CC BY
22
увеличением среднесуточного и абсолютного привесов на 6,8 и 11,4%, соответственно по сравнению с контролем, а также увеличением убойного выхода на 2,5-4,8%. Проведенная ветеринарно-санитарная экспертиза показала, что мясо по органолептическим, физико-химическим и микроскопическим показателям соответствует требованиям действующих стандартов, предусмотренных для доброкачественного мяса здоровых животных.
MEAT PRODUCTIVITY AND VETERINARY-SANITARY EXPERTISE OF MEAT BULLES AT APPLICATION «YANTOVET» PREPARATION
Gracheva O.A, Yakupova L.F, Mukhutdinova D.M Summary
Intramuscular triple application of the drug «Yantovet», containing succinic acid and organic phosphorus compound, in doses of 10 and 15 ml, promoted the increase in meat production of bull-calves, which was expressed by an increase in the average daily and absolute weight gain by 6,8 and 11,4%, respectively, compared with the control , as well as an increase in slaughter yield by 2,5-4,8%. The veterinary-sanitary examination carried out showed that the meat according to organoleptic, physicochemical and microscopic parameters corresponds to the requirements of the current standards for benign meat of healthy animals.
УДК:619:576.809.33:616.98-097
ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА РЕПРОДУКЦИЮ ВИРУСОВ В КУЛЬТУРЕ
КЛЕТОК
Гумеров В.Г. - д.в.н., Каримуллина И.Г. - к.б.н., *Галиуллин А.К. - д.в.н., профессор, Плотникова Э.М. - д.б.н., Хаммадов Н.И. - к.б.н., Коннов М.Н. - к.в.н.
ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» *ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»
Ключевые слова: культура клеток, вирусная диарея, контаминация. антитела. Key words: culture of cell, viral diarrhea, contamination, antibodies.
Создание и производство вирусных вакцин с использованием культур клеток является одной из актуальнейших задач современной биотехнологии в период импортозамещения в нашей стране. Однако при промышленном культивировании вирусов неизбежны проблемы связанные с риском контаминации клеточных культур.
Существенным недостатком
клеточных культур, осложняющим их применение, особенно в производстве живых вакцин, является опасность их загрязнения вирусами, бактериями, грибами, дрожжами, микоплазмами и паразитами. Наиболее трудно выявить
контаминацию латентными вирусами и в частности вирусом вирусной диареи-болезни слизистых оболочек (ВД-БС), которые длительное время могут оставаться незамеченными в культуре [2,4].
В последние годы рядом авторов изучена биология ВД-БС КРС. Особенностью возбудителя является распространенность штаммов, способных индуцировать персистентную инфекцию, как в организме хозяина, так и в культурах клеток. В первом случае формируется стойкое неблагополучие стада по ВД-БС, во втором - скрытая контаминация клеточных линий, используемых в
биологической промышленности и лабораторной практике [1,6].
Материалом для загрязнения культур клеток является: исходный клеточный материал, сыворотка, питательная среда трипсин и посевной вирус, которые заранее необходимо проверить на чистоту.
В качестве одного из главных компонентов питательных сред для культивирования клеток обычно используются сыворотки крупных животных (КРС, лошади). Сыворотки рассматриваются как потенциальные источники инфекции (вирус диареи, вирусы репродуктивных и респираторных заболеваний КРС, представители герпесвирусов, аденовирусов, вируса лейкоза КРС). Поэтому требуется постоянный контроль производственных партий сывороток, так как в противном случае может возникнуть скрытая контаминация клеточных линий используемых в лабораторной практике и биологической промышленности при создании вакцинных препаратов. Вследствие этого культуральные живые вакцины, приготовленные с использованием некачественного сырья, могут быть потенциальным источником вируса ВД-БС для восприимчивых животных, а контаминированные диагностические антигены послужить причиной ложных результатов исследований [3].
Изготовление инактивированных концентрированных вакцин требует больших объемов вирусного сырья с выраженной антигенной активностью. Одним из факторов, влияющим на репродукцию вирусов в культуре клеток является наличие в сыворотке в высоких титрах антител, которые снижают инфекционную активность [5].
Поэтому важным этапом в исследовательских работах и производстве вакцин является система контроля, направленная на предотвращение биологического загрязнения.
Материалы и методы исследований. В опытах были использованы перевиваемые линии культуры клеток почки эмбриона коровы (МБВК), легкого эмбриона коровы (ЛЭК) и почки эмбриона сирийского хомячка (ВНК-21/13). Вирусы парагриппа-3 штамм «ПТК-45/86», инфекционного ринотрахеита штамм «ТК-(ВИЭВ)-В2» и вирусной диареи-болезни слизистых оболочек КРС штамм «ВК-1». Производственные серии №2 (2016 г.), №1 и №3 (2017 г.), №2 (2018 г.) сыворотки КРС для культивирования культуры клеток изготовленные в ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».
Наличие антител в сыворотках крови КРС к вирусу парагриппа-3 определяли в реакции торможения гемагглю-тинации (РТГА), к герпесвирусу типа 1 и вирусу вирусной диареи в реакции нейтрализации (РН).
Молекулярно-биологические исследования культур клеток на возможную контаминацию их герпесвирусом типа 1 проводили с использованием «Тест-системы «РИНОКОР» для выявления возбудителя инфекционного ринот-рахеита крупного рогатого скота» и вирусом диареи -«Тест-системой ВД для выявления возбудителя вирусной диареи КРС» методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекции в режиме реального времени.
Результаты исследований. На начальном этапе исследований были проведены опыты по выявлению возможных вирусных контаминантов в 3-х перевиваемых линиях культуры клеток (МОВК, ЛЭК и ВНК-21/13) методом ПЦР. Результаты проведенных исследований, представленные в таблице 1 показали, что культуры МБВК и ВНК-21/13 контами-нированы вирусом ВД-БС крупного рогатого скота. В связи с этим в дальнейших опытах использовали культуру клеток ЛЭК.
Таблица 1 - Результаты молекулярно-биологических исследований
№ п/п Название культуры клеток Герпесвирус-1 (ИРТ) Вирусная диарея
реакция концентрация/мл реакция концентрация/мл
1 MDBK - 0 + 1 х 106
2 ЛЭК - 0 - 0
3 BHK-21/13 - 0 + 2 х 104
Примечание: + - положительный результат;
- - отрицательный результат.
В таблице 2 представлены результаты серологических исследований 4-х производственных серий сыворотки крови КРС использованных для культивирования культур клеток.
Нами установлено, что во всех сериях присутствовали антитела к вирусу ПГ-3 в титрах 1:40 - 1:160 в РТГА и 1:4 -1:8 к герпесвирусу типа 1 в РН. При
постановке реакции нейтрализации на ВД-БС КРС только в одной (№3 - 2017 г.) из исследованных серий препарата не были выявены специфические антитела.
Следует также отметить, что эмбриональная сыворотка, которая служила контролем, была серонегативна ко всем 3-ем вирусным антигенам.
Таблица 2 - Результаты серологических исследований
№ п/п Номер серии, год изготовления сыворотки Титры антител
Парагрипп-3 в РТГА Герпесвирус-1 (ИРТ) в РН Вирусная диарея в РН
1 №2 - 2016 г. 1:160 1:8 1:4
2 №1 - 2017 г 1:40 1:8 1:8
3 №3 - 2017 г 1:80 1:4 0
4 №2 - 2018 г 1:40 1:4 1:2
5 Эмбриональная сыв-ка(контроль) 0 0 0
Результаты изучения инфекционной активности вирусов на культуре клеток ЛЭК выращенной с использованием вышеперечисленных серий сывороток КРС представлены в таблице 3.
Анализ проведенных исследований показал, что даже 2-3-х кратное промывание монослоя раствором Хенкса не полностью удаляет сывороточные антитела.
Таблица 3 - Инфекционная активность вирусов на культуре клеток ЛЭК (п=3, p<0,05)
№ п/п Номер серии, год изготовления сыворотки Инфекционный титр вируса ( ^ ТЦД 50/мл.)
Парагрипп-3 Герпесвирус-1 (ИРТ) Вирусная диарея
1 №2 - 2016 г. 5,4 ± 0,35 6,1 ± 0,32 5,5 ± 0,27
2 №1 - 2017 г 5,7 ± 0,24 6,2 ± 0,19 5,3 ± 0,31
3 №3 - 2017 г 5,6 ± 0,28 6,3 ± 0,23 5,6 ± 0,12
4 №2 - 2018 г 5,8 ± 0,16 6,3 ± 0,28 5,5 ± 0,22
5 Эмбриональная сыв-ка(контроль) 6,0 ± 0,10 6,5 ± 0,09 5,7 ± 0,10
Так инфекционный титр вирусов ПГ-3 был на 0,2 - 0,6 ^ ТЦД 50/мл, ИРТ -на 0,2 - 0,4 ^ ТЦД 50/мл и ВД-БС - на 0,1 - 0,4 ^ ТЦД 50/мл ниже по сравнению с вышеперечисленными вирусами, которыми инфицировали культуру клеток, выращенной на эмбриональной сыворотке.
Заключение. Таким образом, проведенными молекулярно-биологическими исследованиями установлена контаминация культур клеток MDBK и ВНК-21/13 вирусом ВД-БС крупного рогатого скота. Присутствие в производственных сериях сыворотки крови специфических антител способствовало снижению инфекционного титра вирусов ПГ-3, ИРТ и ВД-БС КРС. Учитывая вышеизложенное перед проведением лабораторных опытов, а также при изготовлении вакцинных и диагностических препаратов необходимо проводить строгий контроль производственных серий сывороток на вирусную и микоплазменную контаминацию, а также на наличие в них специфических антител к испытуемым штаммам микроорганизмов.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Алексеенкова, С.В. Проверка клеточных культур на контаминацию вирусом диареи крупного рогатого скота-необходимое условие производства биологических препаратов / С.В. Алексеен-кова, Г.К. Юров, ТВ. Гальнбек, И.А. Ка-
лита, К.П. Юров // РВЖ . - 2013.—№1.- С. 15-18.
2. Сергеев, В.А. Вирусы и вирусные вакцины / В.А. Сергеев, Е.А. Непоклонов, Т.И. Алипер // М.:Библионика,
2007.- 524 с.
3. Урываев, Л.В. О контаминации клеточных культур вирусом диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота (BVDV) / Л.В. Урываев, А.В. Дедова, Л.В. Дедова, К.С. Ионова, Н.А. Парасюк, Т.К. Селеванова, Н.И. Бунь-кова, Е.А. Гущина, Т.В. Гребенникова, Р.Я. Подчерняева // Бюллетень экспер. биол. и медиц. -2013. - Т. 153. -№1. -С. 88-93.
4. Castro, M.D. A method to detect bovine viral diarrhea virus contamination in cultures using immunoperoxidase staining/ M.D. Castro, W.C. Stoffregen, G.P. Bregman, K.A. Hillard // J. Diagn. Invest.-1997. -9: -P. 427-431.
5. Edwards, S. Bovine viral diarrhea virus / S. Edwards, A. Doyle, J.B. Griffith, D.G. Newell // Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures. - 1993.-7B (5). - P. 18.
6. Nagai, M. Identification of new genetic subtypes of bovine viral diarrhea virus genotype 1 isolates in Japan / M. Na-gai, M. Hayashi, M. Itou, T. Fukutomi, H. Akashi, H. Kida, Y. Sakoda// Virus Genes.-
2008. -36. -P. 135-139.
ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА РЕПРОДУКЦИЮ ВИРУСОВ В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК
Гумеров В.Г., Каримуллина И.Г., Галиуллин А.К., Плотникова Э.М., Хаммадов Н.И., Коннов М.Н.
Резюме
В статье представлены результаты исследований культуры клеток на вирусную контаминацию, а также влияние сывороточных антител на репродукцию вирусов.
Установлено, что две перевиваемые линии (MDBK и ВНК-21/13) культуры клеток контаминированы вирусом ВД-БС крупного рогатого скота. Наличие в производственных сериях сыворотки КРС специфических антител к вирусам ПГ-3, ИРТ и ВД-БС способствовало снижению их инфекционной активности при репродукции на культуре клеток ЛЭК на 0,1 - 0,6 lg ТЦД 50/мл.
FACTORS AFFECTING REPRODUCTION VIRUSES IN CELL CULTURE
Gumerov V. G., Karimullina I. G., Galiullin A.K., Plotnikova A.M., Xammadov N.I., Konnov M. N.
Summary
The article presents the results of studies of cell culture on viral contamination, as well as the effect of serum antibodies on the reproduction of viruses.
It has been established that two transfected lines (MDBK and BHK-21/13) of cell culture are contaminated with the virus of BD-BS of bovines. The presence of specific antibodies to the viruses PG-3, IRT and VD-BS in the production series of serum of cattle promoted a decrease in their infectious activity during reproduction on the culture of LEK cells by 0.1-0.6 lg TCD 50 / ml.
УДК 636.082: 636.22/28
ОЦЕНКА РЕМОНТНОГО МОЛОДНЯКА МЯСНЫХ ПОРОД СКОТА ПО СОБСТВЕННОЙ ПРОДУКТИВНОСТИ
Гумеров М.Б. - аспирант, Горелик О.В. - д.с/х.н., профессор ФГБОУ ВО «Уральский государственный аграрный университет»
Ключевые слова: ремонтные бычки, казахская белоголовая, аулиекольская, абердин-ангусская породы, собственная мясная продуктивность, оценка.
Key words: repair bull-calves Kazakh white-headed, auliekolskaya, Aberdeen-Angus, a private meat productivity, assessment.
Увеличение производства продукции животноводства, в том числе говядины приоритетная задача работников сельскохозяйственных предприятий [1-5]. В республике Казахстан исторически сложилась нагуле экстенсивная технология производства говядины путем нагула молодняка крупного рогатого скота на естественных пастбищах. Внедрение современных технологий производства продуктов животноводства, распахан-ность земель, смена приоритетов по разведению той или иной породы крупного рогатого скота, изменение структуры производства продукции животноводства привело к снижению поголовья молодняка для выращивания и откорма. Однако, увеличение спроса на качественную говядину, ее приоритет перед другими видами мяса ставят перед сельхозпроизводителями новые задачи как по увеличению производства, так и
повышению качества получаемой продукции [6-17].
Возможно это путем увеличения поголовья крупного рогатого скота мясных пород. В Казахстане в настоящий период около 7 млн. голов крупного рогатого скота и только чуть больше 6% приходится на мясной. При этом функционируют 81 племенных заводов и хозяйств по разведению мясного скота. В этих формированиях сосредоточено 72 тыс. племенных животных, в том числе 30 тыс. коров, что вполне обеспечивает потребности хозяйств-товаропро-
изводителей в получении необходимого для использования в воспроизводстве контингента быков. Однако спрос на маточное поголовье пока еще не удовлетворен, так как деятельность многих племенных хозяйств направлена на увеличение численности поголовья в собственных стадах, и они не располагают сверхремонтными тел-
