CC BY
25ЭФФЕКТИВНОЕ ЖИВОТНОВОДСТВО
V 39
DOI 10.24412/cl-33489-2023-3-39-42 УДК 619:616.98:578.831.11:615.371
Мороз Н.В., заместитель директора, кандидат ветеринарных наук, e-mail: [email protected] Фролов С.В., начальник отдела, кандидат ветеринарных наук, e-mail: [email protected] Кулаков В.Ю., ведущий научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук, [email protected] Зыбина Т.Н., научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук, [email protected] Гусева Н.А., ведущий специалист, [email protected] ФГБУ «ВНИИЗЖ»
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВАКЦИН ПРОТИВ ВИРУСА НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ ГЕНОТИПА VII L
Аннотация. Оценивали эффективность нескольких вакцин против ньюкаслской болезни (НБ) различных производителей в отношении природного изолята вируса НБ VII генотипа (Г7), выделенного на территории сопредельного государства. Установили, что наиболее эффективной была «Вакцина против ньюкаслской болезни из штамма «Ла-Со-та» сухая живая» (производитель ФГБУ «ВНИИЗЖ»).
Ключевые слова: Ньюкаслская болезнь, вакцина, вирус ньюкаслской болезни VII генотип, заболеваемость, летальность.
Abstract. Effectiveness of several Newcastle disease (ND) vaccines from different manufactures was tested against the field isolate of Genotype VII ND virus. Live dry vaccine against Newcastle disease based on LaSota strain (manufacturer: FGBI "ARRIAH") was determined to be the most effective.
Keywords: Newcastle disease, vaccine, genotype VII Newcastle disease virus, morbidity, mortality.
Резюме. В остром опыте на группах (n=15) товарного молодняка птиц яичного кросса проведены сравнительные исследования иммунологических свойств пяти коммерческих вакцин против ньюкаслской болезни (НБ): ВЕКТОРМУН® ND, Ceva Sante Animale (в тексте - «Вектормун»); Нобилис® ND Clone 30 MSD, Animal Health, Интервет (в тексте - «Клон-30»); Avinew Neo, Boehringer Ingelheim (в тексте - «Авинью»); СЕВАК® NEW L, Ceva Sante Animale (в тексте - «Сева»); Вакцина против ньюкаслской болезни из штамма «Ла-Сота» сухая живая, ФГБУ «ВНИИЗЖ», РФ (в тексте - «Ла-Сота»). Контрольное заражение проводили на фазе развитой поствакцинальной иммунной реакции птиц изолятом вируса
НБ VII генотипа (Г7), выделенного на территории сопредельного государства. В группах вычисляли текущий (суточный) клинический показатель вида С = ^+т)/'п, где: d - число птиц, имеющих клинические признаки НБ; т - число погибших птиц; 'п - количество птиц в группе на данные сутки.
Установили, что в группе привитой препаратом «Ла-Сота» полное прекращение клинического проявления болезни (С=0) наступало раньше, чем в остальных группах. Определяли оценки протек-тивного эффекта на интервале 4-6 суток после контрольного заражения, характеризующие процент птиц, защищенных от клинического проявления НБ:
40 Щ Птицеводство
www.agroyug.ru
Pc = (1 - (Хс4 _ 6)/3) x100, а также - оценки протектив-ного эффекта вакцины по показателю смертности за период наблюдений (11 суток), характеризующие процент выживших птиц, после контрольного заражения: Pm = (1 _ (£m)/n))x100. Соответственно тестированным вакцинам были получены следующие величины (Рс\Рт, %): «Вектормун» _ 68,5\73,3; «Клон-30» _ 61,8\46,7; «Авинью» _ 78,5\73,3; «Сева» _ 59,3\73,3; «Ла-Сота» _ 71,3\86,7. По совокупности изученных показателей наиболее эффективной показала себя «Вакцина против ньюкаслской болезни из штамма «Ла-Сота» сухая живая», ФГБУ «ВНИИЗЖ».
Введение. Исследования, проведенные в последние четыре десятилетия, убедительно свидетельствуют о неуклонной эволюции вируса ньюкаслской болезни (НБ). Наследуемые изменения структуры вирусного генома определяют фенотипические свойства возбудителя. Штаммы новых генотипов проявляют себя и как высоковирулентные [3]. Выделенные в 80-е годы во время эпизоотий в Европе, варианты вируса Нб были отнесены к генотипу VlI [4], который в течение 20 лет распространился во многие страны с развитым птицеводством [3]. В РФ в 2019 году было зафиксировано 17 очагов НБ, где был выделен субгенотип VII-L [1]. При этом у синан-тропных птиц были выявлены высокие титры антител к вирусу Нб [6], что предполагает возможность проникновения возбудителя НБ на птицефабрики.
В этой связи представляется актуальным, изучение эффективности известных коммерческих вакцин против НБ в отношении новых высоковирулентных изолятов данного вируса.
Целью настоящих исследований являлась оценка иммунологической эффективности пяти коммерческих препаратов для специфической профилактики НБ в отношении изолята вируса НБ генотипа VII, выделенного на территории сопредельного государства.
Материалы и методы.
Вакцины:
- ВЕКТОРМУН® ND. Вакцина против болезни Ньюкасла и Марека живая замороженная векторная с разбавителем. Изготовлена из культуры клеток фибробластов СПФ-эмбрионов кур, инфицированной рекомбинантным вирусом «rHVT/ND», представляющим собой вирус герпеса индеек (штамм «HVT FC-126»), в ДНК которого встроен ген, кодирующий протективный эпитоп вируса ньюкаслской болезни (штамм «D-26»). В одной иммунизирующей дозе содержится не менее 2500 ФОЕ рекомбинантного вируса «rHVT/ND». Производитель: Сeva Sante Animale (в тексте: «Вектормун»);
- Нобилис® ND Clone 30. Вакцина против ньюкаслской болезни живая сухая. Вакцина изготовлена из экстраэмбриональной жидкости СПФ-эмбрионов кур, инфицированной живым аттенуированным вирусом ньюкаслской болезни (штамм «Clone 30»). В одной иммунизирующей дозе вакцины содержится не менее 6,0 log10 ЭЛД50 живого вируса болезни Ньюкасла (штамм «Clone 30»). Производитель: MSD Animal Health, Интервет (в тексте: «Клон 30»);
_ Avinew Neo. Вакцина против ньюкаслской болезни живая таблетированная (представляет собой шипучую водорастворимую таблетку). Изготовлена из экстраэмбриональной жидкости СПФ-эмбрионов кур, инфицированных вирусом ньюкаслской болезни (штамм «VG/GA»). В одной прививной дозе вакцины содержится не менее 1055 ЭИД вируса ньюкаслской болезни (штамм «VG/GA»). Производитель: Boehringer Ingelheim (в тексте: «Авинью»);
- СЕВАК® NEW L. Вакцина против ньюкаслской болезни живая (лиофилизат для приготовления суспензии для окулярного и перорального применения). Вакцина изготовлена из экстраэмбриональной жидкости СПФ-эмбрионов кур, инфицированных вирусом ньюкаслской болезни (штамм «Ла-Сота»). Одна доза вакцины в качестве действующего вещества содержит вирус ньюкаслской болезни, штамм «Ла-Сота» не менее 5,5 loglO ЭИД50. Производитель: Ceva Sante Animale (в тексте: «Сева»);
- Вакцина против ньюкаслской болезни из штамма «Ла-Сота» сухая живая. Вакцина предназначена для профилактики ньюкаслской болезни у птиц путем создания активного специфического иммунитета. Действующее вещество: биологически активный аттенуированный вариант вируса ньюкаслской болезни штамм «Ла-Сота». Вакцина представляет собой лиофилизированнную вируссодержащую экстраэмбриональную жидкость SPF-эмбрионов кур. Одна интраназальная (окулярная) доза вакцины содержит не менее 1067 ЭИД вируса НБ (штамм «Ла-Сота»). Производитель: ФГБУ «ВНИИЗЖ», РФ (в тексте: «Ла-Сота»).
Вирус. Для контрольного заражения в эксперименте был использован изолят вируса НБ генотипа VII, выделенный на территории сопредельного государства (в тексте изолят «Г7»). Вирусный материал в виде экстраэмбриональной жидкости после расплодки на СПФ эмбрионах кур.
Птица. Использованы цыплята яичного кросса в возрасте 0 и 10 суток, полученные из благополучного по инфекционным болезням птицехозяйства. Средние логарифмические (log2) титры антител к вирусу НБ в РТГА в сыворотках крови цыплят (n>10) в возрасте 0 и 10 суток составили 4,5±0,6 и 2,1±0,5, соответственно. Все эксперименты на животных проводились в соответствии с ГОСТ 33215, а также согласно требованиям «Директивы 2010/63/EU» по охране животных, используемых в научных целях.
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА). В РТГА в образцах сывороток крови птиц определяли титр антител к вирусу НБ. Использовали диагностические наборы для выявления антител к вирусу НБ в РТГА производства ФГБУ «ВНИИЗЖ».
Схема эксперимента. Соответственно числу тестируемых вакцин были образованы 5 групп птиц по 15 голов. В том же количестве голов параллельно содержали группу контроля. Вакцины применяли в соответствии с инструкциями производителей с учётом дозировки указанной на этикетках флаконов. Птиц в контрольной группе не прививали. Хронология этапов эксперимента приведена в таблице 1.
Таблица 1.
Хронологическая схема эксперимента.
№№ групп Вакцина Возраст цыплят, сутки
Вакцинация' Заражение''
1* «Вектормун» 1 31
2** «Клон-30» 10 21
3** «Свинью» 10 21
4** «Ceва» 10 21
5** «Ла-Coта» 10 21
6*** Контроль - 21
Примечания: # - вакцины применены в соответствии с инструкциями в одной прививной дозе; ## - для заражения использован изолят «Г7» вируса НБ в дозе 6,6 1д ЭИД50. * - внутримышечная инъекция; ** - выпойка; *** - птиц не прививали.
ЭФФЕКТИВНОЕ ЖИВОТНОВОДСТВО
Контрольное заражение. Процедуру контрольного заражения проводили в соответствии с Руководством МЭБ по диагностическим тестам и вакцинам для наземных животных [5]. Вирусный материал (изолят «Г7») вводили внутримышечно в дозе 6,6 1дЭИД50 в объеме 0,5 см3. Наблюдения клинического состояния зараженной птицы продолжали в течение 11 суток.
Обработка данных. Использованные вычислительные процедуры описаны в тексте.
Результаты.
Клинические наблюдения. После проведения контрольного заражения в группах каждые сутки определяли количество заболевших и погибших (т) птиц. Клиническими симптомами НБ считали угнетение, конъюнктивиты, нарушение координации движений, парезы и параличи конечностей, шеи, диарею. Патологоанатомическими признаками НБ являлись: ринит, дистрофия печени (глиняный цвет), кровоизлияния в слепокишечных миндалинах и в слизистой на переходе мышечного и железистого желудков, кровоизлияния в кору головного мозга. Полученные первичные данные представлены в таблице 2.
Приведенные в таблице 2 данные позволяют считать, что использованный в эксперименте изолят «Г7» вируса НБ проявил высокую вирулентность и продемонстрировал в течение трех суток абсолютный летальный эффект в контрольной группе интактных птиц. При этом во всех иммунизированных группах вакцины в различной степени показали протективное действие.
Для удобства анализа данных приняли, что клиническое проявление болезни и летальный эффект могут быть рассмотрены как взаимодополняющие показатели, т.е. летальность является следствием болезни (предельным случаем). На этом основании вычисляли обобщенный клинический показатель (С), который на данные сутки характеризовал долю клинически больных и павших особей от количества птиц в группе. Вычисления производили по формуле: ^ = (d+m)/'n, где: d - число птиц, имеющих клинические признаки НБ; т - число погибших птиц; п - количество птиц в группе на данные сутки.
Наблюдения продолжали в течение 11 суток. Полученные результаты приведены на рисунке 1.
Рисунок 1. Динамика клинических показателей (С) в группах цыплят иммунизированных вакцинами: «Вектормун» (ряд 1); «Клон 30» (ряд 2); «Авинью» (ряд 3); «Сева» (ряд 4); «Ла-Сота» (ряд 5) после контрольного заражения изолятом «Г7» вируса НБ.
Таблица 2.
Результаты клинических наблюдений после контрольного заражения иммунизированных и интактных птиц изолятом «Г7» вируса НБ.
Оценки заболеваемости и смертности (m)** в группах птиц (п=15) соответственно использованных вакцин и времени после заражения (сут)
Сут Вакцина
«Вектормун» «Клон 30» «Авинью» «Сева» «Ла-Сота» Контроль
d 1п d 1п d 1п d 1п d 1п d 1п
1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 6
3 2 0 2 0 0 0 1 0 1 0 0 9
4 2 2 6 0 3 0 4 0 4 0 - -
5 4 2 2 4 2 1 5 2 3 1 - -
6 1 0 1 1 2 1 4 1 3 1 - -
7 1 0 2 0 1 1 4 0 1 0 - -
8 2 0 2 1 2 0 3 0 1 0 - -
9 2 0 2 0 2 0 4 0 1 0 - -
10 2 0 1 1 3 0 2 1 0 0 - -
11 2 0 1 0 2 1 2 0 0 0 - -
Примечания: * - наличие клинических признаков НБ; ** - подтверждено наличием характерных для НБ патологоанатоми-ческих изменений.
42 У
Птицеводство
www.agroyug.ru
Таблица 3.
Показатели, характеризующие иммуногенность вакцин против НБ (Р * и Р **) после контрольного заражения изолятом «Г7» вируса НБ.
Показатель Вакцины
«Вектормун» «Клон 30» «Авинью» «Сева» «Ла-Сота»
P , % c' 68,5 61,8 78,5 59,3 71,3
Pm, % 73,3 46,7 73,3 73,3 86,7
Примечания: * - Рс - оценка протективного эффекта вакцины по среднему клиническому показателю на интервале 4 - 6 суток после контрольного заражения. Характеризует процент птиц, защищенных от клинического проявления НБ (Рс=(1 - (Хс4 - 6)/3) х100); ** - Рт - оценка протективного эффекта вакцины по показателю смертности за период наблюдений. Характеризует процент выживших птиц, после контрольного заражения (Р = (1 - (X )/п))х100).
Представленные на рисунке 1 данные позволяют считать, что после проведения контрольного заражения фаза активного развития инфекционного процесса, сопровождавшегося клиническим проявлением болезни и гибелью птиц, для всех тестируемых вакцин приходилась на интервал 4 - 6 суток. Далее, во всех группах значения ¿-показателей снижались.
Однако динамика наблюдаемых явлений не была одинаковой. За период наблюдения только вакцина «Ла-Сота» обеспечила полную регрессию клинического проявления болезни. Указанный препарат имел на 10-е сутки оценку С = 0. В остальных группах в течение 11 суток инфекционные процессы в организме птиц не завершились. Для препаратов «Вектормун», «Клон 30», «Авинью» и «Сева» финальные значения С составили 0,182, 0,143, 0,273, и 0,182, соответственно.
В качестве оценочных показателей иммуно-генного действия вакцин на зачетном интервале наблюдений приняли следующие величины:
- оценку протективного эффекта вакцины по среднему клиническому показателю на фазе наиболее активного развития инфекционного процесса (на интервале 4 - 6 суток после контрольного заражения), характеризующую процент птиц, защищенных от клинического проявления НБ:
Рс = (1 - (Хс4 - 6) / 3) х 100;
- оценку протективного эффекта вакцины по показателю смертности за период наблюдений, характеризующую процент выживших птиц, после контрольного заражения:
Рт = (1 - (Хт) / п)) х 100;
Полученные результаты приведены в таблице 3.
Результаты, представленные в таблице 3, демонстрируют, что против изолята «Г7» вируса Нб наибольшим эффектом сдерживания клинического проявления болезни (т.е. величиной Р -показателя) обладали препараты «Авинью» (78,5%%) и «Ла-Со-та» (71,3%). Наименее эффективным оказались препараты «Сева» (59,3%) и «Клон 30» (61,8%). Промежуточное положение заняла вакцина «Век-тормун» (68,5%).
По степени защищенности птиц от летального действия вируса Нб (по Рт-показателю) в подопытных группах наблюдали различия. Наибольший протективный эффект обеспечила вакцина «Ла-Со-та» (86,7%). Наименее эффективным показал себя препарат «Клон-30», где сохранность составила менее половины вакцинированных птиц (46,7%). Оценки протективного действия остальных вакцин оказались одинаковыми (73,3%).
Заключение.
По отношению к изоляту «Г7» вируса НБ по совокупности изученных показателей наиболее эффективной показала себя «Вакцина против ньюкаслской болезни из штамма «Ла-Сота» сухая живая» производства ФГБУ «ВНИИЗЖ». После контрольного заражения полное прекращение клинического проявления болезни в группе привитой данным препаратом наступало раньше, чем в остальных группах. Оценка сдерживания клинического проявления болезни вакциной составила величину Рс = 71,3% (второй показатель по группам). Протективный эффект препарата от летального действия вируса НБ был наилучшим и составил оценку Рт = 86,7%.
В целом, в отношении препаратов специфической профилактики НБ, вероятно следует признать, что определяющим фактором их протективного действия является соответствие антигенных свойств (и/или тропизма) между вакцинным штаммом и конкретным инфицирующим изолятом вируса [2].
Результаты проведенных исследований являются предварительными и не претендуют на исчерпывающий доказательный анализ, однако иллюстрируют, что сравнительная оценка иммунологических свойств известных препаратов специфической профилактики НБ по отношению к новым изолятам вируса представляется весьма целесообразной и позволит обоснованно использовать на практике наиболее эффективные вакцины.
ЛИТЕРАТУРА
1. Эффективность вакцин против ньюкаслской болезни производства ФГБУ «ВНИИЗЖ» в отношении актуальных вирусов VII генотипа / С.В. Фролов [и др.] // Ветеринария сегодня. -2021. - №1. - С.44-51.
2. Genotype VII.1.1-Based Newcastle Disease Virus Vaccines Afford Better Protection against Field Isolates in Commercial Broiler Chickens / A. Dewidar [et all] // Animals. - 2022. Vol. 12, P. 1696.
3. Newcastle disease vaccines—A solved problem or a continuous challenge? / K. Dimitrov, L. Claudio, Yu Qingzhong, J. Patti // Veterinary Microbiology. - 2017. - Vol. 206, P. - 126-136.
4. Newcastle disease outbreaks in recent years in western Europe were caused by an old (VI) and a novel genotype (VII) / B. Lomniczi [et all] // Arch. Virol. 1998. - - Vol. 143, - P. - 49-64.
5. OIE Terrestrial Manual 2018. Chapter 3.3.14. - Newcastle disease (infection with Newcastle disease virus), Р. 964 - 983.
6. Serological monitoring of avian influenza and Newcastle disease in the Russian Federation in 2019 / M. Volkova [et all] // Veterinary Science Today. - 2020. - Vol. 6. Р. 76-82.
