CC BY
13
DOI 10.31588/2413-4201-1883-241-1-90-94
УДК: 616-0051-08:331.1:615.22
ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПЕРВИЧНОГО ГЕМОСТАЗА У КОРОВ
ВО ВРЕМЯ СТЕЛЬНОСТИ
Завалишина С.Ю. - д.б.н., доцент
ФГБОУ ВО «Российский государственный социальный университет»
Ключевые слова: стельность, коровы, тромбоциты, сосуды, агрегация, дезагрегация Кеуwords: pregnancy, cows, platelets, blood vessels, aggregation, disaggregation
Первичный гемостаз имеет большое защитное значение в плане сохранения объема крови в сосудистом русле в случае любых повреждений и в плане поддержания нормальной ее реологии в сосудах мелкого калибра. Известно, что тромбоциты и стенки сосудов в любом возрасте функционально связаны друг с другом, в значительной мере определяя агрегатные свойства крови у продуктивных животных в любом возрасте [7]. Достаточность функциональной активности отдельных показателей первичного гемостаза следует считать важным для работы гемостаза в организме в целом и сохранения оптимума передвижения крови в сосудах системы микроциркуляции, обеспечивая достаточность кровоснабжения органов животных в любом возрасте. Большую значимость тромбоцитарно-сосудистые взаимодействия имеют во время беременности, когда плоду требуется значительное количество кислорода и питательных веществ и что сильно определяется активностью компонентов первичного гемостаза в организме матери [4].
В современном сельском хозяйстве большое значение имеет животноводство, обеспечивающее потребности в молоке и говядине, требующееся количество которых постоянно растет. Для увеличения продукции животноводства необходимо продолжение накопления знаний по физиологии крупного рогатого скота с последующим их применением на практике.
Серьезное значение в этом имеет изучение у него сосудисто-тромбоцитарных взаимодействий на протяжении всего онтогенеза животных. Особую биологическую значимость гемоста-
тические свойства тромбоцитов и сосудов имеют в течение стельности. Однако до сих пор они изучены недостаточно, не смотря на их огромное значение в формировании условий, требующихся для создания оптимума жизненных процессов у плода [8]. Ввиду огромной физиологической и экономической значимости процесса вынашивания беременности коровами и низкой степени изученности состояния первичного гемостаза в ходе нее было решено выяснить функциональные особенности тромбоцитарного и сосудистого компонентов гемостаза у коров в течение нормальной стельности.
Цель - установить физиологические особенности первичного гемостаза у коров на протяжении этапа стельности.
Материал и методы исследований. Работа выполнена в полном соответствии с нормами этики определенными Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и иных научных целях (была принята в Страсбурге 18 марта 1986 года и полностью была одобрена в Страсбурге 15 июня 2006 года) и поддержана локальным комитетом по этике Российского государственного социального университета (протокол № 11 от 17 января 2019 г.).
Исследование проведено на 47 здоровых стельных коровах черно-пестрой породы, которые были обследованы: в день осеменения и в течение стельности, на 45-е, 90-е, 135-е, 180-е, 230-е и 280-е сутки этого состояния.
У взятых в исследование коров оценивали агрегационную активность тромбоцитов (АТ) [7] в отношении ряда индукторов: АДФ (0,5*10-4 М.), коллагена (раз-
ведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125 ед/мл.), ристомицина (0,8 мг/мл) (производство фирмы «Ренам»), адреналина (5,0*10-6 М, производство Гедеон Рихтер) и ряда сочетаний индукторов: АДФ и адреналина; АДФ и коллагена; коллагена и адреналина; АДФ и тромбина в аналогичных концентрациях в плазме, подвергшейся стандартизации по уровню в ней тромбоцитов до величины 200х109 тромбоцитов в 1 литре.
Активность превращения арахидоно-вой кислоты в тромбоцитах коров и функциональная готовность ферментов тромбоцитов циклооксигеназы и тромбоксан-синтетазывыясняли с помощь трех переносных проб путем оценки в них на фото-электроколориметре агрегации тромбоцитов [2].
Осуществлялась количественная оценка уровня в тромбоцитарных гранулах АТФ и АДФ, регистрировалась степень их секреции в условиях тромбоцитарной активации (применение коллагена) и выяснялись тромбоцитарные уровни актина и миозина [2]. Активность сосудистого гемостаза у коров оценивали по антиагрега-ционным свойствам стенок сосудов, регистрируемых по АТ в плазме, взятой после проведения временной венозной окклюзии и в плазме, взятой без нее со всеми индукторами и их сочетаниями путем вычисления величины индекса антиагрегационной активности стенки сосуда (ИААСС) в ходе деления времени развития АТ в плазме после венозного застоя на длительность АТ в плазме, взятой без него [1]. Результаты исследований обработаны критерием (1ё) Стьюдента.
Результаты исследований. В проведенном исследовании у стельных коров в крови отмечалось оптимальное содержание тромбоцитов. В самом начале стельности у коров АТ в ответ на коллаген возникала за 22,9±0,16 с, постепенно тормозясь к 135-м суткам стельности, а затем увеличиваясь дополнительно до конца наблюдения (27,9±0,19 с). Сходные изменения АТ у стельных коров выявлены в ответ на АДФ (возросла на 15,1 %) и на индуктор ристомицин (возросла на 13,9%), немного позднее наступая в ответ на действие
тромбина (возросла на 11,3 %) и на адреналин (возросла на 7,5 %). Агрегационный ответ тромбоцитов в отношении испытанных комбинаций агонистов у обследованных коров также тормозился по мере увеличения у них срока стельности (Табл.1).
Важным механизмом, способствующим замедлению агрегации тромбоцитов у коров в течение стельности, можно считать имеющееся у них ослабление превращения в тромбоцитах арахидоновой кислоты в тромбоксан, на что косвенно указывало уменьшение степени АТ в простой пробе переноса (уменьшение на 29,0 %). Этот эффект обеспечивался одновременным понижением активности тромбоци-тарных тромбоксансинтетазы и циклоок-сигеназы. Сокращение активности цикло-оксигенезы тромбоцитов на протяжении стельности составляло 8,2 %, достигая к концу наблюдения 81,8±0,36 %. Функциональные возможности тромбоксансинтета-зы у обследованных коров за все время наблюдения понизилась на 18,1 %, достигнув уровня 42,6±0,17 %.
На протяжении стельности количество АТФ в гранулах тромбоцитов коров постепенно уменьшалось с 5,87±0,07 мкмоль/109 тромбоцитов до 5,58±0,13 мкмоль/109 тромбоцитов. Аналогичную динамику претерпело содержание в тромбоцитах АДФ, понижавшееся с 3,71±0,11 мкмоль/109 тромбоцитов до 3,39±0,15 мкмоль/109 тромбоцитов. Выраженность их секреции из тромбоцитов коров постепенно ослабевала, соответственно с 42,7±0,26 % и 52,7±0,24 % в день осеменения до величин, соответственно, 37,6±0,24 % и 47,8±0,23 % к концу наблюдения. Содержание белка актина и миозина в не подвергшихся активации тромбоцитах у коров в исходе наблюдения достигало 37,8±0,19% и 18,5±0,12% к общему белку в тромбоцитах, медленно уменьшалось к 280 суткам стельности до величин 32,6±0,25% и 16,3±0,09% к общему белку в тромбоцитах. За время стельности у коров зарегистрировано нарастание степени контроля сосудов над активностью АТ.
Максимальным ИААСС оказался в отношении АДФ. Немного ниже значение ИААСС отмечено в отношении коллагена
и адреналина. Значения ИААСС в случае для сочетаний агонистов. Они также имели
тромбина и ристомицина оказались еще склонность к росту на протяжении всей
меньше. Несколько ниже ИААСС были стельности (Табл. 1).
Таблица 1 - Параметры первичного гемостаза у коров в течение стельности
Учитываемые величины Сроки стельности, в днях п=47, M±m
осеменение 45 90 135 180 230 280
Агрегация тромбоцитов с АДФ, с 31,9± 0,18 32,0± 0,22 32,8± 0,20 33,8± 0,19 35,0± 0,23 36,1± 0,26 37,6± 0,24
Агрегация тромбоцитов с коллагеном, с 22,9± 0,16 23,0± 0,14 23,6± 0,18 24,8± 0,21 25,7± 0,24 26,8± 0,23 27,9± 0,19
Агрегация тромбоцитов с тромбином, с 44,6± 0,12 44,7± 0,20 45,1± 0,16 46,1± 0,27 47,7± 0,29 49,0± 0,31 50,3± 0,26
Агрегация тромбоцитов с ристомицином, с 39,6± 0,19 39,8± 0,15 40,6± 0,21 41,8± 0,24 42,7± 0,28 44,3± 0,23 р<0,05 46,0± 0,24 р<0,05
Агрегация тромбоцитов с адреналином, с 86,4± 0,31 86,7± 0,27 87,5± 0,25 89,2± 0,29 р<0,05 90,6± 0,32 91,4± 0,35 93,4± 0,37 р<0,05
Агрегация тромбоцитов с АДФ и адреналином, с 29,2± 0,16 29,4± 0,17 30,4± 0,12 31,7± 0,15 32,8± 0,17 33,9± 0,12 35,6± 0,19 р<0,05
Агрегация тромбоцитов с АДФ и коллагеном, с 20,4± 0,12 20,5± 0,14 21,4± 0,16 22,3± 0,09 23,4± 0,13 24,5± 0,15 25,7± 0,23
Агрегация тромбоцитов с адреналином и коллагеном, с 21,2± 0,11 21,3± 0,17 22,6± 0,22 23,5± 0,18 24,4± 0,15 25,6± 0,20 27,2± 0,18 р<0,05
Агрегация тромбоцитов с АДФ и тромбином, с 20,7± 0,12 20,8± 0,15 21,6± 0,13 23,2± 0,15 24,6± 0,17 26,0± 0,22 р<0,05 28,1± 0,14 р<0,05
ИААСС с АДФ 1,89± 0,12 1,89± 0,08 1,91± 0,06 1,93± 0,07 1,94± 0,09 1,96± 0,05 1,98± 0,08
ИААСС с коллагеном 1,77± 0,06 1,77± 0,04 1,78± 0,07 1,80± 0,05 1,82± 0,09 1,84± 0,07 1,87± 0,04 р<0,05
ИААСС с тромбином 1,64± 0,10 1,64± 0,07 1,65± 0,08 1,67± 0,09 1,69± 0,10 1,71± 0,08 1,74± 0,12 р<0,05
ИААСС с ристомицином 1,66± 0,06 1,67± 0,04 1,68± 0,07 1,70± 0,04 1,72± 0,07 1,74± 0,09 1,77± 0,06 р<0,05
ИААСС с адреналином 1,77± 0,11 1,78± 0,06 1,80± 0,08 1,83± 0,07 р<0,05 1,86± 0,05 р<0,05 1,90± 0,06 р<0,05 1,93± 0,09 р<0,05
ИААСС с АДФ и адреналином 1,58± 0,03 1,59± 0,05 1,62± 0,04 р<0,05 1,64± 0,08 1,67± 0,10 р<0,05 1,70± 0,09 р<0,05 1,74± 0,07 р<0,05
ИААСС с АДФ и коллагеном 1,49± 0,10 1,50± 0,06 1,53± 0,08 р<0,05 1,54± 0,08 1,56± 0,09 1,59± 0,10 р<0,05 1,61± 0,12
ИААСС с адреналином и коллагеном 1,62± 0,12 1,62± 0,07 1,64± 0,08 1,66± 0,05 1,68± 0,04 1,70± 0,05 1,73± 0,10 р<0,05
ИААСС с АДФ и тромбином 1,49± 0,05 1,49± 0,03 1,52± 0,10 1,54± 0,06 1,56± 0,08 1,59± 0,07 р<0,05 1,63± 0,10 р<0,05
Условные обозначения: р - достоверность динамики регистрируемых показателей
Гематологические показатели рас- ные интегративные маркеры состояния ор-
сматриваются в настоящее время как важ- ганизма крупного рогатого скота. Большое
информативное значение имеют параметры системы гемостаза. Их баланс в значительной мере отражает общее состояние всего организма. Оптимум гемостаза обеспечивает нормальное состояние реологических свойств крови в мелких сосудах, а значит оптимум трофики тканей [3]. Большое биологическое значение имеет состояние системы гемостаза у млекопитающих в течение беременности и особенно тромбоцитарно-сосудистого его компонентов.
Регистрация времени наступления агрегации тромбоцитов в ответ на отдельные индукторы и некоторые их физиологические сочетания дает возможность проследить у коров в ходе стельности постепенное ослабление тромбоцитарной чувствительности к ним.
Сходную динамику претерпевают у коров в этом состоянии адгезивная способность тромбоцитов во многом за счет снижения уровня содержания в их крови молекул фактора Виллебранда, обеспечивающего процесс адгезии тромбоцитов. Без сомнения, это сочетается у них с уменьшением плотности рецепторов к нему - (GPIв) на наружных их мембранах [1].
На уменьшение уровня фактора Виллебранда в крови стельных коров говорило постепенное замедление агрегации тромбоцитов у них в ответ на ристомицин, способный взаимодействовать с тромбоцитами, исходно с субэндотелиальными волокнами сосудов. Соединяясь одной частью молекулы к нити коллагена, а другой к тромбоцитарному гликопротеиду I в, фактора Виллебранда на кровяной пластинке возникает цепочка связи коллаген -фактор Виллебранда - GPIв [5]. На основе этого становится ясно понижение за время стельности количества таких рецепторов на мембранах тромбоцитов коров. Уменьшение чувствительности кровяных пластинок в отношении отдельных агони-стов и их сочетаний без сомнения во многом вызвано уменьшением количества на тромбоцитах фибриногеновых рецепторов (GPIIв-Ша), активности тромбоцитарных фосфолипаз А2 и С, выраженности синтеза тромбоксана, интенсивности актино- и
миозинообразования, а также степени секреции аденозинфосфатов из тромбоцитар-ных гранул на протяжении всей стельности [6].
Найденная тенденция к росту ан-тиагрегационных свойств стенок сосудов у стельных коров во многом связано с нарастанием синтеза в них простациклина и NO [9], способных создавать условия для высокой степени доставки кислорода и питательных веществ к тканям плаценты.
Заключение. После успешного осеменения у коров развивается ряд закономерных изменений в сосудисто-тромбоцитарном гемостазе, направленные на формирование условий для успешного развития плода. Данные изменения углубляются по мере увеличения у коров срока стельности. Наступающие изменения в ходе стельности в гемостазе коров заключаются в снижении уровня активности тром-боцитарного и нарастании функциональной готовности сосудистого компонента гемостаза, создавая высокую степень перфузии микрососудов и за счет этого высокий уровень анаболизма в тканях растущего плода.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Баркаган, З.С. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза: справочное издание / З.С. Баркаган, А.П. Момот. - М.: Ньюдиамед, 2008. -292 с.
2. Ермолаева, Т.А. Программа кли-нико-лабораторного обследования больных тромбоцитопатиями / Т.А. Ермолаева, О.Г. Головина, Т.В. Морозова. - СПб., 1992. - 25 с.
3. Краснова, Е.Г. Основы функционирования тромбоцитов / Е.Г. Краснова, Н.В. Кутафина // Ветеринария, зоотехния и биотехнология. - 2015. - № 8. - С. 6-18.
4. Максимов, В.И. Оценка тромбо-цитарных функций у телят и поросят в раннем онтогенезе / В.И. Максимов, И.Н. Медведев // Ветеринария. - 2008. - № 11. - С. 50-54.
5. Медведев, И.Н. Динамика тром-боцитарной активности в раннем онтогенезе поросят / И.Н. Медведев // Зоотехния. - 2008. - № 9. - С. 27-28.
6. Ткачева, Е.С. Реакции тромбоци-
тов крупного рогатого скота на аквапунк-туру / Е.С. Ткачева, Ю.Л. Ошуркова // Мо-лочнохозяйственный вестник. - 2012. - № 2(6). - С.18-21.
7. Шитикова, А.С. Тромбоцитопа-тии врожденные и приобретенные / А.С. Шитикова. - Санкт-Петербург, 2008. - 384 с.
8. Kutafina, N.V. Platelet Aggregation in Clinically Healthy Persons of the Second Coming-of-Age Living in the Kursk Oblast /
N.V. Kutafina, I.N. Medvedev // Advances in Gerontology. - 2015. - T.5, № 4. - C. 267270.
9. Vorobyeva, N.V. Physiological Reaction of Erythrocytes' Microrheological Properties on Hypodynamia in Persons of the Second Mature Age / N.V. Vorobyeva // Annual Research & Review in Biology. - 2017. - № 20(2). - P. 1-9. doi: 10.9734/ARRB/2017/37718.
ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПЕРВИЧНОГО ГЕМОСТАЗА У КОРОВ
ВО ВРЕМЯ СТЕЛЬНОСТИ
Завалишина С.Ю.
Резюме
Основой нормального функционирования первичного гемостаза является физиологическая достаточность активности компонентов, обеспечивающих его работу в условиях in vivo. Такой баланс показателей формирует условия для достаточной степени жидкостных свойств крови в капиллярах и на любом этапе онтогенеза. Работа проведена на 47 коровах черно-пестрой породы оптимального функционального статуса, которых обследовали за время стельности 7 раз. У наблюдавшихся коров выявлена закономерная динамика активности сосудисто-тромбоцитарного гемостаза на протяжении времени стельности в результате торможения агрегации тромбоцитов и усиления дезагрегационных возможностей стенок сосудов. Найденную на протяжении наблюдения у коров динамику активности тромбоцитар-ного и сосудистого компонентов гемостатического процесса следует рассматривать как важный механизм обеспечения у них высокой текучести их крови и обеспечения условий для оптимума трофики плода.
PHYSIOLOGICAL CHARACTERISTICS OF PRIMARY HEMOSTASIS IN COWS DURING
BREAST
Zavalishina S.Yu. Summary
The basis for the normal functioning of primary hemostasis is the physiological sufficiency of the activity of the components that ensure its operation in vivo. Such a balance of indicators creates the conditions for a sufficient degree of fluid properties of blood in the capillaries and at any stage of ontogenesis. The work was carried out on 47 cows of black-motley breed of optimal functional status, which were examined 7 times during pregnancy. In the observed cows, a regular dynamics of the activity of vascular-platelet hemostasis was revealed during the period of pregnancy as a result of inhibition of platelet aggregation and increased disaggregation capabilities of the vessel walls. The dynamics of the activity of platelet and vascular components of the hemostatic process, found during the observation in cows, should be considered as an important mechanism for ensuring their high fluidity and providing conditions for optimum fetal trophicity.
