CC BY
43
УДК 616-053.2
Б.Л. Пономарев] , Л.Е. Обухова, Ю.А. Высоцкий, Н.И. Барсукова,
Г.Н. Бородина, Т.М. Черданцева
ФОРМИРОВАНИЕ ЭЛЕМЕНТОВ СТРОМЫ СЕЛЕЗЕНКИ В РАННИЕ ПЕРИОДЫ ОНТОГЕНЕЗА ЧЕЛОВЕКА
Алтайский государственный медицинский университет (Барнаул)
Электронно-микроскопически изучены особенности гистогенеза стромальных элементов селезенки эмбрионов и плодов человека. Установлено, что в позднем, эмбриогенезе и ранние сроки фетогенеза в органе обнаруживаются, периоды., характеризующиеся, повышенной функциональной активностью ядер ретикулярных и. эндотелиальных клеток, о чем. свидетельствует, изменение доли, эухроматина и митотической активности, клеток селезенки.
Ключевые слова: селезенка, плод, эмбрион
FORMATION OF SPLEEN STROMAL ELEMENTS IN EARLY STAGES OF HUMAN ONTOGENESIS
B.L. Ponomarev, L.E. Obukhova, U.A. Vysotskiy, N.I. Barsukova,
G.N. Borodina, T.M. Cherdantseva
Altay State Medical University, Barnaul
The histogenetic features of stromal elements of human embryos and fetuses where the subject of electron microscopy studies. The periods of increased functional activities of reticular and endothelical cell nuclei are identified, during the late embryogenesis. The changes in euchromatin segments and. cell mitotic activities prove the findings.
Key words: spleen, embryo, fetus
Сосудам принадлежит важная роль в тканевой дифференцировке и гистогенетических процессах. Процесс формирования сосудистой системы органа идет параллельно с увеличением общей массы селезенки [7].
Периферическим органом иммунногенеза является селезенка, выполняющая в зрелом организме и при его развитии многообразные и важные функции [3, 6]. Строму органа составляет ретикулярная ткань. Не до конца изученным остается вопрос формирования стромальных элементов и развития капиллярного русла селезенки в эмбриогенезе и ранние сроки фетогенеза.
Целью настоящего исследования является изучение гистогенеза стромы и эндотелиоцитов селезенки в ранние сроки эмбрионального развития у человека.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Объектом исследования служили образцы селезенки эмбрионов и плодов человека на 7 — 14 неделе внутриутробного развития, взятые при медицинских абортах по социальным показаниям (в соответствии с Постановлениями Правительства РФ от 8 мая 1996 года № 567 и от 11 августа 2003 года № 485). Для проведения исследования было получено разрешение локального этического комитета и индивидуальное информированное согласие от каждой женщины на взятие абортивного материала для исследования. В ходе исследования были соблюдены этические принципы проведения медицинских исследований согласно Хельсинской декларации — редакция 2000 г. Для проведения
исследования было получено разрешение локального этического комитета. Селезенка, взятая у 120 эмбрионов и плодов, распределялась по четырем возрастным группам: 7 — 8 недель, 9—10 недель, 11 — 12 и 13—14 недель внутриутробного развития. Для световой микроскопии материал после обезвоживания в спиртах заливали в парафин. С парафиновых блоков на ротационном микротоме готовили срезы толщиной 7—10 мкм. Для электронной микроскопии кусочки органов дофиксировали в 1% растворе осмиевой кислоты. Обезвоживание проводили этанолом, начиная с 30о до абсолютного, затем материал заключали в аралдит. Ультратонкие срезы контрастировали свинцом по Рейнольдсу и изучали в электронном микроскопе УЭМВ-100К.
Эухроматин в ядрах ретикулярных и эндотелиальных клеток селезенки определяли с помощью планиметрического метода [2]. Готовили 10 срезов каждого объекта исследования. Производили съемку ядер ретикулярных клеток и эндотелиоцитов селезенки, после чего их изображение с помощью фотоувеличителя приводилось к единому увеличению в 20 000 раз. В качестве измерительного инструмента послужила тестовая сетка с шагом в 1 см. Объемную плотность эухроматина вычисляли в долях, в процентах.
Митотический индекс рассчитывали на 1000 клеток селезенки и вычисляли его в промилле. Все количественные показатели имели нормальное распределение (тест Колмагорова-Смирнова). Значимость различий сравнивали по 1-критерию Стьюдента. Результаты работы представлены в виде значений М (средняя арифметическая) ± т
(стандартная ошибка среднего). Оценку межгруп-повых различий проводили при помощи критерия Стьюдента. За статистически значимые различия показателей принималось значение p < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Морфологические признаки, выявленные нами при изучении селезенки показывают, что в эмбриогенезе и ранние сроки фетогенеза в этом органе обнаруживаются периоды, характеризующиеся повышенной функциональной активностью ядер ретикулярных и эндотелиальных клеток, о чем свидетельствует изменение доли эухроматина (рис. 1). Первые признаки внутриклеточных преобразований появляются в ядрах ретикулярных клеток. Они заключаются в перераспределении гетерохроматина к периферии ядер. Затем площадь гетерохроматина в ядре уменьшается, и одновременно происходит расширение перинуклеарного пространства. Установлено, что на 7 — 8 неделе эмбриогенеза гетерохроматин располагается в ядрах ретикулярных клеток, в основном, у внутренней поверхности кариолеммы. Единичные глыбки гетерохроматина расположены в околоя-дрышковой зоне, кариоплазма ядер этих клеток светлая. Перинукелеарное пространство свободно от содержимого и не имело расширений. На 9—10 неделе эмбриогенеза в ядрах ретикулярных клеток селезенки плодов человека определялось незначительное снижение эухроматина (72,5 ± 1,9 %), который расположен в ядре повсеместно, гетерохроматин образовывал глыбки различных размеров. В результате кариоплазма выглядела более темной, чем в предыдущий период эмбриогенеза. Некоторые участки перинуклеарного пространства расширены. На 11 — 12 неделе эмбрионального развития ядерный хроматин имел интенсивную осмиофильную окраску. Глыбки гетерохроматина располагались по периферии ядра ретикулярной клетки. Перинуклеарное пространство расширено, образовывало по периметру равномерные перетяжки. В его просвете обнаруживалось мел-
кодисперсное содержимое слабой электронной плотности. На препаратах хорошо контурировался только наружный слой ядерной мембраны. Доля эухроматина равна 60,9 ± 2,7 %.
На 13—14 неделе фетогенеза кариоплазма ретикулярных клеток светлая и прозрачная. Ядерный хроматин представлен небольшими глыбками, расположенными на внутренней поверхности ядерной мембраны. В центральной части ядра гетерохроматин представлен мелкими гранулами. Число их не велико и расположены они хаотично. Перинуклеарное пространство образовывало по периметру ядра неравномерные расширения. В нем содержалось мелкодисперсное содержимое средней электронной плотности.
В эндотелиоцитах селезенки эмбрионов и плодов появлялись признаки, свидетельствующие о функциональных нагрузках, вначале на уровне клеточных органелл, а затем и ядерного хроматина (рис. 1). Ядра формирующихся эндотелиоцитов круглой или овальной формы, ориентированы в апикально-базальном направлении. В ядрах присутствовало одно ядрышко, ядерный хроматин образовывал небольшие сгущения, хаотично расположенные по всей кариоплазме. На 7 — 8 неделе эмбриогенеза преобладал эухроматин в эндотелиоцитах селезенки (79,2 ± 2,7 %), что связано с интенсивными синтетическими процессами.
На 9 — 10-й неделе фетогенеза эухроматин в эндотелиоцитах селезенки оставался высоким — 64,5 ± 2,9 %. На 11 — 12 неделе фетогенеза в эндотели-оцитах селезенки происходило снижение фракции эухроматина. Ядра клеток имели округлую форму, с одним, реже двумя ядрышками. Ядерный хроматин располагался диффузно. Ядра эндотелиоцитов имели расширенное перинуклеарное пространство, ядерный хроматин представлен небольшими компактными глыбками у внутренней поверхности кариолеммы. Функциональная нагрузка в эндотелиоцитах разной степени зрелости микроциркуля-торного русла наблюдается как в эмбриональном, так и в постэмбриональном периоде онтогенеза [1].
о
а
7-8
9-10
недели
11-12
13-14
0А
□Б
Рис. 1. Эухроматин в клетках селезенки эмбрионов и плодов человека: А - эухроматин в ретикулярных клетках селезенки эмбрионов и плодов человека; Б - эухроматин в эндотелиоцитах селезенки эмбрионов и плодов человека.
Одним из критериев функционального состояния органа является митотическая активность его клеток. В период с 7 по 14 неделю эмбриогенеза отмечалось постепенное снижение способности клеток к делению. Снижение количества митозов обусловлено продолжающейся дифференциров-кой органа. И все же, несмотря на это, изучаемый показатель оставался достаточно высоким на 14 неделе фетогенеза (47, 7 ± 1,9 %0).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
При исследовании эухроматина ретикулярных и эндотелиальных клеток селезенки нами было отмечено, что хроматиновые структуры проявляют высокую мобильность в зависимости от срока внутриутробного развития. В селезенке наблюдается некоторое снижение эухроматина в ядрах ретикулярных клеток на 11 — 12 неделе внутриутробного развития и максимальная митотическая активность клеток этого органа. Такая же закономерность прослеживается и в ядрах эндотелиоцитов. На 13—14 неделе фетогенеза доля эухроматина снова повышается. Связано это с тем, что в организме плода начинается перестройка систем и органов, усиление их функционирования. Побудительной причиной функциональной активности ядерных структур ретикулярных клеток селезенки, возможно, следует считать внедрение в орган кровеносных капилляров и, как следствие, контакт клеток органа со стенкой формирующегося капилляра. Вероятно, в данном случае имеет
место проявление общебиологической реакции, характерной и для других органов плодов млекопитающих [4, 5].
ЛИТЕРАТУРА
1. Аверладзе Ю.Р. Оценка функционального состояния эндотелиоцитов сосудов микроцирку-лярного русла у белых крыс // Морфология. — 2001. - Т. 120, № 6. - С. 27-29.
2. Автандилов Г.Г. Медицинская морфоме-трия. — М. : Медицина, 1990. — 384 с.
3. Внутриутробное развитие человека / под ред. А.П. Милованова, С.В. Савельева. — М. : МДВ, 2006. - 384 с.
4. Иванова И.П. и др. Пролиферация эндотелия капилляров первичного сплетения гироталамо-гипофизарной портальной системы циркуляции в онтогенезе у крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. — 1995. - Т. 119, № 5. - С. 462-464.
5. Мкртчан О.З. и др. Микроциркуляторное русло и репродукция эпителия печени птиц на разных стадиях онтогенеза после однократного перегревания // Морфология. - 2005. - Т. 127, № 4. - С. 109-110.
6. Новицкий В.В. и др. Патофизиология. -М. : ГЭОТАР - Медиа, 2009. - Т. 1. - 848 с.
7. Saad A.H., Bassiouni W.M. Structure and his-tochemical organization of the spleen of Agama stellio (Sanria: Agamidae) and Chalcides ocellatus (Sauria: Scincidae) // J. Morphol. - 1993. - Vol. 216, N 2. -Р. 115-120.
Сведения об авторах
Пономарев Борис Лаврентьевич - доктор медицинских наук, профессор кафедры гистологии Алтайского государственного медицинского университета.
Обухова Лариса Евстигнеевна - кандидат медицинских наук, доцент кафедры биологии с экологией Алтайского государственного медицинского университета (656038, г. Барнаул, пр. Ленина, д. 54, кв. 57; тел.: 8 (3852) 26-05-36; е-таіі: [email protected]).
Высоцкий Юрий Александрович - доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой нормальной анатомии человека Алтайского государственного медицинского университета.
Барсукова Наталья Ивановна - кандидат медицинских наук, ассистент кафедры гистологии Алтайского государственного медицинского университета.
Бородина Галина Николаевна - кандидат медицинских наук, доцент кафедры нормальной анатомии человека Алтайского государственного медицинского университета.
Черданцева Татьяна Михайловна - кандидат медицинских наук, доцент кафедры гистологии, зав. морфологической лаборатории ЦНИЛ Алтайского государственного медицинского университета.
