CC BY
29
УДК 616.32-053-085.37
ФУНКЦИОНАЛЬНО-МЕТАБОЛИЧЕСКИЙ СТАТУС КЛЕТОЧНЫХ ФАКТОРОВ ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА НАЗАЛЬНОГО СЕКРЕТА РИНОХИРУРГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ В РАННИЙ ПОСЛЕОПЕРАЦИОННЫЙ ПЕРИОД
Гизингер О. А. 1, Коркмазов А. М. 1, Кокшарова О. Л. 2, Кудряшова Н. В. 2
1 ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России, г. Челябинск, Россия
2 ООО МЦ «Лотос», г. Челябинск, Россия
Аннотация. Исследовали качественный и количественный состав лейкоцитов, их жизнеспособность, фагоцитарную, лизосомальную активность, кислородзависимый метаболизм ней-трофильных гранулоцитов в НСТ-тесте нейтрофильных гранулоцитов назального секрета. Результаты исследования показали, что у пациентов в первые сутки после хирургического вмешательства по поводу искривления носовой перегородки с последующей 24-часовой тампонадой регистрируется повышение количества жизнеспособных нейтрофильных гранулоцитов, усиление их лизосомальной активности, снижение активности и интенсивности фагоцитоза, угнетение биоцидных свойств по данным спонтанного НСТ-теста.
Ключевые слова: носовая перегородка, назальный секрет, врожденный иммунитет, нейтро-фильные гранулоциты
FUNCTIONAL-METABOLIC STATUS OF CELLULAR FACTORS OF CONGENITAL IMMUNITY OF THE NAZAL SECRET OF RINOSURGICAL PATIENTS IN EARLY POST-OPERATIONAL PERIOD
Gizinger O. A. 1, Korkmazov A. M. 1, Koksharova O. L. 2, Kudryashova N. V. 2
1 FSBEI HE SUSMU MOH Russia, Chelyabinsk, Russia
2 Medical Center "Lotos", Chelyabinsk, Russia
Abstract. The qualitative and quantitative composition of leukocytes, their viability, phagocytosis, lysosomal activity, oxygen-dependent metabolism neutrophilic granulocytes assay in NBT-neutrophilic granulocytes nasal secretions. The results showed that patients in thefirst day after surgeryfor curvature of the nasal septum, followed by 24 hours ' tamponade recorded decrease in the number of viable neutrophils, enhancing their lysosomal activity, decreased activity and the intensity of phagocytosis, inhibition of biocidal properties according to the spontaneous NBT-test.
Keywords: nasal septum, nasal secretion, congenital immunity, neutrophilic granulocytes
Актуальность. У взрослого населения разной степени смещение носовой перегородки регистрируется в 68-90 %, что составляет почти четверть всей назальной патологии этого возраста [1]. Смещение носовой перегородки вызывает нарушение носового дыхания и может провоцировать морфологические изменения и дисфункцию факторов антимикробной защиты слизистых оболочек полости носа [2, 12]. Основное патологическое проявление искривления перегородки носа связано с нарушением аэродинамики, нормальной функции слизистой оболочки
полости носа, эвакуации секрета полости носа и околоносовых пазух, а также полости среднего уха через евстахиеву трубу. В результате этого закономерно развивается предрасположенность к возникновению острых и формированию хронических синуситов и отитов. Метод хирургической коррекции смещенной носовой перегородки является одним из самых распространенных ринохирургических вмешательств в хирургической практике лор-отделения. Данное ринохирургическое вмешательство нередко сопровождается длительной (более 24 ча-
сов) тампонадой, приводящей к неконтролируемым патофизиологическим изменениям слизистой оболочки полости носа и созданию благоприятных условий для инфицирования — снижению факторов колонизационной резистентности и антимикробной защиты слизистых оболочек, дисфункциям функционально-метаболического статуса нейтрофильных гранулоцитов (НГ) назального секрета [3, 14].
Доказана роль НГ в развитии хронической воспалительной патологии слизистых оболочек полости носа [4, 5, 11, 15, 16]. При этом реализация протективных функций данной клеточной популяции обеспечивается механизмами внутри- и внеклеточной бактери-цидности, включающими захват и поглощение чужеродных объектов в ходе реализации фагоцитарной реакции, выделение содержимого биоцидных гранул во внеклеточное пространство, формирование нейтрофиль-ных внеклеточных ловушек [6, 7, 13]. Дисфункции НГ определяют вектор развития инфекционного процесса на слизистых оболочках носа уже в ранний послеоперационный период [8, 9, 10].
Целью исследования было изучить функциональный и метаболический статус клеточных факторов врожденного иммунитета назального секрета ринохирургических пациентов в раннем послеоперационном периоде с тампонадой 24 часа и более.
Материал и методы. Исследование велось проспективно, в течение 6 месяцев (январь — июнь 2017 г) на базе Челябинской областной клинической больницы (главный врач д-р мед. наук Д. А. Альтман). Для проведения исследования были сформированы две группы: первая — 30 пациентов в возрасте (35,21 ± 4,28) года, которые были прооперированы по поводу искривления носовой перегородки; вторая — 30 здоровых в возрасте (36,11 ± 3,38) года, не оперированных по поводу искривления носовой перегородки, то есть группа сравнения.
Исследование иммунного статуса назального секрета включало подсчет качественного и количественного состава лейкоцитов, анализ фагоцитарной активности НГ назального смыва, кислородзависимый метаболизм НГ в тесте с нитросиним тетразолием
(НСТ-тесте). Назальный смыв, помещенный в 1,0 мл физиологического раствора, перемешивался, затем 0,2 мл полученной смеси помещали в одноразовую пробирку с 0,02 мл 1 % раствора трипанового синего с целью определения общего количества лейкоцитов и процента их жизнеспособности. Общее количество лейкоцитов в назальном секрете нами было определено следующим образом:
Х = (А х 4000 х 106 х В) / п, где X — количество лейкоцитов в 1 л; п — количество малых квадратов счетной камеры Горяева;
А — количество лейкоцитов назального смыва в п квадратах;
В — частное от деления суммы объемов назального смыва и физиологического раствора (1,0 мл) на объем назального смыва.
Для иммунологических исследований использовали концентрацию НГ — 1 х 106/мл. Жизнеспособность НГ с поверхности аденоидных вегетаций определяли с помощью окраски клеток 1 % раствором трипанового синего. Для чего 0,2 мл взвеси НГ в физиологическом растворе (концентрация 5 х 106 клеток/мл) смешивали с 0,02 мл 1 % раствора трипанового синего, клетки ресуспензирова-ли и помещали в камеру Горяева, где исследовали в световом микроскопе. Оценивали трипанонегативные живые (прозрачные) и трипанопозитивные нежизнеспособные (фиолетовые) НГ. Подсчет производили на 100 НГ, результат выражали в процентах.
Способность нейтрофилов, находящихся в назальном смыве, к участию в фагоцитарной реакции исследовали на модели поглощения частиц латекса. Для этого 0,2 мл суспензии нейтрофильных гранулоцитов назального смыва смешивали с 0,02 мл взвеси монодисперсного латекса диаметром 1,7 мкм (10 частиц/мл).
Исследование внутриклеточного кисло-родзависимого метаболизма проводили, используя НСТ-тест [4, 5, 11]. В исследовании определяли способность нейтрофилов отвечать повышением метаболической активности на стимуляцию частицами латекса.
От пациентов было получено письменное добровольное информированное согласие на проведение оперативного вмешательства и участие в исследовании в соответ-
ствии с нормативными документами (приказом МЗ РФ от 19.07.2003 № 266; приказом Росздравнадзора от 17.10.2006 № 2325-Пр/06). План обследования соответствовал положениям Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации (ВМА) последнего пересмотра (Сеул, 2008) с учетом разъясняющего примечания к п. 29, внесенного Генеральной Ассамблеей ВМА (Вашингтон, 2002).
Функционально-метаболический статус НГ назального секрета был исследован в иммунологическом отделе НИИ иммунологии ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России (г. Челябинск).
Статистический анализ данных прово-
Таблица 1. Содержание клеточных факторов периоде после оперативного вмешательства и в группе контроля
дился с использованием непараметрических критериев Манна — Уитни при помощи пакета статистических программ STATISTICA 12.5, статистически достоверными считались значения р < 0,05.
Результаты исследования и обсуждение. В назальном секрете прооперированных больных преобладающими клеточными элементами были НГ, содержание которых более чем втрое превышало показатели не оперированных людей (р < 0,05): (95,5 ± 0,1) % и (27,1 ± 0,4) % соответственно. По нашему мнению, данный процесс связан с физиологической ролью НГ в очаге воспалительной реакции, на фоне хирургического вмешательства (табл. 1).
назального секрета (%) пациентов в раннем
по поводу искривления носовой перегородки
Клеточный состав назального секрета Группы пациентов
Прооперированные (n = 30) Не оперированные (n = 30)
Нейтрофильные гранулоциты 95,5 ± 0,1 * 27,1 ± 0,4
Лимфоциты 2,18 ± 0,11 * 3,05 ± 0,05
Эпителиальные клетки 2,15 ± 0,06 * 24,19 ± 0,42
Макрофаги 4,44 ± 0,03 * 1,29 ± 0,11
Эозинофилы 0,07 ± 0,02 * 0,01 ± 0,01
Примечание: * — статистически значимые отличия между показателями группы прооперированных и не оперированных пациентов (р < 0,05).
При изучении функционально-метаболического статуса НГ по их способности поглощать микросферы латекса были выявлены выраженные нарушения поглотительной способности и функции переваривания, проявляющиеся в снижении активности (р < 0,05) и интенсивности
(р < 0,05) фагоцитоза у прооперированных пациентов. Исследование биоцидных возможностей НГ в НСТ-тесте выявило снижение показателей спонтанного НСТ-теста НГ в абсолютных и относительных величинах по сравнению с показателями здоровых людей (табл. 2, 3).
Таблица 2. Функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов назального секрета пациентов в раннем послеоперационном периоде (M ± m)
Показатели функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов назального секрета Группы пациентов
Прооперированные (n = 30) Не оперированные (n = 30)
Лизосомальная активность, у. е. 59,6 ± 0,98 * 29,40 ± 0,21
Активность фагоцитоза, % 41,36 ± 0,25 * 53,49 ± 0,14
Интенсивность фагоцитоза, у. е. 1,66 ± 0,04 * 2,36 ± 0,07
Примечание: * — статистически значимые отличия между показателями группы прооперированных и не оперированных пациентов (р < 0,05).
Таблица 3. Функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов назального секрета пациентов в раннем послеоперационном периоде в НСТ-тесте
Показатели функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов назального секрета в НСТ-тесте Группы пациентов
Прооперированные (n = 30) Не оперированные (n = 30)
НСТ-тест спонтанный, % 22,18 ± 0,21 * 28,18 ± 0,12
НСТ-тест спонтанный, у. е. 0,16 ± 0,01 * 0,36 ± 0,003
НСТ-тест индуцированный, % 29,96 ± 0,11 * 54,67 ± 0,13
НСТ-тест индуцированный, у. е. 0,38 ± 0,02 * 0,68 ± 0,01
Примечание: * — статистически значимые отличия между показателями группы прооперированных и не оперированных пациентов (р < 0,05).
Выводы. У ринохирургических больных, прооперированных по поводу искривления носовой перегородки, в ранний послеоперационный период регистрируется повышение количества жизнеспособных НГ в 1,24 раза, усиление их лизосомальной активности в 3,95 раза, снижение активности — в 1,25 раза и интенсивности фагоцитоза в 1,65 раза, угнетение биоцидных свойств в 2,35 раза по данным спонтанного НСТ-те-ста и в 2,2 раза — по данным индуцированного НСТ-теста.
Таким образом, у ринохирургических больных, прооперированных по поводу искривления носовой перегородки, в ранний послеоперационный период с тампонадой 24 часа и более наблюдаются нарушения функциональной активности НГ, выраженные в увеличении относительного содержания НГ, повышении абсолютного и относительного содержания жизнеспособных НГ и их лизосомальной активности, снижении биоцидных показателей НСТ-теста, активности и интенсивности фагоцитоза, что свидетельствует о наличии выраженных дисфункций клеточных факторов местной противоинфекционной защиты. По нашему мнению, это является свидетельством истощения адаптационно-приспособительных механизмов НГ, снижения их резистентности и способности к осуществлению проти-вомикробной защиты, что в конечном итоге и приводит к развитию бактериальной патологии [14].
Литература
1. Роздильская О. Н. Эффективность включения методов физиотерапии в восстановительное лечение больных с искривлением
носовой перегородки в раннем периоде после операции септопластики //Мед. реабилитация, курортология, физиотерапия. — 2014.
— № 2. — С. 20-23.
2. Саватеева Д. М. Состояние обонятельной функции у пациентов с искривлением носовой перегородки до и после хирургического лечения // Вестн. оториноларингологии. — 2011. — № 5. — С. 22-23.
3. Huizing E. H., Groot J. M. Functional reconstructive nasal surgery // Thieme. — 2003.
— № 1. — P. 59-62.
4. Гизингер О. А. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на состояние местного иммунитета репродуктивной системы у женщин с хламидийной инфекцией: дис. ... канд. биол. наук. — Челябинск: ЧелГМА, 2004.
5. Гизингер О. А. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на нейтрофилы и факторы мукозального иммунитета: дис. ... д-ра биол. наук. — Челябинск: ЧелГМА, 2010.
6. Черток Н. В., Мамылина Н. В., Гизингер О. А. и др. Реэнцефологические показатели в постиммобилизационном периоде у женщин в постменопаузе с переломом лучевой кости // Врач. — 2016. — № 4. — С. 63-68.
7. Пискунов С. 3., Должиков О. Ю., Мезенцева О. Ю. Морфофункциональные особенности слизистой оболочки полости носа, развивающиеся при искривлении носовой перегородки // Рос. оториноларингология. — 2004. — № 2. — С. 90-92.
8. Пискунов B. C. Исследование аэродинамики воздушного потока в полости носа // Рос. оториноларингология. — 2000. — № 2.
— С. 12-15.
9. Hilbery O., Pedersen O. F. Acoustic rhinometry: recommendation for technical specifications and standard operating procedures // Rhinology. — 2000. — № 16. — P. 3-17.
10. Национальное руководство по ЛОР-болезням / под ред. М. Р. Богомильского, В. Р. Чистяковой. — Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2008. — 432 с.
11. Lefkovits G. Nasal reconstruction with irradiated homograft costal cartilage // Plast. Reconstr. Surg. — 2004. — Vol. 113, № 4. — P. 1291-1292.
12. Куулар Ч. Ю., Рымша М. А. Реабилитация больных после проведенного комплексного хирургического вмешательства у пациентов с патологией полости носа и носоглотки // Мед. наука и образование Урала. — 2007. — № 8 (5). — С. 104-106.
13. Гизингер О. А., Ишпахтина К. Г., Колесников O. Л. Влияние низкоинтенсивного лазер-
ного излучения на нейтрофилы периферической крови доноров в условиях эксперимента //Иммунология. — 2009. — № 5. — С. 263-267.
14. Долгушин И. И., Гизингер О. А. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на нейтрофилы цервикального секрета у женщин с микоплазменной инфекцией // Вопр. курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. — 2008. — № 4. — С. 29-31.
15. Долгушин И. И., Андреева Ю. С., Мезенцева Е. А. и др. Нейтрофилы регулируют формирование микробиоценоза слизистых оболочек // Мед. иммунология. — 2006. -Т. 8, № 2-3. — С. 135-136.
16. Плеханова Е. В., Долгушин И. И., Цей-ликман В. Э. и др. Активация бактерицидной функции нейтрофилов в условиях экспериментального асептического перитонита // Рос. аллергологический журн. — 2010. — № S5. — С. 218-219.
УДК 616-006.6-073.43
УЛЬТРАСОНОГРАФИЯ НА ЭТАПАХ РЕАБИЛИТАЦИИ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ПАЦИЕНТОВ
Горбылев П. М.
ФГБУ НМИЦ ДГОИ им. Дм. Рогачева Минздрава России, г. Москва, Россия
Аннотация. Проведение противоопухолевой терапии у детей и подростков сопровождается развитием побочных эффектов. С целью ликвидации последствий и поздних токсических эффектов возможно проведение реабилитационнных программ. Выраженная нейротоксичность полихимиотерапии делает актуальным применение ультразвуковых методов диагностики для выявления поражений нервов, мышц и внутренних органов. Анализ результатов ультра-сонографического обследования 2179 пациентов лечебно-реабилитационного центра «Русское поле» (г. Москва) подтверждает наличие визуальных симптомов поражения периферической нервной системы и мышц, тромботических, сосудистых осложнений. Таким образом, ультра-сонографическое обследование является необходимым компонентом реабилитационных мероприятий для пациентов, перенесших лечение по поводу злокачественных новообразований в детском или подростковом возрасте.
Ключевые слова: ультрасонографическое обследование, злокачественные опухоли, реабилитация, дети
ULTRASONOGRAPHY AT THE STAGES OF REHABILITATION OF CANCER PATIENTS
Gorbylev P. М.
National Medical Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology named after Dmitry Rogachev, Moscow, Russia
