CC BY
53
экспериментальные исследования в Биологии и медицине
УДК 615.01
к.А. Баденикова г.Г. Юшков А.А. Гущина 1, Б.Б. Бенеманский А.С. Гущин 2
формирование ответной реакции организма крыс НА однократное воздействие препаратом ТЕризидоН - 300 мг
1ФГБОУ ВПО «Ангарская государственная техническая академия» (Ангарск)
2 ОАО «Фармасинтез» (Иркутск)
В статье представлены материалы экспериментального изучения препарата Теризидон в условиях однократного перорального воздействия на животных в различных дозах в целях выявления ответной реакции организма для. использования в оценке общетоксического действия перспективного противотуберкулезного препарата.
Ключевые слова: Теризидон, экспериментальное исследование однократного воздействия
FORMATiON OF RESPONSE OF RATS ORGANiSM ON SiNGLE iNFLUENCE OF TERiZiDONE - 300 MG
K.A. Badenikova G.G. Yushkov A.A. Gushchina V.V. Benemanskiy A.S. Gushchin 2
1 Angarsk State Technical Academy, Angarsk 2 Public Corporation «Farmasintez», Irkutsk
The article presents the materials of experimental study of Terizidone preparation in conditions of single peroral influence on animals in different doses with a view to reveal response of an organism, for using in the evaluation of general toxic action of an advanced, antituberculous preparation.
Key words: Terizidonе, experimental research of single influence
Теризидон (C14H14N404 CAS 25683-71 -0) -бактериостатический антибиотик широкого спектра действия. Из побочных эффектов отмечены: головная боль, головокружение, повышенная возбудимость, тремор, бессонница и чувство опьянения [1]. Еще в 1976 г., когда Теризидон использовали для лечения инфекций мочевыводящих путей, на животных была выявлена его способность ингибировать р-аланинаминотрансферазу [2]. Позднее (в 1996 г.) по величине частоты доминантных леталей было установлено отсутствие у Теризидона мутагенных свойств [3]. Из лабораторных данных упоминаются: активность аланинаминотрансферазы (АЛТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), содержание билирубина и креатинина в крови, что открыло дорогу Теризидону на рынок противотуберкулезных препаратов, достигшую в 2007-2008 гг. и России.
Цель настоящего исследования - уточнить механизмы развития побочных эффектов при лечении Теризидоном.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Исследования проводили с использованием нелинейных самцов и самок крыс, находящихся в стационарных условиях вивария (ветудостосе-рение 238 № 0018669). Препарат в виде водного раствора в дозах 200 и 13 мг/кг вводили внутриже-
лудочно через атравматический зонд, однократно. Проводили измерение величин показателей на 1-е, 3-и, 7-е, 14-е и 21-е сутки после введения на фоне динамического контроля. Дозирование проводилось по активному компоненту препарата с учетом требований Инструкции по его медицинскому применению. Все эксперименты выполнялись в строгом соответствии с требованиями Руководства по экспериментальному исследованию новых фармакологических веществ [4], а также Приказа Минздрава СССР № 755 от 12.08.1977 о правилах проведения работ с использованием экспериментальных животных, Декларации WMA Хельсинки (2008) и Директивы 86/609/ЕЕС (1986).
Согласно требованиям официальных методических руководств [5, 6], унифицированными методами определяли: массу тела, потребление воды, исследовательский рефлекс, спонтанную двигательную активность с ее автоматической регистрацией, суммационно- подпороговый показатель (СПП), частоту сердечных сокращений (ЧСС), нагрузочную пробу с гексеналом, общий анализ крови, содержание холестерина, мочевины, глюкозы, общего белка, креатинина в сыворотке крови, а также активность аланин- и аспартатами-нотрансфераз. Количественные данные получены с помощью биохимического анализатора EURO
Lyser (Австрия) и гематологического — Нето1их (Китай).
Статистическая обработка данных проводилась с использованием ^критерия при р < 0,05.
результаты исследования
Существенных отличий от контроля в приросте массы тела животных не отмечено, равно как и потребляемой крысами воды. При биохимическом исследовании однократного воздействия Теризидоном установлено некоторое повышение количества мочевины в сыворотке крови, снижение содержания глюкозы; оказалось характерным снижение активности печеночных трансфераз и повышение количества общего белка (табл. 1).
Отмеченное было свойственно только животным, получавшим Теризидон в дозе 200 мг/кг. Ни промежуточная, ни терапевтическая дозы такого эффекта не вызвали.
В то же время у животных, получавших Теризидон в дозе 200 мг/кг, статистически достоверно снизилась величина СПП на 1—3-и сутки после введения препаратов (табл. 2). Температура тела на протяжении всего срока наблюдения оставалась неизменной. Спонтанная двигательная активность достоверно снижалась только на первые сутки при введении препарата в дозе 200 мг/кг (табл. 3). Продолжительность гексенало-вого сна приобретала едва заметную тенденцию к увеличению. Частота сердечных сокращений
Таблица 1
Динамика биохимических показателей при однократном введении препарата Теризидон (n = 10)
Показатель Доза, мг/кг Срок наблюдения (сутки)
1-е 3-и 7-е 14-е 21-е
Динамика активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови крыс-самцов при однократном введении Теризидона, Ед/л 200 78,8 ± З,8* ЗЗ,4 ± З,6* 48,5 ± З,7* 6З,З ± З,0 61,7 ± 2,6
13 61,7 ± 2,1 62,З ± 1,8 60,1 ± 2,2 61,8 ± 1,4 60,1 ± 2,0
Контроль 60,0 ± 1,7 61,8 ± 2,4 59,6 ± 1,0 62,З ± 2,1 60,З ± 1,9
Динамика активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови крыс-самок при однократном введении Теризидона, Ед/л 200 77,4 ± 4,0* З6,7 ± 4,2* 50,3 ± 3,1* 66,7 ± 4,3 65,2 ± 1,3
13 6З,5 ± 2,8 65,4 ± 1,8 64,З ± 2,0 6З,8 ± 1,8 65,2 ± 1,0
Контроль 61,7 ± 1,4 6З,5 ± З,0 61,8 ± 1,2 65,6 ± З,4 66,З ± 2,8
Динамика активности аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови крыс-самцов при однократном введении Теризидона, Ед/л 200 З06,9 ± 4,0 210,4 ± 2,6* 284,5 ± 9,2 З09,1 ± З,4 З06,5 ± 4,8
13 296,7 ± 1,9 З01,4 ± З,2 З05,2 ± 4,4 З10,2 ± 4,0 З00,5 ± 2,1
Контроль З01,6 ± 4,2 З16,6 ± 1,8 292,1 ± 1,5 З14,З ± 2,0 298,4 ± 2,9
Динамика активности аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови крыс-самок при однократном введении Теризидона, Ед/л 200 З10,8 ± 4,1 226,6 ± З,0* З01,5 ± 7,2 З08,2 ± З,1 З11,4 ± З,0
13 З00,6 ± З,8 З15,9 ± 4,0 З12,2 ± 1,8 З18,5 ± 2,1 З19,4 ± 1,1
Контроль З05,9 ± 2,1 З11,6 ± 1,8 З16,7 ± 2,4 З21,5 ± З,0 З18,6 ± 1,5
Динамика содержания общего белка в сыворотке крови крыс-самцов при однократном введении Теризидона, Ед/л 200 76,5 ± 4,8 80,4 ± З,0 94,2 ± 1,2* 88,6 ± 2,0* 76,З ± 1,1
13 77,9 ± 1,0 75,2 ± 1,4 76,8 ± 2,0 77,5 ± 1,4 77,1 ± 2,0
Контроль 76,8 ± 1,1 78,З ± 1,0 77,9 ± 0,9 80,1 ± 2,0 77,5 ± 1,4
Динамика содержания общего белка в сыворотке крови крыс-самок при однократном введении Теризидона, Ед/л 200 79,6 ± 0,8 80,З ± 0,9 91,6 ± 1,4* 87,З ± 1,0* 79,4 ± 1,5
13 79,4 ± 1,1 80,1 ± 1,0 77,2 ± 1,0 79,2 ± 1,4 78,4 ± 0,9
Контроль 80,1 ± 1,6 79,4 ± 1,2 79,5 ± 1,1 80,5 ± 0,8 80,З ± 0,9
Динамика содержания мочевины в сыворотке крови крыс-самцов при однократном введении Теризидона, Ед/л 200 8,5 ± 0,06* 9,1 ± 0,07* 8,1 ± 0,06 8,1 ± 0,06 8,1 ± 0,05
13 8,1 ± 0,05 8,1 ± 0,06 8,1 ± 0,04 8,1 ± 0,0З 8,1 ± 0,02
Контроль 8,1 ± 0,05 8,11 ± 0,05 8,12 ± 0,06 8,1 ± 0,05 8,11 ± 0,04
Динамика содержания мочевины в сыворотке крови крыс-самок при однократном введении Теризидона, Ед/л 200 8,4 ± 0,06* 8,7 ± 0,08* 8,0 ± 0,05 8,0 ± 0,06 8,0 ± 0,04
13 7,9 ± 0,05 8,0 ± 0,06 7,9 ± 0,04 8,0 ± 0,0З 8,0 ± 0,05
Контроль 8,0 ± 0,05 7,9 ± 0,04 8,0 ± 0,06 8,0 ± 0,04 7,9 ± 0,05
Динамика содержания глюкозы в сыворотке крови крыс-самцов при однократном введении Теризидона, Ед/л 200 5,0 ± 0,07* 4,8 ± 0,06* 5,6 ± 0,07 5,6 ± 0,08 5,5 ± 0,05
13 5,6 ± 0,04 5,6 ± 0,05 5,6 ± 0,06 5,5 ± 0,04 5,6 ± 0,04
Контроль 5,6 ± 0,05 5,6 ± 0,05 5,6 ± 0,04 5,5 ± 0,05 5,6 ± 0,04
Динамика содержания глюкозы в сыворотке крови крыс-самок при однократном введении Теризидона, Ед/л 200 5,0 ± 0,06* 4,9 ± 0,05* 5,6 ± 0,05 5,6 ± 0,04 5,6 ± 0,0З
13 5,6 ± 0,0З 5,6 ± 0,04 5,5 ± 0,06 5,6 ± 0,05 5,6 ± 0,04
Контроль 5,5 ± 0,04 5,6 ± 0,05 5,6 ± 0,06 5,6 ± 0,04 5,6 ± 0,05
Примечание: * - отличия от контроля статистически достоверны при Р < 0,05.
практически не отличалась от контроля. Из гематологических показателей обратило на себя внимание снижение количества гемоглобина на 3-и сутки у животных при дозе 200 мг/кг, снижение же количества эритроцитов произошло
на 7-е сутки с повышением в периферической крови ретикулоцитов. Некоторое повышение количества лейкоцитов у животных при дозе 200 мг/кг не достигало уровня статистической достоверности (табл. 5).
Таблица 2
Динамика суммационно-подпорогового показателя у крыс при однократном введении
Показатель Доза, мг/кг Срок наблюдения (сутки)
Фон 1-е 3-и 7-е 21-е
Суммационно-подпороговый показатель (в) 200 7,3 ± 0,3 5,05 ± 0,45* 10,8 ± 0,35* 8,3 ± 0,4 7,7 ± 0,65
13 7,25 ± 0,45 6,85 ± 0,55 7,2 ± 0,55 7,3 ± 0,45 7,45 ± 0,4
Контроль 7,25 ± 0,45 7,35 ± 0,5 7,3 ± 0,4 7,4 ± 0,5 7,45 ± 0,5
Примечание: * - отличия от контроля статистически достоверны при Р < 0,05.
Таблица 3
Динамика спонтанной двигательной активности крыс при однократном введении
Показатель Доза, мг/кг Срок наблюдения (сутки)
Фон 1-е 3-и 7-е 21-е
Спонтанная двигательная активность (перес./З мин) 200 120,45 ± 4,1 94,05 ± 7,8* 104,75 ± 8,05 123,35 ± 10,1 116,95 ± 5,8
13 121,9 ± 4,55 121,05 ± 4,75 120,35 ± 5,55 116,75 ± 7,35 110,1 ± 3,85
Контроль 124,35 ± 6,75 121,95 ± 6,15 119,65 ± 5,85 117,5 ± 8,25 111,15 ± 3,65
Примечание: * - отличия от контроля статистически достоверны при Р< 0,05.
Таблица 4
Динамика исследовательского рефлекса у крыс при однократном введении
Показатель Доза, мг/кг Срок наблюдения (сутки)
Фон 1-е 3-и 21-е
«Норковый» рефлекс (загл./З мин) 200 8,8 ± 0,65 3,3 ± 0,85* 8,3 ± 0,65 7,8 ± 0,6
13 9,35 ± 0,65 9,1 ± 0,55 7,3 ± 0,35 7,15 ± 0,55
Контроль 9,2 ± 0,75 8,7 ± 055 7,65 ± 0,35 7,25 ± 0,35
Примечание: * - отличия от контроля статистически достоверны Рй 0,05.
Таблица 5
Динамика гематологических показателей у крыс при однократном введении Теризидона
Показатель Доза, мг/кг Срок наблюдения (сутки)
Фон 1-е 3-и 7-е 21-е
Содержание гемоглобина, г/л 200 140,05 ± 1,4 138,4 ± 2,75 123,15 ± 5,15* 136,3 ± 7,05 140,05 ± 1,9
13 138,1 ± 0,9 138,15 ± 0,95 139,3 ± 1,75 139,65 ± 2,8 139,55 ± 2,75
Контроль 137,8 ± 0,85 138,05 ± 0,95 139,85 ± 2,8 139,95 ± 2,1 139,7 ± 3,05
Количество эритроцитов, х 1012/л 200 7,0 ± 0,1 7,0 ± 0,2 6,75 ± 0,2 6,35 ± 0,1* 7,15 ± 0,2
13 7,05 ± 0,1 7,1 ± 0,1 7,0 ± 0,1 7,05 ± 0,08 7,05 ± 0,095
Контроль 7,05 ± 0,1 7,0 ± 0,08 7,05 ± 0,09 7,0 ± 0,08 7,05 ± 0,09
Количество ретикулоцитов, % 200 20,5 ± 0,45 21,15 ± 0,55 21,75 ± 0,6 24,7 ± 0,55* 22,0 ± 0,95
13 19,85 ± 0,55 20,05 ± 0,45 20,65 ± 0,65 20,2 ± 0,45 20,2 ± 0,4
Контроль 19,85 ± 0,65 19,9 ± 0,5 19,5 ± 0,55 19,35 ± 0,6 19,6 ± 0,8
Количество лейкоцитов, х 109/л 200 8,7 ± 0,45 9,25 ± 0,9 10,2 ± 1,1 9,5 ± 0,65 9,7 ± 0,95
13 8,55 ± 0,55 8,8 ± 0,45 8,85 ± 0,55 8,85 ± 0,7 8,8 ± 0,6
Контроль 8,75 ± 0,5 8,8 ± 0,45 8,75 ± 0,55 8,55 ± 0,55 8,8 ± 0,45
Примечание: * - отличия от контроля статистически достоверны при Рй 0,05.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Эксперименты показали, что Теризидон в дозе 200 мг/кг при однократном введении грызунам оказывает нейротропное действие (СПП, спонтанная двигательная активность, исследовательский рефлекс) с угнетением активности печеночных трансфераз, повышением содержания общего белка в сыворотке, мочевины и снижением уровня глюкозы.
Полученные данные согласуются с данными литературы. При введении препарата внутриже-лудочно однократно в терапевтической дозе — 13 мг/кг, существенных отклонений в состоянии животных от контроля не отмечено.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гуськова Т.А. Токсикология лекарственных средств. — М.: Русский врач, 2003. — 154 с.
2. Лабораторные методы в клинике / Под ред. В.В.Меньшикова. - М.: Медицина, 1987. -С. 106-125.
3. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М.: Ремедиум, 2000. - 398 с.
4. American hospital formulary service - drug information 96 / Ed. G.K. McEvoy. - Bethesda MO: American Society of Health-System pharmacists Inc., 1996. - P. 404.
5. Strata A. Clinical pharmacology of Terizidone // Lotta Tuberc. - 1971. - Vol. 41 (3). - P. 367368.
6. Yasumitsu Т., Takao T., Kakimoto Y. Inhibition of metabolism of beta-alanine and beta-aminoisobu-tyric acid by D-cycloserine // Biochem. Pharmacol. -1976. - Vol. 25, N 3. - P. 253-258.
Сведения об авторах
Баденникова Ксения Артемьевна - аспирант кафедры экологии и безопасности деятельности человека ФГБОУ ВПО «Ангарская государственная техническая академия» (665835, г. Ангарск, ул. Чайковского, 60; тел.: 8 (3955) 67-18-32; email: osya_88@mail.ru)
Юшков Геннадий Георгиевич - кандидат медицинских наук, профессор кафедры экологии и безопасности деятельности человека, заместитель директора по науке НИИ биофизики ФГБОУ ВПО «Ангарская государственная техническая академия»
Гущина Алла Анатольевна - заведующая лабораторией токсикологической биохимии ФГБОУ ВПО «Ангарская государственная техническая академия»
Бенеманский Виктор Викторович - доктор медицинских наук, профессор кафедры экологии и безопасности деятельности человека ФГБОУ ВПО «Ангарская государственная техническая академия» (665830, г. Ангарск, ул. Партизанская, 2; тел.: (3955) 95-70-68; e-mail: emil09.42@mail.ru)
Гущин Александр Сергеевич - кандидат медицинских наук, директор ОАО «Фармсинтез», директор по науке и инновациям ОАО «Фармасинтез» (664040, г. Иркутск, ул. Тухачевского, 3; тел.: 8 (3952) 55-03-55, 8 (3952) 44-13-85, факс: 8 (3952) 55-03-25; е-mail: pharmasyntez@gin.global-one.ru)
