CC BY
29
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Экспериментальные модели Experimental models
видностью демонстрировало, что индекс модуляции при применении M в дозе 108 КОЕ/ мышь и Линекса 5 х 107 КОЕ/мышь определялся со знаком «—», свидетельствуя о токсическом действии этих препаратов и необходимости ограничения их дозы. В отношении действия на фагоцитоз макрофагов, подтверждалось, что M в дозе 2 х 107 КОЕ/мышь, эффективно увеличивает концентрацию макрофагов в перитонеальном экссудате и их поглотительную активность (p < 0,001). Показано, что M в дозе 107 M существенно превосходил влияние Линекса на фагоцитарную активность макрофагов (p < 0,001). Однако высокая доза (2 х 108 КОЕ/мышь) М приводило к снижению фагоцитарного индекса.
Таким образом, разрабатываемый препарат М, в состав которого входят штаммы E. faecium L3, L. rhamnosus K32, B. longum GT15, в дозе 107 КОЕ/мышь, не нарушает функционирование иммунной системы, а по стимуляции фагоцитарной активности превосходит Линекс. При включении пробиотиков в схемы таргетной терапии различных заболеваний нужно учитывать, что дозы препаратов могут существенно влиять на реализации важных функции иммунной системы.
ВОЗДЕЙСТВИЕ ПРЕПАРАТА ФОСПРЕНИЛ НА ПОЛЯРИЗАЦИЮ ИММУННОГО ОТВЕТА, ОБУСЛОВЛЕННУЮ CagA+ ФРАГМЕНТОМ ХРОМОСОМЫ HELICOBACTER PYLORI
Николаева Т.Н., Козлов В.В., Григорьева Е.А., Белый Ю.Ф., Пронин А.В.
ФГБУ «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Иммунные механизмы являются ключевыми в формировании Helicobacter pylori (Н.р), ассоциированной га-стродуоденальной патологии.
Функциональные белки CagA M.M.120-145-kDa, кодируемые островком патогенности сagA(cagPAI) в 40kb, интегрированным в хромосому Н.р., воздействуют на множественные сигнальные пути, которые регулируют естественный клеточный иммунитет, в том числе Th-клетки. С CagA ассоциировано смещение поляризации иммунного ответа с Th1 на Th2 с параллельным возрастанием активности регуляторных T-клеток и прогрессией тяжелых форм поражения желудка вплоть до аде-номокарциномы. При инфекции, вызванной CagA- Н.р., такого смещения не наблюдается.
В связи с этим актуален поиск путей иммунокор-рекции естественного и адаптивного иммунитета при хеликобактериозе. Фоспренил (ФП) относится к фос-фориллированным полиизоприноидам, которые являются интегральными компонентами мембран всех живых клеток, где выполняют функции промежуточных акцепторов сахаров (в частности маннозы) при биосинтезе гликопротеинов. Ранее было показано, что препарат способен подавлять взаимодействие IL-2 с CD25 и, таким образом, препятствовать активации ре-гуляторных Т-клеток. В связи с этим цель настоящего исследования состояла в изучении действие препарата ФП на иммунный ответ экспериментальных животных, инфицированных живыми бактериями генетически родственных штаммов E. coli BL21, отличающихся наличием островка cagA H.pylori.
Материалы и методы. бактерии генетически родственных штаммов живых бактерий E. coli BL21p119(CagA+) и E. coli BL21рЕТ-28с (CagA-). Мышам интрагастрально через металлический зонд вводили живые бактерии изученных штаммов в количестве 5 х 109 КОЕ/0,5 мл. Клеточные иммунные реакции оценивали по уровню пролиферации спленоцитов в реакции бласттрансформации (РБТЛ), цитотоксической активности ЕК-клеток селезенки, синтезу цитокинов методом ELISA. Анализ экспрессии поверхностных антигенов на мононуклеарных лимфоцитах селезенки проводили методом проточной цитофлуорометрии с использованием моноклональных антител анти-CDi-FITC, CD4-PE-Cy7, CD8-APC (BD Biosciences, USA). Образцы анализировали на проточном цитофлуориме-тре BD FACS CantoII (BD Biosciences, USA).
Результаты. Введение животным E. coli CagA+ уже через сутки сопровождается резким усилением про-лиферативной активности спленоцитов, чего не наблюдается после заражения изогенным CagA- штаммом E. coli BL21. Предварительное введение животным ФП за 3 часа до заражения нивелирует различия между штаммами. При этом ФП усиливал активацию естественных киллеров у мышей, зараженных штаммом E. coli BL21p119 (CagA+), значительно сильнее, чем у животных зараженных штаммом, не продуцирующим CagA белки (Р < 0,05).
Методом проточной цитофлуориметрии показано, что ФП сильнее снижает число CD3+CD4+T клеток у мышей, инфицированных CagA+ по сравнению с мышами, инфицированными CagA- мутантом и подавляет продукцию IL-2 Т-клетками, оставляя неизменным соотношение IFNy, IL-4 и IL-10, что свидетельствует об ингибиру-ющем воздействии ФП на регуляторные T-клетки.
Таким образом, ФП, подавляя активность регуляторных Т-клеток, может препятствовать поляризации иммунного ответа с Th1 на Th2, связанной с активностью CagA.
ЭФФЕКТЫ ДЕЙСТВИЯ АНТИМИКРОБНЫХ ПЕПТИДОВ НА ЦИТОТОКСИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ МОНОНУКЛЕАРОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА В ОТНОШЕНИИ КЛЕТОК МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЫ IN VITRO
Пазина Т.Ю.1, Артамонов А.Ю.1, Орлов Д.СЛ 2, Филатенкова Т.А., Шамова О.В.1, 2
1ФГБНУ«Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия
2 Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург, Россия
Нейтрофилы, циркулирующие в периферической крови и мигрирующие в очаги развития патологических процессов, способны посредством биологических активных молекул модулировать иммунный ответ, а именно влиять на функцию цитотоксических Т- и ЕК-клеток. Роль нейтрофильных гранулоцитов в опухолеобразова-нии неоднозначна, так как секретируемые этими клетками факторы могут, как стимулировать опухолевый рост, так и способствовать его ограничению. Известно, что катионные пептиды (АМП) нейтрофилов, проявляющие антимикробные свойства, обладают также и противоопухолевой активностью.
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
Целью исследования явилась оценка влияния пептидов системы врожденного иммунитета альфа-дефенсина человека HNP-1, кателицидина человека LL-37, бета-де-фенсина человека hDB-3, а также двух АМП животных: протегрина 1 (PG-1) и бактенецина ChBac.3.4 на цито-токсическое действие ЕК- и Т-клеток фракции монону-клеаров периферической крови здоровых доноров в отношении клеточных линий множественной миеломы (ММ): MM.1R и RPMI8226, in vitro.
Цитотоксическую активность ЕК-клеток фракции мо-нонуклеаров здоровых доноров определяли по их способности лизировать клетки-мишени RPMI-8226 и MM.1R in vitro, при помощи набора реактивов Delfia EuTDA Cytotoxicity Reagents kit (PerkinElmer, США). Пептиды применяли в концентрации, при которой они, по результатам МТТ-теста, не проявляют токсичности для клеток-мишеней и эффекторов: PG-1 — 2 мкМ, LL-37 —5 мкМ, HNP-1 - 10 мкМ, hDB-3 - 1 мкМ, ChBac.3.4 - 5 мкМ. Лизис клеток-мишеней количественно оценивали, проводя измерения в режиме отсроченной во времени флуоресценции (TRF) на приборе Omega Polar Star (BMG Labtech, Германия). Результаты рассчитывали в процентах по формуле: % лизиса = (экспериментальное значение — контроль (0% лизиса))/(контроль (100% лизиса) — контроль (0% лизиса)).
В большинстве случаях установлено увеличение лизиса таргетных клеток в присутствии мононуклеаров и пептидов по сравнению с контрольными пробами, где клетки инкубировались только в присутствии мононуклеаров или только пептидов. Действие LL-37 — пептида, который содержится преимущественно в нейтрофилах или в клетках барьерных эпителиев человека, наиболее выражено для всех исследованных клеточных линий. Интересно, что данным эффектом обладал, как мембранолитический пептид PG-1, имеющий конформацию бета-шпильки, так и линейный пролин-богатый бактенецин ChBac3.4, для которого описано менее выраженное повреждающее действие в отношении клеточных мембран. Бета-дефен-син человека hBD3, который проявил наиболее высокую собственную цитотоксическую активность в отношении клеток ММ in vitro, оказывал наименьший эффект на ци-тотоксическое действие мононуклеарных клеток в данных экспериментальных условиях.
Полученные е данные свидетельствуют в пользу предположения о возможном участии АМП в противоопухолевой защите, не только вследствие их прямого цитоток-сического действия на малигнизированные клетки, но и за счет их взаимодействия с ЕК- и Т-клетками.
Работа поддержана грантом РФФИ № 17-04-02177а.
ВЛИЯНИЕ ОКСИТОЦИНА НА СОСТАВ ЛЕЙКОЦИТОВ В МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЕ У ЛАКТИРУЮЩИХ КРЫС
Панова Н.А., Скопичев В.Г.
Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Лактационные процессы в молочной железе тесно связаны с деятельностью иммунной системы. Эта взаимосвязь может проявляться в непосредственной регуляции секретообразования. В результате, отдельные иммунокомпетентные клетки мигрируют в просвет альвеол и включаются в состав секрета молозива и молока. Синтез молока и молозива молочной железой, а также проницаемость гемато-молочного барьера, являются
важными составляющими для дальнейшего роста и развития потомства. В первые дни жизни молозиво играет исключительную роль в поддержании иммуной системы новорожденного, так как содержит необходимые для него иммуноглобулины. Помимо антител, с секретом молочных желез, в организм детёныша поступают лейкоциты, которые проникают через гемато-молочный барьер и являются клеточными факторами защиты. В молоке постоянно присутствуют лимфоидные клетки, количество которых значительно изменяется под влиянием окситоцина на рецепторы миоэпителиальных клеток. Раздражение механорецепторов молочной железы стимулирует выделение нейрогипофизом в кровь окситоцина, который непосредственно стимулирует молокоотдачу из альвеол.
В настоящее время влияние клеточного и гуморального иммунитета на молочную железу самок, в период лактации, изучен недостаточно. Вместе с тем проблемы клеточного иммунитета, приобретаемого потомством с молозивом и молоком, являются актуальными и насущными.
Цель и задачи. Изучение количественного состава лейкоцитов в мазках-отпечатках молочной железы лакти-рующих крыс до влияния окситоцина и через 5 и 10 минут после введения гормона нейрогипофиза.
Материалы и методы. Экспериментальная часть выполнена на безлинейных лактирующих крысах. Сформировали 3 группы крыс по 5 животных в каждой. Продолжительность лактации в контрольной и опытных группах, на момент исследования, составляла 1 неделю. Крысам опытных групп вводили внутрибрюшинно окситоцин в дозе 0,1 мл. У крыс всех групп выделяли молочные железы. В опытных — через 5 и 10 минут. Делали продольный разрез и на предметных стеклах готовили мазки-отпечатки. Готовые, высушенные мазки окрашивали по Паппен-гейму и проводили подсчет иммунокомпетентных клеток при помощи иммерсионной оптики.
Результаты. Анализ полученных нами данных показал, что иммунокомпетентные клетки присутствуют во всех мазках-отпечатках. В молочной железе контрольной группы установлено незначительное количество отдельных видов лейкоцитов. В опытных группах, под влиянием окситоцина, существенно изменился количественный и качественный состав лейкоцитов.
Раздражение рецепторов миоэпителиальных клеток молочной железы окситоцином через 5 минут стимулировало значительное повышение количества лимфоцитов, по сравнению с контрольной группой, с 15 до 35 и к 10-й минуте снизилось до 6 клеток. В молочных железах находились большие, малые, средние и делящиеся лимфоциты. В мазках-отпечатках присутствовали палочкоя-дерные, сегментоядерные нейтрофилов и моноциты. Но их количественный состав менялся незначительно. При микроскопическом исследовании мазков-отпечатков молочной железы встречались жировые и эпителиальные клетки.
Заключение. В непосредственном контакте с секреторными и миоэпителиальными клетками альвеол находятся такие клеточные компоненты соединительной ткани как тучные клетки и лейкоциты, оказывающие влияние на деятельность клеток альвеол. Барьер «кровь-молоко» способны преодолевать только мигрирующие, активированные лейкоциты. Не активированные лейкоциты локализуются в эпителиальных тканях и выполняют функции иммунологичекой защиты.
