CC BY
39
УДК 579.262:576.8-092.6
Д.О. Степанський, ДОКЛ1Н1ЧНЕ ВИВЧЕННЯ ВЛАСТИВОСТЕЙ
Г,М. Кременчуцький, АУТОСИМБ1ОНТ1В ЛЮДИНИ A. VIRIDANS
1.П. Кошова
ДЗ «Днтропетровська медична академiя МОЗ Укра'ши» кафедра мiкробiологii, вiрусологii, iмунологii та епiдемiологii (зав. - к. мед. н. Д.О. Степанський) пл. Соборна, 4, Днтропетровськ, 49000, Украша SE «Dnipropetrovsk medical academy of Health Ministry of Ukraine» Department of Microbiology, virology, immunology and epidemiology Soborna Sq., 4, Dnipropetrovsk, 49000, Ukraine e-mail: [email protected]
Ключовi слова: npo6iomurn, доклiнiчне вивчення, аерококи Key words: probiotics, preclinical study, aerococcus
Реферат. Доклиническое изучение свойств аутосимбионтов человека. A. Viridans. Степанский Д.А., Кременчуцкий Г.Н., Кошевая И.П. В работе представлены данные доклинического изучения свойств аутосимбионтов A. viridans. Штаммы бактерий рода Aerococcus проверены по морфологическим, культу-ральным, тинкториальным и биохимическим свойствам на отсутствие контаминации, была изучена чувствительность к антибиотикам, активность глутатионпероксидазы, супероксидного радикала, супероксидазы, СОД. Проведено определение острой токсичности и безвредности испытуемых штаммов. Аэрококки хорошо накапливают массу на стандартных питательных средах, морфология, тинкториальные и биохимические свойства соответствуют стандартам. Все показатели активности глутатионпероксидазы, супероксидного радикала, супероксидазы, СОД, количество белка также соответствуют стандартам. Антагонистическая активность исследуемых штаммов аэрококков была изучена методом отсроченного антагонизма к тест-культурам. Данные свидетельствуют о высокой антагонистической активности штаммов аэрококков к условно-патогенным микроорганизмам. В ходе определения острой токсичности аэрококков в период наблюдения не было выявлено отеков и некроза тканей в местах инъекций аэрококков, гибели мышей не отмечено. Показана полная безвредность при введении белым мышам per os микробной взвеси аэрококков.
Abstract. Preclinical study of the properties of human autosymbionts A. Viridans. Stepanskyi D.O., Kremenchutskyi G.M., Koshova I.P. The paper presents data of preclinical study of autocamiones A. viridans properties. Acute toxicity and harmlessness of strains was tested. Strains of bacteria of Aerococcus genus were checked for absence of contamination by morphological, cultural, biochemical and tinctorial properties. Aerococci accumulate weight well on standard nutrient media, morphology, tinctorial and biochemical properties meet the standards. All indicators of activity of glutathione peroxidase, superoxide radical, superoxide, SOD, protein content comply with the standards. Antagonistic activity of the studied strains of aurococcus was investigated by the method of deferred antagonism to test cultures. Data show a high antagonistic activity of aurococcus strains to conditionally pathogenic microorganisms. During determination of acute toxicity of aurococcus in the observation period, edema and tissue necrosis at the injection site of aurococcus, death of mice was not marked were not revealed. A complete harmlessness of microbial suspension of aurococcus when administered to white mice per os was revealed.
Нормальна мшрофлора оргашзму людини лшування кишкових шфекцш е застосування
являе собою сукупшсть рiзних 6io^ro3iB, що пробютиюв [2, 5, 6].
займають численш еколопчш нiшi на шкiрi i Багатьма дослщниками встановлено важливу
слизових оболонках вшх порожнин, сполучених роль нормально! мшрофлори оргашзму людини у
i3 зовшшшм середовищем [6, 8]. Зменшення шдтримщ його фiзiологiчного стану, забезпе-
кшькост нормально! кишково! мшрофлори ченш гомеостазу i життедiяльностi [7].
призводить до ослаблення конкуренци з пато- Однак е невелика кшьюсть фундаментальних
генами за рецептори слизово! оболонки ки- дослщжень, присвячених Aerococcus, Acetovib-
шечнику, знижуеться мюцевий iмунiтет - rio, Butyrivibrio, Centipeda, Eutactarrium, Lepto-
продукщя лiзоциму, iмуноглобулiну А [2]. trichia, Ruminobacteria, Solenomonas, Succini-
Сформована ситуащя вимагае пошуку нових vibrio. Aerococcus viridans мають цший ряд
антибактерiальних засобiв i пiдходiв до лшу- корисних властивостей, вироблених у процеш
вання. Одним з найбшьш обговорюваних в динамiчно! взаемоди як з макрооргашзмом, так i
останш роки пiдходiв до профшактики та з мшробюасощантами [2]. Наприклад, виявлена
здатшсть аерокоюв окисляти молочну кислоту призводить до зниження piBM гшоксп в кишечнику; видшення пероксиду водню, який розщеплюеться каталазою епiтелiю кишечнику i також призводить до оксигенаци тканин [1,5].
Глутатюнредуктазна активнiсть, утворення кон'югатiв глутатiону з ксенобютиками та iншi кориснi властивосп становлять iнтерес для подальшого вивчення 1х впливу на гомеостаз макрооргашзму [4].
У 9-му виданнi Bergey's Manual of Determinative Bacteriology [7] аерококи представленi в груш № 17 (грампозитивш коки) у виглядi окремого роду Aerococcus, вщзначеного тiльки одним типовим видом Aerococcus viridans. Цим бактерiям у визначнику мiкроорганiзмiв дана така морфологiчна характеристика: клггини сферичнi, 1,0-2,0 мкм у дiаметрi, що розташо-вуються тетрадами при рост на пiдходящих рщких середовищах. Грампозитивнi, нерухливi, факультативнi анаероби, однак значно краще ростуть при нормальному парщальному тиску кисню в живильних середовищах. G мшроаеро-фшами, не розмножуються в анаеробних умовах. У процесi аеробного росту продукують Н2О2, i маркером е позеленшня кров'яного агару, хемоорганотрофи з окисним метаболiзмом. Ката-лазонегативнi, желатину не розщеплюють, нiтрати не редукують. Оптимум росту 36°С, припиняють рiст при 45°С. Ростуть при рН 9,6 в 10% NaCl i 40% жовчг
Згiдно з даними, отриманими С.А. Риженко i Г.М.Кременчуцьким, аерококи продукують у зовшшне середовище пептид широкого спектру дп - аероцин, що проявляе високi антагонiстичнi дп вiдносно рiзних видiв кандид [4]. Сучасне використання аерокоюв у виглядi препарату «А-бактерин» з йодидом калiя i етонiем е ефек-тивним при урогенiтальних кандидозах, оскшьки забезпечуе направлене пошкодження мембран кандид [8].
Той же ефект досягаеться в результатi вжи-вання аерококiв як засобу профiлактики канди-дозiв, що виникають унаслiдок пригшчення iмунiтету при В1Л [9].
Проведена серiя експериментiв in vitro з вивчення спектру антагошстично! дп A. viridans 167 переконливо й наочно продемонстрували високу iнгiбуючу актившсть бактерiй цього роду вiдносно збудниюв госпiтальних iнфекцiй i мiкроорганiзмiв, що беруть участь у формуванш патолопчного мiкробiоценозу кишечнику людини [9].
Метою дослщження було доклiнiчне вивчення властивостей аутосимбюнив A.viridans, якi
представляють собою суспензiю живих бактерiй роду Аегососсш у стерильному фосфатному буферi рН 7,2-7,4 з концентрацieю 200 млн/мл (1 ОД). Ддача речовина аутосимбюнтного препарату (АСП) - живi штами аерококiв (Аегососсш viridans, видiленi з органiзму людини).
МАТЕР1АЛИ ТА МЕТОДИ ДОСЛ1ДЖЕНЬ
Для вивчення специфiчно! активностi аероко-юв були використанi такi штами Аегососсш viridaш: № 23, № 131, № 165. № 23 - який ви-дшений з мигдалин здорово! людини. № 131 -калу здорово! людини. № 165 - шюри здорово! людини.
Вивчення морфологи та тинкторiальних властивостей проводили за допомогою мшро-скопi! (препарати живих та забарвлених мiкроорганiзмiв).
Вивчення культуральних властивостей визна-чали за характерним ростом на щшьних, рщких та напiврiдких селективних середовищах.
Вивчення фiзiолого-бiохiмiчних властивостей проводили за допомогою зареестрованих дiагно-стичних тест-систем для щентифшацп бактерiй компанi! MERBA-Lachema Diagnostika". Також визначали такi показники: цукрол^ичш фермен-ти, протеолiтичнi властивостi (каталазну, леци-тiназну, плазмокоагулазну, фiбринолiтичну актившсть), лiзоцимну, гiалуронiдазну та гемолiтичну актившсть.
Чутливють до антибiотикiв визначалася методом дифузи в агар з використанням дисюв [3]. Антагонiстична дiя аерококiв по вiдношенню до тест - культур мiкроорганiзмiв вивчалася з використанням методики вщстроченого ан-тагошзму.
Активнiсть глутатiонпероксидази визначалася за методом [13]. Бшок визначався за методом [11]. Супероксидний радикал визначався за методом [12]. Актившсть супероксидази визначалася за методом [3]. Актившсть СОД виражали в мкмоль/мш. мг бшка.
Дослiди адгезивно! активносп проводили за методом Брилис В.И. [1].
Визначення стшкост штаму до дп шлунко-вого соку. З метою вивчення стшкосп дослщжу-ваних штамiв до дi! шлункового соку 1,5 мл добово! культури центрифугували при 3 тис. об/хв протягом 5 хв, вщмивали у фiзiологiчному розчинi i знову центрифугували. Осад ресуспен-дували в 1,5 мл шлункового соку (рН 2.0) (ЗАТ "Бюфарма", Укра!на) та iнкубували 2 год. при температурi 37 °С. Ступiнь виживання бактерiй визначали на MRS-агарi врахуванням кiлькостi КУО через 48 год. шкубацп при 37 °С [7, 14]. У
контролi замють шлункового соку використо-вували фiзiологiчний розчин того самого об'ему.
Визначення гостро! токсичностi проводили на мишах лiнi! СВА масою тша вiд 10 до 14 г. Культуру 2-го пасажу, вирощену на щшьному живильному середовищi, змивали 0,9% розчином натрда хлориду. В отриманш суспензi! визначали концентрацiю мшробних клiтин по оптичному стандарту мутносп. З отримано! суспензi! робили ряд п'ятикратних розведень. Отриману суспензiю рiзно! концентрацi! (105, 106, 107, 108, 109 дози) мiкробiв вводили рiзними способами: внутрiшньочеревно, внутршньо-м'язово, шдшюрно. Доза вводилась в обсязi 0,5 мл. Термш спостереження за тваринами - 7-14 дiб. Пiсля заюнчення термiну спостереження розраховували LD50.
Визначення нешюдливост випробовуваних штамiв проводили на 5 безпородних бших мишах масою (15 ± 1) г. Суспензда штамiв 2-го або 3-го пасажу в концентраци 108 мшробних клiтин вводили в обсязi 0,5 мл перорально. Спостереження за мишами здiйснювали протягом 5 дiб.
Для статистичного аналiзу використовували пакет прикладних програм Statistica v6.1®. Кшьюсш ознаки представленi у виглядi се-реднього значення та його стандартно! похибки
(M±m). Для порiвняння середшх величин застосовували критерiй Стьюдента (t), вiдносних величин - критерiй Xi-квадрат Ирсона (х2). Статистично значущими вважали вiдмiнностi при p < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТИ ТА ÏX ОБГОВОРЕННЯ
Дослщжуваш штами бактерiй роду Aerococcus перевiренi за морфологiчними, культу-ральними, тинкторiальними й бiохiмiчними властивостями на вщсутнють контамiнацiï (табл. 1-3). Визначення проводили вщповщно до ФС «Виробничi штами i штами для контролю» i «Безпека пробiотикiв для медичного застосу-вання в тестах in vivo». З даних, наведених у таблицях 1 та 2, видно, що аерококи добре наро-щують масу на стандартних поживних сере-довищах, морфолопя, тинкторiальнi та бiохiмiчнi властивосп вiдповiдають стандартам.
Методом серiйних розведень була вивчена чутливють до антибютиюв, даш представленi в таблицi 2.
Актившсть глутатюнпероксидази, супероксидного радикалу, супероксидази, СОД, кшь-кiсть бшка представлен в таблицi 3. Вс показники активностi вiдповiдають стандартам.
Таблиця 1
Морфолопя клггин та характер росту культур аерокок1в
Морфолопя Шсля збер1гання аерокотв
Aerococcus viridans №23 Aerococcus viridans №131 Aerococcus viridans № 165
При рост на м'ясо-пептоному агар1 (МПА)
МПА з 10% кшсько!' сироватки
розташовуються тетрадами i скупченнями неправильно'! форми, коки грампозитивн1
морфолог1я
розташовуються тетрадами i
скупченнями неправильно'! форми, коки грампозитивш морфолопя
розташовуються тетрадами i
скупченнями неправильно'! форми, коки грампозитивн1 морфолопя
та ж
та ж
та ж
Характер росту на: МПА
МПА +10% кшсько!' сироватки
р1ст гарний, колони (1-2 мм у дааметр^ з р1вними краями, опукл1, що не зливаються
ркт б1дний. Др1бн1 точечн1 колони
ркт гарний, колонй (1-2 мм у дааметр^ з р1вними краями, опукл^ що не зливаються
р1ст б1дний. Др1бн1 точечн1 колонй
р1ст гарний, колонй (1-2 мм у дааметр^ з ршиими краями, опукл1, що не зливаються
р1ст б1дний. Др1бт точечн1 колонй
МПБ
р1ст гарний у вигляда прист1нного i придонного осаду
р1ст гарний у вигляда пристшного i придонного осаду
р1ст гарний у вигляда пристшного i придонного осаду
МПА з 0,05%
селенистокислого
натрга
р1ст гарний, велит (2-3 мм у дааметр1) колонй червоного кольору
р1ст гарний, велит (2-3 мм у дааметр1) колони червоного кольору
р1ст гарний, велит (2-3 мм у дааметр1) колонй червоного кольору
Властивост1 культур аерокок1в
Властивосп культур П1сля збер1гання аерокок1в
А. УгШаш № 23 А. «гЫаш № 131 | А. vlrldans № 165
при рН 9,6 Р1ст Р1ст Р1ст
при 45°С Р1ст ввдсуттй Р1ст ввдсуттй Р1ст ввдсуттй
Антибютики М1К (мкг/мл)
Пенщилш 0,12 0,12 0,12
Оксацил1н 0,12 0,12 0,12
Метицил1н 0,12 0,12 0,12
Стрептом1цин 3,84 3,84 3,84
Л1зоцим 1,92 1,92 1,92
Ык.миоцик.ми 0,12 0,12 0,12
Карбенщилш 3,84 3,84 3,84
Грамурин 1000 1000 1000
Дюксидин 30,72 30,72 30,72
Нев1грамон 750 750 750
Димексид 500,0 500,0 500,0
Х1ноксидин 1000 1000 1000
Аскорб1нова кислота 4000 4000 4000
Борна кислота 500,0 500,0 500,0
Хлорамш 500,0 500,0 500,0
Желатину не розрвджус не розрвджус не розрвджус
Г1дрол1з:
Крохмалю Не гвдрол1зус Не гвдролзус Не гвдрол1зус
Утилзащя вуглеводав
Араб1ноза + + +
Рамноза _ _ _
1нозит + + +
Ксилоза + + +
Сорб1т _ _ _
Дульцит + + +
Глюкоза + + +
Лактоза - - -
Мальтоза + + +
Манн1т + + +
Сахароза + + +
Лецитиназна активн1сть - - -
Плазмокоагулазна активн1сть - - -
Гемол1тична активн1сть + + +
Ф1бринол1тична активтсть - - -
Бюлопчна актившсть штампв аерококчв (M±m)
Б1олог1чна активн1сть штам1в аерококш
Штами питома активн1сть супероксиддисмутази ОД на 1 мг быка за 1 хв питома актившсть GSH-пероксидази ОД на 1 мг б1лка за 1 хв актившсть ЛДГ OD на 1 мг б1лка накопичення пероксиду водню в бульош (мМ)
№ 23 12,1 ± 0,9 5,6± 0,26 1112±87 20,2±0,08
№ 131 13,3±0,7 5,1±0,11 1071± 74 18,0±0,04
№ 165 11,9±0,4 4,9±0,14 1094±71 23,3±0,06
Методом вщстроченого антагошзму була ви- 113/66. Даш, наведеш в таблицi 4, свщчать про
вчена чyтливiсть тест-штамiв: Proteus vulgaris, високу антагонютичну активнiсть штамiв аеро-
401 Pseudomonas aeruginosa 1, Candida albicans коюв до умовно-патогенних тест-штамiв мшро-
690, Escherichia coli 374, Staphytococcus aureus органiзмiв, зокрема до Staphylоcoccus epider-
209-р, Staphytococcus epidermidis АТСС 14990, midis, Staphytacoccus aureus Escherichia coli. Klebsiella ozaenae 390 та Citrobacter freundii Ве
Таблиця 4
Антагошстнчна активн1сть штампв аерококчв до р1зних штам1в тестових культур
Зона затримки росту (мм) M ± m, n=10
Штами тест-культур № 23 № 131 № 165
Proteus vulgaris 401 11±2 12±4 12±1
Pseudomonas aeruginosa 1 10±1 9±2 11±3
Candida albicans 690 11±2 12±2 12±1
Escherichia coli 374 15±4 14±2 16±1
Staphytococcus aureus 209-р 16±2 15±2 13±1
Staphytococcus epidermidis АТСС 14990 17±3 18±2 16±3
Klebsiella ozaenae 390 13±1 11±1 11±2
Citrobacter freundii Ве 113/66 12±2 13±3 14±3
У ходi встановлення гостро! токсичностi аерокоюв за клiнiчним станом бiлих мишей усiх груп проводили постiйний нагляд протягом перших шести годин, по^м через кожш три години, протягом першо! доби дослiду. При цьому фшсували: початок i динамiку розвитку клшчних проявiв отруення, час загибелi до-слiдних тварин або вщновлення прикмет полiпшення !х фiзiологiчного стану.
У наступш 14 дiб дослщу, щодоби три рази проводили визначення клiнiчного стану лабо-раторних тварин вшх груп. За весь час спосте-
реження не було жодного випадку загибелi тварин, KpiM короткочасного зниження рухово! активностi в першi 3-4 години спостережень. У перюд спостереження не було виявлено набряюв i некрозу тканин у мюцях iн'eкцiй аерококiв. Надалi клiнiчний стан тварин дослщних i контрольно! груп не вiдрiзнявся (табл. 5).
Щц час експерименту вивчення нешюдли-восп штамiв аерококiв показана повна не-шкiдливiсть: при введеннi бiлим мишам per os мiкробно! сyспензi! аерокоюв у кiлькостi 0,5*108 КУО на тварину загибелi мишей не вщзначено.
КЛ1Н1ЧНА МЕДИЦИНА
Вивчення гостроУ токсичности аерокок1в
Метод введення Дози
105 106 107 108 109
Кшьюсть мишей, ят вижили
Внутр1шньочеревно 10 10 10 10 10
Внутр1шньом'язово 10 10 10 10 10
Пвдшюрно 10 10 10 10 10
Контроль 10 10 10 10 10
П р и м i т к а : n=10.
ВИСНОВКИ
1. Штами бактерш роду Aerococcus перевiренi за морфологiчними, культуральними, тинкторiальними i бiохiмiчними властивостями на вщсутшсть контамшацп. З наведених даних видно, що аерококи добре нарощують масу на стандартних поживних середовищах, морфо-лопя, тинкторiальнi та бiохiмiчнi властивостi вщповщають стандартам.
2. Всi показники активност глутатiонперокси-дази, супероксидного радикалу, супероксидази, СОД, кiлькiсть бiлка вщповщають стандартам.
3. Антагонiстична активнiсть дослщжуваних штамiв аерококiв була вивчена методом вщ-строченого антагонiзму до тест-штамiв. Данi
свiдчать про високу антагошстичну активнiсть штамiв аерококiв до умовно-патогенних тест-штамiв мiкроорганiзмiв, зокрема до Staphyto-coccus epidermidis, Staphylоcoccus aureus, Escherichia coli.
4. У ходi встановлення гостроï токсичностi аерокоюв у перiод спостереження не було вияв-лено набрякiв i некрозу тканин у мюцях iн'eкцiй аерокоюв, загибелi мишей не вiдзначено.
5. Показана повна нешюдливють: при введен-нi бiлим мишам per os мiкробноï суспензiï аеро-кокiв у кшькосп 0,5x108 КУО на тварину загибелi мишей не виявлено.
СПИСОК Л1ТЕРАТУРИ
1. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов / В.И. Брилис, Т.А. Брилене, Х.Б. Ленцнер, А.А. Ленцнер // Лаб. дело. - 1986. - № 4. -С. 210-212.
2. Коррекция дисбиотических нарушений при заболеваниях желудочно-кишечного тракта и печени биологически активными добавками с пробиоти-ческим действием / Н.В. Соловьева, С.Н. Лейхтер, Т.А. Бажукова [и др.] // Обзоры по клинич. фармакологии и лекарственной терапии. - 2013. - № 8. -С. 48-57.
3. Костюк В.А. Простой и чувствительный метод определения активности супероксиддисмутазы, основанный на реакции окисления кверцетина / В.А. Костюк, А.И. Потапович, Ж.В. Ковалева // Вопросы мед. химии. - 1990. - № 2. - С. 88-91.
4. Кременчуцкий Г.Н. Роль микроэкологии организма человека и принципы ее коррекции / Г.Н. Кре-менчуцкий, С.А. Рыженко, С.И. Вальчук. - Днепропетровск: Пороги, 2003. - С. 58-59.
5. Моин В.И. Простой и чувствительный метод
определения глутатионпероксидазы в эритроцитах /
В.И. Моин // Лаб. дело. - 1986. - № 12. - С. 724-727.
6. Об унификации микробиологических методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений: Приказ№ 535 МЗ СССР от 22.04.1985. -Москва, 1985. - 56 с.
7. Определитель бактерий Берджи. В 2 т. / под ред. Хулта Дж., Крига Н., Снита П. [и др.] [пер. с англ. под ред. Заварзина Г.А.]. - Москва: Мир, 2001.
8. Риженко С.А. Вплив живо! культури Aerococ-cusviridans на фактори 1мунолопчно! реактивносп оргашзму людини invitro / С.А. Риженко, С.1. Вальчук // Одес. мед. журнал. - 2003. - № 5 (79). - С.108-111.
9. Рыженко С.А. Влияние А-бактерина на гомео-стаз организма человека при различных патологических состояниях // Сб. материалов междунар. науч.-практ. конф. памяти Г.И. Гончаровой «Пробио-тические микроорганизмы - современное состояние вопроса и перспективы использования» / под ред. В.А. Алешкина. - Москва, 2002. - С. 41-42.
10. Clinical efficacy of probiotics: review of the evidence with focus on children / S. Michail, F. Sylvester, G. Fuchs [et al. ] // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. - 2006. -Vol. 43, N4. - P. 550 -557.
11. Lowry O.H. Protein measurement with the folin phenol reagent / O.H. Lowry // Biol. Chem. - 1951. -Vol. 193, N 1. - P. 265-275.
12. Glutathione peroxidase, superoxide dismutase, and catalase inactivation by peroxides and oxygen derived free radicals / E.Pigeolet, P.Corbisier, A.Houbion [et al. ] // Mech Ageing Dev. - 1990.-Vol.51, N 3. - P. 283-297.
13. Steinhoff U. Who controls the crowd? New findings and old questions about the intestinal microflora / U. Steinhoff // Immunol. Letters. - 2005. - Vol. 99, Issue 1. - P. 12-16.
14. Yazid W.A. Survival of bifidobacteria in simulated gastric pH and growth in the presence of bile / W.A.Yazid, M. Shuhaimi, M. Ghazali // Asia J. Mol. Biol. Biotechnol. - 1999. - Vol. 7, N 2. - P. 185-188.
REFERENCES
1. Brilis VI, Brilene TA, Lentsner KhB, Lent-sner AA. [Methods of studying the adhesive process of microorganisms]. Lab. Delo. 1986;4:210-2. Russian.
2. Solov'eva NV, Leykhter SN, Bazhukova TA. [Correction of dysbiotic disorders in diseases of the gastrointestinal tract and liver with dietary supplements with a probiotic effect]. Obzory po klinicheskoy farmakologii i lekarstvennoy terapii. 2013;8:48-57. Russian.
3. Kostyuk VA, Potapovich AI, Kovaleva ZhV. [A simple and sensitive method for determining the activity of superoxide dismutase, based on the reaction of oxidation of quercetin]. Vopr. med. khimii. 1990;2:88-91. Russian.
4. Kremenchutskiy GN, Ryzhenko SA, Val'chuk SI. [Role of Microbiology of the human body and the principles of correction]. 2003;58-59. Russian.
5. Moin VI. [A simple and sensitive method for the determination of glutathione peroxidase in erythrocytes]. Lab. Delo. 1986;12:724-7. Russian.
6. On the unification of microbiological research methods used in clinical diagnostic laboratories of medical institutions. Prikaz№ 535 MZ SSSR ot 22.04.1985. M., 1985;56. Russian.
7. The determinant of bacteria Burgi: In 2 volumes (pod red. Khulta Dzh., Kriga N., Snita P. i dr.; per. s angl. pod red. Zavarzina G.A.). Izdatel'stvo: Mir; 2001. Russian.
8. Ryzhenko SA, Val'chuk SI. [The impact of living culture Aerococcus Viridans the factors immunological reactivity of human invitro]. Odes. med. zhurnal. 2003;5(79):108-11. Ukrainian.
9. Ryzhenko SA, Aleshkin VA. [Effect of A-bacte-rinum homeostasis in human organism at different pathological states]. Sb. materialov mezhdunar. nauch.-prakt. konf. pamyati G.I. Goncharovoy «Probioticheskie mikro-organizmy - sovremennoe sostoyanie voprosa i per-spektivy ispol'zovaniya». 2002;41-42. Russian.
10. Michail S, Sylvester F, Fuchs G, Issenman R. Clinical efficacy of probiotics: review of the evidence with focus on children. J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 2006;43(4):550-7.
11. Lowry OH. Lowry O.H. Protein measurement with the folin phenol reagent. Biol. Chem. 1951;193(1):265-75.
12. Pigeolet E, Corbisier P, Houbion A, Lambert D. Glutathione peroxidase, superoxide dismutase, and cata-lase inactivation by peroxides and oxygen derived free radicals. Mech Ageing Dev. 1990;51(3):283-97.
13. Steinhoff U. Who controls the crowd? New findings and old questions about the intestinal microflora. Immunology Letters. 2005;99(1):12-16.
14. Yazid WA, Shuhaimi M, Ghazali M. Survival of bifidobacteria in simulated gastric pH and growth in the presence of bile. Asia J. Mol. Biol. Biotechnol. 1999;7(2):185-8.
Crarra Hagmm^a go pegaKmi' 05.04.2016
♦
