CC BY
86
Приложение
составили пациенты с лимфопролиферативными заболеваниями - 287 (73,8%), с миелопролиферативными заболеваниями -92 (23,6%). Мужчин 197, женщин 192 в возрасте от 15 до 87 лет, средний возраст составил 53,9 лет, старше 60 лет - 125 (32,1%). Все оперированные больные разделены на 2 основные группы. В 1-ю группу вошли 275 пациентов с массивной и гигантской спленомегалией, оперированные в период с 1989 по 2005 г; во 2-ю группу включено 114 пациентов, спленэкто-мия у которых выполнена с 2006 по 2011 г с использованием нового методического подхода. Максимальный размер удаленной селезенки составил 41 см, массой 9000 г.
Результаты и обсуждение. Использование предлагаемого методического подхода при выполнении АСЭ позволило: в 2,4 раза уменьшить количество послеоперационных осложнений (с 27 до 11,4%); в 2 раза снизить количество интраоперационных осложнений и число повторных оперативных вмешательств с целью ликвидации хирургических осложнений; сократить на 17% интраоперационную кровопотерю. Частота развития острого послеоперационного панкреатита уменьшилась в 4,6
раза (с 16 до 3,5%), внутрибрюшного кровотечения в 2,2 раза, поддиафрагмального абсцесса в 1,7 раза. Ранняя послеоперационная летальность составила 0%. Общее количество выполненных сочетанных операций при массивной и гигантской сплено-мегалии за последние 6 лет возросло в 2,7 раза по сравнению с предыдущими 17 годами. При гигантской спленомегалии щадящая техника выполнения абдоминальной спленэктомии позволила в 5,5 раза чаще выполнить сочетанные операции.
Заключение. Массивная и гигантская спленомегалия обуславливает технические трудности при выполнении абдоминальной спленэктомии и сопряжена с высоким риском осложнений (22%). Особенностями стандартизированной техники выполнения СЭ у таких больных являются: использование широкого доступа с дополнительными разрезами; предварительное выделение и перевязка селезеночной артерии in situ; щадящее отделение хвоста поджелудочной железы от ворот селезенки; применение преимущественно лигатурного способа достижения локального гемостаза; установка дополнительного дренажа к ложу селезенки.
Экспрессия рецепторов к цитокинам на клетках костного мозга больных лимфомами как дополнительный
молекулярный фактор прогноза опухолевой прогрессии
Н.В. Скворцова, Т.И. Поспелова, И.Б. Ковынев, О.Б. Серегина, В.Д. Коптев ГБОУ ВПО Новосибирский Государственный медицинский университет, Минздравсоцразвития России
Введение. Известно, что цитокинам принадлежит важная роль в патогенезе лимфом: они могут быть производными неопластических клеток и действовать различными способами на злокачественно трансформированнные или реактивные клетки. Разнообразные эффекты цитокинов реализуются при их взаимодействии со специфическими мембранными рецепторами. В последнее время появились многочисленные данные о наличии рецепторов цитокинов на опухолевых клетках. Экспрессия рецепторов во многих случаях сочетается со способностью опухолевых клеток продуцировать цитокины, что дает им возможность конкурировать с иммунокомпетентными клетками за интерлейкины, используя их для усиления собственного роста, что лежит в основе опухолевой прогрессии. Цель исследования - определение уровня экспрессии рецепторов к цитокинам (R-IL) (IL-1P и IL-6) на клетках костного мозга (КМ) и оценка их участия в опухолевой прогрессии у больных неходжкинскими злокачественными лимфомами (НХЗЛ).
Материалы и методы. Обследованы 26 больных НХЗЛ, из них у 10 (38,5%) была диагностирована фолликулярная лимфома, у 16 (61,5%) - диффузная В-крупноклеточная (средний возраст 44,4 ± 2,4 года). Иммуноцитохимическим методом изучали экспрессию опухолевыми клетками рецепторов к цитокинам (R-IL) (IL-1 и IL-6). Методом ИФА оценивали сывороточный уровень IL-1 в и IL-6.
Результаты и обсуждение. Выявлено, что экспрессия рецепторов к цитокинам отмечалась у всех исследованных больных, как на опухолевых лимфоидных клетках, так и на нормальных мононуклеарах костного мозга (МНК КМ), что, скорее всего, связано с плейотропностью действия данных регуляторных молекул (R-IL-1P - 44,5 ± 9,2% клеток, R-IL-6 - 36,6
± 6,5% клеток). У 35,3% больных экспрессия R-IL на опухолевых клетках была низкой, а у 64,7% обследованных больных, напротив, повышена. У 30,5% больных, преимущественно диффузной В-крупноклеточной лимфомой, отмечено наличие растворимых форм R-IL-1P, что коррелировало с резистентностью к проводимой терапии и плохим прогнозом заболевания, у 69,5% растворимых форм не рецепторов не определялось. У больных с высокой экспрессией рецепторов к цитокинам, уровень в сыворотке крови IL-6 и IL-1P был статистически значимо выше, чем у пациентов с низким уровнем экспрессии рецепторов (для IL-6 - 59,4 ± 10,0 пкг/мл у больных НХЗЛ с высоким уровнем экспрессии R к IL-6 по сравнению с 35,5 ± 4,8 пкг/мл у больных НХЗЛ с низким уровнем экспрессии R к IL-6; для IL-1P - 142,7 ± 41,1 пкг/мл по сравнению с 72,2 ± 27,2 пкг/мл; р < 0,05 соответственно), что указывает на способность опухолевых клеток синтезировать данные цитокины и экспрессировать рецепторы к ним для усиления собственной пролиферации. Следует также отметить, что уровень экспрессии R к IL-6 коррелировал с процентом лимфоидных клеток в костном мозге и уровнем данного цитокина в сыворотке крови (г = 0,64; r = 0,76 соответственно), что не исключает факт аутокринной и паракринной регуляции опухолевого роста у больных НХЗЛ.
Заключение. Параллельное исследование уровня цитокинов в сыворотке крови и экспрессии R-IL на поверхности опухолевых клеток дает ценную информацию об участии цитокинов в иммунопатогенезе и опухолевой прогрессии неходжкинских злокачественных лимфом, что позволяет использовать их в качестве дополнительного к международному прогностическому индексу (IPI) факторов прогноза.
Исследование тромбодинамики у здоровых добровольцев
Н.П. Сошитова1, А.Н. Баландина4, Е.Н. Липец2, И.Д. Тарандовский4, И.А. Щербина3, Д.М. Полохов2, А.В.Полетаев2,
И.И. Серебрийский1, М.А. Пантелеев 1 4 , Ф.И. Атауллаханов1 2 4.
1 ООО "ГемаКор"; 2 ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России; 3 Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева Минздравсоцразвития России; 4 Центр теоретических проблем
физико-химической фармакологии РАН, Москва
Введение. Важной особенностью свертывания крови in vivo является пространственная неоднородность. Свертывание активируется локально, и сгусток распространяется от места активации вглубь сосуда, закрывая место повреждения. В нашей лаборатории была разработана методика наблюдения за ростом фибринового сгустка в пространстве, которая легла в основу нового теста состояния системы свертывания крови - тромбодинамики. Целью данного исследования было определение диапазонов нормальных значений параметров
Тромбодинамики и исследование зависимости параметров тромбодинамики от возраста и пола здоровых добровольцев. Ключевым принципом теста тромбодинамики является регистрация сигнала светорассеяния от растущего фибринового сгустка в неперемешиваемом тонком слое свободной от тромбоцитов плазмы, содержащей ингибитор контактной активации. Активация свертывания в тесте производится иммобилизованным на поверхности тканевым фактором.
Материалы и методы. В работе определялись следу-
137
Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 3
ющие параметры тромбодинамики: время задержки роста сгустка (Tlag), начальная (V вблизи активатора) и стационарная (V ) скорости роста сгустка, наличие/отсутствие спонтанных сгустков в объеме плазмы (показатель гиперкоагуляции). Исследование проводили на свежих образцах плазмы добровольцев, не имевших в анамнезе заболеваний сердечно-сосудистой системы, тромбозов, невынашивания, инфекционных заболеваний (в течение месяца до проведения исследования). В число здоровых добровольцев из всех включенных в исследование отбирались те, у кого не было обнаружено патологий при физикальном осмотре и параметры лабораторных тестов (клинического и биохимического анализов крови и коагулограммы) находились в норме.
Результаты и обсуждение. В ходе работы было обследованы 75 добровольцев, из которых по совокупности данных физикального обследования и лабораторных тестов отобрано 62 здоровых добровольца (28 мужчин, 34 женщины в возрасте от 19 до 65 лет, медиана возраста 32,5 года, среднее значение 35,5 года). Значения всех исследуемых параметров тромбодинамики подчиняются распределению Гаусса. Средние значения ± стандартное отклонение (SD) по всем добровольцам составляют: 0,9 ± 0,3 мин (Tlag), 46 ± 5 мкм/мин
(V0), 25 ± 3 мкм/мин (V ). В качестве диапазонов нормальных значений параметров определены средние значения ± 2SD. Спонтанные сгустки в норме не возникают за все время проведения теста (60 мин). Не обнаружено статистически значимых различий по значениям параметров тромбодинамики между группами различного возраста и пола (р = 0,05).
Заключение. Средние значения стационарной скорости ± SD равны 25 ± 3 мкм/мин как для мужчин, так и для женщин, а также для доноров 20-30 и 30-40 лет, и 25 ± 2 мкм/мин для доноров 40-65 лет. Определены диапазоны нормальных значений параметров тромбодинамики. Они применимы для мужчин и женщин возраста от 20 до 65 лет. Группы здоровых добровольцев различного возраста и пола не отличаются достоверно друг от друга по значениям параметров тромбодинамики.
Работа была частично поддержана грантами РФФИ 1001-91055, 11-04-00303, 11-04-12080, 12-04-00652-а, 12-04-00438-а, 12-04-00111 -а и программами фундаментальных исследований Президиума РАН "Фундаментальные науки -медицине", "Интегративная физиология" и "Молекулярные механизмы физиологических функций"
Оценка влияния температуры, времени и механических воздействий на активность цитологических процессов и пролиферативную активность гемопоэтических стволовых клеток при транспортировке
трансплантационного материала
А.А. Степанов, Е.В. Коротаев, В.И. Рабинович, Л.П. Астахова, С.А. Пономарев АУ Югорский НИИ клеточных технологий с банком стволовых клеток, Ханты-Мансийск, РФ.
Введение. Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) в настоящее время является одним из наиболее эффективных методов лечения гематологических заболеваний. Однако, не все клинические учреждения в России, потенциально способные выполнять ТГСК, имеют при себе оснащенные подразделения для хранения трансплантационного материала. Для реализации данного вида медицинской помощи в этих учреждениях, нами предложена следующая стратегия. Создание централизованных специализированных центров по хранению трансплантационного материала с выездными бригадами, способными обеспечить заготовку и транспортировку трансплантационного материала. Такой подход позволит эффективно использовать дорогостоящее оборудование и поддерживать высокую квалификацию персонала. При этом необходимо обеспечить оптимальные условия транспортировки, при которых трансплантационный материал не потеряет свих физиологических качеств. Таким образом, возникает необходимость оценить влияние факторов, возникающих при транспортировке, на качество трансплантационного материала и гемопоэтических стволовых клеток (ГСК). Цель исследования: оценить влияние температуры, времени и механических воздействий на активность цитолитических процессов лейкоцитов и пролиферативную активность гемопоэтических стволовых клеток при транспортировке трансплантационного материала.
Материалы и методы. Экспериментальный материал пуповиной крови (ПК) был получен в соответствии с приказом № 325 МЗ РФ. Моделирование механических воздействий осуществлялось с помощью программируемого шейкера MultiBio 3D.
Эксперимент состоял из 4 групп (п = 40):
Пакет с ПК находится при температуре +24°С неподвижно (п = 10);
Пакет с ПК находится при температуре +24°С на шейкере (п = 10);
Пакет с ПК находится при температуре +4°С неподвижно (п = 10);
Пакет с ПК находится при температуре +4°С на шейкере (п = 10).
Анализ материала проводили непосредственно перед экспериментом и в динамике через 6, 12 и 24 ч. Для оценки колониеобразующей активности ГСК использована готовая метилцеллюлозная среда MethoCult H4434. Цитолитическая активность оценивалась методом проточной цитометрии. Лейкоциты метились моноклональными антителами CD45+. Цитолиз оценивали с помощью витального красителя 7AAD.
Результаты и обсуждение. Достоверное снижение колониеобразующей активности ГСК обнаружено уже через 6 ч моделирования транспортировки во всех группах (р < 0,05). Через 6, 12 и 24 ч снижение данного показателя составило соответственно - 16%, 37% и 62%. Статистически значимых различий показателя колониеобразующей активности ГСК между группами не обнаружено. Анализ результатов исследования цитолитической активности показал, что через 12 и 24 ч, при температуре +4°С, лизис лейкоцитов достоверно выше на 9% и 12% соответственно, чем в группе при температуре +24°С (р < 0,05).
Заключение Таким образом, было показано, что предпочтительная температура транспортировки трансплантационного материала, содержащего ГСК, будет температура +24°С. Зная время, необходимое для доставки трансплантата к месту хранения, можно прогнозировать степень снижения регенеративного потенциала ГСК. При этом механические воздействия, возникающие при транспортировке, не влияют на исследованные показатели качества трансплантационного материала.
Генетические полиморфизмы склонности к тромбофилии у людей с различными группами крови АВ0
Т.Н. Субботина, А.В. Петухова, А.В. Ковалев
Красноярский филиал ФГБУЗ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России; Красноярский научный центр Северного отделения РАН, Сибирский федеральный университет, Красноярск
Введение. В рамках проекта формирования регистра тромбофилий (Ройтман В.В., Момот А.П. и др., 2010) в Красноярском крае на 01.03.2012 проведено исследование распространенности генетических тромбогенных полиморфизмов у 655 добровольцев. Одновременно участники исследования
заполняли анкету, включающую среди прочих вопросов сведения об их группе крови. Учитывая известные факты об относительно более высокой склонности обладателей "не 0" группы крови к повышенному свертыванию крови (Кузник, 2011, Jukic et al., 2010), представлялось интересным оценить
138
