CC BY
8
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVI, №4, 2020
Дмитриев В. В.
Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь, Минск
ЭНДОГЕННЫЙ ПОТЕНЦИАЛ ТРОМБИНА И ТРОМБОЦИТОПЕНИЯ У ДЕТЕЙ С КРОВОТЕЧЕНИЕМ
Введение. Нет единого мнения, определяющего минимальное содержание тромбоцитов в крови, обеспечивающего защиту от кровотечения при синдроме системного воспалительного ответа (ССВО) у детей со злокачественными новообразованиями.
Цель исследования. Определить количественно минимальный гемостатический порог содержания тромбоцитов в крови на этапах химиотерапии детей со злокачественными новообразованиями.
Материал и методы. Обследовано 23 пациента (группа 1), имевших геморрагический синдром (легочное, носовое, желудочно-кишечное, кровотечение со слизистой рта). В группу включены пациенты, у которых тромбоцитопе-ния (менее 50-109/л) была одной из основных причин кровотечения. В качестве контроля обследован 21 пациент (группа 2) с аналогичным диагнозом, содержанием тромбоцитов менее 100-109/л, не имевших кровотечения и не получавших заместительной гемостатической терапии в течение суток, предшествовавших включению в исследование. Все обследованные имели признаки (ССВО) на инфекцию кровотока.
Венозную кровь стабилизировали 3,8 %-ным раствором цитрата натрия в соотношении 9:1. Стабилизированную цитратную кровь при температуре 20-22оС центрифугировали 5 минут 200g, после чего тромбоцитарную плазму переносили в пластиковую посуду. Подсчет тромбоцитов в периферической крови для каждого образца осуществляли на гематологическом анализаторе XN-3000 (производства SysmexGmbH, Japan) импедансным методом, используя оригинальные реагенты (SysmexGmbH). Эндогенный потенциал тромбина (ЭПТ) в тромбоцитарной плазме пациентов определяли методом Hemker на флюороскане Fluoroskanascent производства ThermoElectronсorporation (Maastricht, Netherlands), с использованием наборов реагентов фирмы ThrombinoscopeBV. На 96 луночном планшете ThrombinoscopeBV (Maastricht,
Netherlands) в каждые 4 лунки вносили по 80 мкл исследуемой тромбоцитарной плазмы. В первые 2 лунки добавляли 20 мкл реагента PRP (кат № TS42.00) содержащего смесь 0,5 рМ раствора тканевого фактора и фосфолипидов. Во вторые 2 лунки добавляли калибратор тромбина (кат № TS20.00). Реакцию инициировали после автоматического добавления на борту Fluoroskanascent 20 мкл смеси 2,5 мМ флуо-субстрата в 0,1 М растворе кальция хлорида (Набор FluCa, кат № TS50.00). Все манипуляции выполняли в соответствии с инструкцией к наборам реагентов и инструкцией по работе на Fluoroskanascent. Исследование свертывания включало: регистрацию турбидиметрическим методом хронометрических показателей и содержания плазменного фибриногена методом Claus автоматическим коагулометром ACL-9000 фирмы Instrumentation Laboratory (IL) с использованием оригинальных диагностических наборов фирмы IL.
Результаты исследования. Показатели свертывания крови у пациентов с кровотечением отличались от соответствующих значений контроля. У пациентов с кровотечением, несмотря на гипокоагуляционную направленность изменений, по сравнению с контролем, показатели плазменного звена свертывания не могли быть самостоятельной причиной кровотечения. Среди обследованных пациентов выявлена тесная корреляционная (коэффициент корреляции Спирмена — R) зависимость между увеличением R(AnTB) до 1,1 (0,85-1,6) (R = 0,44; p = 0,001), тромбоцитопенией 28,0 (11,0-52,0)-109/л (R = -0,49; p = 0,0001), снижением эндогенного потенциала тромбина тромбоцитарной плазмы до 133,0 (22,0-424,0) нМ/л-мин (R= -0,78; p = 0,000001), с одной стороны, и фактом кровотечения с другой стороны. У пациентов с кровотечением медиана содержания тромбоцитов в периферической крови составила 28,0-109/л, максимальное значение доверительного интервала (0,95 ДИ) — 37-109/л, а максимум достигал 55-109/л. У пациентов с кровотечением медиана ЭПТ тромбоцитарной плазмы составила 133,0
2-я научно-практическая
онлайн-конференция с международным участием «АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПАТОЛОГИИ ГЕМОСТАЗА»
нМ/л-мин, а максимальное значение доверительного интервала (0,95 ДИ) достигало 250,0 нМ/л-мин. Между содержанием тромбоцитов (Тр 109/л) периферической крови и ЭПТ тром-боцитарной плазмы выявлена зависимость, которую отражает уравнение регрессии: у = 19,4411 + (0,0447-х) + (2,9185-105)-х2 (1), где у — содержание тромбоцитов периферической крови (109/л), а х — ЭПТ нМ/л-мин. Зная минимальное пороговое значение ЭПТ, обеспечивающее гемостаз 250 нМ/л-мин можно рассчитать необходимое минимальное содер-
Санкт-Петербург 11 декабря 2020 г.
жание тромбоцитов в крови пациентов с ССВО. Например, минимальное содержание тромбоцитов в крови (у), обеспечивающее защиту от кровотечения составит: у= 19,4411 + (0,04472 5 0) +0,00 0 0 0 29 1 85- 2 5 02 = 32,44-109/л.
Выводы. В случае наличия признаков ССВО во время химиотерапии для защиты от кровотечения трансфузию тромбоцитов следует предусмотреть при снижении содержания тромбоцитов в крови менее 30-109/л, а в случае тромбоза отменить гепарин.
Дмитриев В. В.
Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь, Минск
ВЗАИМОСВЯЗЬ ЭНДОГЕННОГО ПОТЕНЦИАЛА ТРОМБИНА И СОДЕРЖАНИЯ ТРОМБОЦИТОВ В ТРОМБОЦИТАРНОЙ ПЛАЗМЕ
Введение. Нет единого мнения, регламентирующего величину терапевтической дозы низкомолекулярного гепарина (НМГ) у пациентов с тромбозом в случае тромбоцитопении.
Цель исследования. Изучить взаимосвязь между содержанием тромбоцитов и величиной эндогенного потенциала тромбина (ЭПТ) тромбоцитарной плазмы.
Материал и методы. После получения информированного согласия доноров на обследование перед предстоящей кровосдачей венозную кровь, полученную путем пункции периферической вены без наложения жгута, стабилизировали 3,8 %-ным раствором цитрата натрия в соотношении 9:1. Стабилизированную цитратную кровь при температуре 20-22оС центрифугировали 5 минут при 200g, после чего богатую тромбоцитами плазму переносили в пластиковую посуду. Оставшуюся часть крови центрифугировали при 2000g в течение 20 минут. Обедненную тромбоцитами плазму собирали в отдельную пластиковую посуду и использовали для приготовления серии разведений тромбоцитарной плазмы. Готовили разведения тромбоцитарной плазмы с содержанием тромбоцитов 5,0-109/л, 10,0-109/л, 20,0-109/л, 30,0-109/л, 40,0-109/л, 50,0-109/л, 60,0-109/л, 70,0-109/л, 100,0-109/л, 200,0-109/л. Подсчет тромбоцитов для каждого образца в серии осуществляли на гематологическом анализаторе XN-3000 (производства SysmexGmbH, Japan) им-
педансным методом, используя оригинальные реагенты (SysmexGmbH). Параллельно осуществляли контроль содержания тромбоцитов, используя микроскоп с фазовоконтрастной приставкой методом G. Brecheretal (1953). Эндогенный потенциал тромбина определяли методом Hemker на флюороскане Fluoroskanascent производства Thermo Electron ^rporation (Maastricht, Netherlands), с использованием наборов реагентов фирмы ThrombinoscopeBV. На 96 луночном планшете ThrombinoscopeBV (Maastricht, Netherlands) в каждые 4 лунки вносили по 80 мкл исследуемой, содержащей тромбоциты, плазмы. В первые 2 лунки добавляли 20 мкл реагента PRP (кат № TS42.00) содержащего смесь 0,5 рМ раствора тканевого фактора и фосфолипидов. Во вторые 2 лунки добавляли калибратор тромбина (кат № TS20.00). Реакцию инициировали после автоматического добавления на борту Fluoroskanascent 20 мкл смеси 2,5 мМ флуосубстрата в 0,1 М растворе кальция хлорида (Набор FluCa, кат № TS50.00). Для каждой серии разведений выполнено по 10 исследований. Результат представлен как медиана (25-й и 75-й процентили)
Результаты. Наименьшая способность к генерации тромбина 145,0 (130,0-178,0) нМ/ л-мин зарегистрирована в плазме, содержащей тромбоциты в концентрации 5,0-109/л. Наибольшая способность разведенной тромбоцитарной плазмы генерировать тромбин
