CC BY
13© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014
Л.Г.Горина, И.В.Раковская, О.И.Бархатова, С.А.Гончарова
ЭТИОЛОГИЧЕСКАЯ РАСШИФРОВКА ВСПЫШКИ ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ ПНЕВМОНИИ, ВЫЗВАННОЙ MYCOPLASMA PNEUMONIAE
НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, Москва
Цель. Использование комплекса методов для этиологической расшифровки острой респираторной инфекции. Материалы и методы. От 35 пациентов с ОРЗ были получены клинические образцы сыворотки крови, смывов из носоглотки и образцы мокроты. Для культивирования M. pneumoniae использовали среду «Difco PPLO Broth». В исследованиях применяли методы РАГА, РИФ, ПЦР, ИФА. Результаты. Результаты исследования показали, что антигены М. рneumoniae в пробах сыворотки крови были обнаружены в РАГА у 32 пациентов, а специфические антитела классов G и M — в 21 и 18 случаях соответственно. Одновременное обнаружение IgG и IgM зарегистрировано у 14 больных. ДНК клеток М. pneumoniae была обнаружена в 10 пробах сыворотки крови из 20. Из сыворотки крови 8 больных (4 с пневмонией, 4 с ОРЗ) были выделены циркулирующие иммунные комплексы и методом прямой РИФ в них были обнаружены антигены М. pneumoniae. Исследование мокроты и мазков из носоглотки в РИФ показало, что из 35 образцов в 29 пробах были обнаружены антигены M.pneumoniae. В 12 образцах мазков из 15 методом ПЦР была обнаружена ДНК M. pneumoniae. В десяти случаях совпали результаты выявления как антигенов в РИФ, так и ДНК в ПЦР. Результаты анализа всего клинического материала показали, что у 33 пациентов из 35 положительные результаты совпадали в двух или трех, а в некоторых случаях и в четырех использованных методах лабораторного исследования. Заключение. Использование комплекса диагностических тестов значительно повышает достоверность результатов исследований, а определение специфических антител дает возможность определить сроки заболевания.
Журн. микробиол., 2014, № 6, С. 117—120
Ключевые слова: Mycoplasma pneumoniae, пневмония, антигены, антитела, ЦИК, РАГА, ПЦР, РИФ, ИФА
L.G.Gorina, I.V.Rakovskaya, O.I.Barkhatova, S.A.Goncharova
ETIOLOGIC DECIPHERING OF COMMUNITY-ACQUIRED PNEUMONIA CAUSED BY MYCOPLASMA PNEUMONIAE
Gamaleya Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Moscow, Russia
Aim. Use of a complex of methods for etiologic deciphering of an acute respiratory infection. Materials and methods. Clinical samples of blood sera, nasopharynx washes and sputum were obtained from 35 patients with acute respiratory disease (ARD). «Difco PPLO Broth» was used for M. pneumoniae cultivation. AHR, IFR, PCR, IFA were used in the study. Results. Results of the study have shown that M. pneumoniae antigens in blood sera samples were detected in AHR in 32 patients, and specific G and M class antibodies — in 21 and 18 cases, respectively. Simultaneous detection of IgG and IgM was registered in 14 patients. M. pneumoniae cell DNA was detected in 10 of 20 blood sera samples. Circulating immune complexes were isolated from blood sera of 8 patients (4 with pneumonia, 4 with ARD) and M. pneumoniae antigens were detected in them by using direct IFR. IFR study of sputum and nasopharynx smears has shown that M. pneumoniae antigens were detected in 29 of 35 samples. In 12 of 15 smear samples M. pneumoniae DNA was detected by PCR. In 10 cases results of antigen detection by IFR as well as DNA in PCR coincided. Results of analysis of all the clinical material have shown that in 33 of 35 patients positive results coincided for 2 or 3 and in some cases 4 of the laboratory study methods used. Conclusion. The use of diagnostic test complex significantly increases the accuracy of the study results, and detection of specific antibodies allows to determine disease period.
Zh. Mikrobiol. (Moscow), 2014, No. 6, P. 117-120
Key words: Mycoplasma pneumoniae, pneumonia, antigens, antibodies, CIC, AHR, IFR, PCR, IFA
Mycoplasma pneumoniae является основным возбудителем респираторного микоплаз-моза. В редких случаях другие виды микоплазм (Mycoplasma hominis, Mycoplasma fermen-tans, Mycoplasma penetrans) также могут являться причиной заболеваний респираторного тракта человека. Клиника респираторного микоплазмоза разнообразна: от здорового носительства до протекания в виде фарингита, трахеита, бронхита, а в отдельных случаях атипичных пневмоний различной степени тяжести. Доля внебольничных пневмоний, обусловленных М. pneumoniae, в разных возрастных группах колеблется от 15 до 30% от общего числа пневмоний. Наиболее часто респираторный микоплазмоз регистрируют среди детей школьного возраста, студентов и новобранцев. Инфекция носит пролонгированный характер, и носители нередко служат источником распространения возбудителя среди населения. М. pneumoniae передается воздушно-капельным путем, инкубационный период заболевания колеблется в пределах от одной до трех и даже 5 недель. Спорадические случаи микоплазмоза перемежаются с эпидемическими вспышками, которые возникают с 4 — 7-летним интервалом [5].
В письме Роспотребнадзора от 3 апреля 2013 г. № 01/3710-13-32 «О противоэпидемической работе в Российской Федерации в 2012 году» информируется о том, что в 2012 г. было зарегистрировано 6 эпидемических очагов внебольничных пневмоний, преимущественно микоплазменной этиологии. В январе 2012 г. Европейский центр профилактики и контроля заболеваний представил данные о росте в ряде европейских стран инфекции, обусловленной М. pneumoniae. Так, в течение осени, зимы 2011 г. и в начале 2012 г. увеличилось число эпидемических очагов в Чехии, Великобритании, Норвегии, Швеции, Дании, Финляндии и Нидерландах [6, 7, 10, 11].
Клинические признаки респираторных микоплазменных инфекций имеют много общего с респираторными заболеваниями и пневмониями вирусной и бактериальной этиологии, вследствие чего основная роль в этиологической расшифровке инфекции отводится лабораторной диагностике. Серологическая диагностика респираторного микоплазмоза основывается на последовательном выявлении в парных сыворотках крови специфических IgM и IgG, а 4-кратное увеличение титров IgG через две-три недели после начала заболевания (положительная сероконверсия) свидетельствует о микоплазменной природе инфекции. Для выявления специфических антител используют ИФА, который позволяет в динамике количественно определить уровень IgM и IgG и примерные сроки заболевания. В последние годы для выявления ДНК М. pneumoniae успешно применяют ПЦР и ПЦР в режиме реального времени.
Учитывая тот факт, что ни один из методов не доказал своей абсолютной надежности в выявлении инфекта, для диагностики микоплазменных инфекций желательно использовать комплекс методов. Цель работы — использование комплекса методов для этиологической расшифровки острой респираторной инфекции.
От тридцати пяти пациентов полузакрытого мужского коллектива (Московская область) с острыми респираторными заболеваниями было получено 35 образцов сыворотки крови, 15 смывов из носоглотки и 20 образцов мокроты. Диагнозы: тяжелое течение пневмонии (n=14), нетяжелое течение пневмонии (n=5), ОРЗ (n=15), острый бронхит (n=1).
Для культивирования М. pneumoniae (FH) использовали коммерческую питательную среду «Difco PPLO ВгоШ» с добавлением 20% сыворотки крови лошади и 1% глюкозы, пенициллина (1000 ед/мл). Для идентификации антигенов микоплазм в пробах сыворотки крови применяли реакцию агрегат-гемагглютинации (РАГА). Определение антигенов в составе циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), в смывах из носоглотки и в образцах мокроты проводили методом прямой иммунофлюоресценции (РИФ), выявление ДНК клеток микоплазм в клиническом материале — методом ПЦР, используя диагностический набор ООО «ИнтерЛабСервис». Для определения IgG и IgM к М. pneumoniae применяли ИФА. Постановку РАГА, ИФА, РИФ осуществляли по методикам [2 — 4].
Общие ЦИК выделяли из проб сыворотки крови по [8] путем преципитации их 3,5% по-лиэтиленгликолем (6000 Да).
Полученные результаты обрабатывали согласно общепринятому методу вариационной статистики.
Результаты комплексного исследования клинического материала, полученного от 35 больных с респираторной патологией, показали, что у 32 из них в пробах сыворотки крови в РАГА были обнаружены антигены М. pneumoniae. Специфические антитела классов G и M были выявлены в 21 и 18 случаях соответственно. Одновременное обнаружение иммуноглобулинов G и M зарегистрировано у 14 больных. В шести случаях антитела класса M были обнаружены в титрах от 1:800 до 1: 1600 (диагностический титр — 1:200) на фоне следовых количеств IgG (1: 100 при диагностическом титре — 1: 200), что может свидетельствовать о первичном иммунном ответе.
ДНК клеток М. pneumoniae была выявлена в 10 пробах сыворотки крови из 20 исследованных образцов, причем в пяти случаях это были пациенты с тяжелым течением пневмонии, остальные больные ОРЗ. В этой группе пациентов были отмечены положительные результаты определения антигенов микоплазм в РАГА, а также антител классов G и M. Из сыворотки крови 8 больных (4 с пневмонией, 4 с ОРЗ) были выделены циркулирующие иммунные комплексы и методом прямой РИФ в них были обнаружены антигены М. pneumoniae.
Исследование мокроты и мазков из носоглотки в РИФ показало, что из 35 образцов в 29 пробах были обнаружены антигены M.pneumoniae. У 12 больных из 15 обследованных методом ПЦР была обнаружена ДНК клеток M.pneumoniae. В десяти случаях совпали результаты выявления как антигенов в РИФ, так и ДНК в ПЦР.
Результаты анализа всего клинического материала (сыворотка крови, мазки из носоглотки и мокрота) показали, что из 35 обследованных больных с респираторной инфекцией у 33 пациентов положительные результаты совпадали в двух или в трех, а в некоторых случаях и в четырех использованных методах лабораторного исследования. Чаще всего в последнее время в лабораториях для выявления возбудителя применяют метод ПЦР в реальном времени, который дает информацию о присутствии ДНК клеток инфекционного агента. Однако ДНК клеток или ее фрагменты, а также антигены длительно сохраняются в организме больного и не дают четкого представления о длительности пер-систенции самого возбудителя [1, 3, 4]. Выявление специфических антител дает возможность определить сроки заболевания, что значительно повышает достоверность результатов исследований.
Данных о росте заболеваемости и эпидемических вспышках пневмоний, вызванных M. pneumoniae среди детей и взрослых в ряде европейских стран в 2010 — 2011 гг., по мнению Lenglet A. et.al. [9], занижены из-за проблем с диагностикой. Это связано с тем, что использование только современных стандартов диагностики на основе количественной модификации ПЦР не дает полной картины о широте распространения инфекции без применения других методов диагностики, в частности, определения антимикоплазменных антител в ИФА. Кроме того, микоплазменная инфекция часто носит субклинический характер и не регистрируется в амбулаторных условиях. Использование комплекса методов в этиологической расшифровке респираторных инфекций дает возможность более четко и своевременно поставить диагноз больному.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бархатова О.И., Балабанов Д.Н., Раковская И.В. Обнаружение «урогенитальных микоплазм» человека в сыворотке крови. Клиническая и лабораторная диагностика. 2008, 3: 49-51.
2. Горина Л.Г., Гончарова С.А., Игумнов А.В. Лабораторная диагностика микоплазмозов человека. Вестник акад. мед. наук СССР. 1991, 6: 44-47.
3. Горина Л.Г., Раковская И.В., Бархатова О.И. и др. Сохранение антигенов и ДНК урогенитальных микоплазм в составе циркулирующих иммунных комплексов. Журн. микробиол. 2009, 4: 85-88.
4. Горина Л.Г., Шершнева Н.Н., Балабанов Д.Н., Гончарова С.А. Персистенция микоплазм при респираторных и урогенитальных микоплазменных инфекциях. Эпидемиология и вакци-нопрофилактика. 2008, 1: 40-42.
5. Atkinson T.P., Balish M.F., Waites K.B. Epidemiology, clinical manifestations, pathogenesis and laboratory detection of Mycoplasma pneumoniae infections. FEMS Microbiol. Rev. 2008, 32 (6): 956-973.
6. Chalker VJ., Stocki T., Mentasti M. et al. Mycoplasma pneumoniae infection in primary careinves-tigated by real-time PCR in England and Wales. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2011, 30 (7): 915-921.
7. Dekeyser S., Bonnel C., Martinet A., Descamps D. Usefulness of PCR test for the management of a Mycoplasma pneumoniae outbreak in Bethune Hospital (Pas-de-Calais, France). Pathol. Biol. (Paris). 2011, 59 (2): 83-97.
8. Digeon M., Laver M., Riza J. Detection of circulating immune complexes in human sera by simlited assays with polyethylene glycol. J. Immunol. Meth. 1977, 16: 165-167.
9. Lenglet A., Herrador Z., Magiorakos A.P. et al. European Working Group on Mycoplasma pneumoniae surveillance. Rapid communications. Surveillance status and recent data for Mycoplasma pneumoniae infections in the European Union and European Economic Area. Euro Surveill. 2012, 17 (5) : pii=20075.
10. Uldum S.A., Bangsborg J.M., Gahrn-Hansen B. et al. Epidemic of Mycoplasma pneumoniae infection in Denmark, 2010 and 2011. Euro Surveill. 2012, 17 (5) : pii=20073.
11. Polkowska A., Harjunpää A., Toikkanen S. et al. Increased incidence of Mycoplasma pneumoniae infection in Finland, 2010 — 2011. Euro Surveill. 2012, 17 (5): pii=20072.
Поступила 27.02.14
Контактная информация: Горина Луиза Георгиевна,
123098, Москва, ул.Гамалеи, 18, .р.т. (499)190-43-68
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014
Т.Н.Ильичева1, А.Г.Дурыманов1, О.В.Петрова1, А.В.Епанчинцева1, Ю.С.Чухров2, Ю.А.Гарбуз3, И.В.Безгодов4, К.В.Булутов5, Г.С.Архипов6, С.С.Самарский7, В.Б.Зиатдинов8, В.Ю.Ананьев9, В.Н.Михеев1, А.Б.Рыжиков1
АНАЛИЗ ПОПУЛЯЦИОННОГО ИММУНИТЕТА ЖИТЕЛЕЙ СУБЪЕКТОВ РФ К СЕЗОННЫМ И ВЫСОКОПАТОГЕННЫМ ШТАММАМ ВИРУСА ГРИППА
1ГНЦ «Вектор», п. Кольцово Новосибирской области, 2Центр гигиены и эпидемиологии в Кемеровской обл., Кемерово; 3в Хабаровском крае, Хабаровск; 4в Иркутской обл., Иркутск; 5в Республике Бурятия, Улан-Удэ; 6в Республике Алтай, Горно-Алтайск; 7в Сахалинской обл., Южно-Сахалинск; 8в Республике Татарстан, Казань; 9в Приморском крае», Владивосток
Цель. Определение уровня антител к социально значимым типам/серотипам вируса гриппа в сыворотках людей, проживающих в различных регионах России. Материалы и методы. 1525 образцов сыворотки крови, собранные в августе—декабре 2013 года в восьми регионах РФ, исследовали в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с антигенами, полученными из штаммов вируса гриппа A/California/07/09 (H1N1)pdm09, А/ Victoria/361/2011(H3N2), B/Brisbane/60/2008 (Victoria line), B/Massachusetts/2/2012 (Yamagata line), A/Commongull/Chany/2006 (H5N1), A/Anhui/01/2013 (H7N9). Результаты. Ни в одном образце сыворотки крови не было значимых титров в РТГА с антигенами А/ Н5 и А/Н7. Из всех 1525 образцов 788 (52%) были положительны с антигеном A(H1N1) pdm09; 734 (48%) взаимодействовали с антигеном А (H3N2); 1010 (66%) образцов были положительны с антигеном B/Victoria и 602 (39%) образца положительны с антигеном В/ Yamagata. Заключение. Учреждениям здравоохранения следует обратить внимание на корректировку профиля популяционного иммунитета в регионах для снижения социально-экономических потерь от сезонных эпидемий гриппа.
Журн. микробиол., 2014, № 6, С. 120—123
Ключевые слова: вирус гриппа А, вирус гриппа В, сыворотки крови людей, реакция торможения гемагглютинации
