CC BY
20
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Экспериментальные модели Experimental models
цитометр Navios™ (Beckman Coulter). Фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови оценивали, анализируя особенности их взаимодействия со смесью стафилококков. Содержание цитокинов в сыворотке крови (IL-10, МСР-1 и TGF-ß) определяли, используя тест-системы для ИФА (Bender MedSystems, США). Исследование иммунных клеток крови выявило снижение количество NK (CD3-CD161+) клеток в группе Б по сравнению с другими группами крыс. При этом процентное содержание NKT (CD3+CD161+) было выше у животных, у которых коррекция дисбиоза не проводилась (группа К1). При анализе биоптатов селезенки обращало на себя внимание низкое содержание FoxP3+CD25+ лимфоцитов у животных из группы К1 (по сравнению с остальными крысами) на фоне повышения содержания этой популяции клеток в группах А, Б и Е по сравнению с К2. Выявлена тенденция к снижению пула В-лимфоцитов (CD45RA+) в селезенке животных из групп Е и А. Содержание противовоспалительного и регуляторного цитокина IL-10 в сыворотке крови было минимальным в группе К1, а в группах Б и Е содержание IL-10 было выше, чем у крыс из групп А и К2. Не было обнаружено достоверных различий в количестве МСР-1 и TGF-ß в сыворотке крови животных из различных групп. Фагоцитарная активность лейкоцитов периферической крови была наиболее низкой у крыс из группы К1 и у крыс из групп А и Б, однако она была выше, чем в группе К2. Таким образом, выявлены общие тенденции и специфические особенности изменений в иммунитете при коррекции дисбиотических нарушений с использованием аутопроби-отических энтерококков, бифидобактерий и анаэробного консорциума. Последний воспроизводит положительные эффекты нескольких моноштаммовых аутопробиотиков.
Работа поддержана грантом РНФ № 16-15-10085.
ЭКСПРЕССИЯ HLA-DR НА NK-КЛЕТКАХ АССОЦИИРОВАНА ПРЕИМУЩЕСТВЕННО С МЕНЕЕ ДИФФЕРЕНЦИРОВАННЫМИ КЛЕТКАМИ С ПОВЫШЕННОЙ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
Ерохина С.А., Стрельцова М.А., Каневский Л.М., Коваленко Е.И.
Институт биоорганической химии РАН, Москва, Россия
В норме в периферической крови человека содержится небольшая доля NK-клеток, экспрессирующих HLA-DR, которая увеличивается при стимуляции NK-клеток IL-2 in vitro. In vivo повышенный уровень HLA-DR+ NK-клеток регистрируется при определенных патологических состояниях, таких как иммунодефицит на фоне HIV-инфекции, рассеянный склероз, IgA-нефропатия. Функциональное значение этой молекулы на NK-клетках все еще обсуждается: есть доказательства того, что NK-клетки могут использовать HLA-DR для презентации антигенов, в других работах HLA-DR рассматривается как маркер активации или пролиферации NK-клеток. Целью данной работы было изучение взаимосвязи между экспрессией HLA-DR и стадиями развития NK-клеток, а также их функциональной активностью. Работа проводилась на свежевыделен-ных NK-клетках и клетках, полученных в системе активации in vitro с использованием IL-2 и клеток K562, экс-прессирующих мембраносвязанный IL-21 (K562-mbIL21). Данная комбинация стимулов используется для наращивания NK-клеток в целях иммунотерапии.
Анализ экспрессии HLA-DR на различных стадиях дифференцировки свежевыделенных NK-клеток по-
казал, что в целом доля HLA-DR-позитивных клеток в периферической крови была значительно выше среди менее дифференцированных NK-клеток CD56bright, чем среди относительно более зрелых клеток CD56dim. Однако у некоторых людей наблюдалась достаточно высокая доля HLA-DR-положительных NK-клеток в терминально дифференцированной субпопуляции CD56dimCD57+ (группа 2). Индивидуумы из группы 2 также показали более высокий уровень NKG2C+ NK-клеток в HLA-DR-положительной субпопуляции по сравнению с HLA-DR-отрицательной. CD56dimCD57+NKG2C+ фенотип указывает на то, что экспрессия HLA-DR может быть в данном случае связана с так называемыми NK-клетками памяти. Функциональный тест показал, что свежевыделенные HLA-DR-позитивные NK-клетки продуцируют IFNy интенсивнее, чем HLA-DR-отрицательные, как в субпопуляции CD56bright, так и в субпопуляции CD56dim.
При стимуляции свежевыделенных NK-клеток IL-2 и K562-mbIL21, но не растворимым IL-21, мы наблюдали многократное увеличение доли HLA-DR-положительных NK-клеток. Помимо увеличения экспрессии HLA-DR, большинство NK-клеток после 6 дней стимуляции демонстрировали фенотип CD56brightCD57—NKG2A+, который характеризует «ранние» NK-клетки. Кроме того, после стимуляции IL-2 и K562-mbIL21 NK-клетки HLA-DR+ все так же демонстрировали более интенсивную продукцию IFNy по сравнению с клетками HLA-DR-.
Таким образом, как в состоянии покоя, так и после активации экспрессия HLA-DR в основном была ассоциирована с менее зрелыми NK-клетками. Однако ее также можно обнаружить in vivo в терминально дифференцированных NK-клетках. Происхождение и особенности данной субпопуляции HLA-DR+CD56dimCD57+ еще предстоит выяснить. HLA-DR-позитивные NK-клетки как ex vivo, так и после стимуляции IL-2 и K562-mbIL21 характеризовались повышенной способностью к продукции IFNy.
Работа выполнена при поддержке РФФИ, грант № 16-34-00836.
ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЙ ФЕНОТИП ФИБРОБЛАСТОПОДОБНЫХ СИНОВИОЦИТОВ КОРРЕЛИРУЕТ С ТЯЖЕСТЬЮ ЗАБОЛЕВАНИЯ В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИ АНТИТЕЛО-ЗАВИСИМОГО АРТРИТА У МЫШЕЙ
Жданова А.С.1 2, Гоголева В.СЛ 2, Зварцев Р.В.1 2, Недоспасов С.А.1, 2, Друцкая М.С.1, 2
1ФГБУН «Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта» РАН, Москва, Россия 2 Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
Ревматоидный артрит (РА) — хроническое воспалительное аутоиммунное заболевание, приводящее к прогрессирующему повреждению суставных и околосуставных структур, которое характеризуется образованием аутоантител и синовиальной гиперплазией. Важную роль в процессе разрушения суставов играют фибробластоподобные синовиоциты (FLS). В норме их функция заключается в производстве внеклеточных матриксных компонентов, которые поддерживают нормальный состав синовиальной жидкости и суставную поверхность. Однако показано, что во время воспалительного процесса эти клетки приобретают патогенный фенотип (Hardy R.S. et al., 2013). Активированные цито-кинами FLS являются главным источником IL-6 и других
