1 а1. (2002) [10] как представители 1-го генотипа, по филогенетической классификации могут принадлежать 1 -му, 4-му, 6-му или 7-му
генотипам; 3-го генотипа - 1-му, 6-му или 7-му генотипам; 5-го генотипа - 1-му, 3-му, 6-му, 7-му или 9-му генотипам; 6-го генотипа - по филогенетической классификации могут относиться ко 2-му, 4-му, 5-му или 7-му генотипам возбудителя, соответственно (табл. 2).
Таблица 2 - Env-ПЦР-ПДРФ-профили ВБЛ (типизация по M. Licursi et al., 2002 [10])
ПЦР- пДрф- ПЦР- проду кт (bp) ПДРФ-фрагменты (bp) Филогенетическая классификация (генотипы) N
типирова ние ВБЛ Bell Haelll prall 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1-й 444 225/219 198/94/87/32/27/6 444 98 - - 1 - 2 8 68 - - - 195
2-й 444 219/121/104 312/94/32/6 444
3-й 444 219/121/104 285/94/32/27/6 444 8 - - - - 6 1 - - - 15
4-й 444 219/121/104 198/94/87/32/27/6 444
5-й 444 225/219 285/94/32/27/6 444 - 3 - - 1 1 - - 28
6-й 444 225/219 198/94/87/32/27/6 280/164 - 35 - 139 9 - 3 - - - 186
? 444 444 198/94/87/32/27/6 444 1 - - - - 1 2 - - 7 20
? 444 225/191/28 198/119/94/27/6 444 1 1
? 444 225/219 312/94/32/6 444 1 1
? 444 444 198/94/87/32/27/6 280.164 - 1 - 1 2
? 444 219/189/36 198/94/87/32/27/6 280/164 - - - - 1 - - - - - 1
? 444 225/219 285/94/32/27/6 280/164 - - - 2 1
? 444 444 198/87/49/45/32/27/ 6 444 1 1
? 444 225/219 225/94/87/32/6 444 - - - - - - - 2 1 - - 21
? 444 225/219 285/94/32/21/6/6 444 - - 1 - - - - - - - 1
? 444 225/219 198/121/87/32/6 280/164 - - - 1 - - - - - - 1
? 444 225/219 198/119/94/27/6 280/164 - - - 1 - - - - - - 1
? 444 219/121/104 285/94/32/27/6 280/164 - - - 4 - - - - - - 4
? 444 225/219 198/87/49/45/32/27/ 6 444 - - - - - - 2 - - - 2
h ? 444 225/219 198/119/94/27/6 444 1 1
о X ? 444 444 198/121/87/32/6 444 1 1 - - - 2
w 1-4 ? 444 225/219 198/87/49/4532/27/6 280/164 - 1 1
? 444 444 198/94/81/32/21/6/6 444 - - - - - 1 - - - - 1
? 444 225/219 198/94/81/32/27/6/6 444 6 6
? 444 225/219 279/94/32/27/6/6 444 11 11
Обозначения: N - количество проанализированных представителей ВБЛ с соответствующим ПЦР-ПДРФ-профилем; «?» - неклассифицированный таксон ВБЛ.
Причем, для данной стратегии типизации [10] выявлено дополнительно 19 уникальных комбинаций ПЦР-ПДРФ-про-филей, тождественных 19 неклассифицированным генотипам ВБЛ (табл. 2). Согласованность предложенной стратегии ПЦР-ПДРФ-генотипирования ВБЛ с филогенетической классификацией возбу-
дителя подтверждена, в том числе, филогенетическим анализом локуса env-гена 57 типовых изолятов десяти известных генотипов ВБЛ (рис. 1), генерирующих 57 уникальных комбинаций ПЦР-ПДРФ-профилей проанализированных изолятов ВБЛ с соответствующей комбинацией ПЦР-ПДРФ-профилей.
Рисунок - Филограмма 57 типовых изолятов 10 известных генотипов ВБЛ, построенная на основании филогенетического анализа локуса env-гена [MEGA-4: алгоритм NJ, 400 nt, 57 seq.]
Наглядный пример реализации стратегии ПЦР-ПДРФ-генотипирования ВБЛ, согласующейся с филогенетической классификацией возбудителя, представлен на электрофореграмме ПЦР-ПДРФ-профи-
лей двух представителей 4-го генотипа ВБЛ, выявленных у крупного рогатого скота животноводческих хозяйств Республики Татарстан (рис. 2).
Рисунок 2 - Электрофореграмма ПЦР-ПДРФ-профилей двух представителей 4-го генотипа ВБЛ (предложенная стратегия генотипирования ВБЛ)
Oбозначения: 1, 7) ДНК-маркеры 100 bp + 50 bp (СибЭнзим). 2-6) ПЦР-ПДРФ-профиль изолята провируса BБЛ «N015» (К17, 4-ый генотип): 2) РгаП-ПДРФ (280/164 bp); 3) SspI-ПДРФ (399/45 bp); 4) HpM-ПДРФ (444 bp); 5) HaeIII-ПДРФ (198/94/87/32/27/6 bp); 6) ÄstfYI-ПДРФ (444 bp). 8-12) ПЦР-ПДРФ-профиль изолята провируса BБЛ «N023» (К18, 4-ый генотип): 8) PvwII-ПДРФ (280/164 bp); 9) SspI-ПДРФ (399/45 bp); 10) HpM-ПДРФ (224/220 bp); 11) HeIII-ПДРФ (198/94/87/32/27.6 bp); 12) ferYI-ПДРФ (253/191 bp).
Заключение. В популяциях крупного рогатого скота Республики Татарстан циркулируют изоляты 1-го, 4-го, 7-го и 8-го генотипов ВБЛ, генотипическая принадлежность которых установлена ПЦР-ПДРФ-анализом и филогенетическим анализом секвенированных последовательностей локуса env-гена провируса. Предложенная стратегия ПЦР-ПДРФ-генотипиро-вания вируса бычьего лейкоза, согласующаяся с его филогенетической классификацией, и актуализированная с учетом новых знаний о генетическом разнообразии возбудителя, позволяет проводить идентификацию всех десяти известных генотипов изучаемого инфекционного агента, и может быть внедрена в систему молекулярного мониторинга инфицированности стад генотипами ВБЛ.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Вафин, Р.Р. Выявление нового (8-го) генотипа ВЛКРС в различных регионах мира / Р.Р. Вафин, Н.З. Хазипов, А.Ю. Шаева, З.Р. Закирова, Л.И. Зайнуллин, С.В. Тюлькин, И.Р. Абдулина, А.М. Алимов // Фундаментальные исследования. - 2013. -№ 10 (часть 7). - С. 1467-1471
2. Вафин, Р.Р. Генотипическая идентификация вируса бычьего лейкоза / Р.Р. Вафин, Н.З. Хазипов, А.Ю. Шаева, З.Р. Закирова, Л.И. Зайнуллин, С.В. Тюль-кин, И.Р. Абдулина, А.М. Алимов // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - 2014. - № 4. - С. 34-40
3. Хазипов, Н.З. Геноидентификация вируса бычьего лейкоза: монография / Н.З. Хазипов, Р.Р. Вафин, А.Ю. Шаева, З.Р. Закирова, А.М. Алимов, Г.Ф. Кабиров // М. : ИНФРА-М, 2017. - 163с.
4. Шаева, А.Ю. Генотипическая идентификация изолятов ВЛКРС, выявленных в хозяйствах Республики Татарстан / А.Ю. Шаева, Р.Р. Вафин, Н.З. Хазипов, Б.В, Камалов, А.М. Алимов, М.Ш. Тагиров // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной ме-
дицины им. Н.Э. Баумана. - 2011. - Т. 208.
- С. 330-337
5. Шаева, А.Ю. Идентификация нового генотипа ВЛКРС / А.Ю. Шаева, З.Р. Гараева, Р.Р. Вафин, Н.З. Хазипов, А.М. Алимов // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2012. - Т. 211.
- С. 192-197
6. Balic, D. Identification of a new genotype of bovine leukemia virus / D. Balic, I. Lojkic, M. Periskic, T. Bedekovic, A. Jungic, N. Lemo, B. Roic, Z. Cae, L. Barbie, J. Madic // Arch. Virol. - 2012. - V. 157. - N. 7. - P. 1281-1290.
7. Beier, D. Identification of different BLV provirus isolates by PCR, RFLPA and DNA sequencing / D. Beier, P. Blankenstein, O. Marquardt, J. Kuzmak // Berl. Munch. Tierarztl. Wochenschr. - 2001. - V. 114. - N. 7-8. - P. 252-256
8. Fechner, H. Provirus variants of the bovine leukemia virus and their relation to the serological status of naturally infected cattle / H. Fechner, P. Blankenstein, A.C. Looman, J. Elwert, L. Geue, C. Albrecht, A. Kurg, D. Beier, O. Marquardt, D. Ebner // Virology. -1997. - V. 237. - N. 2. - P. 261-269
9. Lee, E. Molecular epidemiological and serological studies of bovine leukemia virus (BLV) infection in Thailand cattle / E. Lee, E.J. Kim, J. Ratthanophart, R. Vitoonpong, B.H. Kim, IS. Cho, J.Y. Song, K.K. Lee, Y.K. Shin // Infect. Genet. Evol. - 2016. - V. 41. - N. 245-254.
10. Licursi, M. Genetic heterogeneity among bovine leukemia virus genotypes and its relation to humoral responses in hosts / M. Licursi, Y. Inoshima, D. Wu, T. Yokoyama, E.T. González, H. Sentsui // Virus Res. -2002. - V. 86. - N. 1-2. - P. 101-110
11. Polat, M. A new genotype of bovine leukemia virus in South America identified by NGS-based whole genome sequencing and molecular evolutionary genetic analysis / M. Polat, S.N. Takeshima, K. Hosomichi, J. Kim,
T. Miyasaka, K. Yamada, M. Arainga, T. Murakami, Y. Matsumoto, V. de la Barra Diaz, C.J. Panei, E.T. González, M. Kanemaki, M. Onuma, G. Giovambattista, Y. Aida // Retrovirology. - 2016. - V. 13. - N. 4. - P. 2289-2291
12. Rodriguez, S.M. Bovine leukemia virus can be classified into seven genotypes: evidence for the existence of two novel clades / S.M. Rodriguez, M.D. Golemba, R.H. Cam-
pos, K. Trono, L.R. Jones // J. Gen. Virol. -2009. - V. 90. - N. 11. - P. 2788-2797
13. Rola-Luszczak, M. The molecular characterization of bovine leukaemia virus isolates from Eastern Europe and Siberia and its impact on phylogeny / M. Rola-Luszczak, A. Pluta, M. Olech, I. Donnik, M. Petropavlovskiy, A. Gerilovych, I. Vinogradova, B. Choudhury, J. Kuzmak // PLoS One. - 2013. - V. 8. - N. 3. - P.58705
ГЕНОТИПИЧЕСКАЯ ПРИНАДЛЕЖНОСТЬ ИЗОЛЯТОВ ВИРУСА БЫЧЬЕГО ЛЕЙКОЗА, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ В ПОПУЛЯЦИЯХ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
РЕСПУБЛИКИ ТАТАРСТАН
Гильманов Х.Х., Вафин Р.Р., Шаева А.Ю., Закирова З.Р., Тюлькин С.В.
Резюме
Вирус бычьего лейкоза (ВБЛ) - этиологический агент лейкоза крупного рогатого скота, наносящего существенный экономический ущерб отрасли скотоводства. Молекулярно-генетические методы исследования являются наиболее информативными инструментами его геноидентификации, при этом современная филогенетическая классификация ВБЛ предусматривает наличие десяти генотипов возбудителя, Целью исследования являлось установление генотипической принадлежности изолятов ВБЛ, циркулирующих в популяциях крупного рогатого скота Республики Татарстан, используя филогенетический анализ секвенированных последовательностей локуса env-гена провируса и ПЦР-ПДРФ-анализ, согласующийся с филогенетической классификацией изучаемого вирусного патогена. В результате исследования установлено, что в популяциях крупного рогатого скота Республики Татарстан циркулируют изоляты 1-го, 4-го, 7-го и 8-го генотипов ВБЛ, Предложенная в соответствии с филогенетической классификацией стратегия ПЦР-ПДРФ-генотипирования ВБЛ, актуализирована с учетом новых знаний о генетическом разнообразии возбудителя, и позволяет проводить идентификацию всех десяти известных генотипов изучаемого инфекционного агента.
GENOTYPIC IDENTITY OF BOVINE LEUKEMIA VIRUS ISOLATES, CIRCULATING IN LIVESTOCK POPULATIONS OF THE REPUBLIC OF TATARSTAN
Gilmanov Kh.Kh., Vafin R.R., Shaeva A.Y., Zakirova Z.R., Tyulkin S.V.
Summary
The bovine leukemia virus (BLV) is the etiological agent of bovine leukosis, which causes significant economic damage to the livestock sector. Molecular genetic methods of investigation are the most informative tools for its genotype identification, while the modern phylogenetic classification of BLV provides for the presence of ten genotypes of the pathogen. The aim of the study was to establish the genotypic identity of BLV isolates circulating in livestock populations of the Republic of Tatarstan, using a phylogenetic analysis of the env-gene provirus sequences and PCR-RFLP-analysis, consistent with the phylogenetic classification of the studied viral pathogen. As a result of the study, it was found that the isolates of the 1st, 4th, 7th and 8th genotypes of BLV circulate in livestock populations of the Republic of Tatarstan. The strategy of PCR-RFLP-genotyping of BLV, proposed in accordance with the phylogenetic classification, was updated taking into account new knowledge of the genetic diversity of the pathogen, and allows identification of all ten known BLV genotypes
