CC BY
3
Целью нашей работы явилось: изучить изменения экспрессии и локализации E2F1 в ганглиях задних корешков крыс (DRG) в ответ на перерезку седалищного нерва.
Опыты проведены на самцах крыс линии Wistar (22,5 месяцев; 200-250 г), на которых уже отработана методика перерезки седалищного нерва в нашей лаборатории [4,5]. Декапитацию гильотиной проводили через 1, 4, 24 часа или 7 дней после односторонней перерезки правого седалищного нерва. Юонтроль — симметричные ганглии с контралатеральной стороны того же животного. Уровень экспрессии E2F1 оценивали с помощью имму-ноблоттинга и двойного иммунофлуоресцентного окрашивания. Уровень апоптоза оценивали методом TUNEL. Статистический анализ проводили по One Way Anova RM.
По результатам данной работы аксотомия вызывает гиперэкспрессию E2F1 уже через 4 часа после аксото-мии, тогда как к 7 суткам уровень белка стремится к минимуму. При этом, уровень экспрессии E2F1 повышался как в цитоплазме, так и в ядрах клеток DRG. Наши данные указывают на то, что E2F1 является важной терапевтической мишенью, поскольку проведенные исследования продемонстрировали участие фактора транскрипции E2F1 в запуске апоптоза нейронов и глиальных клеток DRG после аксотомии.
Наши новые данные указывает на то, что E2F1 может быть потенциальным биомаркером на ранних стадиях после нейротравмы, предполагая, что ингибиторы E2F1 могут быть рассмотрены для терапевтических подходов в ранний период после повреждения. Такая стратегия будет направлена на спасение клеток от гибели и иметь терапевтический эффект, например, на восстановление количества нейронов после нейротравмы, как концептуальная альтернатива трансплантации клеток.
Работа выполнена при поддержке гранта Mинистерства науки и высшего образования РФ № 0852-2020-0028 и стипендии Президента Российской Федерации для молодых ученых.
Литература:
1. Esposito MF, Malayil R, Hanes M, Deer T. Pain Med. 2019 Jun
1; 20(Suppl 1): S23-S30.
2. Martin SL, Reid AJ, Verkhratsky A et al. Neural Regen Res.
2019 Jun; 14(6): 939-947.
3. Polager S, Ginsberg D. Nat Rev Cancer. 2009 Oct; 9(10):
738-48.
4. Dzreyan VA, Rodkin SV, Pitinova MA et al. Mol Neurobiol.
2021 Jan; 58(1): 217-228.
5. Dzreyan V, Rodkin S, Nikul V et al. J Mol Neurosci. 2021 Apr;
71(4): 826-835.
ЦИТОСПЕЦИФИЧЕСКАЯ
БИОСОВМЕСТИМОСТЬ НОВЫХ МАТЕРИАЛОВ-МАТРИКСОВ ДЛЯ ИМПЛАНТОЛОГИИ С МСК ЧЕЛОВЕКА
Н.Н. Диденко, А.А. Долгалев, Д.В. Бобрышев, С.Р. Адешелидзе
ФГБОУ ВО Ставропольский государственный медицинский университет Минздрава России, Ставрополь, Россия
e-mail: nikolai.n.didenko@gmail.com
Ключевые слова: МСК, коллагеновый гель, биосомести-мость, материалы-матриксы, имплантология.
Целый ряд уникальных качеств (возможность распознавания сигналов клеток, биоразлагаемость,
механические свойства) делают коллаген уникальным материалом для регенеративной медицины [1 ]. Изучаемый нами коллагеновый гель представляет собой прототип имплантируемого медицинского изделия. Это гелеобразное вещество на основе внеклеточного матрикса (BKM) из коллагена (преимущественно I и III типов) ксеногенного происхождения и стерильного физиологического раствора. Внеклеточный матрикс получен путем глубокой очистки (многоступенчатая химико-биологическая обработка), децеллюляризации и фрагментации ксеногенного сырья. Источником сырья для изготовления BKM являются перикард крупного рогатого скота (№С) и подслизистой тонкой кишки (ПТЮ свиньи [2].
Первичные культуры M^ человека культивировали при 37°C и 5% CO2 в пластиковых культуральных флаконах площадью 25 см2, содержащих полную питательную среду. На третьем пассаже клетки высевались на образцы исследуемых материалов и культивировались в течение 96 ч.
Подсчет клеток и уровня их жизнеспособности проводился при помощи автоматического счетчика LounaFL (LogosBio) с использованием окрашивания трипановым синим. Для оценки пролиферативной активности клеток применяли люминесцентный анализ уровня АТФ с использованием набора реагентов ATPlite 1 step (PerkinElmer) при помощи фотометра-имиджера Cytation 1 (BioTek). Для оценки миграционной активности использовали анализ на «зарастание раны» (scratch test).
По результатам проведенного исследования показано, что опытные образцы гелей из перикарда №С и ПЖ свиньи не обладают цитотоксичностью, не препятствуют митотической активности и пролиферации M^ человека. Полученные данные дают основание проводить исследования эффективности и безопасности опытных образов изделия в экспериментах in vivo на лабораторных животных.
Литература:
1. Asd Chu C., Deng J., Sun X. et al. Tissue Eng Part B Rev. 2017.
V. Oct. № . 23(5). P. 421.
2. Долгалев A.A., Бойко E.M., Бобрышев Д.В. и др. Mедицин-
ский вестник Северного ^вказа. 2022. Т. 17. № 1. С. 74.
ЭКСПРЕССИЯ ОНКОМАРКЁРНОГО БЕЛКА B23 В ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТКАХ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ У ПЛОТОЯДНЫХ
О.В. Дилекова, В.В. Митенко
Ставропольский государственный аграрный университет, Ставрополь, Россия
e-mail: mitenko.vas@yandex.ru
Ключевые слова: кошка, собака, опухоль молочной железы, нуклеофозмин, экспрессия
Исследование были проведены с 2021 по 2022 гг. Объектом исследования служили плотоядные животные с новообразованиями молочных желез (собаки (n=28), кошки (n=25)), которые были пациентами ветеринарных клиник г. Ставрополя. Возраст животных составлял от 7 до 15 лет.
В 42% случаев у собак пород: немецкая овчарка, пудель, доберман, метис, при патогистологическом исследовании была диагностирована — аденокарцинома высокодифференцированная (G1) — 66% до умере-но-дифференцированной (G2) — 33%. У кошек в 64% случаев породы: сиамская, сфинкс, бенгальская, метис, были установлены при исследовании аденокар-цинома высокодифференцированная (G1) — 16%,
Гены & ^етки XVII, №3, 2022
умерено-дифференцированная (G2] — 24% и низкодиф-ференцированная (G3]—24%. При постановке патогисто-логического диагноза использовалась Mеждународная гистологическая классификация и номенклатура опухолей домашних животных ВОЗ (1975].
Экспрессия белка B23 у кошек выявляется в эпителиальном компоненте, проявляется сильным окрашиванием (+3], занимает больше 10% площади опухоли. Иммуннопозитивный материал имеет ядрышковую локализацию в количестве от 1 до 2-х, с выраженным анизо-нуклеозом. Отмечается наличие маркера в цитоплазме в виде гранул. У собак экспрессия В2З имеет от сильного (+3] до умеренного окрашивания (+2] и занимает также больше 10% от площади опухолей. Количество ядрышек насчитывается от 1 до 3-х.
Таким образом, фактор транскрипции В2З в опухолях молочный железы у собак и кошек имеет эпителиальную локализацию, выявленную во внутриядерном субком-партмене. По нашему мнению, выявленные изменения связаны с нарушением сигнального пути от ErbB1 к ну-клефозмину в клетках, что приводит к генетическому дисбалансу и возникновению опухолей [1, 2, 3].
Литература:
1. Зенит-Журавлева Е.Г., Полковниченко E.M., Лушникова A.A. Mолекулярная медицина № 4, 2012.
2. Якунина M.H. Опухоли молочной железы собак и кошек. 2 изд., испр. M: Onebook.ru, 2014.
3. Keren Farin, Ayelet Di Segni, Adam Mor Structure-Function Analysis of Nucleolin and ErbB Receptors Interactions. Published: July 3, 2009.
УЧАСТИЕ ГИСТАМИНА И СЕРОТОНИНА В ПРОЦЕССАХ РЕГЕНЕРАЦИИ ТКАНЕЙ МАТКИ КРЫС
С.В. Диндяев1, Д.В. Касаткин2, Ф.А. Ромашин1, Т.С. Пупышева1
1 ФГБОУ ВО Ивановская государственная медицинская академия Минздрава России, Иваново, Россия
2 Урологический центр «Уромед», Иваново, Россия
e-mail: dindyaev@ivgma.ru
Ключевые слова: гистамин, серотонин, матка крыс, беременность, послеродовый период, апоптоз.
С помощью флуоресцентно-гистохимическим методов Фалька-Хилларпа и Кросса-Эвана-Роста исследовано содержание гистамина и серотонина в клеточных элементах слизистой и мышечной оболочек тела матки крыс в течение беременности и послеродового периода. Наиболее высокий уровень гистамина в тучных клетках слизистой и мышечной оболочек, в гладких миоцитах миометрия наблюдается перед родами и сразу после них. Для показателей, оценивающих плотность тучных клеток и содержание в них гистамина, характерна отрицательная взаимосвязь, как во время беременности, так и после родов (R=-0,807-0,814]. В то же время для изменений содержания гистамина в тучных клетках и гладких миоцитах миометрия свойственна высокая положительная взаимосвязь. После образования гистамин связывается рабочими клетками, превращается в неактивную форму или разрушается ферментом диаминооксидазой или гистаминазой [1]. Отмечено, что при любом способе инактивации гистамина образуются активные формы кислорода, которые могут вызывать
макромолекулярные повреждения и старение клеток, особенно если в их микроокружении мало молекул анти-оксидантов [2]. Возможно, это способствует апоптозу миоцитов во время послеродовой инволюции матки.
Максимальное содержание серотонина в эпителио-цитах эндометрия отмечается на 7-е сутки беременности. Начиная со вторых суток после родов, происходит значительное снижение содержания серотонина и гистамина в эпителиоцитах эндометрия со стабилизацией этого показателя на 7-8-е сутки. Серотонин в гладких миоцитах миометрия достоверно выявляется только в 1-е, 10-е и 15-е сутки после родов. По результатам нашего исследования к 5-м суткам послеродового периода значительно снижается частота клеток мышечной оболочки с положительной экспрессией гена p53 апоптоза.
Тучные клетки матки являются основным источником гистамина и серотонина в тканях матки. Поддержание гистаминопосредованной аутокринной регуляции секреции тучных клеток является одним из ключевых факторов поддержания пролиферации, дифференцировки и апоптоза клеток матки.
Литература:
1. Грачев В.И., Маринкин И.О., Суслонова Н.В. Norwegian Journal of development of the International Science. 2019. № 31. С. 20-34.
2. Moya-García A.A., Pino-Ángeles A., Sánchez-Jiménez F. et al. Biomolecules. 2021. Vol. 11(3). Р. 415. https:doi. org/10.3390/biom11030415
ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ МЕЖДУ СИГНАЛЬНЫМИ ПУТЯМИ NOTCH И BMP В ЭНДОТЕЛИАЛЬНО-МЕЗЕНХИМНОМ ПЕРЕХОДЕ
П.М. Докшин1, 2, А.Б. Малашичева1, 2
1 ФГБУ НМИЦ им. В.А. Алмазова Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия
2 Институт Цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия
e-mail: pdocshin@icloud.com
Ключевые слова: эндотелиально-мезенхимный переход, сигнальный путь Notch, передача сигналов Bmp, мезенхим-ные клетки сердца, сердечный фиброз.
Эндотелиально-мезенхимный переход (ЭндМП) является одним из ключевых событий, происходящих в сердце как при развитии органа, так и его поломке. В эндМП вовлечено множество сигнальных путей, которые активно модулируют процесс, и наиболее важным является сигнальный путь Notch, который представляет собой ключевой регулятор эндМП при миокардиальном фиброзе [1]. Передача сигналов Notch это эволюционный консервативный путь межклеточной коммуникации, участвующий в выборе клеточной судьбы посредством лиганд-рецеп-торных взаимодействий между трансмембранными молекулами соседних клеток. Сердечный фиброз формируется в результате развивающейся сердечной недостаточности, например, возникшей в следствии инфаркта миокарда, и характеризуется избыточным отложением коллагена, что становится причиной ремоделирования органа. Ранее мы отмечали [2], что в процессах раннего ремоде-лирования миокарда участвует фактор BMP2 из суперсемейства TGF-p. Сигнальный каскад, индуцированный TGF-p, является также важным регуляторным путем в инициации и развитии эндМП [3]. Взаимодействуют ли сигнальный путь Notch и BMP2 между собой в процессах эндМП остаётся неясным.
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
