CC BY
49
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Было показано, что у B6.Sap-D-/- микобактериальная нагрузка легочной ткани и селезенки достоверно выше, чем у мышей В6 как через три, так и через пять недель после инфицирования. Анализ клеточного состава легочной ткани показал, что для «наивных» Sap-D-/- по сравнению с мышами дикого типа (В6) характерно меньшее количество макрофагов как в легочной ткани, так и в селезенке. Причем через три недели после инфицирования M. tuberculosis H37Rv содержание макрофагов у нокаутов по сапозину D и мышей дикого типа в легких выравнивается, а в селезенке различия сохраняются. Через пять недель после инфицирования количество макрофагов у мышей нокаутов достоверно выше, чем у В6. Также было показано, что через пять недель после заражения мыши B6.Sap-D-/-отличаются от мышей дикого типа большей инфильтрацией легочной ткани, большим количеством нейтрофилов. Исследование чувствительности к апоптозу клеток легочной ткани Sap-D мышей и мышей дикого типа показало, что содержание апоптотических клеток в легких мышей нокаутов по сапозину D через три и пять недель после инфицирования достоверно выше, чем у мышей линии В6.
Итак, дефицит Sap-D существенно усиливает воспаление при экспериментальной туберкулезной инфекции, а также влияет на предрасположенность к апоптозу.
Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (грант № 15-04-05519).
УРОВЕНЬ ЦИТОКИНЕМИИ ПРИ АЛЛОКСАНОВОМ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ У КРЫС И ЕГО КОРРЕКЦИИ СОЕДИНЕНИЕМ РЯДА 1,3,4-ТИАДИАЗИНА
Емельянов В.В.1, Булавинцева Т.С.1, 2, Сидорова Л.П.1, Цейтлер Т.А.1, Чупахин О.Н.1, Черешнев ВА.1, 2
1ФГАОУ ВО «Уральский федеральный университет им. первого Президента России Б.Н. Ельцина», Екатеринбург, Россия
2 ФГБУН«Институт иммунологии и физиологии УрО РАН», Екатеринбург, Россия
Введение. Метаболические нарушения при сахарном диабете (СД) в эксперименте и клинике существенно изменяют продукцию про- и антивоспалительных цитокинов клетками иммунной системы. Выявлена роль провоспали-тельных цитокинов в повреждении сосудистого эндотелия и развитии диабетических ангиопатий. Предшествующими исследованиями показана способность соединений ряда 1,3,4-тиадиазина корригировать метаболические нарушения при аллоксановом СД у крыс, а также изменять течение воспалительной реакции при экспериментальном панкреонекрозе и инфаркте миокарда.
Цель и задачи. Оценить уровень цитокинемии при развитии аллоксанового СД у крыс и его коррекции соединением ряда 1,3,4-тиадиазина.
Материалы и методы. Эксперименты выполнены на 30 крысах-самцах линии Wlstar массой 210-250 г в соответствии с этическими нормами Директивы Совета ЕС 2010/63. СД моделировали введением аллоксана по ранее разработанной методике в течение 3 суток в суммарной дозе 300 мг/кг массы животного. Синтетическое соединение L-17 ряда 1,3,4-тиадиазина и вещество сравнения липоевую кислоту (ЛК, препарат «Октолипен», Россия) вводили внутримышечно в дозе 40 мг/кг массы животного 3 раза в неделю в течение 4 недель. На 30-е сутки эксперимента в крови крыс определяли содержание интерлей-кинов (Щ) ГЬ-1а, Ш-6 и ГЬ-10 методом ИФА наборами
фирмы «Thermo Scientific» на автоматическом анализаторе «LAZURITE AUTOMATED ELISA SYSTEM».
Результаты. Развитие СД у крыс приводило к статистически значимому повышению концентрации IL-1a, IL-6 и IL-10 от 1,1 до 3,6 раз по сравнению с интактными животными. Введение ЛК частично корригировало показатели цитокинемии, снижая концентрации IL-6 и IL-1a до уровня интактных животных, при этом концентрация IL-10 продолжала оставаться повышенной. Наиболее полной коррекции цитокинемии удалось достичь соединением IL-17, введение которого приводило к снижению концентраций всех исследованных цитокинов до уровня интактных крыс.
Заключение. Полученные результаты свидетельствуют об участии иммунологических механизмов в корригирующем действии соединения ряда 1,3,4-тиадиазина при аллоксановом СД у крыс.
Работа выполнена при поддержке гранта РНФ № проекта 16-15-00039.
ВЛИЯНИЕ АУТОПРОБИОТИКОВ НА ИММУНИТЕТ ПРИ КОРРЕКЦИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ДИСБИОЗА
Ермоленко Е.И.1, 2, Котылева М.П.1, Кудрявцев И.В.1, Лавренова Н.С.1, Крамская Т.А.1, Леонтьева Г.Ф.1, Куляшова Л.Б.3, Суворов А.Н.1, 2
1 ФГБУН «Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия
2 Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург, Россия
3 Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, Санкт-Петербург, Россия
Дисбиоз кишечника корректируется при помощи пробиотиков, полезных бактерий, как правило, выделенных из пищевых продуктов или организма здоровых людей и животных. Однако использование пробиотиков в ряде случаев бывает недостаточно эффективным и кратковременным. Индигенные, или собственные, бактерии (аутопробиотики) имеют ряд преимуществ, связанных с наличием по отношению к ним иммунологической толерантности и отсутствием у них выраженной антагонистической активности к облигатным представителям микробиоты. До сих пор методология создания аутопро-биотических препаратов окончательно не разработана. Во многом выбор состава аутопробиотиков связан с особенностями их влияния на иммунитет. Целью данного исследования явилось сравнение иммуномодулирующего эффекта различных по составу аутопробиотиков после введения крысам при дисбиозе кишечника.
В эксперименте использованы 5 групп крыс (самцы, Вистар). Индукция дисбиоза осуществлена введением ампициллина и метронидазола в течение трех дней. Затем животные в течение 5 дней получали индигенные бифидо-бактериии (группа Б), энтерококки (группа Е), консорциум аутопробиотических микроорганизмов, выращенных в анаэробных условиях (группа А) или фосфатный буфер (группа К1). Крысы из второй контрольной группы (К2) получали воду и фосфатный буфер. На 9-ый день эксперимента пробы крови и биоптаты селезенки исследованы при помощи проточной цитометриии клеток, окрашенных комбинацией флуоресцентно меченых моноклональных антител к CD3+, CD4+, CD8+, CD161+, FoxP3+ и CD45RA+ маркерам (Biolegend, США). Был использован проточный
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Экспериментальные модели Experimental models
цитометр Navios™ (Beckman Coulter). Фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови оценивали, анализируя особенности их взаимодействия со смесью стафилококков. Содержание цитокинов в сыворотке крови (IL-10, МСР-1 и TGF-ß) определяли, используя тест-системы для ИФА (Bender MedSystems, США). Исследование иммунных клеток крови выявило снижение количество NK (CD3-CD161+) клеток в группе Б по сравнению с другими группами крыс. При этом процентное содержание NKT (CD3+CD161+) было выше у животных, у которых коррекция дисбиоза не проводилась (группа К1). При анализе биоптатов селезенки обращало на себя внимание низкое содержание FoxP3+CD25+ лимфоцитов у животных из группы К1 (по сравнению с остальными крысами) на фоне повышения содержания этой популяции клеток в группах А, Б и Е по сравнению с К2. Выявлена тенденция к снижению пула В-лимфоцитов (CD45RA+) в селезенке животных из групп Е и А. Содержание противовоспалительного и регуляторного цитокина IL-10 в сыворотке крови было минимальным в группе К1, а в группах Б и Е содержание IL-10 было выше, чем у крыс из групп А и К2. Не было обнаружено достоверных различий в количестве МСР-1 и TGF-ß в сыворотке крови животных из различных групп. Фагоцитарная активность лейкоцитов периферической крови была наиболее низкой у крыс из группы К1 и у крыс из групп А и Б, однако она была выше, чем в группе К2. Таким образом, выявлены общие тенденции и специфические особенности изменений в иммунитете при коррекции дисбиотических нарушений с использованием аутопроби-отических энтерококков, бифидобактерий и анаэробного консорциума. Последний воспроизводит положительные эффекты нескольких моноштаммовых аутопробиотиков.
Работа поддержана грантом РНФ № 16-15-10085.
ЭКСПРЕССИЯ HLA-DR НА NK-КЛЕТКАХ АССОЦИИРОВАНА ПРЕИМУЩЕСТВЕННО С МЕНЕЕ ДИФФЕРЕНЦИРОВАННЫМИ КЛЕТКАМИ С ПОВЫШЕННОЙ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
Ерохина С.А., Стрельцова М.А., Каневский Л.М., Коваленко Е.И.
Институт биоорганической химии РАН, Москва, Россия
В норме в периферической крови человека содержится небольшая доля NK-клеток, экспрессирующих HLA-DR, которая увеличивается при стимуляции NK-клеток IL-2 in vitro. In vivo повышенный уровень HLA-DR+ NK-клеток регистрируется при определенных патологических состояниях, таких как иммунодефицит на фоне HIV-инфекции, рассеянный склероз, IgA-нефропатия. Функциональное значение этой молекулы на NK-клетках все еще обсуждается: есть доказательства того, что NK-клетки могут использовать HLA-DR для презентации антигенов, в других работах HLA-DR рассматривается как маркер активации или пролиферации NK-клеток. Целью данной работы было изучение взаимосвязи между экспрессией HLA-DR и стадиями развития NK-клеток, а также их функциональной активностью. Работа проводилась на свежевыделен-ных NK-клетках и клетках, полученных в системе активации in vitro с использованием IL-2 и клеток K562, экс-прессирующих мембраносвязанный IL-21 (K562-mbIL21). Данная комбинация стимулов используется для наращивания NK-клеток в целях иммунотерапии.
Анализ экспрессии HLA-DR на различных стадиях дифференцировки свежевыделенных NK-клеток по-
казал, что в целом доля HLA-DR-позитивных клеток в периферической крови была значительно выше среди менее дифференцированных NK-клеток CD56bright, чем среди относительно более зрелых клеток CD56dim. Однако у некоторых людей наблюдалась достаточно высокая доля HLA-DR-положительных NK-клеток в терминально дифференцированной субпопуляции CD56dimCD57+ (группа 2). Индивидуумы из группы 2 также показали более высокий уровень NKG2C+ NK-клеток в HLA-DR-положительной субпопуляции по сравнению с HLA-DR-отрицательной. CD56dimCD57+NKG2C+ фенотип указывает на то, что экспрессия HLA-DR может быть в данном случае связана с так называемыми NK-клетками памяти. Функциональный тест показал, что свежевыделенные HLA-DR-позитивные NK-клетки продуцируют IFNy интенсивнее, чем HLA-DR-отрицательные, как в субпопуляции CD56bright, так и в субпопуляции CD56dim.
При стимуляции свежевыделенных NK-клеток IL-2 и K562-mbIL21, но не растворимым IL-21, мы наблюдали многократное увеличение доли HLA-DR-положительных NK-клеток. Помимо увеличения экспрессии HLA-DR, большинство NK-клеток после 6 дней стимуляции демонстрировали фенотип CD56brightCD57—NKG2A+, который характеризует «ранние» NK-клетки. Кроме того, после стимуляции IL-2 и K562-mbIL21 NK-клетки HLA-DR+ все так же демонстрировали более интенсивную продукцию IFNy по сравнению с клетками HLA-DR-.
Таким образом, как в состоянии покоя, так и после активации экспрессия HLA-DR в основном была ассоциирована с менее зрелыми NK-клетками. Однако ее также можно обнаружить in vivo в терминально дифференцированных NK-клетках. Происхождение и особенности данной субпопуляции HLA-DR+CD56dimCD57+ еще предстоит выяснить. HLA-DR-позитивные NK-клетки как ex vivo, так и после стимуляции IL-2 и K562-mbIL21 характеризовались повышенной способностью к продукции IFNy.
Работа выполнена при поддержке РФФИ, грант № 16-34-00836.
ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЙ ФЕНОТИП ФИБРОБЛАСТОПОДОБНЫХ СИНОВИОЦИТОВ КОРРЕЛИРУЕТ С ТЯЖЕСТЬЮ ЗАБОЛЕВАНИЯ В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИ АНТИТЕЛО-ЗАВИСИМОГО АРТРИТА У МЫШЕЙ
Жданова А.С.1 2, Гоголева В.СЛ 2, Зварцев Р.В.1 2, Недоспасов С.А.1, 2, Друцкая М.С.1, 2
1ФГБУН «Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта» РАН, Москва, Россия 2 Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
Ревматоидный артрит (РА) — хроническое воспалительное аутоиммунное заболевание, приводящее к прогрессирующему повреждению суставных и околосуставных структур, которое характеризуется образованием аутоантител и синовиальной гиперплазией. Важную роль в процессе разрушения суставов играют фибробластоподобные синовиоциты (FLS). В норме их функция заключается в производстве внеклеточных матриксных компонентов, которые поддерживают нормальный состав синовиальной жидкости и суставную поверхность. Однако показано, что во время воспалительного процесса эти клетки приобретают патогенный фенотип (Hardy R.S. et al., 2013). Активированные цито-кинами FLS являются главным источником IL-6 и других
