CC BY
41
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
Целью исследования явилась оценка влияния пептидов системы врожденного иммунитета альфа-дефенсина человека HNP-1, кателицидина человека LL-37, бета-де-фенсина человека hDB-3, а также двух АМП животных: протегрина 1 (PG-1) и бактенецина ChBac.3.4 на цито-токсическое действие ЕК- и Т-клеток фракции монону-клеаров периферической крови здоровых доноров в отношении клеточных линий множественной миеломы (ММ): MM.1R и RPMI8226, in vitro.
Цитотоксическую активность ЕК-клеток фракции мо-нонуклеаров здоровых доноров определяли по их способности лизировать клетки-мишени RPMI-8226 и MM.1R in vitro, при помощи набора реактивов Delfia EuTDA Cytotoxicity Reagents kit (PerkinElmer, США). Пептиды применяли в концентрации, при которой они, по результатам МТТ-теста, не проявляют токсичности для клеток-мишеней и эффекторов: PG-1 — 2 мкМ, LL-37 —5 мкМ, HNP-1 - 10 мкМ, hDB-3 - 1 мкМ, ChBac.3.4 - 5 мкМ. Лизис клеток-мишеней количественно оценивали, проводя измерения в режиме отсроченной во времени флуоресценции (TRF) на приборе Omega Polar Star (BMG Labtech, Германия). Результаты рассчитывали в процентах по формуле: % лизиса = (экспериментальное значение — контроль (0% лизиса))/(контроль (100% лизиса) — контроль (0% лизиса)).
В большинстве случаях установлено увеличение лизиса таргетных клеток в присутствии мононуклеаров и пептидов по сравнению с контрольными пробами, где клетки инкубировались только в присутствии мононуклеаров или только пептидов. Действие LL-37 — пептида, который содержится преимущественно в нейтрофилах или в клетках барьерных эпителиев человека, наиболее выражено для всех исследованных клеточных линий. Интересно, что данным эффектом обладал, как мембранолитический пептид PG-1, имеющий конформацию бета-шпильки, так и линейный пролин-богатый бактенецин ChBac3.4, для которого описано менее выраженное повреждающее действие в отношении клеточных мембран. Бета-дефен-син человека hBD3, который проявил наиболее высокую собственную цитотоксическую активность в отношении клеток ММ in vitro, оказывал наименьший эффект на ци-тотоксическое действие мононуклеарных клеток в данных экспериментальных условиях.
Полученные е данные свидетельствуют в пользу предположения о возможном участии АМП в противоопухолевой защите, не только вследствие их прямого цитоток-сического действия на малигнизированные клетки, но и за счет их взаимодействия с ЕК- и Т-клетками.
Работа поддержана грантом РФФИ № 17-04-02177а.
ВЛИЯНИЕ ОКСИТОЦИНА НА СОСТАВ ЛЕЙКОЦИТОВ В МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЕ У ЛАКТИРУЮЩИХ КРЫС
Панова Н.А., Скопичев В.Г.
Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Лактационные процессы в молочной железе тесно связаны с деятельностью иммунной системы. Эта взаимосвязь может проявляться в непосредственной регуляции секретообразования. В результате, отдельные иммунокомпетентные клетки мигрируют в просвет альвеол и включаются в состав секрета молозива и молока. Синтез молока и молозива молочной железой, а также проницаемость гемато-молочного барьера, являются
важными составляющими для дальнейшего роста и развития потомства. В первые дни жизни молозиво играет исключительную роль в поддержании иммуной системы новорожденного, так как содержит необходимые для него иммуноглобулины. Помимо антител, с секретом молочных желез, в организм детёныша поступают лейкоциты, которые проникают через гемато-молочный барьер и являются клеточными факторами защиты. В молоке постоянно присутствуют лимфоидные клетки, количество которых значительно изменяется под влиянием окситоцина на рецепторы миоэпителиальных клеток. Раздражение механорецепторов молочной железы стимулирует выделение нейрогипофизом в кровь окситоцина, который непосредственно стимулирует молокоотдачу из альвеол.
В настоящее время влияние клеточного и гуморального иммунитета на молочную железу самок, в период лактации, изучен недостаточно. Вместе с тем проблемы клеточного иммунитета, приобретаемого потомством с молозивом и молоком, являются актуальными и насущными.
Цель и задачи. Изучение количественного состава лейкоцитов в мазках-отпечатках молочной железы лакти-рующих крыс до влияния окситоцина и через 5 и 10 минут после введения гормона нейрогипофиза.
Материалы и методы. Экспериментальная часть выполнена на безлинейных лактирующих крысах. Сформировали 3 группы крыс по 5 животных в каждой. Продолжительность лактации в контрольной и опытных группах, на момент исследования, составляла 1 неделю. Крысам опытных групп вводили внутрибрюшинно окситоцин в дозе 0,1 мл. У крыс всех групп выделяли молочные железы. В опытных — через 5 и 10 минут. Делали продольный разрез и на предметных стеклах готовили мазки-отпечатки. Готовые, высушенные мазки окрашивали по Паппен-гейму и проводили подсчет иммунокомпетентных клеток при помощи иммерсионной оптики.
Результаты. Анализ полученных нами данных показал, что иммунокомпетентные клетки присутствуют во всех мазках-отпечатках. В молочной железе контрольной группы установлено незначительное количество отдельных видов лейкоцитов. В опытных группах, под влиянием окситоцина, существенно изменился количественный и качественный состав лейкоцитов.
Раздражение рецепторов миоэпителиальных клеток молочной железы окситоцином через 5 минут стимулировало значительное повышение количества лимфоцитов, по сравнению с контрольной группой, с 15 до 35 и к 10-й минуте снизилось до 6 клеток. В молочных железах находились большие, малые, средние и делящиеся лимфоциты. В мазках-отпечатках присутствовали палочкоя-дерные, сегментоядерные нейтрофилов и моноциты. Но их количественный состав менялся незначительно. При микроскопическом исследовании мазков-отпечатков молочной железы встречались жировые и эпителиальные клетки.
Заключение. В непосредственном контакте с секреторными и миоэпителиальными клетками альвеол находятся такие клеточные компоненты соединительной ткани как тучные клетки и лейкоциты, оказывающие влияние на деятельность клеток альвеол. Барьер «кровь-молоко» способны преодолевать только мигрирующие, активированные лейкоциты. Не активированные лейкоциты локализуются в эпителиальных тканях и выполняют функции иммунологичекой защиты.
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Экспериментальные модели Experimental models
Повышение содержания лейкоцитов в молочной железе, после стимуляции окситоцином, происходило за счет увеличения числа лимфоцитов. Проникновение их из крови в молочную железу и изменение гемато-молоч-ного барьера связано с действием окситоцина.
Во время лактации механизмы иммунной системы самки максимально направлены на защиту потомства и поддержание его иммунного статуса в первые дни жизни. Происходит этот процесс под непосредственным контролем нейрогуморальной регуляции. С молозивом и молоком новорожденный получает все питательные вещества и иммуноглобулины, необходимые для роста и развития организма. Но данные защитные факторы быстро элиминируют.
На основе наших исследований можно предположить, что клеточные факторы защиты являются составляющими колострального иммунитета, в результате которого у новорожденного обеспечивается стойкий и длительный иммунитет.
ОЦЕНКА ХРОНОСОПРЯЖЕННОСТИ ИЗМЕНЕНИЙ ПЛОТНОСТИ ПРОСТРАНСТВЕННОГО РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ТКАНЕВЫХ БАЗОФИЛОВ И МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ В ПОСЛЕРОДОВОМ ПЕРИОДЕ
Параскун А.А., Виноградов С.Ю., Штойко М.А., Чериков В.С.
ФГБОУ ВО «Ивановская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения РФ, Иваново, Россия
По данным популяционных исследований, в последние годы увеличивается распространенность заболеваний щитовидной железы у женщин во время беременности и лактации. В поддержании внутриорганного гомеостаза щитовидной железы принимают участие тканевые базо-филы, которые накапливают и выделяют широкий спектр биологически активных веществ, тем самым регулируя пролиферацию клеток, их дифференцировку, функциональную активность и межклеточные взаимодействия. Цель исследований — оценка хроносопряженности динамики плотности пространственного распределения тканевых базофилов (ТБ) и морфофункциональных параметров щитовидной железы (ЩЖ) в послеродовом периоде. Работа выполнена на 40 беспородных крысах-самках. Сроки эксперимента составили — 0, 1, 3, 5, 7, сутки после родов и лактации. Исследования с животными проводили в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных». После забоя у крыс отделяли обе доли ЩЖ. Одна доля подвергалась криостатному микротомированию, а другая — парафиновой проводке. Для оценки плотности пространственного распределения ТБ срезы окрашивали альциа-новым синим-сафранином в прописи J. Desaga и изучали с помощью микроскопа Биолам (об. 90, ок.10). Подсчитывали количество тканевых базофилов в поле зрения (10 полей зрения — 1 варианта статистического массива). При анализе результатов тучные клетки были разделены на основе сродства гранул к красителям на 3 группы: альцианофильные, миксные, сафранинофильные. Мор-фометрические исследования препаратов, окрашенных гематоксилин-эозином, проводили с помощью анализатора изображений, используя программу ВИДЕО ТЕСТ
МАСТЕР. Содержание тироксина (Т4), трийодтиронина (Т3), тиреотропного гормона (ТТГ) в сыворотке крови животных определяли методом ИФА. Статистическая обработка материала проводилась с использованием программ Microsoft Excel 2010, Statistica 6.0. Для выявления и анализа внутри- и межрегиональных сопряжений изменения оценочных параметров применялся непараметрический метод рангового корреляционного анализа Спирмена. В результате исследований изучена 361 ранговая корреляционная зависимость, из них 152 отражают колебания показателей с ТБ (28% достоверных). Динамику хроносопряжений ТБ между собой оценивают 37%, а с морфофункциональными параметрами ЩЖ 63%. Блок наиболее тесных зависимостей выявлен между общим количеством ТБ и показателями ЩЖ (32%): отрицательные («-») — с высотой тироцитов, площадью фолликулов; положительные («+») — с индексом накопления коллоида, содержанием ТТГ в сыворотке крови. В центральных зонах ЩЖ большим количеством значимых связей обладает изменение сафранинофильных ТБ («-» с высотой тироцитов, площадью фолликулов; «+» с уровнем Т3), в периферических участках железы — миксных ТБ («+» с индексом накопления коллоида и его оптической плотностью, содержанием Т4). Таким образом, корреляционный анализ демонстрирует хроносопряженность динамики плотности распределения ТБ и показателей функциональной активности ЩЖ.
ВЛИЯНИЕ ПСИХОЭМОЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ НА МЕТАСТАЗИРОВАНИЕ АДЕНОКАРЦИНОМЫ ЛЬЮИС У МЫШЕЙ
Попова Н.А.1, 2, Каледин В.И.2, Николин В.П.2, Амикишиева А.В.2, Ильницкая С.И.2
1 Новосибирский национальный исследовательский государственный университет, Новосибирск, Россия
2 ФИЦ«Институт цитологии и генетики» СО РАН, Новосибирск, Россия
Исследование условий и особенностей метастазиро-вания злокачественных опухолей представляется весьма актуальным, поскольку именно метастазы опухолей являются непосредственной причиной смертельных исходов онкологических заболеваний.
Не вызывает сомнений, что хронический стресс и сопровождающая его общая напряженность, которая перерастает в чувство повышенной тревожности и далее в депрессию, оказывает влияние на рост и ме-тастазирование злокачественных опухолей. Механизм этого феномена может реализоваться путем индукции психоэмоционального иммунодефицита. Ранее нами показано, что хронический стресс в виде 20-дневных ежедневных социальных конфронтаций в одинаковой степени усиливает рост аденокарциномы Льюис как у победителей в межсамцовых столкновениях, так и у побежденных. Однако число метастазов в легких при этом увеличивается только у побежденных. В использованной нами модели социальных конфликтов побежденные самцы имеют последствия ежедневных драк в виде повреждений кожи, что очевидно вызывает воспаление, которое в свою очередь может стать причиной иммунодефицита. Чтобы исключить эту возможность, мы изучали зависимость метастазирования от психоэмоционального статуса на поведенческой модели, в которой формирование соответствующего статуса про-
