CC BY
694
ФЕНОМЕН ИНАКТИВАЦИИ Х-ХРОМОСОМЫ И ЗАБОЛЕВАНИЯ ЧЕЛОВЕКА
А.И. Шевченко
ФГБНУ «Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики СО РАН», Новосибирск, Россия ФГБНУ «Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН», Новосибирск, Россия ФГБУ «Новосибирский научно-исследовательский институт патологии кровообращения имени академика Е.Н. Мешалкина» Министерства здравоохранения РФ, Новосибирск, Россия
The phenomenon of X chromosome inactivation and human diseases
A.I. Shevchenko
Federal Research Center Institute of Cytology and Genetics, the Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Novosibirsk, Russia
Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine, the Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Novosibirsk, Russia
State Research Institute of Circulation Pathology, Ministry of Healthcare of the Russian Federation, Novosibirsk, Russia
На ранней стадии развития у эмбрионов женского пола в каждой соматической клетке случайным образом инак-тивируется одна из двух Х-хромосом. В результате инактивации формируется мозаичный организм, приблизительно в половине клеток которого активна Х-хромосома, унаследованная от отца, тогда как в оставшейся половине экс-прессируются гены Х-хромосомы, полученной от матери. Нарушение процесса инактивации в эмбриогенезе приводит к гибели плода. Реактивация неактивной Х-хромосомы в клетках женщин является причиной развития ряда заболеваний, включая онкологические и аутоиммунные. Изменения случайного характера инактивации Х-хромосомы и предпочтительный выбор для инактивации одной из них способны оказывать влияние на клинические проявления около 400 заболеваний, связанных с мутациями X-сцепленных генов. Феномен инактивации Х-хромосомы необходимо учитывать при работе с плюрипотентными стволовыми клетками человека для их успешного применения в биомедицинских исследованиях и использования для целей регенеративной медицины.
Ключевые слова: инактивация Х-хромосомы, ген XIST, болезни человека при нарушении дозы Х-сцепленных генов, плюрипотентные стволовые клетки.
Введение
В раннем развитии в клетках эмбрионов женского пола происходит инактивация транскрипции генов на одной из двух Х-хромосом. В результате, каждая клетка женского организма имеет только одну активную Х-хромосому, как и клетки мужского организма, пол которого детерминируется сочетанием половых хромосом XY [1, 2]. Х-хромосома человека — субме-тацентрик, состоящий из короткого (Xp) и длинного (Xq) плеча. Она содержит около 1100 генов и имеет размер около 160 млн. пар нуклеотидов. Акроцен-трическая Y-хромосома представляет собой значительно деградировавший вариант Х-хромосомы и содержит около 100 генов, часть из которых гомологична генам Х-хромосомы. Считают, что феномен инактивации Х-хромосомы является механизмом дозовой компенсации, который позволяет достигать одинакового уровня продуктов генов Х-хромосомы в клетках мужчин (XY) и женщин (XX).
На Х-хромосоме имеется особый локус — центр инактивации (XiC), который отвечает за подсчет числа Х-хромосом на диплоидный набор аутосом, случайный выбор единственной активной Х-хромосомы и инициацию инактивации оставшихся [1, 2]. Ключевой ген центра инактивации, XIST, кодирует протяженную РНК размером 17 тыс. нуклеотидов. РНК гена XIST не покидает пределы ядра,
e-mail: epigene@bionet.nsc.ru
in early development, one of the two X chromosomes is randomly inactivated in each somatic cell of female embryos. As a result, women are mosaics that means about a half of their cells bear the active X chromosome inherited from the father, while the genes of the maternally inherited X chromosome are expressed in the other half. Disturbance in the inactivation process during embryogenesis leads to fetal death. Reactivation of the inactive X chromosome in female cells can cause a number of diseases, including cancer and autoimmune disorders. Changes in randomness of X-chromosome inactivation and skewed choice of one of the X-chromosomes for inactivation can influence clinical manifestations of about 400 diseases associated with mutations in X-linked genes. The phenomenon of X chromosome inactivation is also an important issue for successful application of human pluripotent stem cells in biomedical research and regenerative medicine.
Keywords: X-chromosome inactivation, XIST, human diseases caused by disturbances in dosage of X-linked genes, pluripotent stem cells.
она распространяется по Х-хромосоме, выбранной для инактивации, и инициирует на ней репрессию транскрипции генов. Кроме того, XIST РНК способна связывать белковые комплексы, вызывающие формирование факультативного гетерохроматина неактивной Х-хромосомы. В плюрипотенных клетках человека обнаружена другая видоспецифичная некодирующая РНК — ХАСТ, которая локализуется на активных Х-хромосомах и, по-видимому, препятствует их сайленсингу до завершения процесса инактивации [3, 4].
В процессе инактивации Х-хромосома подвергается гетерохроматизации. Факультативный гетерохро-матин неактивной Х-хромосомы (ХП подразделяется на два типа, которые чередуются и не перекрываются между собой [4, 5]. Первый тип обнаруживает зависимость от экспрессии РНК гена XIST и характеризуется присутствием триметилированного гистона Н3 по лизину К27 (Н3К27те3), гистона макро Н2А1.2 и убиквитинированного гистона Н2А по лизину К119. Второй тип факультативного гетерохроматина неактивной Х-хромосомы представлен триметилированым гистоном Н3 по лизину К9 (Н3К9те3), гетерохрома-тин специфичным белком НР1 и триметилирован-ным гистоном Н4 по лизину К20 (Н3К20те3). Он является менее изученным, и до сих пор остается открытым вопрос о механизмах его образования,
однако предполагают, что его формирование не связано с распространением РНК гена XIST.
Установившееся неактивное состояние Х-хромосомы является стабильным и клонально наследуется в ряду клеточных поколений. Большинство генов неактивной Х-хромосомы человека подвергаются стабильной инактивации транскрипции, однако часть Х-сцепленных генов, доля которых оценивается в 15%, избегает инактивации [6, 7]. Многие гены, избегающие инактивации, имеют гомологи на Y-хромосоме и не нуждаются в дозовой компенсации. В тех случаях, когда избегающие инактивации гены не имеют гомолога на Y-хромосоме, их Y-гомолог не экспрессируется или выполняет специфическую функцию, экспрессия с неактивной Х-хромосомы остается некомпенсированной и, предположительно, может служить для формирования признаков, отличающихся у индивидуумов разного пола. Гены, избегающие инактивации на Х^ лишены репрессирующих модификаций хроматина, однако их транскрипция в большинстве случаев снижена по сравнению с аллелями на активной Х-хромосоме.
Нарушения дозы генов половых хромосом могут быть причиной различных заболеваний человека. В обзоре обобщены сведения о связи процесса инактивации с патологиями, вызываемыми численными или структурными аномалиями Х-хромосомы, а также мутациями Х-сцепленных генов, рассмотрен вклад процесса инактивации в развитие опухолей и аутоиммунных заболеваний, обсуждается важность контроля за транскрипционным статусом Х-хромосом при клеточной терапии с применением плюрипотент-ных стволовых клеток человека.
Болезни, связанные с анеуплоидиями
и структурными перестройками Х-хромосом
Анеуплоидии, связанные с Х-хромосомой человека, как правило, совместимы с жизнью, так как клеткам организма, в целом, достаточно одной активной Х-хромосомы на диплоидный набор аутосом, а оставшиеся, в том числе и сверхчисленные Х-хромосомы, становятся траскрипционно неактивными благодаря феномену инактивации [1]. Тем не менее при этом большинство анеуплоидий сопровождается различными отклонениями от нормы и проявляется как генетические синдромы. Наиболее часто встречающиеся анеуплоидии — это отсутствие второй половой хромосомы у женщин с кариотипом 45,Х (синдром Тернера) и наличие дополнительной Х-хромосомы у мужчин с кариотипом 47,XXY (синдром Кляйнфель-тера). Реже выявляются анеуплоидии XXX, ХХХХ и XXXY. Наблюдаемые пороки развития при синдромах, связанных с анеуплоидиями Х-хромосомы, объясняют нарушениями дозы генов, избегающих инактивации на Xi и экспрессирующихся как с активной, так и с неактивной Х-хромосом, а в ряде случаев (при наличии функциональных гомологов) также и с Y-хромосомы. В дополнение к соматическим аномалиям пациенты с кариотипами 45,Х или 47,XXY также являются стерильными, т.е. не имеют жизнеспособных гамет, что, как полагают, вызвано нарушениями дозы Х-сцепленных генов в клетках зародышевого пути и спаривания половых хромосом в мейозе.
Под структурными перестройками Х-хромосом подразумевают происходящие на них делеции или дупликации, а также транслокации между Х-хромосомой и аутосомами (рис. 1).
с1е1 Х(р) с!ирХ(р)
1(1 1
/ЙГ ■ XIБТ
1У 1
Реципрокная I (X;А)
1| 13
НерецигрокнаяI(Х;А)
Рис. 1. Примеры структурных перестроек с участием Х-хромосомы и сопутствующий им паттерн процесса инактивации. Неактивная Х-хромосома экспресиирует ген XIST
Следствием перестроек Х-хромосомы, как правило, является нарушение случайного характера инактивации, в результате чего в клетках в неактивном состоянии преимущественно выявляется только одна Х-хромосома из пары [8]. В случаях делеций, не затрагивающих ХС активной преимущественно является нормальная Х-хромосома, а неактивной оказывается Х-хромосома с делецией. Поскольку в клетках, где активна Х-хромосома с делецией, наблюдается нехватка продуктов генов из района де-леции, в организме против таких клеток будет идти селекция, соответственно живыми останутся клетки, в которых активна нормальная Х-хромосома. Если же делеция происходит в ХС то Х-хромосома с делецией не имеет возможности запускать инактивацию и будет оставаться активной. Когда делеция затрагивает районы ХС отвечающие за подсчет Х-хромосом, активными остаются обе Х-хромосомы, что ведет к гибели эмбриона на ранних стадиях развития. Если функция подсчета при делеции сохраняется, неактивной будет нормальная Х-хромосома, способная запустить экспрессию гена XIST и инициировать инактивацию.
У гетерозигот по транслокациям между Х-хромосомой и аутосомой картина более сложная [8, 9]. При переносе фрагмента Х-хромосомы с Х^ на аутосому и выборе его для инактивации неактивное состояние может распространяться на ау-тосомные гены, вызывая нарушения в количестве их продуктов. При этом также наблюдается избыток продуктов части Х-хромосомы, оставшейся без Х^. Поскольку в данном случае происходят нарушения дозы как аутосомных, так и Х-сцепленных генов, в организме против таких клеток идет сильный отбор. Следовательно, у самок, гетерозиготных по транслокации с Х-хромосомы на аутосому, Х-хромосома, вовлеченная в перестройку, обычно остается активной во всех клетках. Большинство женщин с подобными транслокациями не проявляют соматических аномалий, но могут быть стерильны [8, 9]. Кроме того, необходимо учитывать, что если при
I
смещенной инактивации, связанной с хромосомными перестройками, гены активной Х-хромосомы имеют мутации, вызывающие болезни, то они будут иметь полное проявление, поскольку нормальный аллель в большинстве клеток не экс-прессируется. Иногда точки разрывов, по которым происходят транслокации, могут находиться в генах Х-хромосомы. Учитывая, что в основном активной является Х-хромосома с перестройкой, нарушение функций генов, вовлеченных в разрыв, может приводить к развитию заболеваний.
При сбалансированных транслокациях между Х-хромосомой и аутосомой, в которых точки разрыва на Х-хромосоме находятся очень близко от одного из ее концов, часть клеток имеет перестроенную хромосому в качестве неактивной. В этом случае пациенты, как правило, имеют врожденные пороки развития, которые возникают из-за избыточной дозы генов концевого фрагмента Х-хромосомы [8, 9]. При несбалансированных транслокациях у пациентов инактивация транслоцированной Х-хромосомы может уменьшить потенциальный дисбаланс дозы генов, и отбор будет благоприятствовать этим клеткам. Тем не менее в данном случае у пациентов развиваются пороки развития из-за до-зовых нарушений, вызванных вовлечением в инактивацию генов аутосомы.
Еще один тип структурных аномалий X-хромосомы, имеющий значение для инактивации — кольцевые Х-хромосомы, которые формируются в результате особого типа делеций [10, 11]. Женщины, несущие кольцевую Х-хромосому, имеют задержку психического развития и множественные врожденные пороки. Было обнаружено, что в кольцевой Х-хромосоме локус XiC, содержащий ген XIST, может быть частично или полностью удален, следовательно, кольцевая Х-хромосома не может нормально инактивировать-ся, что, по-видимому, и является причиной различных нарушений развития у ее носителей.
Отклонения от случайной инактивации
и их роль в проявлении Х-сцепленных
болезней у женщин
Важным следствием феномена инактивации является то, что женщины, гетерозиготные по генам Х-хромосомы являются мозаиками, содержащими две популяции клеток, в которых активен либо один, либо другой аллель. Теоретически, у гетерозигот женского пола, несущих мутации Х-сцепленных генов, соотношение двух типов клеток должно быть примерно 50:50 [12]. Тем не менее в некоторых случаях наблюдаются отклонения от случайного характера инактивации, и это соотношение изменяется в пользу клеток, экспрессирующих либо нормальный, либо мутантный аллель (рис. 2). Поэтому смещенная инактивация у женщин может модулировать степень проявления болезней, вызываемых сцепленными с Х-хромосомой рецессивными и доминантными мутациями.
Тяжесть проявления заболеваний, сцепленных с Х-хромосомой, зависит от пола. Полные формы болезни проявляются преимущественно у мужчин, поскольку они гемизиготны по генам, локализованным на Х-хромосоме. Гетерозиготные женщины, как правило, здоровы если они являюся носителями рецессивной Х-сцепленной мутации. Если мутация гена Х-хромосомы имеет доминантное проявление, то у
гетерозиготных женщин болезнь проявляется в легкой форме. Гомозиготы как по рецессивным, так и по доминантным мутациям Х-хромосомы в большинстве случаев летальны. Смещенная инактивация, которая по оценкам выявляется у 22% женщин, может модулировать степень проявления болезней у гете-розигот по рецессивным и доминантным мутациям, сцепленным с Х-хромосомой.
А
Б
В
Рис. 2. Механизмы, приводящие к преимущественной инактивации одной из двух Х-хромосом:
А — случайная инактивация Х-хромосомы (материнская (голубая) и отцовская (синяя) Х-хромосомы равновероятно запускают экспрессию гена XIST и становятся неактивными; в тканях организма приблизительно 50% клеток имеют активной Х-хромосому, унаследованную от матери (голубой цвет), в оставшихся 50% — активна отцовская Х-хромосома (синий цвет)); Б — процесс инактивации идет случайным образом, однако имеющаяся на отцовской Х-хромосоме мутация (зеленая метка) при выборе данной Х-хромосомы в качестве активной снижает жизнеспособность клеток и приводит их к гибели, в результате ткани организма имеют активной только материнскую Х-хромосому; В — смещенный выбор Х-хромосомы для инактивации (мутация (зеленая метка) в гене XIST на материнской Х-хромосоме не позволяет запускать на ней ген XIST, поэтому она остается активной во всех клетках организма)
Преобладание клеток, экспрессирующих один из аллелей Х-хромосомы, может возникать по разным причинам [13]. Например, из-за того, что эмбрион в момент инициации инактивации состоит из сравнительно небольшого числа клеток, и для формирования той или иной ткани и органа случайным образом может быть задействована группа клеток, в которых активна только Х-хромосома с мутацией. Кроме того, это может быть связано с предпочтительным выбором одной из Х-хромосом для инактивации, или же является результатом позитивной и негативной селекции клеток.
Клеточная селекция возможна, когда клетки с активным мутантным Х-сцепленным геном имеют более медленную скорость деления или имеют низкую жизнеспособность. Подобная селекция обычно характерна для активно пролиферирующих типов клеток, таких, например, как клетки крови. Примеры селекции известны при синдроме Леша — Нихана и синдроме иммунодефицита Вискотта — Олдрича. В обоих случаях все лейкоциты гетерозиготных женщин имеют преимущественно активную Х-хромосому с нормальным аллелем, тогда как в фибробластах кожи есть смесь клеток обоих типов. У гетерозигот с другими заболеваниями селекция может происходить в клетках всех тканей. Это наблюдается, когда женщины являются носителями рецессивных летальных Х-сцепленных мутаций [14].
Неслучайная инактивация одной из Х-хромосом, связанная с ее предпочтительным выбором для инициации инактивации, встречается реже. Причиной этого могут быть мутации в промоторной области гена XIST, затрудняющие его активацию на одной из двух Х-хромосом, как это было обнаружено в двух семьях [15, 16]. В то же время известен случай, в котором генетически детерминированная причина неслучайного выбора Х-хромосомы для инактивации, по-видимому, находится за пределами локуса XIST [17].
Инактивация Х-хромосомы и аутоиммунные
заболевания
Аутоиммунным заболеваниям подвержены 5—10% населения, при этом в основном страдают женщины [18]. Соотношение больных женщин и мужчин различается в зависимости от заболевания. Так, мужчины и женщины в равной степени подвержены воспалительным заболеваниям кишечника и сахарному диабету типа 1, тем не менее женщины заболевают в два раза чаще, чем мужчины, рассеянным склерозом, в три раза чаще — ревматоидным артритом, и в 9—10 раз чаще — системной красной волчанкой, синдромом Шегрена и аутоиммунным тиреоидитом. Изначально предполагали, что причина склонности женщин к аутоиммунным заболеваниям связана с их гормональным статусом, однако в последнее время накапливаются данные о том, что риск развития болезней данной группы связан с феноменом инактивации Х-хромосомы. В пользу предположения о связи инактивации с аутоиммунными заболеваниями, в частности, свидетельствуют данные о том, что частота случаев системной красной волчанки у пациентов мужчин с синдромом Кляйнфельтера (47,XXY), имеющих одну дополнительную Х-хромосому, в четырнадцать раз выше, чем у нормальных мужчин (46, XY) [19, 20].
Вероятно, одной из причин аутоимунных заболеваний может быть реактивация генов на Xi. Реактивация неактивной Х-хромосомы, приводящая к повышению уровня X-сцепленных продуктов, может оказывать влияние на функционирование иммунной системы организма [21]. В результате реактивации Xi в клетках происходит общее увеличение уровня белка и РНК, что может служить причиной ошибок в механизмах распознавания собственных продуктов клетки и запуска аутоиммунных реакций. Общая концентрация белков в клетке, согласно эффекту Гиббса-Доннана, влияет на распределение ионов по клеточной мембране [22, 23]. Следовательно, нарушения в концентрации белка могут изменять мембранный потенциал клеток, что, в свою очередь, может негативно сказываться на различных зависящих от него процессах. Другой эффект от повышения концентрации белков может заключаться в уменьшении их растворимости, в результате чего в цитозоле и в окружении клеток могут формироваться нерастворимые белковые агрегаты, которые будут распознаваться иммунной системой как чужеродные [21]. Предполагают, что при реактивации Xi восстанавливать транскрипционную активность могут не только гены, но и диспергированные повторенные последовательности ДНК, такие как Alu1 и UNE1. Таким образом, среди причин, запускающих аутоиммунные заболевания при реактивации Xi, вероятно, может быть функциональная активность обратной транскриптазы UNE1 и обилие Alu РНК [24].
Существенный вклад в развитие аутоиммунных заболеваний, в частности системной красной волчанки, вносит дистальный район короткого плеча Х-хромосомы, где сосредоточены гены, избегающие инактивации, в том числе имеющие гомологи на Y-хромосоме [25]. В данном районе также расположен так называемый сайт ломкости FRAXB, в котором происходит задержка репликации, приводящая к повышенной частоте образования разрывов ДНК и утрате дистального района Xp.
Кроме того, отмечают, что несколько генов Х-хромосомы демонстрируют прямую связь с аутоиммунными заболеваниями. В ряде случаев развитие аутоиммунных заболеваний связано с наличием замен, инсерций/делеций или дупликаций в этих генах, что изменяет уровень их экспрессии или влияет на функцию их продуктов. Уровень экспрессии этих генов может изменяться также за счет эпигенетических модификаций хроматина, не вносящих изменений в последовательности ДНК. Один из генов Х-хромосомы, нарушение экспрессии которого вносит вклад в развитие системной красной волчанки, кодирует белок, связывающий метилированные CpG-динуклеотиды (MECP2) и подавляющий транскрипцию в районе связывания за счет привлечения деацетилаз гистонов [26, 27]. Уменьшение уровня мРНК MECP2 является результатом однонуклео-тидных замен вблизи гена, которые изменяют его экспрессию. Продукт другого гена, обозначенного IRAK1, взаимодействует с рецептором интерлей-кина 1 и активирует ядерный фактор NKAP, участвующий в инициации иммунного ответа. Одна из мутаций, S196F, изменяет структуру белка iRAKI, усиливая экспрессию NKAP, что значительно увеличивает риск развития системной красной волчанки [26]. Еще один геном, связанным с аутоиммунными заболеваниями, является CD40LG (или CD154), кодирующий мембранный белок, располагающийся
на поверхности CD4 активированных Т-клеток [28]. CD40LG связывается с рецептором CD40 на клетках, которые экспонируют чужеродный антиген в комплексе с молекулами главного комплекса ги-стосовместимости на своей поверхности, таких как макрофаги. Это взаимодействие CD40-CD40LG запускает активацию адаптивного иммунного ответа по отношению к антигену. При системной склеродермии наблюдается избыточная экспрессия CD40LG [29]. Механизм сверхэкспресии CD40LG еще не понятен, однако предполагают, что она происходит из-за реактивации CD40LG на неактивной Х-хромосоме, поскольку имеются сведения о гипометилировании данного гена в Т-клетках у пациентов с системной красной волчанкой [30]. Ген FOXP3, кодирующий ключевой транскрипционный фактор, участвующий в активации регуляторных Т-клеток, также считается имеющим отношение к некоторым аутоиммунным заболеваниям. FoxP3 — основной фактор для супрессии иммунного ответа. Мутации, встречающиеся в гене FOXP3, могут приводить к появлению аутореак-тивных лимфоцитов [31].
Отмечают, что риск развития аутоиммунных заболеваний существенно возрастает, если описанные выше нарушения дозовой компенсации и отдельных генов Х-хромосомы реализуются в нейтрофилах [24, 25].
Высказано предположение о том, что связь между дозовой компенсацией и аутоиммунными заболеваниями могла бы служить в процессе эволюции половых хромосом млекопитающих движущим фактором, который бы обеспечивал и контролировал вовлеченность генов Х-хромосомы в процесс инактивации [21].
Инактивация Х-хромосомы и онкологические
заболевания
На Х-хромосоме локализуются известные су-прессоры опухолей (CDC14B, CDK6, CNOT7, iDH1, iGFBP5, PCDH10, PLXNC1, RBBP4, STK4) и онкогены (BCL11A, CHD1L, FGFR1, FUS, FYN, RAB6B, RAB12, SOS1) [32]. Увеличение экспрессии онкогенов может быть обусловлено спонтанной реактивацией Х-хромосомы, вероятность которой увеличивается с возрастом. Неспособность супрессоров опухолей выполнять свои функции, как правило, связана с мутациями генов или их делециями на активной Х-хромосоме [33].
Отмечено, что повышенная экспрессия генов Х-хромосомы коррелирует с развитием злокачественных опухолей [34, 35]. В злокачественных опухолях различного происхождения обнаружена повышенная экспрессия следующих Х-сцепленных генов: MAGEA2, MAGEA6, CHP2; ACP5; AiF1, TCEAL3, L0C100131199 и LOC285965 [32, 33], что, предположительно, связано с реактивацией неактивной Х-хромосомы.
С развитием опухолей связан ряд генов, избегающих инактивации. Один из них кодирует рецептор GRPR, который является ростовым фактором клеток эпителия легкого. Наличие двух экспрессирующихся копий гена GRPR у женщин может быть фактором, увеличивающим предрасположенность к раку легких, индуцируемому курением [37]. Сверхэкспрессия генов, которые в норме избегают инактивации, может быть вовлечена в развитие лимфом. Показано, что в клетках лимфобластомы 53 гена Х-хромосомы имеют повышенный уровень экспрессии, при этом многие
из них избегают инактивации в нормальных клетках [38]. Предполагают, что гены, избегающие инактивации, могут иметь функции супрессоров опухолей, поскольку их утрата на одной из двух Х-хромосом у женщин может приводить к развитию широкого спектра опухолей яичников, а также агрессивных форм рака молочной железы [39, 40].
В клетках опухолей у мужчин и женщин нередко обнаруживается дупликация активной Х-хромосомы. Так, показано, что для спорадических форм базального рака молочной железы характерна дупликация активной Х-хромосомы, которая может в ряде случаев сопровождаться утратой неактивной Х-хромосомы [41]. Наличие дополнительной активной Х-хромосомы у женщин и мужчин также свойственно клеткам колоректального рака и рака прямой кишки [42, 43]. Увеличение дозы Х-сцепленных генов, включая наличие дополнительной активной Х-хромосомы или ее отдельных плеч и сегментов, наблюдается во многих типах солидных опухолей, а также при раке гематопоэтических клеток. По оценкам, сделанным на гепатобластомах, 43% опухолей связаны с наличием дополнительных фрагментов Хр, тогда как 60% опухолевых клеток имеют дополнительные участки Xq [44].
В малигнизации клеток могут быть задействованы сбалансированные и несбалансированные транслокации генетического материала Х-хромосомы на аутосому, и наоборот. Биаллельная экспрессия Х-сцепленных генов, повышающая уровень экспрессии онкогенов, встречается в опухолях при транслокации фрагмента Х-хромосомы, не содержащего Х^, на аутосому. Подобная реактивация фрагмента Xq, транслоцированного на хромосому 15, была обнаружена в линии клеток лимфобластомы от пациента с анемией Фанкони [45]. Кроме того, перенос Х^ на аутосомы или аутосомного материала на Х-хромосому под контроль Х^ потенциально способен инактивировать аутосомные гены супрессоры опухолей. Иллюстрацией подобного сценария может являться случай транслокации на неактивную Х-хромосому фрагмента аутосомы 13q, содержащего ген супрессор ретинобластомы (ИВ), контролирующий пролиферацию клеток [46]. Второй ген ИВ в данных клетках был неактивен из-за мутации. Отсутствие в клетках функционального ИВ было причиной конститутивной активности транскрипционного фактора E2F1, что вызывало аномальное деление клеток.
Нередко в опухолевых клетках снижается уровень метилирования геномной ДНК, за счет которого поддерживается стабильная инактивация Х-хромосомы. Таким образом, спонтанная реактивация генов Х-хромосомы может быть не только первопричиной малигнизации клеток, но и ее следствием [47]. Известны примеры, когда малигнизация клеток и нарушение в них процесса инактивации могут быть вызваны мутациями в генах аутосом. Так, мутации аутосомного гена ВИСА1, приводящие к развитию рака молочной железы и яичников, нарушают связывание РНК XIST с неактивной Х-хромосомой и вызывают реактивацию экспрессии генов [48]. Продукт гена ВИСА1 является Е3 убиквитинлигазой, которая отвечает за убиквитинирование топоизомеразы 11 альфа, тем самым усиливая ее способность к де-катенированию ДНК в гетерохроматиновых районах генома при репликации. Нарушения убиквитинирова-ния топоизомеразы 11 альфа приводят к нарушению
наследования в ряду клеточных поколений гетерохроматинового состояния отдельных районов генома, включая неактивную Х-хромосому, и, как следствие, происходит реактивация Хк Таким образом, в раковых клетках причиной реактивации неактивной Х-хромосомы могут быть нарушения, затрагивающие различные репрессирующие модификации хроматина и их стабильное наследование от клетки к клетке.
Еще одно интересное наблюдение, которое может иметь значение для связи процесса инактивации с раковой трансформацией клеток, состоит в том, что неактивная Х-хромосома в соматических клетках накапливает больше мутаций по сравнению с активной из-за неспособности к эффективной репарации повреждений ДНК [49].
Инактивация Х-хромосомы и плюрипотентные
стволовые клетки человека
Культуры плюрипотентных клеток человека (ПСК) получают из внутренней клеточной массы бласто-цисты (эмбриональные стволовые клетки, ЭСК), а также в результате перепрограммирования к плюри-потентному состоянию дифференцированных соматических клеток (индуцированные плюрипотентные стволовые клетки, ИПСК) [50]. В культуре ПСК человека характеризуются неограниченным потенциалом пролиферации и роста, а также поддерживают способность дифференцироваться во множество специализированных типов клеток и являются основным инструментом в фундаментальных и прикладных биомедицинских исследованиях, включая регенеративную медицину. Для применения ПСК человека в биомедицинских исследованиях и регенеративной медицине очень важно, чтобы плюрипотентные клетки, находящиеся в культуре, могли поддерживать и воспроизводить все генетические и эпигенетические процессы так же, как это происходит в раннем развитии, что в полной мере относится к феномену инактивации Х-хромосомы.
Однако ПСК человека 46,ХХ имеют разный эпигенетический статус Х-хромосом, который нестабилен и может изменяться в ходе культивирования [51, 52]. Лишь небольшое число линий ПСК человека поддерживают две активные Х-хромосомы и имеют способность к инактивации одной из них при дифференцировке. Большинство линий ПСК с кариотипом 46,ХХ демонстрируют инактивацию одной из двух Х-хромосом в плюрипотентном состоянии. Однако нормальное неактивное состояние Xi в культуре плюрипотентных клеток человека быстро деградирует или, как говорят, претерпевает эрозию. Состояние эрозии на неактивной Х-хромосоме (Хе) характеризуется необратимой утратой экспрессии гена XIST, а также связанного с ним Н3К27те3, снижением метилирования ДНК в промоторных районах и реактивацией ряда генов [4, 51—55]. Интересно, что при этом на неактивной Х-хромосоме может сохраняться факультативный гетерохроматин второго типа, включающий Н3К9те3. Эпигенетическое состояние Х-хромосомы с эрозией инактивации остается необратимым, оно передается в дифференцированные производные и сохраняется при их повторном репрограммировании к плюрипотентному состоянию. Заметные изменения наблюдаются лишь в транскрипции генов: в плюрипотентных клетках наблюдается экспрессия генов Хе практически по всей хромосоме, которая, тем не менее, значительно
снижена по сравнению с транскрипцией на активной Х-хромосоме, однако в дифференцированных производных детектируются преимущественно транскрипты активной Х-хромосомы, и лишь немногие гены остаются реактивированными на Хе. Нередко в культуре ПСК, особенно на ранних пассажах, могут одновременно существовать как клетки, имеющие две активные Х-хромосомы, так и клетки, в которых произошла инактивация Х-хромосомы и ее эрозия. Отмечают, что со временем доля клеток с эрозией Х-хромосомы в культурах ПСК человека увеличивается и может достигать 100%. Показано, что по сравнению с клетками, где присутствуют две активные Х-хромосомы, и клетками с нормальной неактивной Х-хромосомой, ПСК с эрозией инактивации, утратившие способность экспрессировать ген XIST, демонстрируют повышенный уровень экспрессии Х-сцепленных онкогенов и ряда других генов, характерных для раковых клеток. Очевидно, что на данном этапе нестабильный статус Х-хромосом в плюрипотентных клетках и негативные последствия, которые это может вызвать, являются одним из серьезных препятствий для применения ПСК человека и полученных из них дифференцированных производных в клинике для лечения пациентов. Поэтому исследователи пытаются найти способы управлять статусом Х-хромосом в ПСК.
Во многих исследованиях говорится о зависимости статуса Х-хромосом от условий культивирования ПСК человека и считается, что ряд из них способствует реактивации Xi и поддержанию двух активных Х-хромосом в плюрипотентных клетках. Так, показано, что в ИПСК, полученных с использованием трансгенных фидерных клеток линии 51\11_, продуцирующих на высоком уровне фактор ингибирования лейкоза (1^), отмечается высокая вероятность реактивации неактивной Х-хромосомы, чего не происходит при использовании обычного фидера [56]. В другой работе для получения линий ПСК человека с двумя активными Х-хромосомами исследователи использовали ингибиторы сигнальных путей дифференцировки, обеспечивающие повышенный уровень экспрессии 0^4 и ^4 (ингибитор Е1ГК1/2 - РШ325901, ингибитор GSK3 — СЫ1Т99021), регулятор экспрессии KLF4/KLF2 — форсколин, а также человека [57]. Сообщается также, что для возвращения активного статуса Х-хромосомам в линиях ПСК человека можно использовать ингибиторы гистоновых деацетилаз, бутират натрия и вариностат, после чего плюрипо-тентные клетки могут поддерживать две активные Х-хромосомы, если их культивировать с ингибиторами сигнальных путей РШ325901 и СЫН99021 [58]. Авторы еще одной работы обнаружили, что выращивание ПСК человека в присутствии хемокина СС12 усиливает экспрессию генов маркеров плюрипотент-ности посредством фосфорилирования транскрипционного фактора STAT3, активирует гены, связанные с гипоксией, способствует снижению экспрессии гена XIST, реактивации Xi и поддержанию активного состояния Х-хромосом [59]. Однако остается непонятным, действительно ли во всех приведенных работах наблюдалась реактивация Х-хромосомы или же авторы сообщают об эрозии процесса инактивации, для которого также характерна репрессия гена XIST, утрата связанных с ним репрессирующих модификаций хроматина и возобновление экспрессии генов с бывшей Хк Среди этих работ можно выделить серию исследований, которая посвящена получению
ПСК человека в условиях физиологической гипоксии. В одной из таких работ авторы все этапы получения и культивирования ЭСК проводили в условиях физиологической концентрации кислорода 5% вместо обычно используемых 20% [60]. Клетки в полученных линиях плюрипотентных клеток имели неактивный XIST, промотор которого был метилирован, и демонстрировали возможность запускать его экспрессию при изменении условий культивирования. Авторы другой работы, которые в исследовании, посвященном эрозии инактивации, использовали одну из линий ЭСК, полученную и поддерживаемую в условиях физиологической гипоксии, обнаружили, что к 25 пассажу эта линия имела нормальную инактивацию одной из двух Х-хромосом в большинстве клеток культуры [4]. Неактивное состояние Х-хромосомы в данной культуре подвергалось эрозии при ее культивировании в условиях обычной концентрации кислорода, тогда как оставалось нормальным в условиях физиологической гипоксии. При получении ИПСК в условиях c физиологической концентрацией кислорода реактивации Х-хромосомы не происходило, однако полученные линии стабильно поддерживали экспрессию гена XIST [52]. Результаты, полученные в этих работах, приводят к мысли, что в дальнейшем исследователям ПСК человека, вероятно, стоит не только искать возможность полностью реактивировать Х1, но также пытаться выявить условия для стабильного поддержания нормальной инактивации X-хромосомы в плюрипотентных клетках.
Удалось обнаружить, что причиной эрозии может являться возобновление экспрессии с неактивной Х-хромосомы некодирующей РНК XACT, которая в норме в плюрипотентных клетках распространяется по активным Х-хромосомам и, по-видимому, локализуется в тех же локусах, что и XIST на Xi [4]. Предполагают, что при эрозии XACT РНК способствует вытеснению XIST РНК с Xi, что влечет за собой утрату
ЛИТЕРАТУРА:
1. Lyon M.F. X-chromosome inactivation and human genetic disease. Acta Paediatr. Suppl. 2002; 91(439): 107-12.
2. Migeon B.R. X inactivation, female mosaicism, and sex differences in renal diseases. J. Am. Soc. Nephrol. 2008; 19(11): 2052-9.
3. Vallot C., Huret C., Lesecque Y. et al. XACT, a long noncoding transcript coating the active X chromosome in human pluripotent cells. Nat. Genet. 2013; 45(3): 239-41.
4. Vallot C., Ouimette J.F., Makhlouf M. et al. Erosion of X Chromosome Inactivation in Human Pluripotent Cells Initiates with XACT Coating and Depends on a Specific Heterochromatin Landscape. Cell Stem Cell 2015; 16(5): 533-46.
5. Chadwick B.P., Willard H.F. Multiple spatially distinct types of facultative heterochromatin on the human inactive X chromosome. PNAS USA 2004; 101(50): 17450-5.
6. Carrel L., Willard H.F. X-inactivation profile reveals extensive variability in X-linked gene expression in females. Nature 2005; 434(7031): 400-4.
7. Dementyeva E.V., Shevchenko A.I., Zakian S.M. X-chromosome upregulation and inactivation: two sides of the dosage compensation mechanism in mammals. Bioessays 2009; 31(1): 21-8.
8. Schluth C., Cossee M., Girard-Lemaire F. et al. Phenotype in X chromosome rearrangements: pitfalls of X inactivation study. Pathol. Biol. 2007; 55(1): 29-36.
9. Schmidt M., Du Sart D. Functional disomies of the X chromosome influence the cell selection and hence the X inactivation pattern in females with balanced X-autosome translocations: a review of 122 cases. Am. J. Med. Genet. 1992; 42(2): 161-9.
10. Migeon B.R., Luo S., Jani M., Jeppesen P. The severe phenotype of females with tiny ring X chromosomes is associated with inability of these chromosomes to undergo X inactivation. Am. J. Hum. Genet. 1994; 55(3): 497-504.
11. Leppig K.A., Disteche C.M. Ring X and other structural X chromosome abnormalities: X inactivation and phenotype. Semin. Reprod. Med. 2001; 19(2): 147-57.
XIST РНК-зависимых репрессирующих модификаций и реактивацию генов.
Необходимо подчеркнуть, что нарушения эпигенетического ландшафта плюрипотентных клеток могут иметь серьезные негативные последствия для их дифференцированных производных, поэтому мониторинг эпигенетического состояния ПСК человека, включая эпигенетический статус Х-хромосом является важным шагом на пути их терапевтического применения.
Область исследований, посвященных связи феномена инактивации Х-хромосомы с заболеваниями человека активно развивается. Имеются данные, что нарушение инактивации может быть задействовано при синдроме преждевременного старения [61]. Получены сведения, что ответ раковых клеток на химиотерапевтическое лечение может зависеть от экспрессии в них гена XIST [62]. Показано, что развитие заболеваний может быть связано не только с отсутствием на Xi экспрессии XIST, но и с его сверхэкспрессией [63]. Предпринимались попытки использовать центр инактивации и ген XIST для устранения нарушений дозы генов при трисомии по хромосоме 21 у больных с синдромом Дауна [64]. Обсуждается возможность использования клеточных популяций, экспрессирующих нормальный аллель Х-хромосомы, для лечения больных с Х-сцепленными мутациями [65]. Таким образом, в ближайшем будущем мы можем ожидать от исследований процесса инактивации как новых важных для медицины результатов о механизмах формирования болезней, так и разработки неожиданных терапевтических подходов.
Благодарности
Работа поддержана грантом РФФИ № 14-0400710 и бюджетным проектом Института цитологии и генетики СО РАН № 0324-2015-0003.
12. Van den Veyver I.B. Skewed X inactivation in X-linked disorders. Semin. Reprod. Med. 2001; 19(2): 183-91.
13. Belmont J.W. Genetic control of X inactivation and processes leading to X-inactivation skewing. Am. J. Hum. Genet. 1996; 58(6): 1101-8.
14. Pegoraro E., Whitaker J., Mowery-Rushton P. et al., Familial skewed X inactivation: a molecular trait associated with high spontaneous-abortion rate maps to Xq28. Am. J. Hum. Genet. 1997; 61(1): 160-70.
15. Pugacheva E.M., Tiwari V.K., Abdullaev Z. et al. Familial cases of point mutations in the XIST promoter reveal a correlation between CTCF binding and pre-emptive choices of X chromosome inactivation. Hum. Mol. Genet. 2005; 14(7): 953-65.
16. Plenge R.M., Hendrich B.D., Schwartz C. et al. A promoter mutation in the XIST gene in two unrelated families with skewed X-chromosome inactivation. Nat. Genet. 1997; 17(3): 353-6.
17. Naumova A.K., Plenge R.M., Bird L.M. et al. Heritability of X chromosome-inactivation phenotype in a large family. Am. J. Hum. Genet. 1996; 58(6): 1111-9.
18. Invernizzi P., Pasini S., Selmi C. et al. Female predominance and X chromosome defects in autoimmune diseases. J. Autoimmun. 2009; 33(1): 12-6.
19. Scofield R.H., Bruner G.R., Namjou B. et al. Klinefelter's syndrome (47,XXY) in male systemic lupus erythematosus patients: support for the notion of a gene-dose effect from the X chromosome. Arthritis Rheum. 2008; 58(8): 2511-7.
20. Sawalha A.H., Harley J.B., Scofield R.H. Autoimmunity and Klinefelter's syndrome: when men have two X chromosomes. J. Autoimmun. 2009; 33(1): 31-4.
21. Forsdyke D.R. X chromosome reactivation perturbs intracellular self/not-self discrimination. Immunol. Cell Biol. 2009; 87(7): 525-8.
22. Hitchcock D.I. Proteins and the Donnan equilibrium. Physiol. Rev. 1924; 4(3): 505-31.
23. Kurbel S. Are extracellular osmolality and sodium concentration determined by Donnan effects of intracellular protein charges and of pumped sodium? J. Theor. Biol. 2008; 252(4): 769-72.
24. Brooks W. A commentary on types of DNA methylation status of the interspersed repetitive sequences for LINE-1, Alu, HERV-E and HERV-K in the neutrophils from systemic lupus erythematosus patients and healthy controls. J. Hum. Genet. 2014; 59(4): 174-5.
25. Brooks W.H., Renaudineau Y. Epigenetics and autoimmune diseases: the X chromosome-nucleolus nexus. Front Genet. 2015; 6: 22.
26. Kaufman K.M., Zhao J., Kelly J.A. et al. Fine mapping of Xq28: both MECP2 and IRAKI contribute to risk for systemic lupus erythematosus in multiple ancestral groups. Ann. Rheum. Dis. 2013; 72(3): 437-44.
27. Sawalha A.H. Overexpression of methyl-CpG-binding protein 2 and autoimmunity: evidence from MECP2 duplication syndrome, lupus, MECP2 transgenic and Mecp2 deficient mice. Lupus 2013; 22(9): 870-2.
28. Banchereau J., Bazan F., Blanchard D. et al. The CD40 antigen and its ligand. Ann. Rev. Immunol. 1994; 12: 881-922.
29. Lian X., Xiao R., Hu X. et al. DNA demethylation of CD40l in CD4+ T cells from women with systemic sclerosis: a possible explanation for female susceptibility. Arthritis Rheum. 2012; 64(7): 2338-45.
30. Dekker R.J., van Soest S., Fontijn R.D. et al. Prolonged fluid shear stress induces a distinct set of endothelial cell genes, most specifically lung Krüppel-like factor (KLF2). Blood 2002; 100(5): 1689-98.
31. Kim H.P., Leonard W.J. CREB/ATF-dependent T cell receptor-induced FoxP3 gene expression: a role for DNA methylation. J. Exp. Med. 2007; 204(7): 1543-51.
32. Higgins M.E., Claremont M., Major J.E. et al. CancerGenes: a gene selection resource for cancer genome projects. Nucleic Acids Res. 2007; 35(Database issue): D721-6.
33. Spatz A., Borg C., Feunteun J. X-chromosome genetics and human cancer. Nat. Rev. Cancer 2004; 4(8): 617-29.
34. Richardson A.L., Wang Z.C., De Nicolo A. et al. X chromosomal abnormalities in basal-like human breast cancer. Cancer Cell 2006; 9(2): 121-32.
35. Pageau G.J., Hall L.L., Ganesan S. et al. The disappearing Barr body in breast and ovarian cancers. Nat. Rev. Cancer. 2007; 7(8): 628-33.
36. Rogner U.C., Wilke K., Steck E. et al. The melanoma antigen gene (MAGE) family is clustered in the chromosomal band Xq28. Genomics 1995; 29(3): 725-31.
37. Shriver S.P., Bourdeau H.A., Gubish C.T. et al. Sex-specific expression of gastrin-releasing peptide receptor: relationship to smoking history and risk of lung cancer. J. Natl. Cancer Inst. 2000; 92(1): 24-33.
38. Sudbrak R., Wieczorek G., Nuber U.A. et al. X chromosome-specific cDNA arrays: identification of genes that escape from X-inactivation and other applications. Hum. Mol. Genet. 2001; 10(1): 77-83.
39. Cheng .PC., Gosewehr J.A., Kim T.M. et al. Potential role of the inactivated X chromosome in ovarian epithelial tumor development. JNCI J. Nat. Cancer Inst. 1996; 88(8): 510-8.
40. Piao Z., Lee K.S., Kim H. et al. Identification of novel deletion regions on chromosome arms 2q and 6p in breast carcinomas by amplotype analysis. Genes Chromosomes Cancer 2001; 30(2): 113-22.
41. Wang N., Cedrone E., Skuse G.R. et al. Two identical active X chromosomes in human mammary carcinoma cells. Cancer Genet Cytogenet. 1990; 46(2): 271-80.
42. Muleris M., Dutrillaux A.M., Salmon R.J., Dutrillaux B. Sex chromosomes in a series of 79 colorectal cancers: Replication pattern, numerical, and structural changes. Genes Chromosomes Cancer. 1990; 1(3): 221-7.
43. Dutrillaux B., Muleris M., Seureau M.G. Imbalance of sex chromosomes, with gain of early-replicating X, in human solid tumors. Int. J. Cancer 1986; 38(4): 475-9.
44. Terracciano L.M., Bernasconi B., Ruck P. et al. Comparative genomic hybridization analysis of hepatoblastoma reveals high frequency of X-chromosome gains and similarities between epithelial and stromal components. Hum. Pathol. 2003; 34(9): 864-71.
45. Kokalj-Vokac N., Saint-Ruf C., Lefrançois D. et al. A t(X;15) (q23;q25) with Xq reactivation in a lymphoblastoid cell line from Fanconi anemia. Cytogenet. Cell Genet. 1991; 57(1): 11-5.
46. Jones C., Booth C., Rita D. et al. Bilateral retinoblastoma in a male patient with an X; 13 translocation: evidence for silencing of the RB1 gene by the spreading of X inactivation. Am. J. Hum. Genet. 1997; 60(6): 1558-62.
47. Hake S.B., Xiao A., Allis C.D. Linking the epigenetic "language" of covalent histone modifications to cancer. Br. J. Cancer 2004; 90(4): 761-9.
48. Lou Z., Minter-Dykhouse K., Chen J. BRCA1 participates in DNA decatenation. Nat. Struct. Mol. Biol. 2005;12(7): 589-93.
49. Jäger N., Schlesner M., Jones D.T.W. et al. Hypermutation of the inactive X chromosome is a frequent event in cancer. Cell 2013; 155(3): 567-81.
50. Medvedev S.P., Shevchenko A.I., Zakian S.M. Induced Pluripotent Stem Cells: Problems and Advantages when Applying them in Regenerative Medicine. Acta Naturae 2010; 2(2): 18-28.
51. Silva S.S., Rowntree R.K., Mekhoubad S., Lee J.T. X-chromosome inactivation and epigenetic fluidity in human embryonic stem cells. PNAS USA 2008; 105(12): 4820-5.
52. Anguera M.C., Sadreyev R., Zhang Z. et al. Molecular signatures of human induced pluripotent stem cells highlight sex differences and cancer genes. Cell Stem Cell 2012; 11(1): 75-90.
53. Shen Y., Matsuno Y., Fouse S.D. et al. X-inactivation in female human embryonic stem cells is in a nonrandom pattern and prone to epigenetic alterations. PNAS USA 2008; 105(12): 4709-14.
54. Hall L.L., Byron M., Butler J. et al. X-inactivation reveals epigenetic anomalies in most hESC but identifies sublines that initiate as expected. J. Cell Physiol. 2008; 216(2): 445-52.
55. Mekhoubad S., Bock C., de Boer A.S. et al. Erosion of dosage compensation impacts human iPSC disease modeling. Cell Stem Cell 2012; 10(5): 595-609.
56. Tomoda K., Takahashi K., Leung K. et al. Derivation conditions impact X-inactivation status in female human induced pluripotent stem cells. Cell Stem Cell 2012; 11(1): 91-9.
57. Hanna J., Cheng A.W., Saha K. et al. Human embryonic stem cells with biological and epigenetic characteristics similar to those of mouse ESCs. PNAS USA 2010; 107(20): 9222-7.
58. Ware C.B., Wang L., Mecham B.H. et al. Histone deacetylase inhibition elicits an evolutionarily conserved self-renewal program in embryonic stem cells. Cell Stem Cell 2009; 4(4): 359-69.
59. Hasegawa Y., Tang D., Takahashi N. et al. CCL2 enhances pluripotency of human induced pluripotent stem cells by activating hypoxia related genes. Sci. Rep. 2014; doi:10.1038/srep05228.
60. Lengner C.J., Gimelbrant A.A., Erwin J.A. et al. Derivation of pre-X inactivation human embryonic stem cells under physiological oxygen concentrations. Cell 2010; 141(5): 872-83.
61. Shumaker D.K., Dechat T., Kohlmaier A. et al. Mutant nuclear lamin A leads to progressive alterations of epigenetic control in premature aging. PNAS USA 2006; 103(23): 8703-8.
62. Huang K.-C., Rao P.H., Lau C.C. et al. Relationship of XIST expression and responses of ovarian cancer to chemotherapy. Mol. Cancer Ther. 2002; 1(10): 769-76.
63. Ji B., Higa K.K., Kelsoe J.R., Zhou X. Over-expression of XIST, the master gene for X chromosome inactivation, in females with major affective disorders. EBioMedicine 2015; 2(8): 907-16.
64. Jiang J., Jing Y., Cost G.J. et al. Translating dosage compensation to trisomy 21. Nature 2013; 500(7462): 296-300.
65. Tchieu J., Kuoy E., Chin M.H. et al. Female human iPSCs retain an inactive X chromosome. Cell Stem Cell 2010; 7(3): 329-42.
Поступила: 20.02.2016
