CC BY
17
остальных вариантах портальной гемодинамики - I (11% больных), II (12%) и IV (38%) средние значения ЭТ-1 также превышали норму, но в меньшей степени. При I ТПК, то есть при отсутствии гемодинамических нарушений, этот показатель составлял всего 0,56±0,4 фмоль/л. При сравнении значений ЭТ-1 между всеми пяти подгруппами получена достоверность-!2 = 17,0, р=0,02, причем при анализе I и V типов р=0,002 (1=3,38), а I и III типов - р=0,02 (1=2,5). При ХГ большая часть больных - 62% была отнесена к нормокинетическому (I) ТПК. Различия между средними значениями ЭТ-1 во всех группах не являлись статистически достоверными, хотя при IV ТПК (гипокинетическом), который наблюдался у 15% больных ХГ, отмечена тенденция к росту данного показателя (0,64±0,24 фмоль/л).
Таким образом, патогенез гемодинамических нарушений при ХГ и, особенно, при ЦП сложен, при этом значительная роль принадлежит факторам, регулирующим сосудистый тонус и приводящим к формированию ЭД. Как показывает проведенное исследование, ЭТ-1 как мощный вазоконстриктор, участвующий в сосудистой регуляции, реагирует на патологические изменения в печени и повышение его экспрессии способствует усугублению проявлений ПГ и связанных с ней нарушений гемодинамики, как внутрипеченочной, так и внепеченоч-ной.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Гринберг Б.А. Состояние портального кровотока при хронических диффузных заболеваниях печени: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Астрахань, 1999. - 23 с.
2. Куликов В.Е. Системные изменения гемодинамики у больных хроническими заболеваниями печени с проявлениями портальной гипертензии: автореф. дис. ... док. мед. наук. - Новгород, 2008. - 38 с.
3. Левитан Б.Н., Гринберг Б.А. Типы портального кровотока при циррозах печени по данным ультразвуковой допплерографии. // Материалы VI Российской конференции «Гепатология сегодня». - М., 2001 - 25 с.
4. Прибылов В.С. Коррекция дисфункции эндотелия и портальной гипертензии при циррозах печени бе-та-блокаторами и ингибиторами ангиотензин-превращающего фермента // Вестник новых медицинских технологий - 2007. - Т. Х., № 1. - С. 123-130.
Касьянова Татьяна Рудольфовна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры факультетской терапии и профессиональных болезней с курсом последипломного образования ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8512) 28-90-68
Любарт Нина Ивановна, врач функциональной диагностики отделения функциональной диагностики ГУЗ «Алек-сандро-Мариинская областная клиническая больница», Россия, 414056, г. Астрахань, ул. Татищева, 2, e-mail: doctor-urolog@rambler. ru
Левитан Болеслав Наумович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой факультетской терапии и профессиональных болезней с курсом последипломного образования ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8512) 28-90-68
УДК 616.155.16:576.8.077.3 © Ю.А. Кривенцев, Р.А. Бисалиева, Е.А. Гребнева, Р.В. Бисалиев, С.С. Рамазанова, А.И. Носков, 2011
Ю.А. Кривенцев1, Р.А. Бисалиева1, Е.А. Гребнева2, Р.В. Бисалиев1, С.С. Рамазанова1, А.И. Носков1
ФЕТАЛЬНЫЙ ГЕМОГЛОБИН ПРИ НАРКОПАТОЛОГИИ
:ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России
2НУЗ «Медико-санитарная часть», г. Астрахань
Иммунохимический анализ фетального гемоглобина методом ракетного электрофореза 96 наркологических пациентов показал его достоверное превышение в крови больных с наркологической и алкогольной зависимостью. Ключевые слова: наркомания, алкоголизм, гемоглобины, иммунохимия.
Yu.A. Kriventsev, R.A. Bisalieva, E.A. Grebnjeva, R.V. Bisaliev, S.S. Ramazanova, A.I. Noskov FETAL HEMOGLOBIN IN DRUG ADDICTS
Immunochemical analysis of 96 addicts' fetal hemoglobin by rocket electrophoresis showed its significant excess in the blood of patients with drug and alcohol addiction.
Key words: drug addiction, alcoholism, hemoglobin, immunochemistry.
Проблема наркозависимости и сопряженного с ней ухудшения здоровья нации является одной из острейших социальных проблем современной России. Значительный рост распространенности наркологических заболеваний ставит вопрос о необходимости разработки методов ранней диагностики и контроля качества лечебных мер, направленных на борьбу с этими расстройствами.
В последние годы активно ведется работа по созданию иммунохимических тест-систем на фетальный гемоглобин (HbF) [4, 6, 8], поскольку доминирующие на сегодня методы колориметрического определения этого белка не отличаются точностью, специфичностью и регистрируют целую группу щелочерезистентных белков. В современной литературе имеются данные о повышении уровня HbF при различной соматической патологии, сопровождающейся тканевой гипоксией. Так, например, повышение концентрации фетального гемоглобина в крови наблюдается у больных с хронической ишемической болезнью сердца и хронической обструктив-ной болезнью легких, гипоксических состояниях и др. [1, 2, 3, 5, 6]. Вместе с тем, работ по иммунохимическому изучению концентрации фетального гемоглобина при наркологических заболеваниях нет. Исходя из предположения, что метаболические нарушения, возникающие при хронической интоксикации психоактивными веществами, затрагивают процессы аэробного окисления, что неизбежно приводит к развитию гипоксий, в качестве маркера соматического состояния наркологических больных был выбран HbF, поскольку периферическое звено эритрона чутко реагирует на изменения гомеостаза [2, 3, 7].
Цель: иммунохимическое определение уровня фетального гемоглобина в крови больных алкоголизмом и опийной наркоманией.
Материалы и методы. Объектом исследования являлась гепаринизированная периферическая кровь наркологических больных. Обследованы образцы крови от 138 человек, из них: 52 образца от пациентов с алкогольной зависимостью; 44 - от больных опийной наркоманией и 42 пробы от здоровых взрослых (контрольная группа). Сбор клинического материала проводился в наркологическом учебно-научно-лечебном центре Астраханской государственной медицинской академии. Возраст больных был в пределах от 18 до 43-х лет. В силу специфики патологии половой профиль исследуемых групп был несимметричен: большая часть пациентов (92,7 %) были мужчинами. Поэтому в целях получения более объективных и достоверных результатов контрольная группа была составлена с учетом той же половой пропорции: 90,4 % мужчин и 9,5 % женщин. Отбор проб в группу контроля проводили на станции переливания крови города Астрахани от доноров в возрастном диапазоне 20-40 лет.
Для получения гемолизата использовали метод осмотическо-механического гемолиза с последующим избавлением от клеточных обломков путем центрифугирования раствора при 8000 об/мин. Для выделения и очистки HbF применяли методы щелочной денатурации, высаливания, гель-фильтрации и ионообменной хроматографии. Для получения антисывороток при иммунизации в качестве лабораторных животных использовали кроликов породы «Шиншилла». Иммунизация кроликов проводилась с полным адьювантом Фрейнда по стандартной схеме [1, 6]. Количественный анализ HbF в исследуемых образцах проводили методом ракетного электрофореза с додецилсульфатом натрия [4]. Для построения калибровочных кривых, использовали препараты HbF с концентрацией от 0,5 мг/л до 4000 мг/л по исследуемому гемоглобину.
Статистическую и графическую обработку фактического материала проводили c помощью прикладной программы для Windows XP Professional Edition - Microsoft 2003.
Результаты и обсуждение. Разработан оптимальный алгоритм выделения и очистки фетального гемоглобина из гепаринизированной пуповинной крови. Гемолизат пуповинной крови, полученный по стандартной методике, подвергали щелочной денатурации 1,2 М раствором NaOH в течение одной минуты с последующим осаждением сульфатом аммония 50%-й насыщенности. Надосадочную жидкость затем подвергали обессолива-нию гель-фильтрацией на колонке с сефадексом G-25, рабочий буфер - 0,05 М фосфатный раствор, рН 7,4. Заключительным этапом выделения HbF являлась ионообменная хроматография на ДЕАЕ-сефадексе А-50 с 0,01 М трис-хлоридным рабочим буфером рН 8,1 в нисходящем градиенте рН.
Анализ чистоты полученного препарата проводили методом электрофореза в полиакриламидном геле. Очищенный препарат фетального гемоглобина использовали для получения специфических антисывороток иммунизацией кроликов. В результате была получена моновалентная антисыворотка на HbF, контроль специфичности которой проводили сопоставлением с антигенными композитами методами РИД по Оухтерлони, им-муноэлектрофореза, специфической окраске на гемоглобин гваяколовым методом [6]. С использованием полученной антисыворотки и очищенного препарата HbF смоделирована иммунохимическая тест-система на этот белок и разработан способ количественного анализа HbF методом ракетного электрофореза с додецилсульфа-том натрия [4], с помощью которого в дальнейшем был проведен развернутый количественный иммунохимиче-ский анализ HbF в крови пациентов исследуемых групп (табл.). Анализ показал достоверное превышение кон-
центрации фетального гемоглобина в крови больных алкогольной зависимостью и опийной наркоманией почти в три раза, по сравнению с уровнем концентрации НЪБ в крови доноров контрольной группы (р<0,05).
Таблица
Результаты количественного определения HbF в крови наркологических больных и
здоровых доноров
Исследуемая группа Число обследованных, (n) Концентрация HbF, (мг/л), M±m % HbF от общего Hb, w
Кровь больных алкоголизмом 44 1631±43 3,76
Кровь больных опийной наркоманией 52 1848±56 4,26
Кровь здоровых (контрольная группа) 42 650±29 1,51
Активация синтеза HbF у наркологических больных, возможно, объясняется появлением измененного клона эритроидных элементов, способных при определенных условиях к увеличенному синтезу HbF среди популяции зрелых эритроцитов, за счет ранней усиленной гемоглобинизации эритробластов. Принимая во внимание положение о ведущей роли эритрона в механизмах дыхания, можно предположить, что главным фактором, регулирующим эритропоэз, должно быть отношение между снабжением тканей кислородом и их потребностью в О2. Вероятно, что метаболические изменения, касающиеся процессов аэробного окисления у наркологических больных, создают то микроокружение эритроидных клеток, которое влияет на их программирование с преимущественным образованием фетального гемоглобина. С другой стороны, возможно в результате хронического употребления ПАВ, в некоторых гемопоэтических стволовых клетках возникает трансформация генетических структур, ведущая к изменению интенсивности синтеза фетального гемоглобина.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Даштаянц Г.А. Клиническая гематология. - Киев: «Здоровье», 1973. - С.45-72.
2. Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П. Основы патохимии. - СПб.: «Элби-СПб», 2000. - 376 с.
3. Иржак Л.И. Гемоглобины и их свойства. - М.: Наука, 1983. - 150 с.
4. Кривенцев Ю.А., Никулина Д.М., Бисалиева Р.А. Способ количественного определения фетального гемоглобина человека: пат. 2310204 Рос. Федерации. № 2006107774/15; заявл. 13.03.06; опубл. 10.11.2007. - 7 с.
5. Лабораторные методы исследования. Под р. В.В.Меньшикова. - М. Медицина, 1987. - 285 с.
6. Никулина Д.М., Кривенцев Ю.А., Бисалиева Р. А. [и др.] Новый иммунохимический тест для лабораторной оценки состояния эритрона // Клиническая лабораторная диагностика. - М., 2009. - № 12. -С. 27-30.
7. Стародуб Н.Ф., Токарев Ю.Н. Гетерогенная система гемоглобина. Синтез гемоглобина отдельных типов в онтогенезе и при патологии организма // Усп. совр. биол. - 1986. - Т. 101, Вып. 3. -С. 374-389.
8. Токарев Ю.Н., Ахундова А.Н., Андреева А.П. [и др.] Иммунохимический метод ряда гемоглобинопа-тий // Метод. Рекомендации. ЦНИИ гематологии и переливания криви, Азерб. НИИ гематологии и переливания крови. - Баку: Новая книжная типография, 1982. - 9 с.
Кривенцев Юрий Алексеевич, доктор медицинских наук, доцент кафедры биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8512) 52-53-21, e-mail: rabbit1630@mail.ru
Бисалиева Рината Альбкалиевна, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8512) 52-53-21.
Гребнева Елена Александровна, врач приемного отделения НУЗ «Медико-санитарная часть», Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Кубанская, 1. тел. (8512) 71-55-60, e-mail: oboltis@rambler.ru
Бисалиев Рафаель Валерьевич, кандидат медицинских наук, врач Наркологического учебно-научно-лечебного центра ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, г. Астрахань, Началовское шоссе, 9, тел. (8512) 38-50-72.
Рамазанова Сара Сангаджиевна, студентка V курса лечебного факультета ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8512)-52-53-21.
Носков Андрей Игоревич, кандидат медицинских наук, доцент кафедры госпитальной терапии с курсом функциональной диагностики ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8512) 71-55-60
