CC BY
5
и 88 % соответственно по сравнению с контролем). Ежедневное введение сульфокарбатиона животным в дозе 75оЬЭ5о вызывало отчетливое снижение активности катепси-на А на 36 % и основной лизосомальной эндопептидазы — катепсина О на 33 %• В свою очередь, хотя у животных данной экспериментальной группы и сохранялась активация гиоловых протеиназ, она была выражена в наименьшей степени по сравнению с таковой у животных, получавших суль-фокарбатион в дозах 1 /'5ооо и ЧъооЬГ>5о. Одновременно следует подчеркнуть, что сульфокарбатион практически не оказывал влияния на общую активность лизосомальных гидролаз другой субстратной специфичности (арилсульфатаз А и В и р-галактозидазы), а также на содержание белка в печени.
Исследование неседиментируемой активности лизосомальных гидролаз позволило установить, что сульфокарбатион в дозе 1/5ооЬ050 не вызывал каких-либо структурных изменений лизосомального аппарата клеток печени. По мере увеличения количества вводимого препарата обнаружена дестабилизация мембран лизосом. наиболее отчетливо выявляемая при максимальной использованной дозе — УбоЬЭзо, о чем можно судить по увеличению на 31—59 % неседиментируемой активности большинства из изученных лизосом (катепсинов В, С, Э и р-галактозидазы).
Полученные результаты позволяют сделать вывод, что хроническая интоксикация сульфокарбатионом в дозах выше '/зооЬОбо приводит к снижению интенсивности внутриклеточного катаболизма белка. Об этом свидетельствует угнетение активности двух лизосомальных протеиназ — катепсинов А и Э, действующих как синергисты и ответственных за процессы тотального протеолиза в клетке [3, 6, 14]. Вместе с тем обнаруженная активация тиоловых протеиназ, наиболее рельефно проявляющаяся при введении минимальных (УбоооЬОбо) доз пестицида, может быть обусловлена тем обстоятельством, что сульфокарбатион способен выступать в качестве своеобразного донора БН-групп, необходимых для проявления каталитических свойств катепсинов В и С [2, 11]. На обоснованность подобного предположения указывает и обнаруженное повышение концентрации БН-групп в сыворотке крови животных всех экспериментальных групп в среднем на 10—15 % (р<0,05). В то же время снижение степени активации катепсинов В и С с увеличением вводимой дозы сульфокарбатиона можно расценивать как результат проявления общего ингибирующего действия данного пестицида на процессы внутрилизосомального протеолиза, что связано, по-видимому, с коротким периодом полужизни протеолитических ферментов лизосом и нарушением их биосинтеза [5, 15].
Таким боразом, представленные результаты свидетельствуют, что одним из компонентов биохимического действия
сульфокарбатиона является нарушение обмена белка на уровне его деградации и повреждение структурной целостности лизосомальных мембран, создающее предпосылки для развития процессов неконтролируемого гидролиза в клетке и как следствие дисрегуляции многочисленных путей метаболизма. В совокупности с имеющимися данными [9] выявленные особенности биохимического действия сульфокарбатиона позволяют рассматривать их как общее свойство пестицидов дитиокарбаматного ряда.
Литература
1. Бадаева Jl. П., Кокшарева Н. В., Овсянникова Л. М. и др. // Гиг. и сан. — 1986. — № 6. — С. 23—26.
2. Баррет А. Д., Хит М. Ф. // Лизосомы: Методы исследования/Под ред. Дж. Дингла: Пер. с англ. — М., 1980.— С. 25—156.
3. Васильев А. В., Звягина О. П. // Вопр. питания. — 1978.— № 5.— С. 31—33.
4. Васильев А. В., Капелевич Т. А., Тутельян В. А. // Вопр. мед. химии.— 1983. — № 3. — С. 127—130.
5. Васильев А. В., Непесова Ш. А., Тутельян В. А.// Бюл. экспер. биол.— 1983. — №7. — С. 39—40.
6. Дин Р. Процессы распада в клетке: Пер. с англ. —' М., 1981.
7. Литвинов Н. Н., Кухта В. КДадыко Т. И. и др. // Гиг. и сан.— 1983. —№ 9. — С. 22—25.
8. Меркурьева Р. В., Судаков К. В., Бонашевская Т. И., Журков В. С. Медико-биологические исследования в гигиене. — М., 1986.
9. Непесова Ш. А., Васильев А. В., Тутельян В. А. // Гиг. и сан. — 1985. — № 1. —С. 89—91.
10. Покровский А. А. // Химические основы процессов жизнедеятельности / Под ред. В. Н. Ореховича. — М., 1962. —С. 311—331.
11. Покровский А. А., Тутельян В. А. Лизосомы. — М., 1976.
12. Рубина X. М., Романчук Л. А.// Вопр. мед. химии.— 1961 . — № 6. — С. 652—655.
13. Сасинович Л. М., Паньшина Т. И., Светлый С. С. // Гиг. и сан. — 1983. — № 3. — С. 30—34.
14. Тутельян В. А. // Вопр. питания. — 1980. — № 5.— С. 56—61.
15. Amenta J. SSargus M. /., Baccino F. M.//J. Cell. Physiol. — 1978. — Vol. 97. — P. 267—284.
16. Lowry О. П., Rosebrough N. JFarr A. L., Randall R. J. //J. biol. Chetn.—1951. —Vol. 193.— P. 265— 275.
Поступила 15.05.87
УДК 611.1/8-06:577.175.122
Л. К. Айвазян
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ДЕЙСТВИЯ ПРЕПАРАТА
ГИДРЕЛ ПО МОРФОЛОГИЧЕСКИМ ПОКАЗАТЕЛЯМ
Филиал ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс,
Ереван
Гидрел — регулятор роста растений, производное 2-хлор-этилфосфоновой кислоты; применяется в качестве стимулятора созревания овощных и плодовых культур и дефолиации хлопчатника [6].
Целью настоящей работы явилось морфологическое исследование внутренних органов (печень, почки, селезенка, легкие, сердце, надпочечники, щитовидная железа) и головного мозга белых крыс, подвергнутых воздействию гид-рела.
Помимо окраски препаратов гематоксилином и эозином, в работе использованы гистохимические методы выявления липидов, РНК и гликогена, а в остром эксперименте с пе-роральным введением вещества проведено также изучение
активности кислой и щелочной фосфатаз (по Берстону) в печени. Гистохимические реакции оценивали визуально. На каждый срок наблюдения использована группа из 4— 5 крыс.
В остром эксперименте материал взят через 1, 2, 3 и 5 сут после однократного введения препарата в дозе 2200 мг/кг (1Х>50).
В раннем периоде исследования (1-е сутки) обнаружены дисциркуляторные изменения, проявившиеся расширением и полнокровием центральных вен, междольковых разветвлений воротной вены и частично синусов в печени, межкаль-цевых капилляров и капилляров гломерул, мелких вен в корковом и мозговом веществе почек, венозных синусов в
\
т
Рис
а
1. Морфологические изменения в печени через 3 сут после однократного перо-
рального введения гидрела в дозе 2200 мг/кг.Х250.
жировая дистрофия. Окраска гематоксилином и эозином; б — резкое снижение содержания
гликогена. ШИК-реакция.
селезенке, межмышечнЫх капилляров в миокарде. В надпочечниках наблюдалось выраженное расширение и полнокровие синусоидов в медуллярной части, капилляров в сетчатой зоне. В просвете синусоидных капилляров печени несколько увеличено содержание лимфоцитов, обнаружено набухание ядер купферовских клеток.
У крыс, аутопсированных в последующие сроки, в печени формировались дистрофические изменения гепатоцитов различной степени выраженности, проявляющиеся зернистостью, вакуолизацией цитоплазмы, а также мелкие фокусы некроза. В почках выявлены гипертрофия части клубочков, очаговое сужение просвета извитых канальцев в результате набухания эпителиоцитов. В селезенке наблюдаются обеднение лимфоидной тканью, ретикулоцитарная гиперплазия, набухание эндотелиоцитов синусов, расширение последних; в парафолликулярных зонах обнаружено увеличение числа плазматических клеток. В миокарде выявлены умеренная отечность интерстиция, отдельные фокусы пролиферации гистиоцитов. В головном мозге обнаружен периваскулярный отек.
Поскольку наиболее выраженные морфологические признаки интоксикации отмечены через 3 сут после затравки, в этот срок проведены более подробные исследования с использованием гистохимических методов. В печени подопытных крыс выявлена зональная или диффузная жировая дистрофия (рис. 1, а). Резко снижено (вплоть до отсутствия) содержание гликогена в печени, в виде мелкой ШИК-положительной субстанции он обнаруживается лишь в ге-патоцитах центральных отделов долек у части крыс
(рис. 1, б). Снижено содержание РНК. В гепатоцитах, под« вергшихся жировой дистрофии, РНК не определяется. В клетках, содержащих РНК, последняя обнаруживается в виде неоформленных глыбок, имеющих часто перинуклеар-ное расположение, или в виде мельчайших зерен. При гисто-ферментативном исследовании обнаружено увеличение содержания и укрупнение гранул продукта реакции в структурах печени, обладающих активностью кислой (рис. 2, б) и щелочной фосфатаз. В почках подопытных крыс выявлена мелкокапельная жировая дистрофия в части извитых канальцев. Резко снижено содержание липидов в коре надпочечников; суданофобный слой не выявляется.
Морфологические исследования, проведенные через 3 сут после однократного ингаляционного воздействия гидрела в максимально создаваемой концентрации 2430 мг/м^, выявили картину выраженной жировой дистрофии печени. Включения липидов в виде крупных и средней величины капель заполняют цитоплазму гепатоцитов. Относительно интактны их комплексы, расположенные в центре долек. Жировая дистрофия носит почти диффузный характер и охватывает значительные участки долек — интермедиарные и особенно периферические. Резко уменьшено содержание гликогена, у части животных последний вовсе не определяется. РНК выявляется лишь в группах клеток, примыкающих к центральной вене, в виде немногочисленных мелких зерен. Жировые включения выявлены в нефроцитах заметного числа извитых канальцев в виде мелких и средней величины капель. Содержание липидов в коре надпочечников умеренное; суданофобный слой не определяется. В легких подопыт-
«Ш-:
шшшя
^ * у]
а
Рис. 2. Кислая фосфатаза в печени крыс (реакция по Берстону) X 312,5.
контроль; б — через 3 сут после однократного перорального введения гидрела в дозе 2200 мг/кг Гепатоциты содержат значительное количество продукта реакции в виде крупных гранул.
ных крыс выявлено полнокровие сосудов межальволярных перегородок, в селезенке — полнокровие синусов, расширение центров размножения некоторых фолликулов. В головном мозге у части крыс найдены полнокровие капилляров, признаки периваскулярного отека, у одного животного — очаговая лимфоидноклеточная инфильтрация мягкой мозговой оболочки.
Сопоставление морфологических признаков интоксикации при пероральном и ингаляционном воздействии гидре-ла в остром эксперименте свидетельствует об однотипности проявлений токсического действия препарата.
Исследования, проведенные по окончании 2-месячного подострого эксперимента с пероральным введением гидрела в дозах 102 и 41 мг/кг (7го и 7бо ЬО50), выявили патологические изменения, характеризующиеся в основном мелкоочаговой жировой дистрофией печени. У отдельных крыс, подвергавшихся воздействию гидрела в дозе 102 мг/кг, обнаружены жировая дистрофия, захватывающая периферические или центральные отделы части печеночных долек, единичные мелкие очаги некроза. В селезенке крыс этой группы определялись умеренно выраженная атрофия фолликулов, очаговая ретикулоклеточная гиперплазия.
Морфологические исследования, проведенные через б мес и по окончании 9-месячного воздействия гидрела в дозах 22, 2,2 и 0,22 мг/кг (1/юо, 7юоо и 1/ю ооо ЬО50) , свидетельствуют об отсутствии заметных сдвигов в структуре изученных органов подопытных животных. Лишь с определенным постоянством обнаруживалась очаговая зернистая дистрофия печени при воздействии гидрела в дозе 22 мг/кг в течение 6 мес. Согласно результатам этих исследований, доза гидрела 22 мг/кг является пороговой, дозы 2,2 и 0,22 мг/кг—недействующими.
При изучении эффекта хронического ингаляционного действия гидрела патологические изменения выявлены у крыс, подвергавшихся воздействию препарата в концентрации 203 мг/м3. В печени подопытных животных этой группы обнаружены дистрофические изменения паренхиматозных элементов (очаговая жировая дистрофия, снижение гистохимических показателей содержания гликогена и РНК), в легких — нерезко выраженные пролиферативные процессы в межуточной ткани. Хроническое поступление гидрела в концентрациях 70 и 4 мг/м3 не вызывает сколько-нибудь заметных патологических изменений во внутренних органах и головном мозге подопытных животных.
Результаты морфологических исследований использованы при обосновании гигиенических нормативов гидрела в воздухе рабочей зоны, воде водоемов и продуктах питания.
Анализ результатов проведенных исследований показал, что острое отравление гидрелом вызывает ряд патологических сдвигов в организме подопытных животных. Наибольшей выраженности они достигают в печени, проявляясь диффузным или очаговым поражением паренхиматозных элементов по типу жировой дистрофии. Известно, что для
поврежденных клеток характерны усиление гликолитических процессов, ряд нарушений обмена веществ, активация про-теолиза. Обнаруженные при остром отравлении гидрелом резкое уменьшение содержания гликогена, избыточное накопление липидов, уменьшение содержания РНК в гепато-цитах и активация кислой фосфатазы, одной из функций которой является катализ белкового распада [2], свидетельствуют о повреждающем действии гидрела на паренхиматозные элементы печени. Развитию дистрофических изменений в печени способствовали обнаруженные в ней сосудистые расстройства. Повышение активности щелочной фосфатазы указывает на изменение проницаемости стенок капилляров, нарушение транспорта веществ через них [3]. Жировая дистрофия печени — наиболее выраженное проявление острой интоксикации гидрелом — ведет к снижению основных функций печени. Накопление липидов, обнаруженное в эпителии главных отделов канальцев почек, является морфологическим выражением резорбционной недостаточности их [5]. Морфологическая картина надпочечников при остром отравлении гидрелом указывает на повышение функции коры, о чем свидетельствует снижение содержания суданофильных веществ в адренокортикоцитах [1], а также исчезновение субгломерулярного слоя [4].
Действие гидрела в условиях подострого эксперимента проявляется мелкоочаговой жировой дистрофией печени, нерезко выраженными изменениями в селезенке.
Хроническое пероральное воздействие гидрела вызывает развитие паренхиматозного диспротеиноза в печени в виде очаговой зернистой дистрофии.
Хроническое ингаляционное воздействие гидрела сопровождается очаговыми дистрофическими изменениями гепа-тоцитов, нерезко выраженными гиперпластическими процессами в легких.
Приведенные результаты свидетельствуют о гепатотроп-ном действии гидрела, признаки которого доминируют в картине острой интоксикации этим препаратом и служат почти единственным проявлением интоксикации при его хроническом пероральном и ингаляционном воздействиях
Литература
1. Артишевский А. А. Надпочечные железы (строение, функция, развитие). — Минск, 1977.
2. Введение в количественную гистохимию ферментов / Под ред. Т. Б. Журавлевой, Р. А. Прочуханова. — М., 1978.
3. Кравцова Г. Б. // Арх. анат. — 1983. — № 7. — С. 55—61.
4. Савина Е. А.// Там же. — 1978. — № 9. — С. 30—36.
5. Серов В. В. // Основы нефрологии. — М., 1972. — Т. 1.— С. 372—382.
6. Справочник по пестицидам. Н. Н. Мельников, К. В. Новожилов, С. Р. Белан, Т.Н. Пылова. — М., 1985. — С. 37.
Поступила 19.05.87
УДК 613.632.547.807.4]-074
И. И. Даценко, Е. П. Корнейчук, В. С. Петру с, Л. А. Комиссарова,
Ж. Я. Лопатнева
Т(^КСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ^ЧДИТИОД ИМОРФОЛИНА
^ • « < к** •
Львовский медицинский институт
Основными компонентами резиновых смесей являются каучук и вулканизирующие вещества [1]. Для ускорения процесса вулканизации и улучшения физико-химических свойств резины в смесь вводят ускорители, среди которых наиболее широкое применение получили 2-меркаптобензтиа-зол (каптакс), дифенилгуанидин, тетраметилтиурамдисуль-фид (тиурам), обладающие относительно высокой токсичностью.
В настоящее время в смесях на основе цис-1,4-изопрено-вого каучука широко применяется как ускоритель и самостоятельный агент вулканизации 1М-№-дитиодиморфолин
(Ы-М'-ДТДМ), токсикологическая оценка которого составила предмет настоящего исследования.
По данным литературы [7], Ы-Ы'-ДТДМ относится к веществам 3-го класса опасности (ЬО50 Д£я белых мышей 2755 мг/кг), оказывает нейротропное действие и вызывает изменения белкового, углеводного и жирового обмена, обладает раздражающими свойствами.
В настоящей работе приведены данные исследований по изучению токсикологических параметров Ы-Ы'-ДТДМ при пероральном и ингаляционном путях поступления в организм животных, местно-раздражающего действия, а также
