CC BY
7
DOI 10.31588/2413 -4201-1883-242-2-31 -35
УДК 611.018.5
ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПАРАМЕТРЫ ТРОМБОЦИТАРНОЙ АГРЕГАЦИИ У ТЕЛЯТ ГОЛЛАНДСКОЙ ПОРОДЫ В ТЕЧЕНИЕ ПЕРВЫХ 10 СУТОК ЖИЗНИ
Воробьева Н.В. - к.б.н., доцент, Медведев И.Н. - д.б.н., профессор
ФГБНУ «Федеральный научный центр животноводства - ВИЖ имени
академика Л.К. Эрнста
Ключевые слова: телята, фаза новорожденности, голландская порода, тромбоциты, агрегация, секреция
Keywords: calves, newborn phase, dutch breed, platelets, aggregation, secretion
Гемостаз весьма важен для поддержания жизни у всех продуктивных животных [15]. Ясно, что состояние функциональных показателей системы гемостаза весьма существенно определяет процессы гемоциркуляции [4]. Большое влияние на нее оказывают тромбоциты, состояние активности которых способно регулировать ход микроциркуляции [1] у разных живых организмов [12]. При этом, многие аспекты тромбоцитарного гемостаза у крупного рогатого скота остаются слабо изучены. [8]. До сих пор отсутствует целостная картина о связи генетических особенностей крупного рогатого скота и активности у них тромбоцитов на разных этапах их развития. Вместе с тем, именно с уровнем активности тромбоцитов у телят в значительной степени связана эффективность капиллярного кровотока, а, следовательно, уровень трофики тканей и интенсивность роста всех структур организма и становление их функциональных характеристик [13,14]. Учитывая наличие генетических различий между породами крупного рогатого скота, вызывало большой интерес выяснение особенностей активности тромбоцитов у телят высокопродуктивной по объему удоев голландской породы [9,10] в самом начале их онтогенеза - в течение фазы новорожденности.
Цель - выяснить состояние агрегации тромбоцитов у телят голландской породы в течение фазы новорожденности.
Материал и методы исследований. Работа выполнена в полном соответствии с нормами этики определенными Европейской конвенцией о защите позво-
ночных животных, используемых в экспериментальных и иных научных целях (была принята в Страсбурге 18 марта 1986 года и полностью была одобрена в Страсбурге 15 июня 2006 года) и поддержана локальным комитетом по этике Всероссийского НИИ физиологии, биохимии и кормления животных (протокол № 11 от 17 января 2018 г.).
Работа выполнена на 37 телятах голландской породы. Всех взятых в исследование телят получили от здоровых коров после нормально протекавшей у них стельности. Всех телят подвергли осмотру и обследованию за фазу новорожденности 5 раз: на 1-2, 3-4, 5-6, 7-8 и 9-10 сутки жизни.
У всех животных проводилась косвенная оценка активности синтеза в тромбоцитах тромбоксана и косвенное выяснение в них ферментативной активности циклооксигеназы и тромбоксансинтетазы при помощи трех проб переноса, оценивающих агрегацию тромбоцитов на фото-электроколориметре [3].
Выраженность агрегации тромбоцитов (АТ) выяснялась при помощи визуального микрометода с использованием в качестве индукторов АДФ (в дозе 0,5 х 10-4 М), коллагена (в разведении 1:2 от основной суспензии), тромбина (в дозе 0,125 ед/мл), адреналина (в дозе 5,0х10-6 М) и ристомицина (в дозе 0,8 мг/мл) в плазме, которую предварительно стандартизировали по числу тромбоцитов до уровня 200x109 тромбоцитов в литре [12]. Внутри-сосудистую активность тромбоцитов (ВАТ) определяли путем применения ме-
тода фазово-контрастной микроскопии [12]. Статистическая обработка полученной информации производилась с помощью программного пакета «Statistics for Windows v. 6.0», «Microsoft Excel». Различия в данных считались достоверными в случае р<0,05.
Результаты исследований. У телят голландской породы за период новорож-денности выявлена склонность к уменьшению исходно небольшой активности тромбоцитов. Так, у обследованных телят на 1-
Уровень тромбоцитов-дискоцитов в крови обследованных телят за фазу новорожденное™ претерпел тенденцию к нарастанию. За период наблюдения сумма активированных разновидностей тромбоцитов у них испытывала некоторое снижение, суммарно составившее 11,1 %. Число находящихся в крови во взвешенном состоянии малых и больших агрегатов тром-
2 сутки жизни АТ развивалась в ответ на коллаген за 37,4±0,13 с, в последующие сроки наблюдения тормозилась, достигая к 9-10 суткам жизни 38,6±0,15 с. Аналогичная тенденция к замедлению процесса АТ найдена в отношении АДФ и ристомицина, наступавших к концу наблюдения за 47,6±0,26 с и 56,9±0,24 с, соответственно. Также выяснена склонность к замедлению развития АТ в ответ на тромбин (до 60,1±0,20 с) и на адреналин (до 108,2±0,15 с) (Таблица 1).
боцитов у наблюдавшихся животных за первые 10 суток жизни постепенно снижалось на 21,7 % и в 2 раза, соответственно.
Ясно, что торможение АТ у телят голландской породы за время наблюдения происходило во многом в результате ослабления синтеза в тромбоцитах тром-боксана, на что косвенно указывало на снижение АТ в простой пробе переноса,
Таблица 1 - Состояние тромбоцитарной активности у новорожденных телят голландской породы_
Показатель Телята голландской породы, n=37, M±m
1-2 3-4 5-6 7-8 9-10
сутки сутки сутки сутки сутки
Уровень восстановления АТ 75,9±0,14 75,5±0,17 74,8±0,09 73,7±0,08 73,0±0,09
при проведении КАП, %
Уровень восстановления АТ 36,6±0,11 36,0±0,05 35,6±0,08 35,0±0,07 34,3±0,12
при проведении КИП, %
Состояние АТ в простой пробе 26,5±0,14 26,2±0,12 25,6±0,10 25,0±0,09 24,8±0,16
переноса, %
Время AТ с АДФ, с 46,7±0,20 46,8±0,17 47,0±0,24 47,3±0,18 47,6±0,26
Время AТ с коллагеном, с 37,4±0,13 37,7±0,20 38,0±0,14 38,3±0,19 38,6±0,15
Время AТ с тромбином, с 58,5±0,12 58,8±0,24 59,4±0,28 59,8±0,17 60,1±0,20
Время AТ с ристомицином, с 54,6±0,10 54,9±0,17 55,3±0,30 56,6±0,19 56,9±0,24
Время AТ с адреналином, с 105,8±0,25 106,8±0,22 107,3±0,16 107,6±0,18 108,2±0,15
Количество тромбоцитов дис- 84,0±0,21 84,4±0,29 84,9±0,17 85,3±0,23 85,6±0,26
коцитов, %
Общее количество активных 16,0±0,19 15,6±0,12 15,1±0,16 14,7±0,15 14,4±0,14
тромбоцитов, % p<0,05 p<0,05
Количество малых тромбоци- 2,8±0,09 2,6±0,05 2,4±0,03 2,3±0,04 2,3±0,06
тарных агрегатов, на 100 свободных тромбоцитов p<0,05 p<0,01 p<0,01
Количество средних и боль- 0,10±0,017 0,09±0,01 0,07±0,01 0,06±0,01 0,05±0,02
ших тромбоцитарных агрегатов, на 100 свободных тромбоцитов p<0,05 p<0,01 p<0,01 p<0,01
Примечание: p-достоверность динамики показателей по отношению к 1-2 суточному возрас-
ту.
показатель которой на 9-10 сутки жизни составлял 24,8±0,16 %. Данные результаты обеспечивались у наблюдаемых телят за счет тенденции к ослаблению активности обоих тромбоцитарных ферментов синтеза тромбоксана - циклооксигеназы и тром-боксансинтетазы. Выраженность восстановления АТ в ходе коллаген-аспириновой пробы, характеризующей уровень активности в тромбоцитах циклооксигеназы, составляла к концу наблюдения 73,0±0,09 %. Степень восстановления АТ в процессе проведения коллаген-имидазольной пробы, позволяющий косвенно оценить уровень активности тромбоцитарной тром-боксансинтетазы, у обследованных телят также понижалась за время наблюдения и достигала на 9-10 сутки 34,3±0,12 %.
Тромбоцитарная активность у молодняка высокопродуктивных пород крупного рогатого скота до сих пор остается очень слабо изученой [11]. При оценке у телят голландской породы времени развития АТ в ответ на коллаген и ристомицин удалось отметить исходно небольшую адгезивную активность их тромбоцитов, имевшую за период новорожденности тенденцию к ослаблению. Ясно, что в основе данных изменений лежали, как минимум, два биологически важных механизма. Во-первых, у телят отмечена склонность к ослабеванию тромбоцитарной агрегации, развивающейся в ответ на появление в плазме коллагена. В основе этого явления лежит развитие понижения изначально небольшой плотности на мембранах тромбоцитов телят рецепторов к коллагену - гли-копротеидов !а - Па и VI [2]. На наличие второго механизма обеспечения невысоких адгезивных возможностей тромбоцитов у телят голландской породы указывала тенденция к ослаблению АТ в ответ на ристо-мицин [6]. Этот биологический механизм был связан с развитием слабого уменьшения в крови телят за фазу новорожденно-сти концентрации фактора Виллебранда и неактивным вовлечением в адгезивный процесс рецепторов к нему (GPI в) на поверхности тромбоцитов [12].
Для новорожденных телят голландской породы свойственна тенденция к торможению исходно неактивной агрега-
ции тромбоцитов. Есть основания считать, что эти изменения призваны улучшить процессы гемоциркуляции в микрососудах. Исходно невысокая чувствительность тромбоцитов к стимуляторам процесса агрегации, имеющей при этом склонность к ослаблению, также проявилась торможением взаимодействия с тромбоцитами сильных индукторов агрегации - коллагена и тромбина [13]. Очевидно, в основе данных изменений лежало ослабление активности фосфолипазы С и всего фосфои-нозитольного механизма. Оптимально невысокая выработка инозитолтрифосфата в их тромбоцитах, видимо, обеспечивала небольшую степень выброса Са2+ из его депо и способствовала снижению интенсивности самосборки актомиозина и ослаблению его сокращения [8].
Считающиеся слабыми агонистами процесса агрегации тромбоцитов, АДФ и адреналин обеспечивали у телят голландской породы при рождении агрегацию невысокой степени выраженности, которая испытывала в ходе новорожденности склонность к понижению. В основе данных изменений лежала, очевидно, небольшая плотность рецепторов к ним на поверхности тромбоцитов, небольшая степень экспрессии рецепторов к фибриногену (GPIIb-Ша) и невысокая активация фосфолипазы А2 в процессе тромбоцитар-ной агрегации. Это обеспечивало функциональный минимум уровня выхода из мембранных фосфолипидов арахидоновой кислоты, что ограничивало синтез тром-боксана А2. При этом, у телят голландской породы оказалась невысока активность тромбоцитарных циклооксигеназы и тром-боксансинтетазы, что также сдерживало синтез агреганта тромбоксана А2. Данное обстоятельство было доказано результатами проведенных проб переноса [5].
Обнаружение в крови у голландских телят невысокого уровня активных форм тромбоцитов доказывало у них низкую чувствительность тромбоцитов к любым индукторам агрегации. Найденный у них базальный уровень ВАТ также доказывал слабую доступность коллагена находящегося в их сосудистой стенке за счет высокой сохранности эндотелия. Данное обсто-
ятельство обеспечивалось наличием в крови наблюдаемых телят небольшого количества активных разновидностей тромбоцитов и их агрегатов. Косвенно это подтверждало низкую чувствительность тромбоцитов телят голландской породы к постоянно присутствующим в их крови индукторам агрегации (АДФ, тромбин, адреналин) [14]. Найденное у наблюдаемых телят снижение исходно невысокой способности тромбоцитов к агрегации вызывало понижение уровня их активных форм и циркулирующих в крови их агрегатов любых размеров [7]. Найденные изменения можно рассматривать как важный механизм обеспечения низкой активности тромбоцитарного гемостаза, оптимума ге-моциркуляции капиллярах и поддержания на физиологически выгодном уровне тромбоцитарно-сосудистых взаимоотношений [5]. Выявленная небольшая внутри-сосудистая тромбоцитарная активность у новорожденных телят голландской породы указывала на невысокую активность агре-гационных свойств тромбоцитов, проявляемых in vivo.
Заключение. У новорожденных телят голландской породы отмечается высокая степень функционального совершенства тромбоцитов. Она в значительной мере обеспечивает физиологически выгодные условия для микроциркуляции и обмена веществ в тканях. Это возможно в результате невысокой активности у них тромбо-цитарных механизмов, обеспечивающих протекание адгезии, агрегации и секреции. Небольшая внутрисосудистая тромбоци-тарная активность у новорожденных телят голландской породы в значительной мере способствует формированию оптимума их общей жизнеспособности, требующейся для быстрого их роста и развития.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Глаголева, Т.И. Сосудистый контроль над агрегационными свойствами форменных элементов крови у телят-молочников / Т.И. Глаголева // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2015. - Т. 222(2). - С. 58-62.
2. Глаголева, Т.И. Физиологические особенности спонтанной агрегации эрит-
роцитов у телят молозивного питания // Международный вестник ветеринарии. -2016. - № 4. - С. 80-83.
3. Ермолаева, Т.А. Программа кли-нико-лабораторного обследования больных тромбоцитопатиями / Т.А. Ермолаева, О.Г. Головина, Т.В. Морозова [и др.]. -СПб., 1992. - 25 с.
4. Завалишина, С.Ю. Гемостатиче-ская активность сосудистой стенки у новорожденных телят / С.Ю. Завалишина // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. -2012. - № 1. - С. 37-39.
5. Завалишина, С.Ю. Сосудистый гемостаз у телят в период молочно-растительного питания / С.Ю. Завалишина // Зоотехния. -2012. - № 2. - С. 21.
6. Завалишина, С.Ю. Тромбоцитар-ная активность у новорожденных телят при железодефицитной анемии / С.Ю. Завалишина // Ветеринария. - 2012. - № 2. -С.51-52.
7. Завалишина, С.Ю. Контроль сосудистой стенки над индуцированной агрегацией тромбоцитов у новорожденных телят в условиях дефицита железа / С.Ю. Завалишина, Т.И. Глаголева // Ветеринарная практика. - 2013. - № 2. - С. 40.
8. Завалишина, С.Ю. Сосудисто-тромбоцитарные взаимодействия у стельных коров / С.Ю. Завалишина // Фундаментальные исследования. - 2015. - № 2(2). - С. 267-271.
9. Карамаев, С.В. Морфофункцио-нальные свойства вымени и молочная продуктивность коров голландской породы / С.В. Карамаев, Л.Н. Бакаева, Е.А. Китаев, [и др.] // Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии. - 2009. - № 1. - С. 91-94.
10. Пулатов, Ф.Б. Содержание коров голландской породы / Ф.Б. Пулатов // Молодежь и наука. - 2019. - № 3. - С. 34.
11. Чинаров, В.И. Оценка конкурентоспособности молочных пород крупного рогатого скота / В.И. Чинаров // Достижения науки и техники АПК. - 2018. - Т.32. -№ 10. - С. 74-78.
12. Шитикова, А.С. Тромбоцитар-ный гемостаз / А.С. Шитикова. - СПб.: Изд-во СПб. ГМУ, 2000. - 227 с.
13. Zavalishina, S.Y. Diagnostical Appreciation of Physiological Reaction of Intravascular Thrombocytes Activity of Two-Years-Old Mice to Regular Physical Loads / S.Y. Zavalishina, Y.A. Vatnikov, E.V. Kuli-kov, [et al.] // Biomedical and Pharmacology Journal. - 2017. - T.10. - № 1. - C. 129-136.
14. Glagoleva, T.I. Aggregative Activity of Basic Regular Blood Elements and Vascular Disaggregating Control over It in
Calves of Milk-vegetable Nutrition / T.I. Glagoleva, S.Yu. Zavalishina // Annual Research & Review in Biology. - 2017. - V. 12(6). - P. 1-7.
15. Tkacheva, E.S. Physiological features of platelet aggregation in newborn piglets / E.S. Tkacheva, S.Yu. Zavalishina // Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences. - 2018. - T. 9. - № 5. - C. 36-42.
ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПАРАМЕТРЫ ТРОМБОЦИТАРНОЙ АГРЕГАЦИИ У ТЕЛЯТ ГОЛЛАНДСКОЙ ПОРОДЫ В ТЕЧЕНИЕ ПЕРВЫХ 10 СУТОК ЖИЗНИ
Воробьева Н.В., Медведев И.Н.
Резюме
Проведенное исследование выполнено на 37 телятах голландской породы, которых получили от здоровых коров после нормально протекавшей стельности. Всех телят подвергли осмотру и обследованию на 1-2 сутки, 3-4 сутки, 5-6 сутки, 7-8 сутки и 9-10 сутки их онтогенеза. В работе были применены биохимические, гематологические и статистические методы исследования. У обследованных животных, за фазу новорожденности отмечена тенденция к торможению агрегации тромбоцитов в ответ на все примененные индукторы. Количество тромбоцитов - дискоцитов в крови обследованных телят голландской породы за первые 1 0 суток их жизни испытывало тенденцию к повышению. Сумма активных разновидностей тромбоцитов у них уменьшалась на 11,1 %. Число находящихся в крови агрегатов тромбоцитов малых и больших размеров также у них снижалось за время наблюдения.
FUNCTIONAL PARAMETERS OF TROMBOCYTIC AGGREGATION IN CALVES OF THE DUTCH BREED FOR THE FIRST 10 DAYS OF LIFE
Vorobyeva N.V., Medvedev I.N.
Summary
The study was performed on 37 calves of the Dutch breed, which were obtained from healthy cows after a normal pregnancy. All calves were examined and examined for 1-2 days, 3-4 days, 5-6 days, 7-8 days and 9-10 days of their ontogenesis. In the work, biochemical, hematological and statistical research methods were applied. In the examined animals, a tendency toward inhibition of platelet aggregation in response to all applied inducers was noted in the neonatal phase. The number of platelet discocytes in the blood of the examined Dutch calves during the first 10 days of their life tended to increase. The amount of active platelet species in them decreased by 11.1 %. The number of platelet aggregates of small and large sizes in their blood also decreased during the observation period.
