Антиагрегационная активность сосудов поросят молочного питания

Краснова Евгения Геннадьевна; Медведев Илья Николаевич

УДК: [616-005.1-08:331.1]:615.22

Ключевые слова: поросята, фаза молочного питания, антиагрегационная активность сосудистой стенки, перекисное окисление липидов, эндотелий

Key ords: pigs, a phase of a dairy food, antiaggregatory activity of a vascular wall, lipid peroxidation, endothelium

Краснова Е. Г., Медведев И. Н.

АНТИАГРЕГАЦИОННАЯ АКТИВНОСТЬ СОСУДОВ ПОРОСЯТ МОЛОЧНОГО ПИТАНИЯ

ANTIAGGREGATORY ACTIVITY OF VESSELS OF SUCKING PIGS

Курский институт социального образования (филиал) РГСУ, г. Курск Адрес: 305035, г. Курск, ул. Пирогова, 12б

Kursk Institute of Social Education (branch of) Russian State Social University, Kursk Address: 305035, Russia, Kursk, Pirogov street, 12б

Краснова Евгения Геннадьевна, к. б. н., соискатель каф. адаптивной физ. культуры и медико-биологических наук Krasnova Evgeniya G., Ph.D. in Biology Science, Competitor for Science Degree of the Dept. of Adaptive Physical Training and Medical-Biological Sciences Медведев Илья Николаевич, д. б. н., проф., зав. каф. адаптивной физ. культуры и медико-биологических наук Medvedev Ilya N., Doctor of Biology Science, Professor, Head of the Dept. of Adaptive Physical Training and Medical-Biological Sciences

Аннотация. При обследовании 36 здоровых поросят молочного питания установлено понижение содержания в их крови продуктов перекисного окисления и повышение активности антиоксидантного потенциала плазмы. Это обуславливает слабую альтерацию эндотелиоцитов стенки сосудов, способствуя оптимальной антиагрегаци-онной активности. У поросят в течение фазы молочного питания отмечается постепенное повышение антиагрега-ционной активности сосудистой стенки вследствие постепенного нарастания выработки в ней дезагрегирующих субстанций.

Summary. The examination of 36 healthy sucking pigs defined the decrease of content of lipid peroxidation products in blood and increase of activity of plasma antioxidant potential. It provides weak alteration of vascular endothelial cells contributing to the optimum antiaggregatory activity. Improving vessel wall antiaggregatory activity in pigs within the phase of a dairy food results from gradual increase ofproduction of disaggregated substancies in it.

Введение

Важным элементом гемостатической способности сосудистой стенки растущего организма поросенка является антиагрегационная активность сосудистой стенки. Степень ее выраженности у поросят во многом контролирует функционирование первичного гемостаза и состояние микроциркуляции в их тканях [5], определяя становление многих функциональных механизмов, в т. ч. в фазе молочного питания. Антиагрегаци-онная активность сосудистой стенки в этой фазе существенно определяет рост и развитие животного в течение периода раннего онтогенеза и в конечном итоге продуктивные свойства животного по окончании данного периода [6]. Вместе с тем антиагрегационная способность стенки сосудов у поросят-молочников изучена еще весьма недостаточно. Во многом не изучена способность стенки сосудов контролировать агрегацию тромбо-

цитов in vitro и in vivo. Цель работы: установить антиагрегационную активность сосудистой стенки у здоровых поросят в фазе молочного питания.

Материалы и методы исследования

В исследование были включены 36 здоровых поросят молочного питания породы крупная белая, которые осматривались и обследовались 4 раза: на 6-е, 10-е, 15-е и 20-е сутки жизни.

В период исследования было проведено: определение активности перекисного окисления липидов плазмы крови (ПОЛ) по содержанию ацилгидроперекисей (АГП) [3], ТБК-активных продуктов (набор фирмы ООО «Агат-Мед») и антиокислительной активности жидкой части крови [2].

У поросят определяли степень эндоте-лиоцитемии [4], активность антиагрега-ционной способности стенки сосуда [1]

на основе визуального микрометода регистрации агрегации тромбоцитов (АТ) [7] с АДФ (0,5*10-4 М), коллагеном (разведение 1 : 2 основной суспензии), тромбином (0,125 ед./мл), ристомицином (0,8 мг/мл) и адреналином (5,0*10~6 М), а также с их сочетаниями - АДФ+адреналин, АДФ+коллаген и коллаген+адреналин в аналогичных концентрациях со стандартизированным количеством тромбоцитов в исследуемой плазме 200*109 тр. до и после временной венозной окклюзии. Индекс антиагрегационной активности сосудистой стенки (ИААСС), вычисляли путем деления времени АТ при венозном застое на время развития АТ без него [1].

Внутрисосудистую активность стенки (ВАС) сосуда определяли с использованием фазового контраста [8] до и после временной венозной окклюзии [1].

Результаты исследований обработаны с использованием критерия (td) Стьюдента.

Результаты исследования

У поросят в течение фазы молочного питания отмечена в начале тенденция, а затем достоверное понижение содержания в крови первичных продуктов ПОЛ плазмы -АГП и вторичных - ТБК-активных соединений с 1,45±0,04 до 1,37±0,14 Д233/1 мл и с 3,33±0,14до 3,28±0,06 мкмоль/л, соответственно. Выявленное понижение интенсивности пероксидации оказалось возможным в результате нарастания активности антиоксидантного потенциала их плазмы с 35,8±0,15 до 36,9±0,08 %.

Отмеченный у поросят низкий уровень эндотелиоцитемии в течение второй фазы раннего онтогенеза (в среднем 1,2±0,05 кле-ток/мкл) указывал на высокую целостность эндотелиальной выстилки сосудов, вероятно, за счет выраженной связи клеток эндотелия между собой и субэндотелиальными структурами.

Выяснено, что у поросят-молочников АТ без венозной окклюзии имела тенденцию к ускорению. Наиболее ранней АТ была под влиянием коллагена (табл. 1). Несколько медленнее АТ развивалась под действием АДФ, ристомицина и Н2О2. Тромбиновая и адреналиновая АТ возникали еще позднее,

постепенно ускоряясь в течение фазы молочного питания (р < 0,05). Время наступления АТ на фоне сочетания агонистов оказалось еще более укороченным, достоверно ускоряясь в течение периода наблюдения со всеми учитываемыми их комбинациями.

Венозная окклюзия вызывала достоверное замедление АТ, которая увеличивалась по мере увеличения возраста животных (табл. 1). Наибольшая ранняя АТ на фоне временной окклюзии стенки сосуда у поросят была зафиксирована для коллагена, АДФ и ристомицина (к 20-м суткам жизни до 53,6±0,05, 71,8±0,12 и 74,2±0,04 с, соответственно). Медленнее АТ при венозной окклюзии развивалась у животных под влиянием Н2О2 (79,2±0,05 с на 20-е сутки жизни). При этом на фоне искусственного венозного застоя тромбиновая и адреналиновая АТ также замедлились, достигая к концу фазы 86,0±0,12 с и 170,5±0,06 с, соответственно. При сочетании индукторов на фоне временной венозной окклюзии наблюдалось небольшое, но значимое ускорение времени развития АТ у животных: АДФ+адреналин на 2,4 %, АДФ+коллаген на 3,9 %, адреналин+коллаген на 2,2 %, соответственно.

Для поросят молочного питания наблюдали нарастание с 6-х по 20-е сутки жизни ИААСС со всеми примененными индукторами и их сочетаниями (табл. 1). Наиболее высокий ИААСС оказался при оценке АТ с адреналином ввиду максимального ее торможения с данным индуктором при венозной окклюзии. Чуть меньший уровень ИААСС зарегистрирован с АДФ и Н2О2. Еще меньший ИААСС наблюдали с коллагеном (до 1,72±0,04) и ристомицином (до 1,68±0,07). Индексы агрегационной активности сосудистой стенки при сочетании аго-нистов были ниже, чем при применении изолированного индуктора.

В крови поросят молочного питания отмечено постепенное снижение содержания дискоцитов с 82,1±0,18 % в начале фазы до 81,0±0,14 % в ее конце. Количество диско-эхи-ноцитов увеличилось у них на 7,2 %. Содержание сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов в течение срока

Таблица 1.

Антиагрегационная активность сосудов у поросят молочного питания

Параметры Фаза молочного питания, n=36, M±m Среднее значение за фазу молочного питания, n=36, M±m

6 сут. жизни 10 сут. жизни 15 сут. жизни 20 сут. жизни

АДФ, с 42,4±0,10 42,0±0,12 р < 0,05 41,4±0,05 р < 0,05 41,0±0,12 р < 0,05 41,7±0,10

АДФ на фоне венозной окклюзии, с 68,5±0,08 69,3±0,07 р < 0,05 70,4±0,05 р < 0,05 71,8±0,12 р < 0,05 70,0±0,08

ИААСС с АДФ 1,61±0,03 1,65±0,05 р < 0,05 1,70±0,04 р < 0,05 1,75±0,09 р < 0,05 1,68±0,05

Коллаген, с 32,4±0,06 32,0±0,08 31,5±0,05 р < 0,05 31,1±0,02 р < 0,05 31,8±0,05

Коллаген на фоне венозной окклюзии, с 50,4±0,07 52,0±0,03 52,8±0,08 р < 0,05 53,6±0,05 р < 0,05 52,2±0,06

ИААСС с коллагеном 1,55±0,05 1,62±0,02 р < 0,05 1,67±0,06 р < 0,05 1,72±0,04 р < 0,05 1,64±0,04

Тромбин, с 57,3±0,05 57,0±0,03 56,5±0,02 р < 0,05 56,1±0,07 р < 0,05 56,7±0,04

Тромбин на фоне венозной окклюзии, с 84,6±0,02 84,9±0,06 85,6±0,10 р < 0,05 86,0±0,12 р < 0,05 85,3±0,08

ИААСС с тромбином 1,47±0,04 1,48±0,11 1,51±0,06 р < 0,05 1,53±0,03 р < 0,05 1,50±0,06

Ристомицин, с 45,3±0,12 45,0±0,08 44,6±0,04 р < 0,05 44,0±0,08 р < 0,05 44,7±0,08

Ристомицин на фоне венозной окклюзии, с 72,5±0,16 72,9±0,06 73,6±0,08 р < 0,05 74,2±0,04 р < 0,05 73,3±0,09

ИААСС с ристомицином 1,60±0,05 1,62±0,04 1,65±0,08 р < 0,05 1,68±0,07 р < 0,05 1,64±0,06

Н,^ с 46,6±0,04 46,2±0,05 45,6±0,03 р < 0,05 45,1±0,08 р < 0,05 45,9±0,05

Н2О2 на фоне венозной окклюзии, с 77,5±0,11 77,9±0,21 78,5±0,06 р < 0,05 79,2±0,05 р < 0,05 78,3±0,11

ИААСС с Н2О2 1,66±0,05 1,68±0,04 1,72±0,06 р < 0,05 1,75±0,08 р < 0,05 1,70±0,06

Адреналин, с 98,6±0,04 98,0±0,02 97,3±0,08 р < 0,05 96,6±0,03 р < 0,05 97,6±0,04

Адреналин на фоне венозной окклюзии, с 167,6±0,06 168,9±0,04 169,7±0,06 р < 0,05 170,5±0,06 р < 0,05 169,2±0,06

ИААСС с адреналином 1,70±0,07 1,72±0,03 1,74±0,02 р < 0,05 1,76±0,04 р < 0,05 1,73±0,04

АДФ+адреналин, с 34,3±0,08 33,8±0,03 33,2±0,09 р < 0,05 32,6±0,07 р < 0,05 33,5±0,07

АДФ+адреналин на фоне венозной окклюзии, с 51,4±0,04 51,4±0,05 50,7±0,12 р < 0,05 50,2±0,08 р < 0,05 50,9±0,07

ИААСС с ДФ+адреналином 1,50±0,07 1,52±0,04 1,53±0,02 1,54±0,07 1,52±0,05

АДФ+коллаген, с 24,9±0,07 24,5±0,06 24,0±0,08 р < 0,05 23,6±0,11 р < 0,05 24,3±0,08

АДФ+коллаген на фоне венозной окклюзии, с 40,0±0,03 39,4±0,08 38,8±0,07 р < 0,05 38,5±0,12 р < 0,05 39,2±0,08

ИААСС с АДФ+коллагеном 1,60±0,09 1,61±0,12 1,62±0,06 1,63±0,05 1,62±0,08

Адреналин+коллаген, с 26,4±0,11 26,0±0,09 25,7±0,12 р < 0,05 25,2±0,05 р < 0,05 25,8±0,09

Адреналин+коллаген на фоне венозной окклюзии, с 42,2±0,08 42,1±0,05 41,9±0,11 р < 0,05 41,3±0,03 р < 0,05 41,9±0,07

ИААСС с адреналином+коллагеном 1,60±0,06 1,62±0,06 1,63±0,07 1,64±0,09 1,62±0,07

Условные обозначения: р - уровень достоверности изменений. В последующей таблице обозначения аналогичные.

наблюдения нарастало в крови животных до 2,8±0,08 %, 1,8±0,04 % и 1,0±0,01 %, соответственно. Сумма активных форм тромбоцитов у поросят возросла с 6-х до 20-х суток жизни на 6,1 %, сочетаясь с увеличением количества малых и больших агрегатов на 5,3 % и 31,2 %, соответственно. При этом содержание тромбоцитов в агрегатах у животных достигало 7,9±0,09 % в конце фазы против 7,3±0,17 % в ее начале (табл. 2).

В результате венозной окклюзии уровень дискоидных форм тромбоцитов в крови животных значительно повышался по мере увеличения возраста при одновременном уменьшении в крови количества диско-эхи-ноцитов, сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов. Сумма активных форм тромбоцитов в крови поросят при венозном застое снижалась за фазу молочного питания на 17,0 %. Количество малых и больших агрегатов в кровотоке поросят на фоне венозной окклюзии в начале фазы составляло 1,9±0,05 и 0,03±0,02 на 100 свободнолежащих тромбоцитов, в ее конце - 1,7±0,02 и 0,03±0,005 на 100 сво-боднолежащих тромбоцитов, соответственно, при понижении количества тромбоцитов в агрегатах на 4,2 %.

Таким образом, у здоровых поросят в течение фазы молочного питания на фоне повышения агрегационной активности тромбоцитов отмечается усиление антиагрегационной способности сосудистой стенки, что может объясняться нарастанием выработки в ней веществ с антиагрегационной активностью.

Обсуждение результатов

Фаза молочного питания является одним из важнейших этапов раннего онтогенеза поросенка, во многом закрепляющая адаптацию организма к условиям внешней среды и обеспечивающая его подготовку к началу питания растительными кормами. В фазу молочного питания весьма активно происходит развитие всех органов и систем в соответствии с генетической программой живого существа [5]. Одной из систем, связующей воедино организм животного, является сосудистая система. Она полифункциональна и через ряд механизмов связана с другими системами, ор-

ганами, в свою очередь влияющими на агрегатное состояние крови. Активность стенки сосуда у молодняка продуктивных животных обуславливает оптимальный уровень в крови факторов, поддерживающих необходимые реологические свойства крови и, тем самым, гомеостаз растущего организма [6].

Неактивное ПОЛ плазмы у поросят молочного питания обуславливает слабую альтерацию эндотелиоцитов, способствуя усилению антиагрегационной способности стенки сосудов, видимо, за счет повышения активности синтеза в ней простациклина и N0, обеспечивая должный уровень микроциркуляции в тканях, необходимый для потребностей организма в условиях молочного питания и подготовки к началу поступления в организм растительной пищи.

При проведении пробы с временной ишемией венозной стенки у здоровых поросят-молочников отмечалось выраженное снижение адгезивной способности кровяных пластинок, обеспечивающееся двумя механизмами. Первый - достаточный контроль со стороны сосудистой стенки над плотностью коллагеновых рецепторов-гликопроте-идов 1а - 11а и VI на мембране тромбоцитов, что косвенно установлено по выраженности торможения АТ с коллагеном при временной венозной ишемии. Второй механизм усиления контроля над адгезией тромбоцитов у поросят связан с ослаблением выработки фактора Виллебранда структурами сосудов и торможением его связыванием с рецепторами к нему - в) на поверхности кровяных пластинок и значительным количеством физиологических антиагрегантов, активно выделяемых стенкой сосуда при ее временной ишемии, способных ограничить данный процесс.

На фоне нарастания выработки в сосудах физиологических антиагрегантов поддерживается невысокий уровень фиксации сильных агонистов агрегации - коллагена и тромбина к рецепторам на мембране тромбоцитов, сдерживается активность фосфоли-пазы С, тормозя фосфоинозитольный путь активации тромбоцитов, ослабляя фосфоли-рирование белков сократительной системы. В условиях постепенного усиления синтеза

Таблица 2.

Внутрисосудистая активность тромбоцитов до и после временной венозной окклюзии

у поросят молочного питания

Параметры Фаза молочного питания, n=36, M±m Среднее зна-

6 сут. жизни 10 сут. жизни 15 сут. жизни 20 сут. жизни чение за фазу молочного питания, n=36, M±m

Дискоциты, % 82,1±0,18 81,9±0,12 81,4±0,09 р < 0,05 81,0±0,14 р < 0,05 81,6±0,13

Дискоциты на фоне 94,5±0,19 94,6±0,20 94,9±0,03 95,3±0,19 94,8±0,15