CC BY
11Материалы VIII Петербургского международного онкологического форума «Белые ночи • 2022»
Онкоиммунология: клиническая онкоиммунология
Функциональная активность NK-клеток при разработке способа адоптивной иммунотерапии онкологических больных
Авторы
Рыбачук Виктория Александровна, rybachuk2016@list.ru, ООО «Текон Медицинские приборы», Москва Попова Любовь Ильинична, ljubovprokudina@gmail.com, ООО «Текон Медицинские приборы», Москва Борисов Михаил Александрович, borisov.mikhail2011@yandex.ru, ООО «Текон Медицинские приборы», Москва Петрикина Анастасия Петровна, anpetra@bk.ru, ООО «Текон Медицинские приборы», Москва Михайловский Николай Васильевич, nickmikh.mrrc@gmail.com, ООО «Текон Медицинские приборы», Москва Абакушина Елена Вячеславовна, abakushina@mail.ru, ООО «Текон Медицинские приборы», Москва
Ключевые слова:
маркеры активации лимфоцитов, МЫК-клетки, адоптивная иммунотерапия
Актуальность
Область разработки современных способов иммунотерапии онкологических больных получила новое развитие, включая метод адоптивной иммунотерапии (АИТ) с участием T- и NK-клеток [1]. Для активации и генерации NK-клеток наиболее часто используется метод длительного культивирования в присутствии цитокинов и/или фидерных клеток [1, 2].
Цель
Цель данного исследования — оценка литической активности и экспрессия маркеров активации на NK-клетках человека.
Материалы и методы
Мононуклеарные клетки выделяли из периферической крови 6 доноров на градиенте плотности и культивировали в среде RPMI-1640 (Sigma-Aldrich) с добавлением ИЛ-2, ИЛ-15 и ИЛ-21 с фидерными клетками K-562 в течение 21 дня.
Подсчет клеток и оценку жизнеспособности осуществляли каждые 7 дней. Цитофлуориметрический анализ проводили на 0-й и 21-й дни культивирования на цитометре Image Stream MkII (Luminex). Применяли
7-цветную панель меченых антител к CD45/3/56/16 и маркерам активации CD335/337/314 (BD Bioscience»). Цитотоксическую активность определяли в соотношении 1:15 на xCelligence (Agelent). Статистический анализ осуществляли с помощью MS Excel 2016.
Результаты
В процессе in vitro культивирования NK-клеток коэффициент пролиферации составил 2092,8 раза. Содержание NK-клеток на 21-й день культивирования достигало 76,5% (на 0-й день — 8,1%), а увеличение экспрессии маркеров активации CD335/337/314 —в 2,5; 5 и 4,7 раза. Цитотоксическая активность NK-клеток по отношению к клеточным линиям К562, AsPC, MCF-7 составила 51-82%, а жизнеспособность — более 87%.
Выводы
При генерации NK-клеток происходила значительная экспансия NK-клеток и увеличение экспрессии маркеров активации при сохранении высокой жизнеспособности. Данный подход отличается отсутствием этапа сепарации NK-клеток с помощью магнитных частиц и позволяет оценить функциональную активность после активации in vitro.
Список литературы
1. Curiel T J . (ed . ) . Cancer immunotherapy: Paradigms practice and promise: Springer Science & Business Media, 2012 . 2 . Abakushina E . V , Popova L ., Zamyatin A . et al . The advantages and challenges of anticancer dendritic cell vaccines and NK cells in adoptive cell immunotherapy //Vaccines . 2021. Vol . 9 . № 11. P. 1363.
ОНКОИММУНОЛОГИЯ: ФУНДАМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ
Особенности экспрессии маркера ZEB1 при разных формах
рака вульвы
Авторы
Бусарова Ангелина Владимировна, ellina_ue@bk.ru, ГБУЗ «Клинический онкологический диспансер № 1» Минздрава Краснодарского края, Краснодар
Порханова Наталья Владимировна, porhanova.nat@mail.ru, ГБУЗ «Клинический онкологический диспансер № 1» Минздрава Краснодарского края, Краснодар
