Научная статья на тему 'Физиологическая роль активных форм кислорода на клеточном уровне и организма в целом - взгляд клинициста. Ч. 2'

Физиологическая роль активных форм кислорода на клеточном уровне и организма в целом - взгляд клинициста. Ч. 2 Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
3320
523
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
АКТИВНЫЕ ФОРМЫ КИСЛОРОДА / ФИЗИОЛОГИЯ / РЕДОКС-ГОМЕОСТАЗ / ROS / PHYSIOLOGY / REDOX HOMEOSTASIS

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Кормош Наталия Геннадьевна

Представлен анализ литературы по вопросам физиологической роли активных форм кислорода (АФК) на клеточном уровне и в организме в целом. Показано, что изменение уровня АФК приводит к широкому спектру клеточных ответов, таких как пролиферация, дифференцировка, миграция и гибель клеток. Образование АФК в ряде случаев имеет значение для регуляции функций организма в целом: уровня неспецифической и специфической иммунной защиты, сосудистого тонуса, ангиогенеза, поддержания парциального давления кислорода в органах и средах, синтеза гормонов щитовидной железы. Многие из этих процессов носят адаптационный характер.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

PHYSIOLOGICAL ROLE OF REACTIVE OXYGEN AT THE CELLULAR LEVEL AND THE ENTIRE ORGANISM - LOOK CLINICIANS. PART 21

Redox-homeostasis is critical in regulating many cellular processes pertinent to cell survival. Change the level of ROS leads to a wide range of cellular responses such as proliferation, differentiation, migration and cell death. ROS also are signaling molecules for many physiological functions: nonspecific and specific immune protection, regulation of vascular tone, angiogenesis, monitoring of oxygen tension, and the synthesis of thyroid hormones. Many of the ROS-mediated responses are adaptive in nature.

Текст научной работы на тему «Физиологическая роль активных форм кислорода на клеточном уровне и организма в целом - взгляд клинициста. Ч. 2»



ОБЗОР ЛИТЕРА ТУРЫ ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ РОЛЬ... 85

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

УДК 612.014.464

Н.Г. Кормош

ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ РОЛЬ АКТИВНЫХ ФОРМ КИСЛОРОДА

НА КЛЕТОЧНОМ УРОВНЕ И ОРГАНИЗМА В ЦЕЛОМ - ВЗГЛЯД КЛИНИЦИСТА. Ч. 2.

ФГБУ «РОНЦ им Н.Н. Блохина» РАМН, Москва

Контактная информация:

Наталия Геннадьевна Кормош, врач-хирург отделения опухолей женской репродуктивной системы НИИ КО Адрес: 115478, Москва, Каширское шоссе, 24; тел. +7(495)-324-98-35 E-mail: nkormosh@hotmail.com

Статья поступила: 29.04.2011, принята к печати 18.01.2012.

Резюме

Представлен анализ литературы по вопросам физиологической роли активных форм кислорода (АФК) на клеточном уровне и в организме в целом. Показано, что изменение уровня АФК приводит к широкому спектру клеточных ответов, таких как пролиферация, дифференцировка, миграция и гибель клеток. Образование АФК в ряде случаев имеет значение для регуляции функций организма в целом: уровня неспецифической и специфической иммунной защиты, сосудистого тонуса, ангиогенеза, поддержания парциального давления кислорода в органах и средах, синтеза гормонов щитовидной железы. Многие из этих процессов носят адаптационный характер.

Ключевые слова: активные формы кислорода, физиология, редокс-гомеостаз.

Kormosh N. G.

PHYSIOLOGICAL ROLE OF REACTIVE OXYGEN

AT THE CELLULAR LEVEL AND THE ENTIRE ORGANISM - LOOK CLINICIANS. PART 2.

N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS, Moscow

Abstract

Redox-homeostasis is critical in regulating many cellular processes pertinent to cell survival. Change the level of ROS leads to a wide range of cellular responses such as proliferation, differentiation, migration and cell death. ROS also are signaling molecules for many physiological functions: nonspecific and specific immune protection, regulation of vascular tone, angiogenesis, monitoring of oxygen tension, and the synthesis of thyroid hormones. Many of the ROS-mediated responses are adaptive in nature.

Key words: ROS, physiology, redox homeostasis.

Введение

Ранее [2] нами рассмотрены данные о физиологической роли активных форм кислорода на субклеточном уровне. В ней было показано, что АФК постоянно образуются и являются необходимым компонентом жизнедеятельности клеток и организма в целом, а АФК и антиоксидантная система образуют редокс-гомеостатическую систему, обеспечивающую возможность функционального ответа на сигнал. Также продемонстрировано, что для поддержания физиологического уровня АФК требуется постоянная регенерация различных компонентов АОС, а это активные энергоемкие процессы, требующие согласованной работы на всех физиологических уровнях - генном, субклеточном, клеточном и органном.

Данные литературы, обсуждаемые в первой статье, свидетельствуют о том, что интенсификация окисления с участием АФК, расцениваемая как окислительный стресс, может быть проявлением различных процессов происходящих в клетках: интенсификации метаболизма, мобилизации защитных сил и деструкции. Какие изменения вызывают АФК на клеточном уровне и как они влияют на организм в целом - рассмотрено в настоящем обзоре.

Роль АФК на клеточном уровне

Изучение окислительного стресса на клеточном уровне показало, что воздействие одного и того же окислителя (например, H2O2) на пролиферирующие клетки млекопитающих приводит к широкому спектру клеточных ответов, таких как пролиферация, дифференцировка, миграция и гибель клеток. Комплексный анализ этих данных позволяет предположить, что АФК могут функционировать как "классические" вторичные мессенджеры: конкретный ответ зависит от типа клеток, места внутриклеточной генерации и вида АФК, дозы и длительности воздействия [14]. В целом низкий уровень способствует пролиферации или дифференциации; большее количество АФК приводит к остановке деления клетки, а при дальнейшем увеличении концентрации АФК наблюдается её гибель.

Реакция на окислительный стресс в постми-тотических клетках зависит от компенсаторных возможностей, а при недостаточности последних может привести только к гибели клетки.

Роль АФК в дифференцировке в основном изучена на эмбриональных клетках in vitro. Показано, что дифференцировка в различные клеточные линии может быть связана с увеличением уровня АФК. Причем в одних исследованиях это было обу-

словлено активацией НАДФ^Н-оксидазы [39], в других рост митохондриальных АФК совпадал с глобальным повышением антиоксидантных ферментов [13]. Длительность воздействия АФК так же, как и их уровень, влияет на процессы диффе-ренцировки эмбриональных клеток: продолжительное воздействие АФК приводит к угнетению кар-диомио- и васкулогенеза, в то время как импульсное воздействие невысокими дозами АФК усиливает дифференциацию в кардиомиоциты, а также образование сосудов [52].

Значимость АФК показана при изучении регуляции Wnt/p-катенина - сигнального пути, который имеет важное значение для эмбрионального развития, регенерации тканей взрослого организма, а также при злокачественном росте. Установлена роль нуклеоредоксина в модуляции Wnt-сигнализации [22]; показано, что семейство белков Wnt по структуре цистеиннасыщенные гликозилированные, а значит, чувствительны к редокс-регуляции [43].

Ученые The Scripps Research Institute (США) исследовали уровень АФК в процессе развития мозга крыс. Они обнаружили высокий уровень АФК в нейрональных клетках в течение эмбриогенеза и постнатального периода, который не был связан с апоптозом нейронов. Клетки с более низким уровнем АФК дифференцировались в олигодендроциты и астроциты. Нейроны с высоким уровнем АФК затем дифференцировались в большие пирамидальные и мелкие нейроны. Добавление антиоксидантов в культуру не изменяло количества нейронов, но вызывало сдвиги в дифференцировке - увеличивало долю мелких нейронов [59]. Эти данные свидетельствуют, что модуляция уровня АФК влияет на ряд аспектов дифференцировки нейронов.

Одним из механизмов индукции пролиферации клеток является участие АФК в активации ми-тогенных сигнальных путей. Было показано, что различные факторы роста с митогенной активностью, такие как PDGF, FGF2 и EGF активируют МАР-киназные митогенные пути, в которых АФК, генерируемые НАДФ^Н-оксидазой, являются необходимым компонентом [34]. Ингибирование этого фермента приводит к снижению уровня АФК и, в зависимости от дозы, блокированию EGF и PDGF-индуцированной пролиферации клеток лейомиомы [45]. Пролиферация гладкомышечных клеток сосудов, вызванная стимуляцией EGF, подавляется гиперэкспрессией каталазы и СОД, что подтверждает роль АФК в этом процессе [55].

Окислительные изменения, обусловленные ростом АФК, могут приводить к остановке деления клетки, так называемому аресту клеточного цикла. Этот процесс происходит из-за умеренного повреждения клеток и включает системы репарации. Davies K.J., изучая клеточный цикл, показал, что после остановки деления клетки, вызванной ростом АФК, наблюдается преимущественная экспрессия генов окислительной защиты и репарации ДНК [16]. При недостаточности систем репарации и окислительной защиты арест клеточного цикла может стать необратимым или запускаются механизмы клеточной гибели.

Необратимый арест клеточного цикла как следствие редокс-опосредованной дисрегуляции известен как «репликативное старение». В культурах in vitro фибробласты и эпителиальные клетки человека после 50-60 делений (так называемое " число Хейфлика ") необратимо останавливаются в Gi - или G2-фазе клеточного цикла. Исследования in vitro показали, что пролиферативный потенциал

фибробластов и различных Т-клеточных линий людей старшего возраста ниже, чем аналогичных клеток молодых людей [25; 44]. Установлено, что лимит деления клеток обусловлен уменьшением те-ломер при предыдущих делениях. Показано, что теломеры очень чувствительны к повреждениям, вызванными АФК, а сокращение длины теломер происходит более быстрыми темпами во время окислительного стресса [28]. С другой стороны, редокс-состояние микроокружения также влияет на пролиферацию клеток. Так, обработка фибробла-стов человека Н202 в сублетальных дозах т уИго приводила к остановке клеточного деления [11], а в условиях гипоксии пролиферативный потенциал фибробластов повышался [48]. Однако изменение редокс-состояния как самой клетки, так и окружающей среды приводило к остановке деления не всех клеток - в части их наблюдался апоптоз. Комплексный анализ клеточного ответа на окислительный стресс показал, что имеются отличия в экспрессии генов, в частности р53, уровень которого в апоптотический клетках был значительно выше [12]. В ответ на низкий уровень окислительного стресса р53 проявлял антиоксидантную активность, что и обеспечивало выживаемость клеток; в ответ на высокий уровень окислительного стресса р53 действовал прооксидантно, что вело к дальнейшему повышению стрессорного уровня и приводило к гибели клеток [40].

Высокий уровень АФК при недостаточности компенсаторных механизмов может приводить к различным типам клеточной смерти: апоптозу, ау-тофагии и некрозу. Механизм гибели клетки определяется уровнем и скоростью роста АФК. При этом первичный источник образования АФК в клетке не имеет значения, поскольку существуют перекрестные связи между образованием АФК различными источниками. Показано, что быстрый рост митохондриальных АФК приводит к активизации изофором НАДФ^Н-оксидазы, которые обеспечивают медленный, но длительный рост АФК, а также снижение активности №+-, К -АТФазного насоса, что, в свою очередь, ведет к деполяризации митохондриальной мембраны, разобщению окислительного фосфорилирования и росту митохондриальных АФК [15].

Два основных пути могут инициировать апоп-тоз клетки: внутренний - митохондриальный и внешний - рецептор-опосредованный. При митохондриально-зависимой клеточной смерти АФК индуцируют выход цитохрома С из митохондрий и активацию каспазного каскада, р53, и киназ, в том числе С-1ип N терминальную киназу и р38 МАРК [61].

Активация рецептора Т№-а также может проводить к образованию АФК различными источниками, но в основном митохондриями [26]. В отдельных случаях НАДФ^Н-оксидаза и 5-

липоксигеназа тоже могут вносить свой вклад в гибель клетки [32]. В любом случае апоптоз - генетически детерминированный клеточный процесс, при котором гибель клетки сопровождается активацией генома, синтезом многих ферментов и требует энергии.

В последние годы достигнут существенный прогресс в понимании процесса аутофагии. 8сИегс-8Ио^а1 Я. показал, что независимо от типа аутофагии и факторов её вызывающих АФК неизменно участвуют в этом процессе; при этом источником АФК являются митохондрии, а в физиологических условиях процесс митофагии средство для элиминации АФК играет защитную роль [53]. Уи Ь. е! а1.,

изучая процесс гибели клеток, пришли к выводу, что причина патологического накопления АФК - селективная аутофагическая деградация каталазы [65].

Значительное повышение уровня АФК приводит к деструкции внутриклеточных мембран, выходу АФК из компартментов клетки и разрушению клеточных структур непосредственно самими АФК. Такой процесс называется некрозом. Показано, что при этом также индуцируются и защитный ответ, и апоптотический, но они не успевают реализоваться, поскольку происходит более быстрый процесс - разрушение клеточных структур в результате прямого повреждающего действия АФК [3]. Так, на модели экспериментального сахарного диабета у крыс было показано, что на фоне некроза секретирующих клеток поджелудочной железы инициируются и программы клеточной выживаемости [49].

АФК играют также важную роль в регуляции клеточного цикла. W.C. Burhans и N.H. Heintz, изучая редокс-регуляцию клеточного цикла, обнаружили, что в фазе G1 АФК стимулируют митогенные пути, которые контролируют активность циклинза-висимых киназ и фосфорилирование белка рети-нобластомы ^RB), что приводит к вхождению клетки в фазу S клеточного цикла. В ответ на окислительный стресс активизируются факторы транскрипции Nrf2 и Foxo3a, вызывая экспрессию анти-оксидантных ферментов и ингибиторов циклинза-висимых киназ - P27. В фазе S АФК вызывают «арест» клеточного цикла, принимая участие в де-фосфорилировании рRB [9].

Процесс ПОЛ - частный случай окислительных процессов в мембранах клеток. Изучение его позволило установить взаимосвязи между составом клеточных мембран, их структурой и функцией.

Жирные кислоты, определяющие состав липидов, в зависимости от наличия двойных связей между атомами углерода могут быть насыщенными, ненасыщенными и полиненасыщенными. При этом количество и расположение двойных связей определяет их пространственную конфигурацию, а также скорость их окисления. Так, ненасыщенные жирные кислоты образуют цис-изомеры с формированием множественных изгибов по местам двойных связей; поэтому преобладание таких жирных кислот в мембране ведет к изменению её проницаемости. С другой стороны, высокая скорость окисления полиненасыщенных жирных кислот приводит к структурной перестройке мембран, что сопровождается изменением их вязкости [1]. Стационарный, базовый уровень ПОЛ регулирует липидный состав мембран, изменяя долю полине-насыщенных жирных кислот и обеспечивая процесс обновления и перестройки мембран. Это процесс ведет к функциональным изменениям клетки - изменению проницаемости мембран и активности мембраносвязанных ферментов, обеспечивая адаптацию клетки к изменяющимся условиям микроокружения. Кроме того, перекиси липидов участвуют в биосинтезе лей-котриенов, простагландинов, тромбоксанов, стероидных гормонов. Перекиси липидов образуются в любых клетках, однако дальнейшее их преобразование зависит от ферментных систем конкретной клетки. Так, в клетках артериальных сосудов образуется простацик-лин, а в тромбоцитах - тромбоксаны. Образующиеся простагландины оказывают влияние на метаболизм костной ткани, кровообращение и транспорт ионов через мембраны, принимая участие в ремоделировании костной ткани. Синтез высокоактивных веществ с различными биологическими свойствами из одного и того же предшественника - перекиси арахидоновой кислоты - делает процесс ПОЛ универсальным.

Роль АФК на уровне организма

Прежде всего, показано, что действие АФК в многоклеточных организмах зависит от типа и функциональной активности каждой клетки [7]. Благодаря высокой реакционной способности АФК, место, где они производятся, имеет решающее значение для их биологических эффектов [57].

Реакции многоклеточного организма на АФК подразделяют на защитные (защита от окислительного стресса и поддержание окислительно-восстановительного гомеостаза), метаболические, функциональные (физиологические) и патологические. Такое подразделение удобно с теоретических позиций для изучения различных процессов, происходящих в организме, однако накопленная экспериментальная информация о структурно-функциональной организации многоклеточных организмов свидетельствует, что существует тесная взаимосвязь между всеми этими реакциями. Многоклеточность подразумевает специализацию клеток для выполнения различных функций, а значит и различный уровень метаболической активности; даже однотипные клетки одного органа могут отличаться по уровню метаболизма и редокс-статусу. Например, активированные макрофаги и нейтрофилы в зоне воспаления генерируют огромное количество АФК, чтобы убить патогенные микроорганизмы, в тоже время другие клетки макроорганизма должны быть защищены от этого окислительного взрыва. С другой стороны, миграция лимфоцитов в зону воспаления и индукция антигенспецифического иммунологического ответа возможна только потому, что они могут активировать мощные защитные механизмы против окислительного стресса.

Хорошо известным примером защиты клеток организма от АФК является индукция гемоксигеназы (HO-1) в фибробластах кожи. АФК, физиологические дозы ультрафиолетового облучения, окислительный стресс вызывают экспрессию НО-1 мРНК [31; 60]. Окисление гема, который в свободном состоянии высокотоксичен и является прооксидантом, катализируется НО-1 (НО-1 - антиоксидантный фермент, экспрессия которого коррелирует с содержанием кислорода в тканях. Устойчивая индукция HO-1 мРНК во многих тканях различных видов млекопитающих позволила использовать HO-1 мРНК как надежный маркер клеточного окислительного стресса на уровне мРНК). W.Y. Seo et al., показали, что регулирование синтеза НО-1 в клетках эпидермиса осуществляется АФК-зависимым сигнальным каскадом ERK/p38-Nrf2-ARE [54].

Ядерный фактор транскрипции Nrf2 оказывает защитное действие, индуцируя экспрессию многих белков, инактивирующих АФК и восстанавливающих клеточные структуры. С использованием олигонуклеотидных микрочипов были определены Nrf2-зависимые гены, кодирующие ферменты детоксикации, глутатион-ассоцииронные белки, антиок-сидантные ферменты и противовоспалительные гены [38]. Nrf2 ингибируется цистеинсодержащим белком Keap1, с которым образует неактивный комплекс. Под влиянием АФК окисленный Keap1 отсоединяется от Nrf-2, который активизируется фосфо-рилированием. J. Maher et al., высказали предположение, что Nrf-2 защищает клетки от окислительного стресса и поддерживает редокс-баланс только при физиологических уровнях [42].

АФК принимают участие в регуляции уровней неспецифической и специфической иммунной защиты. Доказано, что активированные макрофаги и нейтрофилы могут производить значительное количество АФК при помощи фагоцитарной изо-

формы НАДФ^Н-оксидазы. Резкое увеличение потребления кислорода фагоцитирующей клеткой с образованием АФК, обладающих противомикроб-ным действием, называется «респираторным взрывом». Фагоцитарная НАДФ^Н-оксидаза активируется при участии цитозольных фосфорилированных белков р47 и р67 и белка семейсва RAC в мембранном комплексе в расположении цитохрома Ь558. Активация фагоцитарной НАДФ^Н-оксидазы может быть вызвана различными микробными компонентами, такими как бактериальный липополисаха-рид и липопротеин, а также цитокинами (ИЛ-1 и ИЛ-8) [6]. Активация НАДФ^Н-оксидазы в основном определяется изоформами RAC: RAC2 - в ней-трофилах и RAC1 - в макрофагах и моноцитах [67].

Наследственная недостаточность НАДФ^Н-оксидазы приводит к хроническому гранулематозу. При этом заболевании фагоциты не способны продуцировать супероксидный кислородный радикал и H2O2, поэтому клетки бактерий остаются жизнеспособными внутри фагоцитов, а их антигены вызывают в месте скопления фагоцитов клеточный иммунный ответ и формирование гранулём [29].

Снижение функциональной активности АОС макрофагов в зоне воспаления лимитирует эффективность воспалительного ответа организма. При исследовании перитонеальных макрофагов крыс с острым перитонитом показано, что резистентность клеток к H2O2, а также апоптоз макрофагов определяли жизнеспособность крыс. Сделан вывод, что наличие в экссудате макрофагов, склонных к апоп-тозу или к некрозу, может использоваться как диагностический критерий воспалительного процесса в брюшной полости [4].

Помимо неспецифической защиты, нейтро-филы участвуют в модулировании иммунологической, специфической защиты организма. Исследования биологических свойств нейтрофилов показали их роль в формировании микроокружения и межклеточного взаимодействия для локализации инфекции и воспаления; участие в активации и созревании макрофагов и дендритных клеток. Относительно молекулярных механизмов этих процессов высказано предположение, что АФК играют центральную роль в модулировании врожденного и адаптивного иммунного ответа [35].

Влияние АФК на иммунные процессы осуществляется, прежде всего, на начальных этапах Т-клеточного иммунного ответа. Показано, что АФК усиливают функцию молекул МНС класса II анти-генпрезентирующих клеток [58] и снижают порог активации Т-клеточного рецептора [24] при наличии достаточно большого количества антигенпре-зентирующий клеток, умеренного уровня и длительности воздействия АФК. Это приводит к активации Т-лимфоцитов при относительно невысоких концентрациях антигенов, например, на ранних этапах бактериальной инвазии при наличии физиологического уровня и активности антигенпрезенти-рующих клеток. Не менее важно, что низкие мик-ромолярные концентрации перекиси водорода, а также мягкий окислительный сдвиг внутриклеточного тиолового пула способствуют пролиферации и секреции цитокинов Т-клетками [56].

Активация Т-клеток сопровождается диффе-ренцировкой, пролиферацией и секрецией цитоки-нов. Эти процессы анаболические и энергоёмкие, требующие интенсивной работы митохондрий для синтеза АТФ. Образующиеся при этом АФК определяют фенотип Т-клеток. Показано, что источником АФК, индуцирующих продукцию интерлейки-

нов (2 и 4), являются митохондрии [30]. Наряду с активацией иммунных клеток, нейтрофилы, генерируя высокий уровень АФК, могут деактивировать КК- и Т-клетки за счет истощения внеклеточного уровня Ь-аргинина, необходимого для активации Т-клеток [47]. Исследования иммунного статуса здоровых людей показали, что у лиц со средними уровнями внутриклеточного глутатиона число СБ4 и СБ8 Т-клеток выше, чем у лиц с низким или высоким уровнем глутатиона [20].

Хотя АФК образуются и действуют локально, они принимают участие в выполнении определенных физиологических функций органов и систем всего организма.

АФК вносят свой вклад в поддержание парциального давления кислорода в кровотоке в целом и в отдельных областях организма. Хеморецептор-ные клетки каротидных тел высокочувствительны к изменению напряжения кислорода в артериальной крови. Они представлены нейроэктодермальными клубочковыми клетками I типа и высвобождают медиаторы в синапсы нейронов, ведущих к дыхательному центру. Показано, что в ответ на гипоксию в хеморецепторах увеличивается активность изоформы НАДФ^Н-оксидазы, которая генерирует АФК, которые, в свою очередь, изменяют проницаемость клеточной мембраны и работу К+-каналов [64]. Этот процесс ведет к увеличению Са2+ в клетке, деполяризации мембраны и выходу нейромедиатора в синапс. Изменение уровня электрической активности в эфферентных волокнах языкоглоточного нерва ретранслируется в сенсорную информацию в стволовых нейронах мозга, которые регулируют дыхание [19].

АФК принимают участие в регуляции продукции эритропоэтина. В экспериментальных условиях показано, что образование эритропоэтина подавляется перекисью водорода, а добавление каталазы в условиях нормальной оксигенации стимулирует его продукцию [10]. Регулятором экспрессии гена эритропоэти-на является НГР-1 - гетеродимерный белок, состоящий из 2 субъединиц, -1а и -1р. В условиях нормальной оксигенации НГР-1 а быстро расщепляется в про-теасомах с участием АФК [27; 63]. Гипоксия уменьшает АФК-опосредованную деградацию НГР-1а и тем самым увеличивает образование гетеродимерного комплекса НГР-1 [68]. Последний обнаружен в большинстве, если не во всех клетках человека. По мере изучения число генов, активируемых НГР-1, продолжает увеличиваться. На сегодняшний день показана важная роль НГР-1 в ангиогенезе, энергетическом метаболизме, эритропоэзе, контроле легочной вентиляции, клеточной пролиферации, вазомоторных и иммунных реакциях [18]. АФК принимают участие в регуляции сосудистого тонуса, способствуя дифференциации кровоснабжения, а значит, и доступности кислорода в различных тканях. Практически во всех типах клеток сосудистой стенки и кардиомиоцитах обнаружено образование АФК, основными источниками которых являются изоформы НАДФ^Н-оксидазы. Активация этого ферментного комплекса происходит при действии различных факторов - гормонов, факторов роста, цитокинов, а также при гемо-динамических и метаболических изменениях [23]. Причем, если действие гормонов и факторов роста опосредовано соответствующими мембранными рецепторами, то гемодинамические и метаболические изменения непосредственно приводят к активизации НАДФ^Н-оксидазы и образованию АФК. Такая особенность образования АФК в сосудистой системе позволяет рассматривать их как элемент единой реак-

ции на воздействие и модулятор сигнальных путей [8]. АФК, образованные комплексами НАДФ^Н-оксидазы гладкомышечных клеток сосудов, регулируют активность сигнальных белков p38 МАРК и необходимы для реализации эффекта ангиотензина II [50]. Из изученных изоформ НАДФ^Н-оксидазы в клетках сердечно-сосудистой системы в физиологических условиях обнаружены Nox1, Nox2 и Nox4. Все изоформы комплекса имеют общую каталитическую субъединицу (Nox), которая взаимодействует с различными мембранными белками, включая гуанозинтрифосфатазу, цитозольными белками (phox) и белками цитоскелета [5]. Все эти ферменты отличаются по способу активации, экспрессии или взаимодействия с другими белками, а также по виду АФК, которые генерируется.

R. Ray et al., изучали роль изоформ НАДФ^Н-ок-сидазы в регуляции артериального давления у трансгенных мышей с гиперэкспрессией эндотелиальных Nox4. У таких мышей обнаружена значительная вазо-дилятация и снижение артериального давления за счет повышения уровня ацетилхолина или гистамина в клетках эндотелия по сравнению с диким пометом. Авторами также установлено, что эндотелиальная Nox4 генерирует перекись водорода, вызывая вазоди-лятацию, причем этот эффект не связан с биологической ролью оксида азота [51]. Показана физиологическая роль Nox-4 в кардиомиоцитах как ключевого регулятора ангиогенеза миокарда, определяющего адаптацию сердечной деятельности к нагрузкам. При исследовании механизмов, лежащих в основе этого защитного эффекта, выявлено, что в отличие от других изоформ активность Nox4 регулируется, в основном, уровнем его экспрессии, которая увеличивается в кардиомиоцитах под воздействием увеличения давления или гипоксии, что приводит к активации EGFR и увеличению паракринной ангио-генной активности [66]. Активация Nox1 и Nox2 ассоциируется с гипертонией сосудистого происхождения и связана с увеличением сосудистой сократимости, гипертрофии и пролиферации гладкомышечных и других клеток сосудистой стенки. Предполагается, что одним из механизмов такого эффекта является сопряженность рецептов ангиотензина II, PDGF с комплексами Nox1 и Nox2 на мембране клеток; а также СОД-опосредованная инактивация NO [36]. АФК принимают участие в синтезе гормонов щитовидной железы. Йодирование тиреоглобулина является ключевым шагом в биосинтезе гормонов щитовидной железы. Эта реакция требует перекиси водорода, которая образуется из супероксида, генерированного щитовидной изоформой НАДФ^Н-оксидазы. Изоформы тирео-пероксидазы катализируют две реакции: йодирование тирозиновых остатков тиреоглобулина и слияние йодотирозинов в процессе синтеза тироксина и трийодтиронина. Обе формы этого фермента изучены на молекулярном уровне.

Установлено, что это гликозилированный мембраносвязанный гемопротеиновый фермент содержащий железо, изменение валентности которого играет важную роль в передаче электрона+ при образовании реакционно активных форм йода - I+ и HOI [21]. Генетические исследования позволили определить ген, кодирующий этот фермент [17]. Роль тиреопероксидазы в биосинтезе гормонов щитовидной железы была окончательно доказана in vivo - ассоциацией мутаций в этом гене с развитием гипотиреоза [62]. АФК принимают участие в регуляция адгезии клеток. Молекулы клеточной адгезии играют важную роль в эмбриогенезе, пролиферации и дифференциации клеток. Адгезия лейкоцитов на эндотелиальных клетках в посткапиллярных венулах, например, является первым шагом в хроническом воспалении. Экспрессия молекул клеточной адгезии стимулируется бактериальными липополисахарида-ми и различными цитокинами, такими как TNF-a, ИЛ-1, ИЛ-8 [37]. Адгезия лейкоцитов к эндотелиальным клеткам также может индуцироваться АФК. S.R. Kim et al. доказали, что адгезия лейкоцитов к эндотелиальным клеткам сосудов и аорты осуществляется за счет индукции ICAM-1 и VCAM-1 на мембранах эндотелиальных клеток с помощью АФК и активации фактора транскрипции NF-kB. Антиоксиданты блокировали образование АФК, инактивировали NF-kB, снижали уровень мембранных молекул ICAM-1 и VCAM-1 и купировали адгезию лейкоцитов [33]. Подобные данные получили Y.C. Liu et al., но в их исследовании индукция молекул клеточной адгезии наблюдалась при низком уровне Глу [41].

Заключение

АФК образуются ферментативно, преимущественно в процессе метаболической активности, являются вторичными мессенджерами во множественных внутриклеточных и тканевых реакциях, модулируют активность митогенных сигнальных путей. Изменение уровня АФК приводит к широкому спектру клеточных ответов, таких как пролиферация, дифференцировка, миграция и гибель клеток. Образование АФК в ряде случаев имеет значение для регуляции функций организма в целом: уровня неспецифической и специфической иммунной защиты, сосудистого тонуса, ангиогенеза, поддержания парциального давления кислорода, синтеза гормонов щитовидной железы. АФК и АОС образуют редокс-гомеостатичес-кую систему, обеспечивающую возможность функционального ответа на сигнал, а также сохранение баланса в изменяющихся условиях внешней и внутренней среды. Процесс адаптации приводит к индивидуализации различных реакций, что, в свою очередь, значительно усложняет изучение этих процессов. Изучение редокс-гомеостаза имеет значение не только для фундаментальной биологии, но и для практической медицины, поскольку окислительный стресс обнаружен при многих заболеваниях. Даже гипотетическая мысль о возможности управления системой редокс-гомеостаза представляется замечательной.

Литература

1. Бурлакова Е.Б. Биоантиоксиданты // Рос.хим.ж. (Ж.Рос. хим. Об-ва им. Менделеева). - 2007. - т. L1. -№1. - C. 3-12.

2. Кормош Н. Г. Физиологическая роль активных форм кислорода (субклеточный уровень) - взгляд клинициста // РБЖ. - 2011.- №4 . - С. 29-35.

3. Сазонтова Т.Г., Архипенко Ю.В. Роль свободнорадикальных процессов...// Российский физиологический журнал. - 2005.- N 6. - С. 636-655.

4. Трофимов В. А., Аксенова О. Н., Власов А. П. Склонность макрофагов к Н2О2-индуцированному апоптозу...// Фунд. иссл. - 2004. - №4. - С. 122-3.

5. Bedard K, Krause KH. The NOX family of ROS-generating NADPH oxidases: physiology and pathophysiology // Physiol Rev. - 2007. - №87 (1). - Р. 245-313.

6. Bonizzi G., Piette J., Merville M.P., Bours V. Cell type-specific role for reactive oxygen species in nuclear factor B activation by interleukin-1 // Biochem Pharmacol. - 2000. - №59. - Р. 7-11.

7. Bowie A., O'Neill L.A. Oxidative stress and nuclear factor-kappaB activation: a reassessment of the evidence in the light of recent discoveries // Biochem Pharmacol. - 2000. - №59 (1). - Р. 13-23.

8. Brandes R.P., Weissmann N., Schroder K. NADPH oxidases in cardiovascular disease // Free Radic Biol Med. - 2010. - №49 (5). - Р. 687-706.

9. Burhans W.C., Heintz N.H. The cell cycle is a redox cycle: linking phase-specific targets to cell fate // Free Radic Biol Med. - 2009. - №47 (9). - Р. 1282-1293.

10. Canbolat O., Fandrey J., Jelkmann W. Effects of modulators of the production and degradation of hydrogen peroxide on erythropoietin synthesis

// Respir Physiol. - 1998. - №114. - Р. 175-183.

11. Chen Q., Ames B.N. Senescence-like growth arrest induced by hydrogen peroxide in human diploid fibroblast F65 cells // Proc Natl Acad Sci

USA. - 1994. - №91. :- Р. 4130-4134.

12. Chen Q.M., Liu J., Merrett J.B. Apoptosis or senescence-like growth arrest: influence of cell-cycle position, p53, p21 and bax in H2O2 response

of normal human fibroblasts // Biochem J. - 2000. - №347 (Pt 2). - Р. 543-51.

13. Cho Y.M., Kwon S., Pak Y.K. et al. Dynamic changes in mitochondrial biogenesis and antioxidant enzymes during the spontaneous differentiation of human embryonic stem cells // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2006. - № 348. - Р. 1472-1478.

14. Covarrubias L., Hernandez-Garcia D., Schnabel D. et al. Function of reactive oxygen species during animal development: passive or active? // Dev Biol. - 2008. - №320(1). - Р. 1-11.

15. Daiber A. Redox signaling (cross-talk) from and to mitochondria involves mitochondrial pores and reactive oxygen species // Biochim Biophys Acta. -2010. - №1797 (6-7). - Р. 897-906.

16. Davies K.J. The broad spectrum of responses to oxidants in.// IUBMB Life. - 1999. - №48 (1). - Р. 41-47.

17. De Deken X., Wang D., Dumont J. E., Miot F. Characterization of DUOX2 proteins as components of the thyroid H(2)O(2)-generating system // Exp. Cell Res. - 2002. - № 273. -Р. 187-196.

18. Dehne N, Bmne B. HIF-1 in the inflammatory microenvironment // Exp Cell Res. - 2009. - №315 (11). - Р. 1791-1797.

19. Dinger B., He L., Chen J. et al. The role of NADPH oxidase in carotid body arterial chemoreceptors // Respir Physiol Neurobiol. - 2007. -№157 (1). - Р. 45-54.

20. Droge W., Schulze-Osthoff K., Mihm S. et al. Functions of glutathione and glutathione disulfide.// FASEB J. - 1994. - №8 (14). - Р. 1131-1138.

21. Edens W. A., Sharling L., Cheng G. et al. Tyrosine cross-linking.// J. Cell Biol. - 2001. - №154. - Р. 879-891.

22. Funato Y., Terabayashi T., Sakamoto R. et al. Nucleoredoxin sustains Wnt/p-catenin signaling by retaining a pool of inactive dishevelled protein // Curr Biol. - 2010. - №20 (21). - Р. 1945-52. .

23. Griendling K.K., Sorescu D., Lassegue B., Ushio-Fukai M. Modulation of protein kinase activity and gene expression by reactive oxygen species and their role in vascular physiology and pathophysiology // Arterioscler Thromb Vasc Biol. - 2000. - №20 (10). - Р. 2175-2183.

24. Hehner S.P., Breitkreutz R., Shubinsky G. et al. Enhancement of T cell receptor signaling by a mild oxidative shift in the intracellular thiol pool // J Immunol. - 2000. - №165. - Р. 4319 - 4328.

25. Hohn A., Jung T., Grimm S., Grune T. Lipofuscin-bound iron is a major intracellular source of oxidants: role in senescent cells // Free Radic Biol Med. - 2010. - №48 (8). - Р. 1100-1108.

26. Hughes G., Murphy M.P., Ledgerwood E.C. Mitochondrial reactive oxygen species regulate the temporal activation of nuclear factor kappaB to modulate tumour necrosis factor-induced apoptosis: evidence from mitochondria-targeted antioxidants // Biochem J. - 2005. - №389 (Pt 1). - Р. 83-89.

27. Hung L.E., Gu J., Schau M., Bunn H.F. Regulation of hypoxia- inducible factor 1.// Proc Natl Acad Sci USA. - 1998. - №95. - Р. 7987-7992.

28. Joyce M.J. Houben, Harald J.J. et al. Hageman Telomere length assessment: Biomarker of chronic oxidative stress? // Free Radical Biology and Medicine. - 2008. - №44 (3). - Р. 235-246.

29. Jurkowska M., Bernatowska E., Bal J. Genetic and biochemical background of chronic granulomatous disease // Arch Immunol Ther Exp (Warsz). - 2004. - №52 (2). - Р.113-120.

30. Kaminski M.M., Sauer S.W., Klemke C.D. et al. Mitochondrial reactive oxygen species control T cell activation by regulating IL-2 and IL-4 expression: mechanism of ciprofloxacin-mediated immunosuppression // J Immunol. -2010. - №184 (9). - Р. 4827-4841.

31. Keyse S.M., Tyrrell R.M. Heme oxygenase is the major 32-kDa stress protein induced in human skin fibroblasts by UVA radiation, hydrogen peroxide, and sodium arsenite // Proc Natl Acad Sci USA. - 1989. - №86. - Р. 99 -103.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

32. Kim J.Y., Yu S.J., Oh H.J. et al. Panaxydol induces apoptosis through an increased intracellular calcium level, activation of JNK and p38 MAPK and NADPH oxidase-dependent generation of reactive oxygen species // Apoptosis. - 2010. - PubMed PMID: 21190085.

33. Kim S.R., Bae Y.H., Bae S.K. et al. Visfatin enhances ICAM-1 and VCAM-1 expression through ROS-dependent NF-kappaB activation in endothelial cells // Biochim Biophys Acta. - 2008. - №1783 (5). - Р. 886-895.

34. Kreuzer J., Viedt C., Brandes R.P. et al. Platelet-derived growth factor activates production.// FASEB J. - 2003. - №17. - Р. 38-40.

35. Kumar V, Sharma A. Neutrophils: Cinderella of innate immune system // Int Immunopharmacol. - 2010. - №10(11). - Р.1325-1334.

36. Lambeth JD. Nox enzymes, ROS, and chronic disease: an example of antagonistic pleiotropy // Free Radic Biol Med. - 2007. - №43 (3). - Р. 332-47.

37. Langer H.F., Chavakis T. Leukocyte-endothelial interactions in inflammation // J Cell Mol Med.- 2009. - №13 (7). - Р. 1211-1220.

38. Lee J.M., Calkins M.J., Chan K et al. Identification of the NF-E2-related factor-2-dependent genes conferring protection against oxidative stress in primary cortical astrocytes using oligonucleotide microarray analysis // J Biol Chem. - 2003. - №278 (14). - Р. 12029-12038.

39. Li J., Stuffs M., Serenader L. et al. The NADPH oxidase NOX4 drives cardiac differentiation: role in regulating cardiac transcription factors and MAP kinase activation // Mol. Biol. Cell. - 2006. - №17. - Р. 3978-88.

40. Liu D., Xu Y. p53, Oxidative Stress, and Aging // Antioxid Redox Signal. - 2011. - [Epub ahead of print] - PubMed PMID: 21050134.

41. Liu Y.C., Hsieh C.W., Weng Y.C et al. Sulforaphane inhibition of monocyte adhesion via the suppression of ICAM-1 and NF-kappaB is de-

pendent upon glutathione depletion in endothelial cells // Vascul Pharmacol. - 2008. - №48 (1). - Р. 54-61.

42. Maher J., Yamamoto M. The rise of antioxidant signaling-the evolution. // Toxicol Appl Pharmacol. - 2010. - №244 (1). - Р. 4-15.

43. Maiese K., Li F., Chong Z.Z., Shang Y.C. The Wnt signaling pathway: aging gracefully as a protectionist? // Pharmacol Ther. - 2008. - №118 (1). - Р.58-81.

44. McCarron M., Osborne Y., Story C.J. et al. Effect of age on lymphocyte proliferation // Mech Ageing Dev. - 1987. - №41 (3). - Р. 211-218.

45. Mesquita F.S., Dyer S.N., Heinrich D.A et al. Reactive oxygen species mediate mitogenic growth factor signaling pathways in human leiomyoma smooth muscle cells // Biol Reprod.- 2010. - №82 (2). - Р. 341-51.

46. Moskovitz J, Oien DB. Protein carbonyl and the methionine sulfoxide reductase system // Antioxid Redox Signal. -2010. - №12 (3). - Р. 405-415.

47. Oberlies J., Watzl C., Giese T. et al. Regulation of NK cell function by human granulocyte arginase // Blood. - 2009. - №182. - 5259-5267.

48. Packer L., Fuehr K. Low oxygen concentration extends the lifespan of cultured human diploid cells // Nature. - 1977. - №267. - Р. 423-425.

49. Pavlovic D., Andersen N.A., Mandrup-Poulsen T., Eizirik D.L. Activation of. ERK1/2 contributes.// Eur Cytokine Netw. - 2000. - №11(2). - Р. 267-274.

50. Petry A., Djordjevic T., Weitnauer M.et al. NOX2 and NOX4.// Antioxid. Redox Signal. - 2006. - №8. - Р. 1473-1484.

51. Ray R., Murdoch C.E., Wang M. et al. Endothelial Nox4 NADPH Oxidase.// Arterioscler Thromb Vasc Biol. - 2011. - PubMed PMID: 21415386.

52. Sauer H., Wartenberg M. Reactive oxygen species.// Antioxid Redox Signal. - 2005. - №7 (11-12). - Р. 1423-34.

53. Scherz-Shouval R., Elazar Z. Regulation of autophagy by ROS: physiology and pathology // Trends Biochem Sci. - 2011. - №36 (1). - Р. 30-38.

54. Seo W.Y., Goh A.R., Ju S.M. et al. Celastrol induces expression ofheme oxygenase-1.// Biochem Biophys Res Commun. - 2011. - PubMed PMID: 21414301.

55. Shi M., Yang H., Motley E.D., Guo Z. Overexpression of Cu/Zn-superoxide dismutase.// Am J Hypertens. - 2004. - №17. - Р. 450-456.

56. Tatla S., Woodhead V., Foreman J.C., Chain B.M. The role of reactive oxygen species.// Free Radic Biol Med. -1999. - №26(1-2). - Р. 14-24.

57. Terada, L. S. Specificity in reactive oxidant signaling: think globally, act locally // J. Cell Biol.- 2006. - №174. - Р. 615-623.

58. Tezel G., Yang X., Luo C. et al. Mechanisms of immune system activation in glaucoma: oxidative stress-stimulated antigen presentation by the retina and optic nerve head glia // Invest Ophthalmol Vis Sci. -2007. - №48 (2). - Р. 705-714.

59. Tsatmali M., Walcott E.C., Makarenkova H., Crossin K.L. Reactive oxygen species modulate the differentiation of neurons in clonal cortical cultures // Mol Cell Neurosci. - 2006.- № 33 (4). - Р. 345-57.

60. Tyrrell R. Redox regulation and oxidant activation of heme oxygenase-1 // Free Radical Res. - 1999. - №31. - Р. 335-340.

61. Ueda S., Masutani H., Nakamura H. et al. Redox control of cell death // Antioxid Redox Signal. - 2002. - №4 (3). - Р. 405-14.

62. Vigone M. C., Fugazzola L., Zamproni I.et al. Persistent mild hypothyroidism associated with novel sequence variants of the DUOX2 gene in two siblings // Hum. Mutat. - 2005. - №26 -Р. 395.

63. Wang G.L., Jiang B.H., Rue E.A., Semenza G.L. Hypoxia-inducible factor 1.// Proc Natl Acad Sci USA. - 1995. - №92. - Р. 5510-5514.

64. Weir E.K., Archer S.L. The role of redox changes in oxygen sensing // Respir Physiol Neurobiol. - 2010. - №174 (3). - Р. 182-191.

65. Yu L., Wan F., Dutta S. et al. Autophagic programmed cell death by selective catalase degradation // Proc Natl Acad Sci U S A. - 2006. - №103 (13). - Р. 4952-4977.

66. Zhang M., Brewer A.C., Schroder K. et al. NADPH oxidase-4 mediates protection against chronic load-induced stress in mouse hearts by enhancing angiogenesis // Proc Natl Acad Sci U S A. - 2010. - №107 (42). - Р. 18121-18126.

67. Zhao X. et al. Human Monocytes Use Rac1, Not Rac2, in the NADPH Oxidase Complex//J Biological Chemistry. - 2003. - №278 (42). - Р.40788-40792.

68. Zhu H., Bunn H.F. Oxygen sensing and signaling: impact on the regulation of physiologically important genes // Respir Physiol. - 1999. -№115. - Р. 239-247.

Список литературы приведен в авторской редакции.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.