CC BY
322. Бейли Н., Статистические методы в биологии. М., Мир, 1964.
3. Вайнштейн М.Б., Кудряшова Е.Б. Наннобактерии. Микробиология. 2000, 8: 163-171.
4. Коваленко Я.Р. (ред.). Микоплазмозы животных. М., Колос, 1976.
5. Раковская И.В., Бархатова О.И., Гамова Н.А. и др. «Мини-клетки» и «мини-колонии» микоплазм, выделенные из крови людей, инфицированных M. hominis. Журн. лаб. клин. диагн. 2010, 9: 31-32.
6. Раковская И.В., Бархатова О.И., Гамова Н.А. и др. Нетипичные формы микоплазм, персистирующие в организме зараженных ими людей. Журн. лаб. клин. диагн. 2011, 12: 35-38.
7. Balish M., Krause D. Cytadherence and сytoskeleton. In: Molecular biology and pathogenicity of Mycoplasma. N-Y., 2002, р. 491-518.
8. Imlay I., Chin S., Linn S. et al. Toxic DNA damage by hydrogen peroxide through the Fenton reaction in vivo and vitro. Science. 1988, 240: 640-642.
9. Morfill G., Shimizu T., Steffels B., Schmidt H. Nosocomial infection — a new approach towards preventive medicine using plasma. New J. Phys. 2009, 11: 11519.
10. Sato T., Ochiai Sh., Urayama T. et al. Generation and transport mechanisms of chemical species by a post-discharge flow for inactivation of bacteria. New J. Phys. 2009, 11: 115018.
11. Sladek R., Filoche S., Sissons C., Steffels E. Treatment of Streptococcus mutants biofilm with a nonthermal atmospheric plasma. Appl. Microbiol. Lett. 2007, 45 (3): 318-322.
12. Uphoff C., Meyer C., Drexler H. et al. Elimination of mycoplasma from leukemia-lymphoma cell lines using antibiotics. Leukemia. 2002, 16 (2): 284-288.
Поступила 16.10.12
Контактная информация: Миллер Галина Генриховна, д.б.н.,
123098, Москва, ул. Гамалеи, 18, р.т. (499)193-55-10
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013
И.В.Раковская, Л.Г.Горина, Д.Н.Балабанов, ГА.Левина, О.И.Бархатова, С.А.Гончарова, Н.А.Гамова
ГЕНЕРАЛИЗОВАННАЯ МИКОПЛАЗМЕННАЯ ИНФЕКЦИЯ У БОЛЬНЫХ И НОСИТЕЛЕЙ
НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, Москва
Цель. Изучение возможности генерализации микоплазменной инфекции пациентов с урогенитальной патологией. Материалы и методы. Среди наблюдаемых пациентов выбрали пятерых мужчин, характеризующихся рискованным сексуальным поведением, с выраженными симптомами инфекции или без таковых. Пациенты были обследованы комплексом методов на наличие микоплазменной инфекции: культу-ральным, ПЦР, ПИФ, РПГА, РАГА и путем выявления специфических иммунных комплексов в сыворотке крови. Материалом для исследования служили соскобы из урогенитального тракта, пробы сыворотки
крови, моча, слюна, сок простаты. Результаты. В крови всех пациентов в ИФА были выявлены антитела к Mycoplasma hominis; в РПГА они были обнаружены только у 2 человек. У всех пациентов в крови обнаружены ЦИК, включающие антигены и ДНК одного или нескольких видов микоплазм. Сперма 3 чел. была инфицирована Ureaplasma spp., двух — M.genitalium. В слюне 2 чел. обнаружена M. hominis, трех — U. urealyti-cum. Заключение. Показано, что у всех обследованных инфекция носила генерализованный характер. Этот феномен представляется весьма значительным, поскольку микоплазмы могут вызывать антиапоптоти-ческий и онкогенный эффект.
Журн. микробиол., 2013, № 2, С. 37—43
Ключевые слова: микоплазменные инфекции, генерализация инфекционного процесса
I.V.Rakovskaya, L.G.Gorina, D.N.Balabanov, G.A.Levina, O.I.Barkhatova, S.A.Goncharova, N.A.Gamova
GENERALIZED MYCOPLASMA INFECTION IN PATIENTS AND CARRIERS
Gamaleya Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Moscow, Russia
Aim. Study of possibility of generalization of mycoplasma infection in patients with urogenital pathology. Materials and methods. Among the examined patients 5 males characterized by risky sexual behavior with pronounced symptoms of infection or without those were selected. Patients were examined by a complex of methods for the presence of mycoplasma infection by culture, PCR, DFA, PHA, AHR and by detection of specific immune complexes in blood sera. Scrapes from urogenital tract, blood sera samples, urine, saliva, prostatic fluid were materials for the study. Results. In blood of all patients in ELISA antibodies against Mycoplasma hominis were detected; in PHA they were detected only in 2 individuals. In all the patients in blood CIC were detected including antigens and DNA of one or several mycoplasma species. Sperm of 3 individuals was infected by Ureaplasma spp., 2 — M. genitalium. In saliva of 2 individuals M. hominis was detected, 3 — U. urealyticum. Conclusion. In all the examined patients the infection was shown to have generalized character. This phenomenon presents itself as quite significant because mycoplasma may cause anti-apoptotic and oncogenic effect.
Zh. Mikrobiol. (Moscow), 2013, No. 2, P. 37—43
Key words: mycoplasma infections, infection process generalization
ВВЕДЕНИЕ
Человек является естественным хозяином , по крайней мере, 16 видов микоплазм. Большинство из них комменсалы, но четыре вида: Мусор1азша hominis, Мусорlasma genitalium, Ureaplasma urealyticum и Ureaplasma parvum, будучи условно патогенными микроорганизмами, часто колонизирующими урогенитальный тракт здоровых людей, в определенных ситуациях могут вызывать воспалительные заболевания у мужчин и женщин. Общеизвестно, что M.hominis причастна к развитию бактериального ва-гиноза и часто обнаруживается при неблагоприятном течении беременности. У мужчин эту микоплазму часто выделяют при простатите, однако ее этиологическая роль при этом заболевании не доказана. М. genitalium является возбудителем острого и хронического уретритов, по частоте встречаемости при уретрите она занимает третье место после гонококка и хламидий. Уреаплазмы также могут быть причиной острого и хронического уретритов, иногда эпидидимита и , вероятно, причиной бесплодия мужчин. Известно, что при адсорбции уреаплазм на сперматозоидах изменяется их подвижность и морфология. Нуклеазы уреаплазм повреждают мембрану сперматозоида, что приводит к утечке его содержимого и потере жизнеспособности. В ряде случаев этиотропное лечение приводит к восстановлению фертильности.
Основной путь передачи урогенитальных микоплазм — половой. Микоплазменными инфекциями чаще болеют люди, ведущие беспорядочную половую жизнь, проститутки, наркоманы. Степень колонизации достигает максимума у перечисленных лиц. Некоторые авторы полагают, что уровень колонизации зависит от гормонального статуса, но это не доказано.
У мужчин микоплазмы колонизируют уретру и крайнюю плоть, у женщин — влагалище и реже цервикальный канал.
Несмотря на длительное и всесторонее исследование роли урогени-тальных микоплазм в патологии человека, данные о генерализации мико-плазменных инфекций немногочисленны и противоречивы. В настоящей работе мы приводим описание пяти случаев генерализованной микоплаз-менной инфекции у мужчин с рискованным сексуальным поведением.
Цель исследования — изучение возможности генерализации микоплаз-менной инфекции у пациентов с урогенитальной патологией.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В лаборатории микоплазм и L-форм бактерий НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи среди наблюдаемых пациентов для более детального обследования выбрали пятерых мужчин, характеризующихся рискованным сексуальным поведением. Возраст пациентов 26 — 34 года. Все они обратились к врачу дерматовенерологу либо с определенными жалобами, либо с целью проверки на наличие или отсутствие ЗППП.
Пациент № 1, 26 лет. Гомосексуалист. В течение трех месяцев имеет связь с одним мужчиной. До этого вел беспорядочную половую жизнь. В момент обращения к врачу жалоб не имел.
Пациент № 2, 27лет. Гомосексуалист. В течение трех месяцев имеет сексуальные отношения с одним партнером, до этого в течение 1 года имел другого партнера. При обращении к врачу предъявил жалобы на неприятные ощущения в области уретры, не связанные с мочеиспусканием, необильные выделения слизистого характера из половых путей по утрам.
Пациент № 3, 34 года. Холост. За последние 6месяцев сменил трех половых партнеров. В прошлом перенес уреаплазменную инфекцию. В момент обращения к врачу страдает балано-поститом.
Пациент № 4, 34 года. Холост. Жалоб нет. Имеет множественные случайные связи.
Пациент № 5, 32 года. Холост. Постоянно имеет множественные половые связи. В момент обращения к врачу жалобы на неприятные ощущения в области уретры. Из уретры необильные выделения слизистого характера.
Все пациенты были обследованы комплексом методов: культуральным с целью выявления живых клеток микоплазм, методом ПЦР для выявления в клиническом материале (моче, соскобах из уретры, пробах сыворотки крови ) ДНК микоплазм, методом прямой иммунофлюоресценции (ПИФ) для выявления антигенов микоплазм в соскобах из урогенитального тракта (УГТ) и методом агрегатгемагглютинации ( РАГА ) для обнаружения антигенов микоплазм в сыворотке крови. Антитела к М.hominis выявляли в РПГА и ИФА. В отдельных случаях исследовали сперму и слюну.
Для культивирования микоплазм использовали коммерческую питательную среду « Difco PPLO Broth » и «Difco PPLO Agar » с добавлением 20% сыворотки крови лошади, 1% L-аргинина (для микоплазм ) или 0,05% мочевины (для уреаплазм) [1]. Выявление ДНК микоплазм и уреаплазм осуществляли с помощью тест-систем ООО «Интерлабсервис» ЦНИИ эпидемиологии. Реакции проводили в соответствии с инструкцией в ам-плификаторе «Терцик», детекцию ДНК с помощью электрофоретического анализа в агарозном геле [4]. Антигены микоплазм в соскобах с помощью ПИФ выявляли по обычной методике [6]. Для выявления антигенов микоплазм в крови с помощью РАГА по методу Л.Г.Гориной [3] получали гипериммунную антисыворотку путем длительной иммунизации кроликов по разработанной в лаборатории схеме. РАГА выявляет антигены мико-плазм, циркулирующие в крови в свободном состоянии. Методика выявления антигенов в составе циркулирующих в крови ЦИК описана ранее [2], ДНК в составе ЦИК выявляли, как указано выше [4]. Выявление антител в крови осуществляли по разработанной в лаборатории схеме [5]. Обследование пациентов проводили до лечения и спустя один месяц.
РЕЗУЛ ЬТАТЫ
Результаты первичного обследования пациентов представлены в табл. Как следует из данных таблицы, все пациенты оказались инфицированными одним, двумя или всеми видами микоплазм. В посевах на 4 — 5 сутки отмечали едва заметную опалесценцию бульона, на 1,3% агаре вырастали типичные по размеру и форме аргининозависимые или мочеви-нозависимые колонии. Первые с помощью ПЦР были типированы как М.hominis, вторые как Ureaplasma sрр . В то же время, из сыворотки крови вырастали нетипичные очень мелкие карликовые или мини-колонии, которые очень медленно росли, с трудом пассировались и спустя 2 — 3 пас-
Выявление у пациентов микоплазменной инфекции с помощью комплекса методов
Паци-ент Инфекционный агент Культуральный метод Выявление ДНК (ПЦР) Выявление антигенов Выявление антител Выявление ЦИК
Сыворотка крови Соскоб из УГТ Моча Слюна Сперма Сыворотка крови Соскоб из УТГ Моча Слюна Сперма Соскоб из УТГ (ПИФ) Сьшо-ротка крови (РАГА) РПГА ИФА ПИФ ДНК (ПЦР)
IgG IgM
№ 1 M.hominis + + + — — + + + + — + + + + — + +
Ureaplasma — + + + + — + — — — — + + — —
SPP-
M.genitalium + + + — + — —
№2 M.hominis + + + — — + + + + — + + + + — + +
Ureaplasma + + + + + — + — — + + + + + +
SPP-
M.genitalium + — + — +
№3 M.hominis — — — + — — + + — — + + — + + + +
Ureaplasma — + — + + — + + — — + + — + +
SPP-
M.genitalium — + + — —
№4 M.hominis — + + + — + + + + + — + + + +
Ureaplasma — + + — — + + + + + — — —
SPP-
M.genitalium
№5 M.hominis + + + — + — — — — + + — + + + +
Ureaplasma — — — — — — — — — — — — — —
SPP-
M.genitalium
сажа погибали, но иногда росли обильно, образуя сплошной газон. С помощью ПЦР и ПИФ колонии были идентифицированы как М.hominis.
Во всех случаях результаты культурального метода совпадали с данными ПЦР. Во всех случаях при выявлении очага инфекции в УГТ в пробах сыворотки крови обнаруживали антигены микоплазм. В крови всех пациентов в ИФА были выявлены антитела к М.hominis, тогда как в РПГА они были обнаружены только у двух пациентов, что свидетельствует о большей чувствительности первой из использованных реакций.
Следует заметить, что мы не располагали тест-системами для выявления антител в ИФА к Ureaplasma sрр. и M.genitalium, поэтому соответствующие данные в табл. отсутствуют. Кроме того, ввиду трудностей культивирования последней все диагностические исследования в зарубежных и в нашей лаборатории проводятся на основе ПЦР.
У всех пациентов в крови обнаружены специфические ЦИК, включающие антигены и ДНК одного или нескольких видов микоплазм. Сперма трех пациентов была инфицирована Ureaplasma sрр., двух — М. genitalium ( по результатам ПЦР) . В слюне двух пациентов обнаружена М.hominis, трех — Ureaplasma sрр., которую позже удалось идентифицировать как U. urealyticum. Последний факт является неожиданным, поскольку известно, что уреаплазмы размножаются при более низких значениях рН, чем рН слюны. Присутствие Ureaplasma sрр. в слюне связано, по-видимому, с нестандартной сексуальной ориентацией и поведением обследованных мужчин.
Все пациенты получили специфическую этиотропную терапию по общепринятым схемам.
Спустя месяц после окончания курса лечения пациенты были обследованы повторно. У пациента № 1 микоплазмы во всех посевах отсутствовали. Положительными оставались результаты выявления ДНК м^п^-lium в соскобе из уретры , в моче и сыворотке крови. Результаты выявления антигенов микоплазм в ЦИК также остались положительными.
У пациента № 2 остались положительными результаты выявления ДНК М.genitalium в сыворотке крови и моче, антигенов М.hominis в сыворотке крови и в ЦИК.
У пациента № 3 все бактериальные посевы были стерильными. Однако в соке простаты и соскобе из уретры обнаружили ДНК М.genitalium. Антигены М.hominis и уреаплазм сохранялись в крови и были повторно выявлены в ЦИК.
У пациента № 4 из мочи и слюны выделили М.hominis, ее антигены обнаружили в ЦИК.
Пациента № 5 повторно обследовать не удалось.
ОБСУЖДЕНИ Е
Итак, несмотря на исчезновение после лечения жалоб у тех пациентов, которые их имели, санировать их от микоплазменной инфекции полностью не удалось.
Ранее мы показали, что антигены микоплазм могут сохраняться в ор-
ганизме в течение нескольких месяцев после перенесенной инфекции [4], поэтому присутствие антигенов в крови пациентов после курса терапии не показалось удивительным. Положительный результат, полученный в ПЦР при исследовании некоторых проб, взятых после лечения, можно объяснить тем, что ПЦР выявляет не только живые клетки, но и погибшие и их фрагменты. Однако положительные результаты посевов слюны и мочи свидетельствуют о присутствии в этом материале живых клеток микоплазм, что указывает на недостаточную эффективность проведенного лечения.
Известно, что микоплазменные инфекции лечатся с большим трудом, т.к. микоплазмы обладают множеством факторов, обеспечивающих уход от иммунологического надзора хозяина и от воздействия антибиотиков. Поэтому микоплазменные инфекции часто приобретают хроническое течение, а инфицированный человек остается бессимптомным носителем инфекции и потенциально опасным для партнера.
Таким образом, у всех специально выбранных пациентов выявлена генерализованная микоплазменная инфекция. В крови пациентов обнаружены жизнеспособные клетки, их ДНК и антигены.
В свете последних данных об антиапоптотическом эффекте микоплазм и их возможном влиянии на канцерогенез [7, 8] проблема генерализации микоплазменной инфекции заслуживает особого внимания.
ЛИТЕРАТУРА
1. Прозоровский С.В., Раковская И.В., Вульфович Ю.В. Медицинская микоплаз-мология. М., Медицина, 1995.
2. Горина Л.Г., Вульфович Ю.В. Дифференциация антигенов в составе циркулирующих иммунных комплексов. Журн. микробиол. 1996, 6: 84-86.
3. Горина Л.Г., Жевержеева И.В., Гончарова С.А. использование реакции агрегат-гемагглютинации для выявления антигенов L-форм гемолитического стрептококка группы А и микоплазм Лаб. дело. 1981, 11: 686-688.
4. Раковская И.В., Горина Л.Г., Бархатова О.И. и др. Персистенция Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum в организме инфицированных животных. Журн. микробиол. 2009, 4: 81-85.
5. Шершнева Н.Н., Горина Л.Г. Разработка иммуноферментных тест-систем для выявления антигенов Mycoplasma hominis и Mycoplasma pneumonia. Российский иммунол. журн. 2008, 2 (4): 6420-6426.
6. Barile M., Grabowski M. Detection and identification of mycoplasmas in infected cell cultures by direct immunofluorescence staining methods in mycoplasmology. NY, Academic Press, 1983.
7. Lo Ch-Ch. Apoptotic, antiapoptotic, clastogenic and oncogenic effects. Molecular biology and pathogenicity of mycoplasmas. Razin S., Herrmann R. (ed.). NY, 2002.
8. Loginov D., Scheblyakov D., Zubkova O. et al. Mycoplasma infection suppresses P53, activates Nf-kB and cooperates with oncogenic Ras in rodent fibroblast transformation. Oncogen. 2008, 27: 4521-4531.
Поступила 19.06.12
Контактная информация: Раковская Ирина Валентиновна, 123098, Москва, ул. Гамалеи, 18, р.т. (499)193 -43 -68
