CC BY
41
ФОСФАН - НОВАЯ ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ТЕХНОЛОГИЯ
Осин Н.С.. Помелова В.Г., Соколов A.C., Быченкова Т.А., Аслиян С.К., Бекман Н.И., Шарафудинова Т.А., Ларичева С.Ю., Ивановская Н.П.
ГНЦ ФГУП Государственный научно-исследовательский институт биологического приборостроения, E-mail: niibp@dol.ru
A new diagnostic platform has been developed on the basis of Phosphorescence Analysis (PHOSPHAN). This highly sensitive and cost-wise approach allows simultaneous detection of multiplied analytes in the wells of multiwell microplates from microareas 40x40 micron. The threshold detection limit is about 103 molecules of label (Pt coproporphyrin) which luminescence is measured directly from the well bottom in time-resolved mode.
ФОСФАН - диагностическая технология мультикомпонентного микроанализа для одновременного определения в клинических образцах множества аналитов в формате полистироловых микропланшетов. Ее ключевыми элементами являются фосфоресцентные метчики биореагентов - Pt копро- и Pt уропорфирины, фосфоресцентный анализатор и способы проведения твердофазного мультикомпонентного анализа.
Суть технологии заключается в иммобилизации (сорбции) на дне лунок микропланшета в виде отдельных микрозон (диаметром от 0,1 до 1 мм) первых биоспецифически связывающих молекул (антител, антигенов и т.п.) к различным аналитам и проявлении реакции биоспецифического связывания с помощью вторых биоспецифически связывающих реагентов, маркированных фосфоресцентной меткой.
Технология ФОСФАН обеспечивает предельно низкие пороговые уровни обнаружения фосфоресцентной метки непосредственно с твердой фазы многолуночных полистироловых микропланшетов, что позволяет использовать ее для количественного определения гормонов и других аналитов из образцов сывороток и сухих пятен крови, а также для выявления низких концентраций микроорганизмов и вирусов в образцах проб воды. Метод ФОСФАН позволяет существенно уменьшить расход антител для сенсибилизации твердой фазы (почти в 100 раз). Чувствительность анализа в режиме сканирования микрозон достаточна для обнаружения отдельных клеток микроорганизмов. Пороговый уровень детекции фосфоресцентной метки составляет около 103 молекул Pt копропорфирина с микроплощадки 40x40 микрон.
Биоматериал, маркированный фосфоресцентной меткой, сохраняется в высушенном виде на твердой фазе полистирола в течение длительного времени (месяцы) без заметного снижения уровня сигнала фосфоресценции. Это позволяет архивировать микропланшеты с адсорбированным биоматериалом.
При работе с потенциально инфекционным материалом, для обеспечения требований противоэпидемического режима, иммобилизованный на твердой фазе полистирола биоматериал может быть подвергнут дезактивации некоторыми химическими дезинфектантами. При этом не наблюдается существенного снижения индикационных возможностей технологии.
ФОСФАН обеспечивает одновременное определение нескольких аналитов с помощью одного универсального фосфоресцентного реагента и системы стрептавидин-биотин за счет пространственного распределения зон иммуносорбции по дну лунки микропланшета.
Сочетание высоких аналитических и экономических характеристик с учетом полной адаптированности технологии ФОСФАН к многолуночным микропланшетам позволяет рассматривать ее как одну из наиболее перспективных технологий для создания массовых мултикомпонентных диагностических тестов для клинической лабораторной диагностики.
