CC BY
36
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ■
Пономарев Б.Л., Обухова Л.Е., Высоцкий Ю.А., Барсукова Н.И., Черданцева Т.М.
Алтайский государственный медицинский университет,
г. Барнаул
ФОРМИРОВАНИЕ СТРУКТУРНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ СТРОМЫ СЕЛЕЗЕНКИ ЭМБРИОНОВ И ПЛОДОВ ЧЕЛОВЕКА В НОРМЕ И ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ НА МАТЬ АНТРОПОГЕННЫХ ФАКТОРОВ
Электронно-микроскопически изучены особенности гистогенеза стромальных элементов селезенки эмбрионов и плодов человека в норме и при воздействии на организм матери антропогенных факторов химического производства. Установлено, что негативное влияние изучаемых факторов является причиной снижения диффузного хроматина и митотической активности ретикулярных клеток селезенки в процессе ее эмбрио- и фетогенеза.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: селезенка; плод; эмбрион; диффузный хроматин; митотическая активность.
Ponomarev B.L., Obuhova L.E., Vysoski U.A., Barsukova N.I., Cherdantseva T.M.
Altay Medical University, Barnaul
THE FORMATION OF STRUCTURAL ELEMENTS OF THE SPLEEN STROMA OF HUMAN EMBRYOS AND FETUSES IN NORMAL CONDITION AND UNDER THE EFFECT OF THE ANTHROPOGENIC FACTORS ON MOTHERS
The subject of the electronic microscopy exploration is the histogenetic features of spleen stromal elements of human embryos and fetuses in normal conditions and under the effect of tire manufacturing anthropogenic factors on mothers. The decrease of the diffuse chromatin and spleen reticular cell mitotic activity under the negative influence of the studying factors during embryo and fetogenesis are identified.
KEY WORDS: spleen; fetus; embryo; diffuse chromatin; mitotic activity.
В поддержании равновесия системы мать-пла-цента-плод одно из ведущих мест принадлежит адаптации [1-3]. Ее задачей является блокирование веществ, проникающих через плаценту от матери в организм плода. Периферическим органом иммуногенеза является селезенка, выполняющая в зрелом организме и при его развитии многообразные и важные функции. Строму органа составляет ретикулярная ткань. Ретикулярные клетки селезенки вырабатывают гуморальный фактор, играющий существенную роль в активации и пролиферации Т-лимфоцитов [4]. Не до конца изученным остается вопрос формирования стромальных элементов селезенки в ранние сроки эмбрионального развития, как в норме, так и при воздействии на организм матери антропогенных факторов химического производства.
Цель исследования — изучение гистогенеза стромы селезенки в ранние сроки эмбрионального развития у человека, как норме, так и при воздействии на организм матери негативных факторов окружающей среды.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Объектом исследования служили образцы селезенки эмбрионов и плодов человека на 7-14 неделе внутриутробного развития, взятые при медицинских
Корреспонденцию адресовать:
ОБУХОВА Лариса Евстигнеевна, 656038, г. Барнаул, пр. Ленина, 54-57. Тел. 8 (3852) 26-05-36.
E-mail: [email protected]
абортах по социальным показаниям (в соответствии с Постановлениями Правительства РФ от 8 мая 1996 года № 567 и от 11 августа 2003 года № 485) от матерей, работающих в основных цехах шинного производства (основная группа). Контрольной группой являлись образцы селезенки эмбрионов и плодов, взятые от матерей, не связанных с шинным производством. Для проведения исследования было получено разрешение локального этического комитета. Селезенка, взятая у 240 эмбрионов и плодов, распределялась по четырем возрастным группам: 7-8 недель, 9-10, 11-12 и 13-14 недель внутриутробного развития. Для световой микроскопии материал после обезвоживания в спиртах заливали в парафин. С парафиновых блоков на ротационном микротоме готовили срезы толщиной 7-10 мкм. Для электронной микроскопии кусочки органов дофиксировали в 1 % растворе осмиевой кислоты. Обезвоживание проводили этанолом, начиная с 30° до абсолютного, затем материал заключали в аралдит. Ультратонкие срезы контрастировали свинцом по Рейнольдсу и изучали в электронном микроскопе УЭМВ-100К.
Диффузный хроматин в ядрах селезенки определяли с помощью планиметрического метода [5]. Готовили 10 срезов каждого объекта исследования. Производили съемку ядер ретикулярных клеток селезенки, после чего их изображение с помощью фотоувеличителя приводилось к единому увеличению в 20000. В качестве измерительного инструмента послужила тестовая сетка с шагом в 1 см. Объемную плотность диффузного хроматина в ядрах клеток вычисляли в долях, в процентах.
Митотический индекс рассчитывали на 1000 клеток селезенки и вычисляли его в промилле. Все количес-
■ ФОРМИРОВАНИЕ СТРУКТУРНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ СТРОМЫ СЕЛЕЗЕНКИ ЭМБРИОНОВ И ПЛОДОВ ЧЕЛОВЕКА В НОРМЕ И ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ НА МАТЬ АНТРОПОГЕННЫХ ФАКТОРОВ_________
твенные показатели имели нормальное распределение (тест Колмагорова-Смирнова). Значимость различий сравнивали по ^критерию Стьюдента. Результаты работы представлены в виде значений M (средняя арифметическая) ± m (стандартная ошибка среднего). Оценку межгрупповых различий проводили при помощи критерия Стьюдента. За статистически значимые различия показателей принималось значение p < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Морфологические признаки, выявленные при изучении селезенки, показывают, что в ранние сроки эмбриогенеза в этом органе обнаруживаются периоды, характеризующиеся повышенной функциональной активностью ядра, о чем свидетельствует изменение доли диффузного хроматина (рис. 1) как в контрольной, так и в основной группах. Первые признаки внутриклеточных преобразований появляются в ядре клетки. Они заключаются в перераспределении конденсированного хроматина к периферии ядер. Затем площадь конденсированного хроматина в ядре уменьшается, и одновременно происходит расширение перинуклеарного пространства.
Установлено, что на 7-8 неделе эмбриогенеза конденсированный хроматин располагается в ядре, в основном, у внутренней поверхности кариолеммы. Единичные глыбки конденсированного хроматина распо-
ложены в околоядрышковой зоне, кариоплазма ядер этих клеток светлая. Перинуклеарное пространство свободно от содержимого и не имело расширений. На 9-10 неделе эмбриогенеза в ядрах ретикулярных клеток селезенки плодов человека в контрольной группе определялось незначительное снижение диффузного хроматина (72,5 ± 1,9 %), который расположен в ядре повсеместно, конденсированный хроматин образовывал глыбки различных размеров. В результате кариоплазма выглядела более темной, чем в предыдущий период эмбриогенеза. Некоторые участки перинукле-арного пространства расширены. На 11-12 неделе эмбрионального развития в контрольной группе ядерный хроматин имел интенсивную осмиофильную окраску. Глыбки конденсированного хроматина располагались по периферии ядра ретикулярной клетки. Перинук-леарное пространство расширено, образовывало по периметру равномерные перетяжки. В его просвете обнаруживалось мелкодисперсное содержимое слабой электронной плотности. На препаратах хорошо кон-турировался только наружный слой ядерной мембраны. Доля диффузного хроматина равна 60,9 ± 2,7 %.
На 13-14 неделе фетогенеза кариоплазма ретикулярных клеток светлая и прозрачная. Ядерный хроматин представлен небольшими глыбками, расположенными на внутренней поверхности ядерной мембраны. В центральной части ядра конденсированный хроматин представлен мелкими гранулами. Число их неве-
н
в
н
пі
а
о
о.
и
"К
а
к
т
■е
■е
N
ч
Рисунок 1
Диффузный хроматин в клетках селезенки эмбрионов и плодов человека
Примечание: M ± 1Г1; *p < 0,05 - статистическая значимость различий показателей с контрольной группой; А - диффузный хроматин в ретикулярных клетках селезенки эмбрионов и плодов человека в контрольной группе; Б - диффузный хроматин в ретикулярных клетках селезенки эмбрионов и плодов человека в основной группе.
80 п 70 60
50 Н
40 30 20 -10 -
□а Пб
7-8
9-10
11-12
13-14
недели
Сведения об авторах:
ПОНОМАРЕВ Борис Лаврентьевич, доктор мед. наук, профессор кафедры гистологии ГОУ ВПО «АГМУ Росздрава», г. Барнаул, Россия. ОБУХОВА Лариса Евстигнеевна, канд. мед. наук, доцент кафедры биологии с экологией ГОУ ВПО «АГМУ Росздрава», г. Барнаул, Россия. ВЫСОЦКИЙ Юрий Александрович, доктор мед. наук, профессор, зав. кафедрой нормальной анатомии человека ГОУ ВПО «АГМУ Росздрава», г. Барнаул, Россия.
БАРСУКОВА Наталья Ивановна, канд. мед. наук, преподаватель кафедры гистологии ГОУ ВПО «АГМУ Росздрава», г. Барнаул, Россия. ЧЕРДАНЦЕВА Татьяна Михайловна, канд. мед. наук, доцент кафедры гистологии, зав. морфологической лабораторией ЦНИЛ ГОУ ВПО «АГМУ Росздрава», г. Барнаул, Россия.
44
№4(43) 2010 с//&ть и^іія вс7Іузбассе
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ■
лико и расположены они хаотично. Перинуклеарное пространство образовывало по периметру ядра неравномерные расширения. В нём содержалось мелкодисперсное содержимое средней электронной плотности.
В ретикулярных клетках селезенки плодов основной группы на 9-14 неделе эмбриогенеза перинуклеарное пространство расширено, с хлопьевидным содержимым средней электронной плотности. Глыб-ки конденсированного хроматина резко осмиофиль-ной окраски, расположены на внутренней стороне кариолеммы. Во все сроки исследования наблюдалось снижение доли диффузного хроматина в основной группе по сравнению с контрольной (р < 0, 05). Изменения такого рода в распределении хроматина в ядрах клеток некоторых органов отмечены у экспериментальных животных при воздействии внешних факторов [6, 7].
Одним из критериев функционального состояния органа является митотическая активность его клеток. В период с 7 по 14 неделю эмбриогенеза в контрольной и основной группах отмечалось изменение митотического режима в клетках селезенки эмбрионов и плодов человека (рис. 2). В селезенке эмбрионов и плодов человека в контрольной группе наблюдалось постепенное снижение способности клеток к делению (р > 0,05). Это естественное снижение количества митозов обусловлено продолжающейся дифферен-
цировкой органа. И все же, несмотря на снижение, митотическая активность оставалась достаточно высокой на 14 неделе фетогенеза. Максимальный спад митотического индекса в клетках селезенки в условиях воздействия на мать факторов химического производства наблюдался с 11 по 12 недели эмбриогенеза (40,5 ± 1,8 %0).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
При исследовании ядерного хроматина клеток селезенки отмечено, что хроматиновые структуры проявляют высокую мобильность в зависимости от срока внутриутробного развития.
Соотношение диффузного и конденсированного хроматина в ядрах клеток селезенки отражает сложные процессы, происходящие в органах. Доля диффузного хроматина в ретикулярных клетках селезенки (с 7 по 14 недели) в основной группе меньше, чем в контрольной. Снижение диффузного хроматина является показателем нарушения дифференци-ровки клеток эмбрионов и плодов в основной группе.
Снижение митотической активности клеток селезенки эмбрионов и плодов основной группы, по сравнению с контрольной, обусловлено негативным влиянием антропогенных факторов шинного производства на систему мать-плод.
Рисунок 2
Митотическая активность в клетках селезенки эмбрионов и плодов человека
Примечание: М ± т; *р < 0,05 - статистическая значимость различий показателей с контрольной группой; А - контрольная группа; Б - основная группа.
60
^ 50 и"
g 40
и
К
’§ 30
W
8
S 20 1,0
□а шб
7-8
9-10
11-12
13-14
недели
ЛИТЕРАТУРА:
1. Автандилов, Г.Г. Медицинская морфометрия /Г.Г. Автандилов. - М., 1990. - 384 с.
2. Внутриутробное развитие человека /под ред. А.П. Милованова, С.В. Савельева. - М., 2006. - 384 с.
3. Колейчик, Л.А. К вопросу об оценке суммарного воздействия факторов окружающей среды на организм беременных /Л. А. Колей-чик //Вестн. Амурской обл. больницы № 17. - Благовещенск, 2002. - С. 8-9.
4. Тонкова-Ямпольская, Р.В. Состояние здоровья детей с учетом факторов анте - и постнатального риска /Р.В Тонкова-Ямпольская //Рос. педиатр. журн. - 2002. - № 1. - С. 61-62.
5. Immunological demonstration of terminal transferase (TDT) in rat thymocytes /R. Di Primio, O. Trubiani, M.A. Centurione et al. //Basic and Appl. Histochem. - 1989. - V. 33. - Р. 38.
6. Nuclear coiled bodies and the nucleolus: Pap. Erd Calif. State Univ. Electron Microse. Conf., San Bermardino, Calif., Apr. 9-10, 1994 /K. Brasch, J. Williams, D. Gallo et al. //Microse Res. and Techn. - 1994. - V. 29, N 6. - Р. 492.
7. Silva, F.C. Doppler and birth weight Z score: predictors for adverse neonatal outcome in severe fetal compromise /F.C. de Silva, R.A. de Sa, P.R. de Carvalho, L.M. Lopes //Cardiovasc. Ultrasound. - 2007. - V. 20, N 5. - P. 15.
