CC BY
4
что приводило к изменению рецептивности, нарушению появления субпопуляций зрелых и стареющих дециду-альных клеток, нарушению лиганд-рецепторного взаимодействия с трофобластами и изменению архитектуры внеклеточного матрикса, что препятствовало инвазии модельных бластоцист. Кроме того, за счет измененной паракринной активности стареющие эСК негативно влияли на децидуализацию соседних здоровых клеток, усиливая дисфункцию стромального компартмента эндометрия. Для устранения негативного влияния стареющих эСК на функционирование эндометрия был протестирован ряд соединений с сенолитической активностью, то есть способных направлено инициировать гибель в стареющих клетках. Однако ни одно из протестированных соединений с заявленной сенолитической активностью не оказало желаемого эффекта на стареющие эСК [2]. В качестве альтернативного подхода были использованы сеноморфики, которые в отличие от се-нолитиков уменьшают выраженность фенотипических проявлений стареющих клеток, но не влияют при этом на их жизнеспособность. Использование классических сеноморфных препаратов значимо уменьшило негативное влияние стареющих эСК на децидуализацию клеток и имплантацию модельных бластоцист. В перспективе использование сеноморфиков и разработка сенолитиков, специфичных для стареющих эСК, могут рассматриваться как подходы для повышения эффективности имплантации. Важно, что такие стратегии являются уникальным и не имеют аналогов в мировой практике. Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 19-74-10038.
Литература:
1. Denyabin P.I., Bonodkina A.V. Hum Reprod. 2022. V. 37. P.
1505-1524.
2. Denyabin P.I., Shatnova A.N., Bonodkina A.V. Cell Mol Life Sci.
2021. V. 78. P. 7757-7776.
РАЗРАБОТКА ПРЕПАРАТА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГЕМОРРАГИЧЕСКОГО ИНСУЛЬТА НА БАЗЕ СЕКРЕТОМА МЕЗЕНХИМНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК (МСК)
С.С. Джауари1, Н.А. Басалова1, 2, М.Н. Скрябина1, Н.А. Александрушкина1,2, В.Ю. Балабаньян1,2, В.С. Попов1, 2, А.Ю. Ефименко1, 2, Н.В. Данилова1, П.Г. Мальков1, В.А. Ткачук1, 2, М.Н. Карагяур1, 2
1 Факультет фундаментальной медицины, МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
2 Институт Регенеративной медицины, Медицинский научно-образовательный центр, МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
e-mail: stalik.djauari@yandex.ru
Ключевые слова: геморрагический инсульт, секретом, МСК, микроглия.
Острые нарушения мозгового кровообращения (ОНМК) являются одной из основных причин смертности и инвалидизации людей в мире. По этиологии и патогенезу выделяют две основные формы ОНМК: ишемическую и геморрагическую. Для более распространенной ишеми-ческой формы ОНМК (ишемический инсульт) существуют лекарственные препараты и достаточно эффективные терапевтические подходы. В то же время для ОНМК, ассоциированных с излиянием крови в паренхиму мозга (геморрагический инсульт), менее распространенных,
но клинически более тяжелых, эффективного специфического лечения не существует.
Из данных литературы известно, что мезенхимные стволовые клетки (МСК) являются ключевыми регуляторами процессов регенерации поврежденных тканей, при этом неоднократно было показано, что, в основном МСК реализуют свое стимулирующее действие на процессы регенерации через секрецию факторов роста, цитоки-нов, белков матрикса и пр. Терапевтическая активность МСК и продуктов их секреции (секретома) настолько значима, что предпринимаются попытки их использования для стимуляции регенерации тканей, в том числе периферических нервов и ткани мозга.
В данном исследовании нами был изучен нейропро-тективный потенциал секретома МСК на экспериментальной модели интрацеребральной гематомы у крыс. Секретом МСК вводили в область повреждения через 5 минут после моделирования интрацеребрального кровоизлияния по А.Н. Макаренко. За животными наблюдали в течение 14 дней после моделирования инсульта. Оценивали выживаемость, тяжесть неврологических дефицитов, объем повреждения головного мозга по данным МРТ и гистологического исследования.
Было установлено, что секретом МСК, введенный в область повреждения, предотвращает гибель экспериментальных животных и снижает тяжесть неврологических нарушений, а также уменьшает объем повреждения головного мозга, хотя и наблюдается видоспецифич-ность данного эффекта. Исследование механизма ней-ропротективного действия секретома МСК показало, что он способен стимулировать выживание нейронов в условиях глутамат-опосредованной нейротоксичности и снижать степень активации клеток микроглии, предотвращая прогрессирование вторичного повреждения ткани мозга. Полученные результаты позволяют рассматривать секретом МСК, как перспективный препарат для лечения геморрагического инсульта и других острых повреждений мозга.
АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ И ВНУТРИКЛЕТОЧНОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ ФАКТОРА ТРАНСКРИПЦИИ E2F1 В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЕ КРЫС ПОСЛЕ АКСОТОМИИ
В.А. Дзреян, М.А. Питинова
Лаборатория «Молекулярная нейробиология», Южный федеральный университет, Ростов-на-Дону, Россия
e-mail: dzreyan2016@mail.ru
Ключевые слова: апоптоз, ганглии задних корешков, E2F1, нейротравма, аксотомия, DRG.
Нейротравма является одной из основных причин инвалидности и смертности человека. Однако механизмы, опосредующие выживание и гибель клеток периферической нервной системы, до сих пор полностью не изучены. Эффективных нейропротекторов для защиты нервных клеток в первые часы после травмы на сегодняшний день не существует [1,2]. В ядре клетки E2F1 как фактор транскрипции контролирует экспрессию различных белков, регулирующих многие процессы, в том числе апоптоз. Но в цитоплазме E2F1 может действовать нетранскрипционным путем, напрямую взаимодействуя с митохондриями [3]. Однако, участие E2F1 в регуляции выживания и гибели нейронов и глиальных клеток при аксотомии ранее не изучалось.
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
Целью нашей работы явилось: изучить изменения экспрессии и локализации E2F1 в ганглиях задних корешков крыс (DRG) в ответ на перерезку седалищного нерва.
Опыты проведены на самцах крыс линии Wistar (22,5 месяцев; 200-250 г), на которых уже отработана методика перерезки седалищного нерва в нашей лаборатории [4,5]. Декапитацию гильотиной проводили через 1, 4, 24 часа или 7 дней после односторонней перерезки правого седалищного нерва. Юонтроль — симметричные ганглии с контралатеральной стороны того же животного. Уровень экспрессии E2F1 оценивали с помощью имму-ноблоттинга и двойного иммунофлуоресцентного окрашивания. Уровень апоптоза оценивали методом TUNEL. Статистический анализ проводили по One Way Anova RM.
По результатам данной работы аксотомия вызывает гиперэкспрессию E2F1 уже через 4 часа после аксото-мии, тогда как к 7 суткам уровень белка стремится к минимуму. При этом, уровень экспрессии E2F1 повышался как в цитоплазме, так и в ядрах клеток DRG. Наши данные указывают на то, что E2F1 является важной терапевтической мишенью, поскольку проведенные исследования продемонстрировали участие фактора транскрипции E2F1 в запуске апоптоза нейронов и глиальных клеток DRG после аксотомии.
Наши новые данные указывает на то, что E2F1 может быть потенциальным биомаркером на ранних стадиях после нейротравмы, предполагая, что ингибиторы E2F1 могут быть рассмотрены для терапевтических подходов в ранний период после повреждения. Такая стратегия будет направлена на спасение клеток от гибели и иметь терапевтический эффект, например, на восстановление количества нейронов после нейротравмы, как концептуальная альтернатива трансплантации клеток.
Работа выполнена при поддержке гранта Mинистерства науки и высшего образования РФ № 0852-2020-0028 и стипендии Президента Российской Федерации для молодых ученых.
Литература:
1. Esposito MF, Malayil R, Hanes M, Deer T. Pain Med. 2019 Jun
1; 20(Suppl 1): S23-S30.
2. Martin SL, Reid AJ, Verkhratsky A et al. Neural Regen Res.
2019 Jun; 14(6): 939-947.
3. Polager S, Ginsberg D. Nat Rev Cancer. 2009 Oct; 9(10):
738-48.
4. Dzreyan VA, Rodkin SV, Pitinova MA et al. Mol Neurobiol.
2021 Jan; 58(1): 217-228.
5. Dzreyan V, Rodkin S, Nikul V et al. J Mol Neurosci. 2021 Apr;
71(4): 826-835.
ЦИТОСПЕЦИФИЧЕСКАЯ
БИОСОВМЕСТИМОСТЬ НОВЫХ МАТЕРИАЛОВ-МАТРИКСОВ ДЛЯ ИМПЛАНТОЛОГИИ С МСК ЧЕЛОВЕКА
Н.Н. Диденко, А.А. Долгалев, Д.В. Бобрышев, С.Р. Адешелидзе
ФГБОУ ВО Ставропольский государственный медицинский университет Минздрава России, Ставрополь, Россия
e-mail: nikolai.n.didenko@gmail.com
Ключевые слова: МСК, коллагеновый гель, биосомести-мость, материалы-матриксы, имплантология.
Целый ряд уникальных качеств (возможность распознавания сигналов клеток, биоразлагаемость,
механические свойства) делают коллаген уникальным материалом для регенеративной медицины [1 ]. Изучаемый нами коллагеновый гель представляет собой прототип имплантируемого медицинского изделия. Это гелеобразное вещество на основе внеклеточного матрикса (BKM) из коллагена (преимущественно I и III типов) ксеногенного происхождения и стерильного физиологического раствора. Внеклеточный матрикс получен путем глубокой очистки (многоступенчатая химико-биологическая обработка), децеллюляризации и фрагментации ксеногенного сырья. Источником сырья для изготовления BKM являются перикард крупного рогатого скота (№С) и подслизистой тонкой кишки (ПТЮ свиньи [2].
Первичные культуры M^ человека культивировали при 37°C и 5% CO2 в пластиковых культуральных флаконах площадью 25 см2, содержащих полную питательную среду. На третьем пассаже клетки высевались на образцы исследуемых материалов и культивировались в течение 96 ч.
Подсчет клеток и уровня их жизнеспособности проводился при помощи автоматического счетчика LounaFL (LogosBio) с использованием окрашивания трипановым синим. Для оценки пролиферативной активности клеток применяли люминесцентный анализ уровня АТФ с использованием набора реагентов ATPlite 1 step (PerkinElmer) при помощи фотометра-имиджера Cytation 1 (BioTek). Для оценки миграционной активности использовали анализ на «зарастание раны» (scratch test).
По результатам проведенного исследования показано, что опытные образцы гелей из перикарда №С и ПЖ свиньи не обладают цитотоксичностью, не препятствуют митотической активности и пролиферации M^ человека. Полученные данные дают основание проводить исследования эффективности и безопасности опытных образов изделия в экспериментах in vivo на лабораторных животных.
Литература:
1. Asd Chu C., Deng J., Sun X. et al. Tissue Eng Part B Rev. 2017.
V. Oct. № . 23(5). P. 421.
2. Долгалев A.A., Бойко E.M., Бобрышев Д.В. и др. Mедицин-
ский вестник Северного ^вказа. 2022. Т. 17. № 1. С. 74.
ЭКСПРЕССИЯ ОНКОМАРКЁРНОГО БЕЛКА B23 В ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТКАХ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ У ПЛОТОЯДНЫХ
О.В. Дилекова, В.В. Митенко
Ставропольский государственный аграрный университет, Ставрополь, Россия
e-mail: mitenko.vas@yandex.ru
Ключевые слова: кошка, собака, опухоль молочной железы, нуклеофозмин, экспрессия
Исследование были проведены с 2021 по 2022 гг. Объектом исследования служили плотоядные животные с новообразованиями молочных желез (собаки (n=28), кошки (n=25)), которые были пациентами ветеринарных клиник г. Ставрополя. Возраст животных составлял от 7 до 15 лет.
В 42% случаев у собак пород: немецкая овчарка, пудель, доберман, метис, при патогистологическом исследовании была диагностирована — аденокарцинома высокодифференцированная (G1) — 66% до умере-но-дифференцированной (G2) — 33%. У кошек в 64% случаев породы: сиамская, сфинкс, бенгальская, метис, были установлены при исследовании аденокар-цинома высокодифференцированная (G1) — 16%,
Гены & ^етки XVII, №3, 2022
