CC BY
53
Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 3
ющие параметры тромбодинамики: время задержки роста сгустка (Tlag), начальная (V вблизи активатора) и стационарная (V ) скорости роста сгустка, наличие/отсутствие спонтанных сгустков в объеме плазмы (показатель гиперкоагуляции). Исследование проводили на свежих образцах плазмы добровольцев, не имевших в анамнезе заболеваний сердечно-сосудистой системы, тромбозов, невынашивания, инфекционных заболеваний (в течение месяца до проведения исследования). В число здоровых добровольцев из всех включенных в исследование отбирались те, у кого не было обнаружено патологий при физикальном осмотре и параметры лабораторных тестов (клинического и биохимического анализов крови и коагулограммы) находились в норме.
Результаты и обсуждение. В ходе работы было обследованы 75 добровольцев, из которых по совокупности данных физикального обследования и лабораторных тестов отобрано 62 здоровых добровольца (28 мужчин, 34 женщины в возрасте от 19 до 65 лет, медиана возраста 32,5 года, среднее значение 35,5 года). Значения всех исследуемых параметров тромбодинамики подчиняются распределению Гаусса. Средние значения ± стандартное отклонение (SD) по всем добровольцам составляют: 0,9 ± 0,3 мин (Tlag), 46 ± 5 мкм/мин
(V0), 25 ± 3 мкм/мин (V ). В качестве диапазонов нормальных значений параметров определены средние значения ± 2SD. Спонтанные сгустки в норме не возникают за все время проведения теста (60 мин). Не обнаружено статистически значимых различий по значениям параметров тромбодинамики между группами различного возраста и пола (р = 0,05).
Заключение. Средние значения стационарной скорости ± SD равны 25 ± 3 мкм/мин как для мужчин, так и для женщин, а также для доноров 20-30 и 30-40 лет, и 25 ± 2 мкм/мин для доноров 40-65 лет. Определены диапазоны нормальных значений параметров тромбодинамики. Они применимы для мужчин и женщин возраста от 20 до 65 лет. Группы здоровых добровольцев различного возраста и пола не отличаются достоверно друг от друга по значениям параметров тромбодинамики.
Работа была частично поддержана грантами РФФИ 1001-91055, 11-04-00303, 11-04-12080, 12-04-00652-а, 12-04-00438-а, 12-04-00111 -а и программами фундаментальных исследований Президиума РАН "Фундаментальные науки -медицине", "Интегративная физиология" и "Молекулярные механизмы физиологических функций"
Оценка влияния температуры, времени и механических воздействий на активность цитологических процессов и пролиферативную активность гемопоэтических стволовых клеток при транспортировке
трансплантационного материала
А.А. Степанов, Е.В. Коротаев, В.И. Рабинович, Л.П. Астахова, С.А. Пономарев АУ Югорский НИИ клеточных технологий с банком стволовых клеток, Ханты-Мансийск, РФ.
Введение. Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) в настоящее время является одним из наиболее эффективных методов лечения гематологических заболеваний. Однако, не все клинические учреждения в России, потенциально способные выполнять ТГСК, имеют при себе оснащенные подразделения для хранения трансплантационного материала. Для реализации данного вида медицинской помощи в этих учреждениях, нами предложена следующая стратегия. Создание централизованных специализированных центров по хранению трансплантационного материала с выездными бригадами, способными обеспечить заготовку и транспортировку трансплантационного материала. Такой подход позволит эффективно использовать дорогостоящее оборудование и поддерживать высокую квалификацию персонала. При этом необходимо обеспечить оптимальные условия транспортировки, при которых трансплантационный материал не потеряет свих физиологических качеств. Таким образом, возникает необходимость оценить влияние факторов, возникающих при транспортировке, на качество трансплантационного материала и гемопоэтических стволовых клеток (ГСК). Цель исследования: оценить влияние температуры, времени и механических воздействий на активность цитолитических процессов лейкоцитов и пролиферативную активность гемопоэтических стволовых клеток при транспортировке трансплантационного материала.
Материалы и методы. Экспериментальный материал пуповиной крови (ПК) был получен в соответствии с приказом № 325 МЗ РФ. Моделирование механических воздействий осуществлялось с помощью программируемого шейкера MultiBio 3D.
Эксперимент состоял из 4 групп (п = 40):
Пакет с ПК находится при температуре +24°С неподвижно (п = 10);
Пакет с ПК находится при температуре +24°С на шейкере (п = 10);
Пакет с ПК находится при температуре +4°С неподвижно (п = 10);
Пакет с ПК находится при температуре +4°С на шейкере (п = 10).
Анализ материала проводили непосредственно перед экспериментом и в динамике через 6, 12 и 24 ч. Для оценки колониеобразующей активности ГСК использована готовая метилцеллюлозная среда MethoCult H4434. Цитолитическая активность оценивалась методом проточной цитометрии. Лейкоциты метились моноклональными антителами CD45+. Цитолиз оценивали с помощью витального красителя 7AAD.
Результаты и обсуждение. Достоверное снижение колониеобразующей активности ГСК обнаружено уже через 6 ч моделирования транспортировки во всех группах (р < 0,05). Через 6, 12 и 24 ч снижение данного показателя составило соответственно - 16%, 37% и 62%. Статистически значимых различий показателя колониеобразующей активности ГСК между группами не обнаружено. Анализ результатов исследования цитолитической активности показал, что через 12 и 24 ч, при температуре +4°С, лизис лейкоцитов достоверно выше на 9% и 12% соответственно, чем в группе при температуре +24°С (р < 0,05).
Заключение Таким образом, было показано, что предпочтительная температура транспортировки трансплантационного материала, содержащего ГСК, будет температура +24°С. Зная время, необходимое для доставки трансплантата к месту хранения, можно прогнозировать степень снижения регенеративного потенциала ГСК. При этом механические воздействия, возникающие при транспортировке, не влияют на исследованные показатели качества трансплантационного материала.
Генетические полиморфизмы склонности к тромбофилии у людей с различными группами крови АВ0
Т.Н. Субботина, А.В. Петухова, А.В. Ковалев
Красноярский филиал ФГБУЗ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России; Красноярский научный центр Северного отделения РАН, Сибирский федеральный университет, Красноярск
Введение. В рамках проекта формирования регистра тромбофилий (Ройтман В.В., Момот А.П. и др., 2010) в Красноярском крае на 01.03.2012 проведено исследование распространенности генетических тромбогенных полиморфизмов у 655 добровольцев. Одновременно участники исследования
заполняли анкету, включающую среди прочих вопросов сведения об их группе крови. Учитывая известные факты об относительно более высокой склонности обладателей "не 0" группы крови к повышенному свертыванию крови (Кузник, 2011, Jukic et al., 2010), представлялось интересным оценить
138
Приложение
по накопленной базе данных вероятную связь наличия тромбогенных полиморфизмов и групп крови по системе АВ0.
Материалы и методы. Всем участникам определяли полиморфизмы в генах коагуляционного фактора II - протромбина (FII, 20210 G->A; rs1799963), фактора V (FV, генотип Ляйден, 1691 G->A; rs6025), термолабильного варианта метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR, 677С->Т; rs1801133), ингибитора активатора плазминогена (PAI-1, -675 5G/4G; rs2368564), а также полиморфизм гена коагуляционного фактора VII (FVII, 10976 G->A; rs6046), для которого известно: антитромбогенные эффекты. Детекцию результатов амплификации проводили в режиме реального времени iCycler iQ5 ("BioRad").
Результаты и обсуждение. Принадлежность каждого обследуемого человека к определенной группе крови по системе АВ0 выяснялась в результате проведения анкетирования. Для корректного статистического анализа из 655 записей текущей базы было отобрано 356 записей с полной информацией о группе крови и всех генных маркерах. В данной группе присутствует 80 мужчин и 276 женщин в возрасте от 20 до 85 лет. Среди испытуемых обладатели I(0) группы составили 36,5%, II(A) - 36,2%, III (B) - 20,5%, IV(AB) - 6,7%. Дальнейшие исследования проводили по всей выборке без учета половых и возрастных различий с учетом выбранных аллелей риска тромбогенных проявлений. Полученные результаты отражены в таблице.
Для проверки гипотезы о наличии связи между группой крови и изучаемыми полиморфизмами для каждого из пяти
Частота встречаемости генетических полиморфизмов у лиц с разными группами крови по системе АВ0
Группа крови Частота выявления полиморфизмов, %
F2 (G/A) F5 (G/A) F7 (G/A, А/A) MGTFR (Т/Т) PIA-1 (4G/4G)
I(0) 2,3 5,4 25,4* 12,3 31,5
II(A) 4,65 3,1 13,2 6,2 27,9
III (B) 4,1 8,2 20,5 17,8* 27,4
IV(AB) 4,2 4,2 12,5 8,3 41,7
генов проводили статистическую оценку таблиц сопряженности размерностью 2 х 4 методом расчета параметра х2 и сравнения его с табличным значением - х20 9(3) = 6,25. Показано, что существует статистически значимая связь между частотой встречаемости полиморфизмов в генах F7 и MGTFR и группой крови обследуемых. Детальный анализ таблиц сопряженности показывает, что среди людей с группой крови I(0) увеличена частота встречаемости мутации в гене F7, а у обладателей группы крови III(B) увеличена частота встречаемости мутации в гене MGTFR по сравнению с соответствующими величинами во всех других группах.
Заключение. Выявленные ассоциации могут в определенной мере обусловливать наблюдаемое увеличение частоты развития тромбозов у лиц с " не 0" группой крови.
Обильная менструальная кровопотеря - фактор риска развития анемии у девушек-подростков
И.С. Тарасова
Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева Минздравсоцразвития России, Москва
Введение. Подростки представляют группу риска по развитию железодефицитных состояний (ЖДС). У де-
вушек-подростков наряду с бурным ростом дополнительным фактором, приводящим к истощению запасов железа в организме, является кровопотеря во время менструаций. Цель исследования: определить распространенность анемии среди девушек-подростков, проживающих в средней полосе России, и установить взаимосвязь между менструальной кровопотерей и анемией для разработки мер по улучшению состояния здоровья подростков.
Материалы и методы. Проведено одномоментное популяционное нерандомизированное описательное исследование в рамках диспансеризации учащихся 5 средних школ г. Вологды в сентябре-ноябре 2004 г. Для исследования случайным образом были отобраны 1340 девочек и девушек в возрасте от 10 до 18 лет (средний возраст 13,81 ± 0,04 года). Оценка менструальной функции проведена у 883 девушек в возрасте от 11 до 18 лет (средний возраст 14,5 ± 0,04 года) на основании данных анкетирования и осмотра гинеколога.
Результаты и обсуждение. Распространенность анемии (гемоглобин - Hb < 120 г/л) среди всех обследованных девочек/девушек Вологды составила 10,7% (п = 143). У подавляющего большинства (137, или 95,8%) девочек/ девушек анемия была легкой степени (Hb 90-120 г/л). Рас-
пространенность анемии среди менструирующих девушек-подростков составила 10,6% (95 из 896), а среди девушек с известными характеристиками менструальной функции -10,5% (93 из 883). Возраст наступления менархе колебался от 10 до 16 лет и в среднем составил 12,57 ± 0,03 года (медиана 13 лет). Менструации длительностью более 7 дней наблюдались у 17 (1,9%) девушек, обильные кровяные выделения - у 50 (5,6%), обильные и длительные менструации - у 6 (0,6%). Маточные кровотечения пубертатного периода (МКПП) по данным осмотра гинеколога были выявлены у 54 (6,2%) девушек и протекали по типу меноррагии у 33 (61,1%) девушек, по типу метроррагии - у 2 (3,7%), по типу менометроррагии - у 19 (35,2%). Анемия была выявлена у 11 (20,4%) девушек с МКПП. Из всех нарушений менструальной функции единственным фактором риска развития анемии явилось наличие обильных менструаций [отношение шансов (odds ratio - OR) = 0,43, 95% доверительный интервал 0,22-0,87, p = 0,0348].
Заключение. Потери железа с менструацией являются основным фактором риска развития ЖДС, поэтому для выявления причин анемии у женщин детородного возраста врач должен получить полную информацию о характере менструальных выделений, включая их длительность, интенсивность и регулярность.
Лечение гепатита С у больных гемофилией
И.А. Тенцова, О.П. Плющ, Т.Ю. Полянская, В.Ю. Зоренко ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва
Цель - оценка эффективности лечения гепатита С у больных гемофилией.
Материалы и методы. Были проанализированы результаты клинического и вирусологического обследования 2 групп больных гемофилией А и В. Применение вируснеи-нактивированных препаратов в 1-й группе (п = 500), состоящих на учете более 20 лет, привело к тотальному инфицированию вирусом гепатита С (анти-НС V-96%). Во 2-й группе (п = 58) - больные дети, ранее получающие только вирус-безопасные концентраты факторов свертывания, маркеры ге-
патита С не определялись. Лабораторный контроль включал определение анти-НСУ, РНК-HCV и его генотипа, австралийского антигена, уровня виремии; а также полное гематологическое и биохимическое обследование, УЗИ брюшной полости, гастроскопия, эластография печени.
Результаты и обсуждение. Из 1-й группы у 35 больных диагностировано активное течение хронического гепатита (по клиническим, биохимическим и вирусологическим показателям) и определена тактика дальнейшего лечения совместно со специалистами-гепатологами. У всех пациентов выявлены
139
