CC BY
18
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ■
Н.Н. Зинин-Бермес, Н.А. Чернобай, Л.П. Осипова, В.А. Громова, О.П. Мещерикова, Р.Г. Сафронова, Н.Д. Антипова
Кемеровская государственная медицинская академия, МУЗ Городская клиническая инфекционная больница № 8, МУЗ Городская клиническая больница № 2,
г. Кемерово
ЭКСПРЕССНЫЕ МЕТОДЫ МИКРОРЕАКЦИЙ В АУТОСЕРОЛОГИИ
Отобранные аутосерологические методы позволяют сравнительно легко обнаруживать антитела к аутокультурам в сыворотках крови детей при диареях. На это требуется 33,5 часа. Эффективность обнаружения антител в сыворотках крови больных детей - у 41 из 92 обследованных - можно считать высокой, учитывая большую частоту серонегативных дисбактериозов. В Кузбассе подавляющее большинство кишечных инфекций, вызванных условно-патогенными бактериями, являются клебсиеллезами. Клебсиел-лезными являются и большинство кишечных дисбактериозов у детей.
Ключевые слова: аутосерология, условно-патогенные микробы, фазово-контрастная микроскопия.
Selected autoserological methods allow comparatively easy reveling of antibodies to autocultures in blood sera of children suffering from diarrhoeae. This requires 3-3,5 hours. The efficiency of finding antibodies in blood sera of sick children - in 41 of 92 patients - may be considered high taking into account the great frequency of seronegative disbacterioses. In Kuzbass, vast majority of intestinal infections caused by opportunist bacteria are klebsiello-ses. And most intestinal disbacterioses in children are of klebsiellosis nature.
Key words: autoserology, opportunist bacteria, phasic-contrast microscopy.
Представляемая работа направлена на улучшение диагностики инфекционных заболеваний детей, вызванных условно-патогенными микробами. В частности, имеется в виду диф-ференцировка дисбактериозов и инфекций, являющаяся камнем преткновения в изучении роли условно-патогенных микробов в этиологии многих болезней.
Экспрессным методам уделено особое внимание, поскольку в детской патологии сокращение времени постановки диагноза хотя бы на сутки имеет большое значение. Применение серологических реакций в микровариантах обусловлено спецификой работы с маленькими детьми — количество крови, забираемой у них, часто не превышает 0,5-1 мл. Большое внимание уделено аутосерологии потому, что это наиболее прямой путь дифференцировки дисбактериоза и инфекции, что, по-нашему мнению, недостаточно использовали только из-за отсутствия подходящих методик.
В предыдущей статье [1] нами были представлены сведения о том, что комплекс уже отобранных микрометодов обнаружения антител в сыворотках крови детей дает удовлетворительные результаты. В настоящей работе даны подробные описания использованных методик с оценкой возможности каждой из них, а также уточнены сведения об этиоло-
гии заболеваний, вызванных условно-патогенными микробами в нашем регионе.
Разумеется, круг решаемых задач, достаточный для одной работы, не является исчерпывающим в принципе, на что будет обращено внимание при обсуждении результатов.
Цель работы — улучшение диагностики заболеваний детей, вызванных условно-патогенными бактериями.
ЗАДАЧИ РАБОТЫ:
1. Приспособление ускоренных (до 3-3,5 часов) микрореакций для обнаружения антител к аутокультурам от больных детей.
2. Установить меру вероятности обнаружения антител к аутокультурам для дифференцировки дисбактериозов кишечника и инфекций, вызванных условно-патогенными микробами.
3. Установить спектр видов условно-патогенных микробов, выделяемых от детей при дисбактериозах и аутосерологически подтвержденных инфекциях.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Исследовали испражнения и сыворотки крови 92 детей с диарейным синдромом, находившихся
■ ЭКСПРЕССНЫЕ МЕТОДЫ МИКРОРЕАКЦИЙ В АУТОСЕРОЛОГИИ
на лечении в МУЗ Городской клинической больнице № 8 и МУЗ Городской клинической больнице № 2 города Кемерово. У всех пациентов условнопатогенные бактерии содержались в больших концентрациях — 105 и выше на 1 грамм. Из суточных культур этих микробов готовили 2-миллиардные взвеси. По 2 капли этих суспензий вносили в пробирки, содержащие по 4,5 мл сахарного мясо-пеп-тонного агара (питательная подушка) [2]. В опытные пробирки добавляли по 2 капли гомологичной сыворотки крови больных, а в контрольные пробирки — в одну 2 капли гетерологичной сыворотки, в другую — 2 капли физиологического раствора хлорида натрия. Все пробы инкубировали при 37°С в течение 3 часов. Потом петлей брали по капле жидкости, находящейся поверх плотной среды, и исследовали их в препаратах «раздавленная капля» под фазово-контрастным микроскопом. Отмечали в опытных пробирках наличие реакций антиген-антитело в виде микроагглютинации, феномена нитеоб-разования Пфаундлера-Мандельбаума [3, 4], феномена иммунологической иммобилизации при работе с подвижными бактериями, феномена задержки юного гигантизма в лагфазе роста. При наличии достаточных количеств сыворотки ставили и агглютинацию на стекле, и развернутую пробирочную реакцию.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Как видно из таблицы, антитела обнаружены в сыворотках крови 42 детей из 92 обследованных.
Таблица
Частота обнаружения антител к аутокультурам у детей разного возраста (чел.)
Возраст Обследовано всего Найдены антитела
Новорожденные 6 1
1-5 месяцев 50 21
6 месяцев - 1 год 29 14
Старше года 7 6
Всего: 92 42
Пол больных, видимо, не имел значения. Сероположительные реакции были у 23 девочек и 19 мальчиков. Не обнаружены антитела у 19 девочек и 21 мальчиков. Среди больных, у которых найдены антитела к условно-патогенным микробам, у 15 человек выделены в большом количестве K. pneumonia, у 18 — K. oxytoca. У 12 детей вместе с клебсиеллами или в монокультуре присутствовали в значительных концентрациях золотистые стафилококки, энтеробактер, цитробактер, протей, синегнойная палочка, ацинетобактер.
Различные из примененных серологических реакций обладали не одинаковой чувствительностью. С помощью реакции микроагглютинации антитела выявлены у 29 детей, реакции торможения юного гигантизма — у 1, реакции нитеобразования — у 12, реакции иммобилизации — у 3 человек.
В 9 случаях, когда было достаточно сыворотки, антитела были выявлены и с помощью реакции агглютинации на стекле или с помощью развернутой пробирочной реакции агглютинации. Отметим, что эти макрореакции не прибавляют количества положительных находок антител, поскольку дублируют результаты микрореакций. Иногда, при пользовании агглютиноскопом, наблюдали артефакт — четкую мелкозернистую «агглютинацию». Это было связано с присутствием в сыворотках примеси эритроцитов. Фазово-контрастная микроскопия позволяла легко выявить отсутствие настоящей агглютинации.
Реакция торможения юного гигантизма оказалась малопригодной из-за того, что присутствие сыворотки крови в опытной и одной из контрольных проб сильно стимулирует рост бактерий и при микроскопии трудно видеть различие между гигантскими и не гигантскими формами клеток.
Реакция иммобилизации только трижды дала положительный результат. Но это связано с тем, что в подавляющем большинстве случаев в испражнениях детей находили в большом количестве неподвижных бактерий — клебсиелл, стафилококков, неподвижные варианты эшерихий.
Реакция образования нитей Пфаундлера-Ман-дельбаума получалась легко читаемой. Ее трудно пропустить при фазово-контрастной микроскопии. Обращает на себя внимание факт, что антитела в сыворотке крови многих детей, вызывая реакцию агглютинации, не приводили к реакции нитеобразо-вания. И только в двух случаях в сыворотках, где получено нитеобразование, не было микроагглютинации. Возможно, что для реакции нитеобразова-ния нужен контакт антител с соматическим антигеном. Вопрос этот, судя по доступной литературе, не изучен.
Реакция микроагглютинации в фазово-контрастном поле являлась самой эффективной из использованных реакций при поиске антител в крови детей (29 детей). Однако из приведенных цифр отчетливо видно, что успех аутосерологии прямо зависит и от количества примененных методов. Этот факт приводит к целесообразности поиска новых возможностей обнаружения малого количества антител.
Встречались случаи, когда из фекалий одного пациента выделяли в большом количестве два или три вида условно-патогенных микробов. При этом, как правило, если обнаруживали антитела, то только против одного из этих видов. В одном случае в сыворотке крови ребенка были антитела против обеих выделенных аутокультур — К. оху1оеа и Р. аег^то8а. Возраст ребенка — 10 лет. Очевидно, это случай смешанной инфекции, вызванной условно-патогенными бактериями.
Можно считать, что обнаружение антител почти у половины обследованных детей с диареей указывает на большую чувствительность комплекса микрометодов, основанных на фазово-контрастной микроскопии. Об этом свидетельствует как большое количество причин, приводящих к серонегативным
38
№2(21) 2005 с/^ть и^пя вс7|узбассе
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ■
дисбактериозам, так и очевидный факт, что условно-патогенные бактерии должны сначала накопиться в большом количестве, а уж потом могут войти в реактивные отношения с организмом человека, что приведет к серологическим сдвигам. И все же, как показывает зависимость количества положительных находок антител от числа использованных методик, поиск дополнительных полезных реакций целесообразен.
Отсутствие антител против условно-патогенных микробов, присутствующих в кишечном содержимом в концентрации 105 и выше на 1 грамм, мы рассматриваем как случаи дисбактериоза.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1. Отобранные аутосерологические методы позволяют сравнительно легко обнаруживать антитела к аутокультурам в сыворотках крови детей при диареях. На это требуется 3-3,5 часа.
2. Эффективность обнаружения антител в сыворотках крови больных детей — у 41 из 92 обследован-
ных — можно считать высокой, учитывая большую частоту серонегативных дисбактериозов.
3. В Кузбассе подавляющее большинство кишечных инфекций, вызванных условно-патогенными бактериями, являются клебсиеллезами. Клебси-еллезными являются и большинство кишечных дисбактериозов у детей.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Аутосерологические исследования при кишечных заболеваниях детей младших возрастов и назначение рациональной антимикробной терапии /Н.Н. Зинин-Бермес, Л.П. Осипова, В.А. Громова и др. //Мать и Дитя в Кузбассе. - 2004. - № 3. - С. 20-21.
2. Методы общей бактериологии / Под ред. Ф. Герхарда. - М., 1983. -536 с.
3. Зинин-Бермес, Н.Н. Способы серологической идентификации агрегатно-неустойчивых бактерий с помощью реакции нитеобразо-вания /Н.Н. Зинин-Бермес, Е.М. Котова //Острые инфекционные заболевания. - Кемерово, 1987. - С. 44-45.
4. Златогоров, С.И. Учение о микроорганизмах /С.И. Златогоров. -СПб., 1916. - С. 345-346.
ОТКРЫТОЕ ПИСЬМО 67 СОРОСОВСКИХ ПРОФЕССОРОВ МИНИСТРУ ОБРАЗОВАНИЯ РФ В.М. ФИЛИППОВУ
Глубокоуважаемый Владимир Михайлович!
Обращаемся к Вам от имени коллектива Соросовских профессоров, посвятивших всю свою жизнь образованию молодого поколения в области естественных наук. К этому нас побудила обеспокоенность состоянием дел с предполагаемой реформой российской системы образования... Мы убеждены, что система образования нуждается в постоянной модернизации, которая должна иметь глубоко продуманный и сбалансированный характер с учетом специфики российских условий и традиций. Однако предлагаемые сейчас для внедрения планы реформ вызывают у нас серьезное беспокойство...
...Что касается высшей школы, вызывает большое опасение попытка решения финансовых проблем путем перехода на самоокупаемость и приватизацию вузов. Это исключит наиболее талантливую молодежь из образовательного процесса. К сожалению, конкурсный порядок выделения средств вузам разных форм собственности обескровит государственные учреждения, особенно на периферии, и еще больше централизует систему образования, что неприемлемо для удаленных территорий страны...
...Нам известно, что в настоящее время в странах Западной Европы (Германия, Швеция) и в США активно обсуждается вопрос о переходе на 10-летнее среднее образование, увеличивается удельный вес математического и естественнонаучного образования, заимствуются другие базовые принципы российской системы.
Мы просим Вас продолжить всестороннее обсуждение реформы образования с участием специалистов, непосредственно работающих в области высшего и среднего образования. Со своей стороны мы готовы активно участвовать в этой деятельности и привлечь к ней других российских специалистов. Мы разработали ряд конкретных предложений и готовы их детально обсудить с заинтересованными представителями Вашего министерства.
Письмо подписано 67-ю соросовскими профессорами.
24.07.2005 www.pereplet.ru
