CC BY
96
hypertension in Siberian Federal District” // Atmosphera. Kardiologia. 2002. 4: 31-33.
3. Гайцхоки В.С. Взаимоотношение генотип - фенотип как проблема молекулярной генетики наследственных болезней человека // http: journal.issep.rssi.ru. (4 сентября 2006).
Gaitskhokki V.S. Interrelation genotype - phenotype as
the problem of molecular genetics of heritable diseases // http: journal.issep.rssi.ru. (4 September 2006).
4. Lahiri D.K., Bye S., Nunberg J.I. A non-organic and non-enzymatic extraction method gives higher yields of genomic DNA from whole-blood samples than do nine other methods used // J. Biochem. Biophis. Methods. 1992. 25: 193-205.
SOME MOLECULAR GENETIC PREDICTORS CONTROLLING DIFFERENT SECTIONS OF PATHOGENESIS BY ESSENTIAL ARTERIAL HYPERTENSION IN CHILDREN AND ADOLESCENTS OF BAIKAL REGION
Vladimir Valentinovich DOLGIKH, Lyubov’ Iljinichna KOLESNIKOVA, Tatyana Ananevna BAIROVA, Vladimir Anatolevich SHENIN, Igor Yurevich URYBIN,Elena Vladimirovna BELJAEVA
Russian Academy of Medical Sciences Siberian Branch, Scientific Centre of the Problems of Family Health and Human Reproduction, Irkutsk.
Variety of the complex of molecular-genetic markers involved in the pathogenesis of essential arterial hypertension: ACE, AGT, eNOS, Apo A1, ApoB 3' in Russian and native Buryat population of Baikal region was studied by PCR- method.
Key words: population, genetic markers, hypertension
Dolgikh V.V. - Doct. Med. Sci., professor, vice-director, e-mail: iphr@sbamsr.irk.ru Kolesnikova L.I. - Corr. Memb. RAMS, director Bairova T.A. - Cand. Med. Sci., vice-director
Shenin V.A. - Doct. Biol. Sci., head of lab. genetics and biochemical problems of ontogenesis Urybin I.Yu. - research worker of lab. genetics and biochemical problems of ontogenesis Beljaeva E.V. - post graduate student of lab. genetics and biochemical problems of ontogenesis
УДК 615.32:593.96+615.272+616.36-002
ЭКСТРАКТ ИЗ ДАЛЬНЕВОСТОЧНЫХ ВИДОВ ГОЛОТУРИЙ «ПЕНТАКАН» СНИЖАЕТ УРОВЕНЬ ПЕРОКСИДАЦИИ ЛИПИДОВ В МЕМБРАНАХ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И ВОССТАНАВЛИВАЕТ ГЕПАТОЦИТЫ У КРЫС ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ХРОНИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ
1Людмила Степановна ДОЛМАТОВА, 1Юрий Иванович ДОБРЯКОВ,
2Евгений Юрьевич ДОБРЯКОВ, 2Раиса Нурисламовна БОГДАНОВИЧ
Тихоокеанский океанологический институт им. В.И. Ильичева ДВО РАН, Владивосток 2Медицинское объединение ДВО РАН, Владивосток
Изучали действие экстракта из голотурий «Пентакан» (П) на оксидантную и антиоксидантную активности крови крыс при хроническом гепатите. Через 30 суток эксперимента тетрахлорметан (ТМ) не вызывал достоверных изменений продукции свободных радикалов в крови и уровня малонового диальдегида (МДА) в крови и эритроцитах, но значительно повышал концентрацию оксида азота. Показатели общей оксидантной и антиоксидантной активности крови не отличались от контрольных значений. Жировая дистрофия печени была умеренной. Введение П на фоне отравления ТМ приводило к достоверному снижению уровня МДА в эритроцитах по сравнению с действием одного ТМ и нормализовало состояние печени. По-видимому, гепатопротекторное действие П может быть связано как с его антиоксидантными, так и иммуномодулирующими свойствами.
Ключевые слова: гепатит, малоновый диальдегид, оксид азота, перекисное окисление липидов, экстракт из голотурий
Оригинальными методами экстракции из тканей дальневосточных видов голотурий был выделен комплекс биологически активных веществ, имеющий высокую антиоксидантную активность, по-видимому, обусловленную входящими в его состав каротиноидами и фосфолипидами [1]. Учитывая, что в патогенезе гепатитов различного происхождения ведущим звеном является нарушение оксидантно-антиоксидантного баланса и развитие оксидантного стресса [2], было предположено, что комплекс, получивший название «Пентакан», может оказать защитное действие при токсических поражениях печени.
Целью работы явилось изучение действия экстракта сухого из голотурий «Пентакан»ТМ на показатели оксидантной и антиоксидантной активности периферической крови крыс при экспериментальном хроническом гепатите.
В работе использовали крыс линии Wistar обоего пола массой 224±8 г. Животные были разделены на 4 группы по 5-6 в каждой. Первой группе животных (контрольные) вводили внутрибрюшинно физиологический раствор. Животным 2, 3, 4-й групп вводили внутрибрюшинно 2 раза в неделю тетрахлорме-тан (ТМ) в виде 50 %-го раствора в оливковом масле в дозе 1,0 мл/кг массы тела [2]. Через сутки после первого введения СС14 крысам 3-й группы начали вводить препарат сравнения - эссенциале Н («Sanofi-Aventis», Германия) в дозе 1,5 мл/кг 3 раза в неделю per os, 4-й группе - пентакан в дозе 6 мг/кг по той же схеме, что эссенциале. Через 14 суток от начала эксперимента забивали по одному животному из каждой группы, а через 30 суток - всех оставшихся животных.
Степень жировой дистрофии печени определяли по 5-балльной шкале (0-4 балла) [2]. Малоновый диальдегид (МДА) определяли в плазме крови [3] и эритроцитах [4]. Уровень оксида азота (N0) в сыворотке крови измеряли колориметрическим методом [4]. Общую оксидантную активность (ООА) и общую антиоксидантную активность (ОАА) определяли в сыворотке крови колориметрическим методом [4], модифицированным в лаборатории неспецифического иммунитета ТИБОХ ДВО РАН. Для оценки ООА в качестве красителя использовали пигмент плоского морского ежа - эхинохром, а ОАА измеряли по разрушению окислителя эхинохрома - хлорамина В.
Проведенные исследования показали, что через две недели от начала эксперимента в плазме кро-
ви крыс 2-й группы (получавшие ТМ) и 4 группы (ТМ+пентакан) имелась тенденция к снижению концентрации МДА по сравнению с контролем, однако отмеченные различия были недостоверны (рис. 1 а). Тенденция к снижению уровня МДА по сравнению с контролем у животных в 2-й группы сохранялась и через месяц, однако в группе 4 пентакан в этот период возвращал уровень МДА к контрольным значениям. Введение эссенциале нормализовало уровень МДА в оба срока исследования.
В эритроцитах, как и в плазме крови, уровень МДА под влиянием СС14 был незначительно снижен по сравнению с контролем в оба срока исследования (рис. 1 б). Эссенциале не оказывал влияния на эти сдвиги через 14 дней эксперимента, а через месяц отмечено даже достоверное снижение уровня МДА в группе 3 по сравнению с контролем. Пентакан (группа 4) через две недели опыта нормализовал уровень МДА, а через месяц снижал его уровень по сравнению с контролем на 27 %, еще в большей степени, чем ТМ или эссенциале ( в группах 2 и 3).
Показатели ООА (рис. 1 в) в экспериментальных группах не отличались достоверно от контроля в оба срока измерения.
Через 14 дней опыта ОАО (рис. 1 г) была, напротив, незначительно снижена в группах 2 и 3, а пен-такан нормализовал ее значение в группе 4. Через 30 дней опыта ОАО, как и ООА, была практически одинакова во всех группах.
Уровень свободных радикалов (рис. 1 д) через 2 недели эксперимента имел тенденцию к снижению по сравнению с контролем, а через четыре недели достоверно не отличался от контрольного во всех экспериментальных группах.
Тенденция к росту уровня N0 (рис. 1 е) отмечена во всех экспериментальных группах через 2 недели эксперимента, а к концу опыта установлен достоверный рост уровня этого показателя во всех экспериментальных группах по сравнению с контролем. При этом группы, получавшие эссенциале и пентакан, не отличались достоверно от группы, получавшей только тетрахлорметан.
Таким образом, установлено, что тетрахлорме-тан не оказывал достоверного влияния на активность перекисного окисления липидов (ПОЛ) (МДА в плазме и эритроцитах крови крыс, ООА и уровень свободных радикалов) или даже отмечалась тенденция к его снижению в разные сроки наблюдения. Не оказывал он влияния и на ОАО, или даже незна-
Долматова Л.С. - к.б.н., вед. н. с. лаб. биофизики, e-mail: dolmatova@poi.dvo.ru Добряков Ю.И. - к.б.н., вед. н. с. лаб. биофизики
Добряков Е.Ю. - к.м.н., зав. клинико-исследовательским центром «Амбулаторная гастроэнтерология и эндоскопические технологии»
Богданович Р.Н. - д.м.н., зав. лаб. медико-биологических исследований и технологий
Рис.1. Показатели оксидантно-антиоксидантного баланса крови крыс: контрольных животных (1), экспериментальных крыс при воздействии ТМ (2), при воздействии ТМ и эссенциале (3), при воздействии ТМ и пентакана (4) Примечание: а - уровень МДА в плазме крови, б - уровень МДА эритроцитов, в - уровень общей оксидантной активности, г - уровень общей антиоксидантной активности, д - концентрация свободных радикалов, е - концентрация оксида азота; незаштрихованные столбики - две недели эксперимента, заштрихованные столбики - четыре недели эксперимента; * - р < 0,05; ** - р < 0,01 по сравнению с контролем
чительно повышал ее (через две недели от начала эксперимента). По-видимому, это связано со слабой выраженностью повреждений печени в данном эксперименте по сравнению с контролем: гистологическими исследованиями в контроле установлена слабая, а при действии ТМ умеренная жировая дистрофия (1,25 и 2,2 балла, соответственно). Известно, что уровень ПОЛ зависит от степени выраженности
патологического процесса [5], и его максимальное увеличение отмечается при тяжелой степени гепатитов. При неосложненных формах острых гепатитов легкой степени отмечается даже снижение ПОЛ и активация АОА [6], что, по-видимому, связано с изменениями липидного состава, а именно с повышением уровня их легкоокисляющихся фракций (фосфолипидов), что обеспечивает стационарность
процессов ПОЛ.
Однако тетрахлорметан вызывал достоверный рост концентрации N0 по сравнению с его уровнем в контроле (в 1,4 раза). Сравнение различных показателей, характеризующих оксидантно-антиоксидантную систему крови крыс при хроническом гепатите, показывает, что рост N0 является наиболее достоверным показателем изменений в этой системе. Это соответствует данным о корреляции уровня оксида азота с выраженностью повреждений печени, но не биохимическими показателями, установленными у больных хроническим вирусным гепатитом С [7]. Повышение уровня N0 в случае умеренного хронического гепатита в настоящей работе, по-видимому, является компенсаторным и сопровождается снижением уровня МДА в эритроцитах и, по-видимому, в гепатоцитах. Известно, что N0 принадлежит важная роль в регуляции функционирования гепатобилиарного тракта [8], в том числе. через рецепторы провоспалительных цитокинов на поверхности гепатоцитов. При умеренных гепатитах он может снижать активность ПОЛ.
Вместе с тем, заслуживают внимания достоверные изменения уровня МДА в эритроцитах при действии пентакана, поскольку существует прямая корреляция между изменениями свойств мембран эритроцитов и цитоплазматических мембран гепа-тоцитов. Препарат через 30 сут от начала эксперимента снижал концентрацию МДА по сравнению с контролем даже в более значительной степени, чем эссенциале. При этом уровень жировой дистрофии снижался при действии пентакана до уровня ниже контрольного (1 балл), а в группе 3 он составил 0,7 балла. Таким образом, снижение уровня МДА в эритроцитах при действии обоих исследованных препаратов, по-видимому, отражает процессы стабилизации мембран гепатоцитов.
Предварительные исследования показывают, что в основе защитного действия пентакана могут лежать как непосредственно его антиоксидантные свойства, так и возможность модуляции им иммунного ответа организма, в частности, изменения функциональной активности лейкоцитов и уровня синтеза провоспалительного цитокина ИЛ-1а.
Таким образом, при умеренно выраженном экспериментальном хроническом гепатите, вызванном введением тетрахлорметана, отмечено отсутствие достоверных изменений оксидантно-антиоксидантного баланса периферической крови крыс по сравнению с контролем. Одним из механизмов сохранения баланса является, по-видимому, повышенная продукция оксида азота. Пентакан снижает уровень МДА в эритроцитах периферической крови по сравнению с контролем и группой, полу-
чавшей только тетрахлорметан и нормализует морфофункциональное состояние печени. Пентакан и препарат сравнения эссенциале оказывали на исследованные параметры оксидантной и антиоксидант-ной активности (уровень МДА в крови и эритроцитах, общая оксидантная и общая антиоксидантная активности, уровни свободных радикалов и оксида азота) сходное действие и в равной мере снижали жировую дистрофию печени, индуцированную тетрахлорметаном.
Представляются перспективными дальнейшие исследования пентакана как гепатопротектора.
Литература
1. Долматова Л.С., Тимченко Н.Ф., Стасенко Н.Я. Характеристика состава и медико-биологические исследования комплекса биологически активных веществ из дальневосточных видов голотурий II B кн.: Дальневосточные моря России I под ред. BA. Акуличева, B.H Че-ломина. Книга 2: Исследование морской экологии и биоресурсов. М.: Наука, 2007. 684-694.
Dolmatova L.S., Timchenko N.F., Stasenko N.Y. Characteristics of content and medico-biological investigations of biologically active substances from far-eastern species of sea cucumbers II In: Far-Eastern Seas of Russia I Eds. V.A. Akulichev, V.P. Chelomin. Book 2: Studies on marine ecology and bioresources. M.: Nauka, 2007. 684-694.
2. Ипатова О.М. Фосфоглив: механизм действия и применение в клинике. М.: Изд-во ГУ НИИ БМХ РАМН, 2005. 318 с.
Ipatova O.M. Phosphogliv: mechanism of action and clinical application. M.: Academician of RAMS, 2005. 318 p.
3. Buege J.A., Aust S.D. Microsomal lipid peroxidation II Methods in Enzymology. 1978. 52: 302-310.
4. Новгородцева Т.П., Эндакова Э.А., Янькова B.H Руководство по методам исследования параметров в системе «перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита» в биологических жидкостях. Bладивосток: Изд-во ДBГУ, 2003. 80 с.
Novgorodtseva T.P., Endakova E.A., Yan'kova V.I. Manual of research methods of parameters in system “lipid peroxidation-antioxidant defense” in biological fluids. Vladivostok: DVGU, 2003. 80 p.
5. Макаренко E.B., Козловский HB. Антиоксидантная система эритроцитов при хронических заболеваниях печени II Терапевт. арх. 1989. 61 (9): 115-118.
Makarenko E.V., Kozlovsky I.V. Antioxidant system of erythrocytes under chronic pathologies of liver II Therapevt. Arch. 1989. 61 (9): 115-118.
6. Дудник Л.Б., Bиксна Л.М., Майоре А.Я. Перок-сидное окисление липидов и его связь с изменением состава и антиокислительных свойств липидов при кома-тогенных формах острого вирусного гепатита B II Bопр. мед. химии. 2000. 46 (6): 46-52.
Dudnik L. B., Viksna L.M., Maiore A.Ya. Lipid peroxidation and its relation to changes in content and antioxidant properties of lipids under comatogenic forms of acute virus hepatitis B II Vopr. Med. Khim. 2000. 46 (6): 46-52.
7. Скляр Л.Ф. Синтез оксида азота у больных с манифестными и латентными формами хронического вирусного гепатита С // Успехи современного естествознания. 2003. 11: 87.
Sklyar L.F. Synthesis of nitric oxide in patients with manifest and latent forms of chronic virus hepatitis C // Achievements of modern natural science. 2003. 11: 87.
8. Sener A.G., Kirdar S., Serter M. et al. Investigation of
the relationship between serum nitric oxide levels, HBV-DNA and ALT levels in chronic hepatitis B patients // Mikrobiyol Bul. 2009. 43 (1): 83-89.
Работа выполнена при частичной поддержке грантом РФФИ-ДВО РАН № 08-04-99141
EXTRACT FROM FAR-EASTERN SPECIES OF SEA CUCUMBERS “PENTACAN” DECREASES THE LEVEL OF LIPID PEROXIDATION IN MEMBRANES OF PERIPHERAL BLOOD CELLS AND RECOVERS RAT HEPATOCYTES UNDER EXPERIMENTAL CHRONIC HEPATITIS
Liudmila Stepanovna DOLMATOVA, JYuriy Ivanovich DOBRYAKOV, 2Evgeniy Yurievich DOBRYAKOV, 2Raisa Nikolaevna BOGDANOVICH
1V. I. Il’ichev Pacific Oceanological Institute FEB RAS, Vladivostok 2 Medical association of FEB RAS, Vladivostok
The effects of the extract from sea cucumbers “Pentacan” (P) on oxidant and antioxidant activities in rat blood were studied under chronic hepatitis. In 30 days of experiment, carbon tetrachloride (CT) did not induce certain changes on generation of free radicals in blood and the level of malonic dialdehyde (MDA) in blood and erythrocytes, but significantly increased concentration of nitric oxide. Indices of integrated oxidant and antioxidant activities were similar to those in control. Fatty degeneration of liver was mild. P added together with TM significantly reduced MDA level in erythrocytes compared to TM alone and normalized liver functioning. Apparently, hepatoprotective effect of P is accounted for its both antioxidant and immunomodulating activities.
Keywords: hepatitis, malonic dialdehyde, nitric oxide, lipid peroxidation, extract from sea cucumbers
Dolmatova L.S. - Cand. Biol. Sci., lead. sci. employer of laboratory of biophizika, e-mail: dolmatova@poi.dvo.ru Dobryakov Yu.I. - Cand. Biol. Sci., lead. sci. employer of laboratory of biophizika
Dobryakov E.Yu. - Cand. Mwd. Sci., chief of Clinical and Research Center «Outpatient gastroenterology and endoscopic technologies»
Bogdanovich R.N. - Doct. Med. Sci., chief of laboratory of medico-biological research and technologies
УДК 612.11/. 12:616-053.5(71.61/. 64)
МИКРОЭЛЕМЕНТНЫЙ СТАТУС У ЗДОРОВЫХ ДЕТЕЙ ПРИАМУРЬЯ
Галина Петровна ЕВСЕЕВА, Владимир Кириллович КОЗЛОВ, Стефания Викторовна СУПРУН
Хабаровский филиал Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН -НИИ охраны материнства и детства
Представлены результаты исследования показателей элементного статуса сыворотки и форменных элементов крови у 1340 здоровых детей. Кластерный анализ позволил выделить группу детей с наиболее оптимальным соотношением содержания микроэлементов, что можно принять за норму для детей региона.
Ключевые слова: дети, микроэлементы, Приамурье
За последние годы накопилось значительное ния микроэлементов (МЭ) на обмен веществ. Важ-число исследований, посвященных изучению влия- ная роль МЭ в жизнедеятельности человеческого
Евсеева Г.П. - к.м.н., ученый секретарь, e-mail: iomid@yandex.ru
Козлов В.К. - д.м.н., чл.-корр. РАМН, директор
Супрун С.В. - к.м.н., вед. науч. сотр. группы мед. экологии
