CC BY
12
(2) через каплеуловитель (4) последовательно соединяется с установкой для сжигания (5), в качестве которой мы использовали колонку с платиновой спиралью и электрическую схему прибора ПСУ-1 (прибор для сжигания хлорированных углеводородов в воздухе). Продукты сжигания охлаждаются в трубке (6) и поступают в поглотитель (7), содержащий 1,5 мл 0,01 н. раствора щелочи для поглощения бромистого водорода. Поглотитель (7) через реометр (8) соединяется с водоструйным насосом, при помощи которого производится продувание воздуха через систему. Воздух продувается в течение 1 ч, причем в первые 5—10 мин для предотвращения бурного испарения воды, присутствующей в вазелиновом масле, — со скоростью 0,02 л/мин, а последующее время — со скоростью 0,1 л/мин. Продуваемый воздух очищается путем пропускания его через слой силикагеля или активированного угля (/). После окончания выдувания и сжигания продукта количество бром-ионов определяют нефелометрн-чески по реакции с азотнокислым серебром при помощи калибровочной кривой, построенной в соответствии со шкалой стандартных растворов. Нефелометрирование производят в УФ-свете в области светопропускания 315 ммк, используют кювету с толщиной поглощающего слоя 3 мм.
Зависимость между количеством внесенного продукта и количеством образовавшихся ионов брома линейная.
Для удаления свободных галоидов, возможно присутствующих в воде, к анализируемой пробе воды (500—1000 мл) добавляют соответственно 2,5—5 мл 0,1% раствора метилового оранжевого и 5—10 мл 0,5 н. раствора серной кислоты. Пробу взбалтывают и выдерживают в течение 5 мин, после чего проводят концентрирование продукта. Количество 1,2-дибромпропана рассчитывают по формуле:
а-а С = -у мг/л,
где: С — концентрация 1,2-дибромпропана (в мг/л); а — найденное количество бром-ионов (в мг); V — объем пробы воды, взятой для анализа (в л); а — коэффициент пересчета с бром-иона на 1,2-дибромпропан. В нашем случае а=6, так как в 1,2-дибромпропане содержится 80?/о брома, а выход бром-ионов составляет 25%.
Чувствительность метода количественного определения 1,2-дибромпро-пана в воде 0,15 мг/л. Средняя относительная ошибка определения ±25%. Предлагаемый метод неспецифичен по отношению к другим галоидоорга-ническим соединениям и может быть использован для суммарного определения других хлор-и бром-органических веществ, растворимых в вазелиновом масле. Свободные галоиды не мешают определению.
ЛИТЕРАТУРА. Туляков E.H., Тумурова Л. В. Авт. свид. СССР кл. 421, 3/05 (601п) № 210456, заявл. 22.08.66, опубл. 11.04.68.
Поступила 30/V11I 1973 года
УДК 614.31:637.133.3:677.133.3.087
Канд. ветеринарных наук В. А. Серебренникова, Н. А. Рашкина
ФОСФАТАЗНАЯ ПРОБА КАК СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОЙ И КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПАСТЕРИЗАЦИИ МОЛОКА И МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ
Всесоюзный научно-исследовательский институт молочной промышленности, Москва
В санитарной оценке качества молочных продуктов широко используется фосфатазная проба, дающая возможность объективно судить об эффективности пастеризации.
Из высокочувствительных методов, на наш взгляд, наиболее целесообразно применить метод O'Brien, поскольку он основан на использовании доступных реактивов. Принцип метода заключается в гидролизе динатри-евой соли фенилфосфорной кислоты фосфатазой и окрашивании в розовый цвет выделившегося при этом фенола 4-аминоантипирином в присутствии феррицианида калия. Однако в оригинальной прописи метод автоматизирован, и в нем предусмотрен диализ реакционной смеси, что также сложно для повседневного массового анализа.
В результате некоторой модификации мы предложили метод, в котором после гидролиза субстрата—динатриевой соли фенилфосфорнои кислоты производится осаждение белка смесью сульфатов цинка и меди. Применение этой системы для осаждения белка одновременно позволяет исключить из реакции феррицианид калия, так как роль окислителя 4-аминоантипи-рина в данном случае выполняет смесь сульфатов цинка и меди. В результате модификации мы получили возможность сравнивать бесцветные контрольные растворы с окрашенными в розовый — бордовый (в зависимости от количества фосфатазы в продукте) цвет опытными пробами. В оригинальной же прописи метода желтый контроль сравнивается с оранжевым — красным (в зависимости от количества фосфатазы в пробе) опытным, что из-за близости цветовой гаммы затрудняет визуальное определение фосфатазы в пробах с малым содержанием (0,3—0,5%) сырого молока в пастеризованном.
После отработки оптимальных условий проведения реакции метод позволяет в течение 30 мин определить наличие 0,3% сырого молока в пастеризованном молоке и сливках и 0,5 % — в твороге и сметане. С некоторыми дополнениями метод может применяться для количественного анализа.
При наличии непастеризованного продукта раствор над осадком белка темно-красного цвета. При недостаточной пастеризации продукта раствор имеет розовый цвет по сравнению с бесцветным контролем. При оценке реакции учитывается только цвет, но не прозрачность раствора.
На предприятиях Московского объединения «Молоко» предлагаемый метод был проверен на разных видах молочных продуктов по сравнению с арбитражным (ГОСТ 3623-56).
С учетом результатов производственной проверки метода, показавших, что он имеет более высокую чувствительность и позволяет значительно сократить время анализа для некоторых продуктов по сравнению с арбитражным, этот метод включен в новый ГОСТ как арбитражный и для повседневного контроля творога и сметаны.
При анализе творожных изделий с такими наполнителями, как сахар и ванилин, возможна неспецифическая положительная реакция; поэтому творожные сырки с подобными добавками следует контролировать по исходному сырью.
В ряде случаев, например при отработке нового способа пастеризации, установлении количества сырого молока, добавленного к пастеризованному, и количественном анализе активности фосфатазы в продукте, требуется количественное определение щелочной фосфатазы.
Разработанный нами качественный метод контроля эффективности пастеризации с некоторыми дополнениями может быть использован для количественного анализа. Для количественного определения активности фосфатазы в пробирки вносят исследуемый образец и дистиллированную воду в количестве, указанном в таблице. Затем их тщательно растирают стеклянной палочкой, добавляют рабочий раствор субстрата, перемешивают и инкубируют в водяной бане при 60±2° 20 мин.
После этого добавляют осадитель белка системы цинк — медь. Содержимое тщательно перемешивают и снова ставят в водяную баню на 10 мин. Затем пробы охлаждают под струей холодной воды и профильтровывают через бумажный фильтр (свободный от фенолов).
Компоненты реакции и их количества
Проба Вид исследуемого продукта Количество
исследуемого продукта дистиллированной воды рабочего раствора субстрата осадителя системы цинк — медь
ыл
Опытная Молоко, сливки 6 4 10
Сметана 3 г 3 4 10
Творог, кефир 1 г/мл 5 4 10
Контрольная Кипяченое молоко 9 6 15
Если контрольный фильтрат розовеет, то следует приготовить свежий субстрат. Далее измеряют оптическую плотность растворов против контрольного на ФЭК при темно-зеленом светофильтре № 5 (длина волны 490 нм) в кюветах на 20 мм, а затем по калибровочной кривой определяют количество фенола в 1 мл (г) исследуемого продукта.
Для количественного определения активности фосфатазы необходима калибровка кривой по стандартным фенольным растворам. Для приготовления стандартных фенольных растворов 1 г чистого фенола растворяют в мерной колбе на 1 л в дистиллированной воде. В 1 мл такого раствора содержится 1 мг, или 1000 мкг, фенола. Далее 1 мл этого раствора переносят в 100-миллилитровую мерную колбу и доливают до метки дистиллированной водой. 1 мл полученного раствора содержит 10 мкг фенола. С помощью этого раствора приготовляют растворы, содержащие 0,5, 1, 2, 5 и 10 мкг фенола в 1 мл. С каждым стандартным раствором ставят реакцию на фосфатазу по методике, применимой в отношении молока, взяв в реакцию вместо б мл этого продукта 6 мл стандартного раствора, с последующим измерением оптической плотности растворов.
По среднеарифметическим данным нескольких параллельных исследований строят калибровочную кривую, которая должна иметь вид прямой линии. Экстинция растворов изменяется прямо пропорционально количеству фенола в растворе. Чувствительность определения — 0,5 мкг фенола в 1 мл пробы. В условиях каждой лаборатории необходимо калибровать кривую по фенолу, так как применяемые реактивы, вода и т. п. могут быть специфичны.
Активность фосфатазы продукта — это количество активной фосфатазы, присутствующей в данном продукте; ее выражают в виде количества фенола в микрограммах на 1 мл (г) пробы. Величину оптической плотности растворов переводят в микрограммы фенола с помощью калибровочной кривой. В случае разбавления пробы количество фенола (в мкг) умножают на коэффициент разбавления. Например, Зг сметаны разводят 3 мл дистиллированной воды, т. е. разбавляют пробу в 2 раза по сравнению с молоком (берут 6 мл молока). Поэтому количество фенола, полученное по калибровочной кривой, умножают на 2 и получают активность фосфатазы в 1 г сметаны.
Применение рекомендуемых методов в повседневном контроле эффективности пастеризации молока и молочных продуктов позволит выпускать молочную продукцию гарантированной в санитарном отношении и тем самым повысить ее качество.
ЛИТЕРАТУРА. О'В г i е n J., J. Dairy Sei, 1966, v. 49, p. 1482.
Поступила 20/X 1973 года
