CC BY
285
БИОТЕРАПИЯ ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯМ 57
УДК 616-006-085.371.009.036
Н.П. Ермакова, И.Н. Михайлова, И.Б. Меркулова, О.И. Коняева, Н.Ю. Кульбачевская, Т.В. Абрамова,
К.А. Барышников, Л.М. Михайлова
ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ТОКСИЧНОСТИ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ВАКЦИНЫ «МЕЛАВАК»
РОНЦ им. Н.Н. Блохина, Москва
Контактная информация
Ермакова Надежда Павловна, канд. мед. наук, ведущий научный сотрудник лаборатории фармакологии и токсикологии НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей, Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва
адрес: 115478, Москва, Каширское шоссе, 24; тел.: +7(499)612-78-83 e-mail: ne518@vandex.ru
Статья поступила: 22.07.2010, принята к печати 02.03.2010.
Резюме
Проведено доклиническое токсикологическое изучение противоопухолевой вакцины «Мелавак» с целью оценки ее безопасности и прогноза побочных и токсических эффектов при клиническом изучении у больных меланомой. Изучены локальная и системная токсичность, аллергенные свойства и туморогенность вакцины. Противоопухолевая вакцина «Мелавак» нетоксична и рекомендована для клинической апробации.
Ключевые слова: вакцина, ген ГМ-КСФ, безопасность, аллергенность, туморогенность.
N.P. Ermakova, I.N. Mikhaylova, I.B. Merkulova, O.I. Konyaeva, N.Yu. Kulbachevskaya, T.V. Abramova, K.A. Baryshnikov, \LM. Mikhaylova PRE-CLINICAL STUDY
OF ANTICANCER VACCINE «MELOVAC» TOXICITY
N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center of RAMS, Moscow
Abstract
The aim of this study was to examine the safety and prognosis of side and toxic effects of anticancer vaccine «Melovac». We have studied the local and systemic toxicity, its ability to be allergic and tumorogenic. Based on our pre-clinical study which reveal that «Melovac» vaccine is not toxic, we recommend it for clinical trials.
Key words: vaccine, GM-CSF gene, safety, allergenicity, tumorogenity.
Введение
В последние годы широко изучается активная специфическая иммунотерапия злокачественных новообразований цельноклеточными вакцинами, которые представляют собой живые аллогенные или аутологичные опухолевые клетки. В 1997 г. M. Drew Pardoll с соавт. запатентовали метод лечения и профилактики рецидивов меланомы, основанный на вакцинации ал-логенными клетками, несущими общие меланомные антигены трансфицированные геном человеческого гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (nM-КСф). В последующем были созданы аналогичные вакцины на основе аллогенных и аутологичных ГM-КСФ-трансфицированных клеточных линий меланомы, а также немелкоклеточного рака легкого [5-7] и рака простаты [9]. Эти вакцины под общим названием GVAX проходят клинические испытания по I-II фазе. На I фазе клинических испытаний R. Soiffer и соавт. было показано, что вакцинация облученными аутологичными клетками меланомы, секре-тирующими человеческий nM-КСФ, вызывает мощный противоопухолевый иммунитет у пациентов с диссеминирующей меланомой. Вакцину вводили внут-рикожно и подкожно, начальная «стартовая» доза составляла 10 млн. клеток на человека [10].
В Институте биологии гена РАН совместно с РОНЦ была создана аналогичная GVAX цельноклеточная вакцина под названием «Mелавак», которая явилась объектом данного исследования.
Целью нашей работы явилось доклиническое изучение токсичности противоопухолевой вакцины «Мелавак» для оценки ее безвредности, прогноза побочных эффектов и потенциальных «рисков» при применении человеку.
Материалы и методы
Вакцина «Мелавак» представляет собой клеточную линию меланомы человека Ме1 Kor [2] стабильно трансфецированную человеческим геном ГМ-КСФ, имеет генетическую конструкцию: вектор pBK - CMV (Clon Tech, США) со встроенной к ДНК ГМ-КСФ человека. Вид трансфекции - стабильная, интегрированная. Метод трансфекции - липофекция, при помощи набора Unifectin 56. Уровень трансфекции - 100 %. Количество секретируемого ГМ-КСФ клетками - 78,1-84,0 нг/1 млн клеток /24 ч. Перед введением животным инактивирована на установке АГ АТ-Р у-облучением в дозе 100 Гр.
Исследование безвредности вакцины «Мела-вак» проводили на стандартных сертифицированных животных в соответствии с российскими и международными требованиями по использованию животных моделей в доклинических исследованиях для клеточной и генной терапии [3; 4]. Животные: 80 мышей-самцов (CBA*C57B1/6j)Fb массой 20-22 г; 60 неинбредных крыс-самцов массой 170-250 г; 40 морских свинок-самок альбиносов массой 230-250 г и 42 кролика породы «Шиншилла» массой 1,7-2,2 кг.
Мыши были получены из питомника лабораторных животных «Столбовая» РАМН; крысы - из разведения РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН; кролики - из ФГУП «Опытно-производственное хозяйство «Манихино»; морские свинки - из питомника ГУНЦ Биомедицинских технологий РАМН, Филиал «Андреевка». 22 гибридных иммунодефицитных мышей-самок линии Balb/c nude массой 18-20 г получены и содержались в специализированном кондиционированном отсеке РОНЦ при дозированном световом режиме, на стерильных бумажной подстилке, корме «МЭСТ» (Москва) и воде.
Вакцину «Мелавак» применяли при в/к и п/к путях введения. В качестве контроля во всех исследованиях использовали в/к и п/к введение изотонического раствора хлористого натрия в адекватном объеме. Дозы вакцины «Мелавак», изученные в экспериментах по локальной и системной токсичности, лимитировались максимальным общим объемом вводимой в/к вакцины (не более 0,5 мл на мышь или крысу) и ее концентрацией (1x108 кл/мл). По окончании исследования мыши, крысы и кролики были умерщвлены методом усыпления эфиром с последующим проведением аутопсии и патоморфологического исследования.
Изучение локальной токсичности проводили на кроликах и крысах. Вакцину вводили однократно в/к или п/к в области спины в дозе 5x105 кл/кг кролика в концентрациях 1x107 или 1x108 кл/мл. На 3; 5; 14 и 30 сутки опытных и контрольных кроликов умерщвляли. Крысам вакцину вводили в/к ежедневно на протяжении 7 дней в СД 1,03x107 или 10,3x107 кл/мл. В качестве контролей использовали животных интактных и животных, которым аналогично вводили физиологический раствор. Для патоморфологического исследования крыс из опытных и контрольных групп умерщвляли на 1-е и 75-е сутки.
Исследование «острой» токсичности проводили на мышах и крысах при однократном в/к введении. Критериями оценки «острой» токсичности были: изменение массы и температуры тела, количество лейкоцитов, клиническая картина интоксикации, поведенческие реакции, аутопсия умерщвленных в конце опыта животных. Мышам «Мелавак» вводили в/к в подушечки стоп в дозах, превышающих предполагаемую дозу для человека в 1000 раз - 206,0x107 кл/кг; в 100 раз - 20,6x107 кл/кг; в 10 раз - 2,06x107 кл/кг и аде7кватную предполагаемой дозе для человека
- 0,203x107 кл/кг. Концентрация вводимой животным клеточной суспензии была от 1x10 до 5x107 кл/мл; объем от 0,05 до 0,5 мл (на 1-10 инъекций). Длительность наблюдения за животными составляла 30 дней. Тест «выздоровление» или тест развития «токсических эффектов» проводили в отдельных исследованиях на мышах со сроком наблюдения 140 дней. Крысам вакцину вводили в/к в область спины около хвоста в дозах, превышающих п7 редполагаемую дозу для7 человека в 100 раз - 10,3 x 107 кл/кг; в 10 раз - 1,03x 107 кл/кг и адекватную предполагаемой дозе для человека
- 0,103 x107 кл/кг.
Исследование «хронической» токсичности были проведены на неинбредных крысах. Вакцину «Мелавак» вводили в/к ежедневно в течение 7 дней. Крысы получали вакцину в суммарных дозах, превышающих предполагаемую дозу для человека в 100 раз - 10,3 x 107 кл/кг и в 10 раз - 1,03x107 кл/кг и дозу адекватн7ую предполагаемой дозе для человека - 0,103x10 кл/кг. Критериями оценки «хронической» токсичности на крысах были: клиническая картина интоксикации животных, изменения поведенческих реакций, массы тела, клини-
ко-лабораторные и функциональные показатели здоровья (клинический и биохимический анализ крови, анализ мочи, ЭКГ), данные аутопсии с макроскопической и гистологической оценкой. Продолжительность наблюдения составляла 120 суток.
Для исследования туморогенности вакцины «Мелавак» использовано 22 гибридные иммуноде-фицитные мыши-самки линии Balb/c nude. Мышам, служивших позитивным контролем, вводили не-инактивированные опухолевые клетки линии Mel Kor в дозе^107 клеток п/к в область боковой поверхности тела в объеме 0,2 мл. Мышам второй группы вводили вакцину «Мелавак» аналогичным способом в том же объеме и том же количестве клеток, что и контрольным мышам. Места инокуляции клеток осматривали и при наличии опухолевидных образований измеряли их и вычисляли объем последних. Мыши контрольной группы с развившимися опухолями были умерщвлены на 14-е сутки опыта, мыши, получившие вакцину «Мела-вак» - на 21-63 сутки по мере ухудшения состояния здоровья. На аутопсии проводили осмотр мест инокуляции и внутренних органов, делая бритвой послойные разрезы для визуального контроля метастатических поражений. Для гистологического исследования брали участки головного мозга, сердца, легких, печени, почек, лимфатических узлов, селезенки, костного мозга, а также участки кожи и опухолевидные образования с места введения вакцины или клеток линии Mel Kor.
Аллергизирующее действие вакцины «Мела-вак» оценивали по способности вызывать анафилактический шок у предварительно сенсибилизированных животных [3]. Для сенсибилизации морским свинкам вакцину применяли через день в/м однократно и п/к двукратно в суммарных дозах, равных терапевтической для морской свинки или в 10 раз ее превышающей. Аналогично вводили изотонический раствор хлористого натрия и сыворотку крупнорогатого скота (СКРС). Вакцину «Мелавак» применяли в концентрациях 1 x 106 или 1 x 107 клеток в 1 мл физиологического раствора. Для сенсибилизации препарат вводили двум группам животных в разовых дозах 0,3x106 или 3,0xl06 кл/кг через день (первое введение - п/к, два других - в/м), для разрешения - в суммарных дозах 0,91x106 и 9,1x106 кл/кг соответственно. Разрешение проводили внут-рисердечно на 15-й день после окончания сенсибилизации. После введения разрешающей дозы вакцины и контрольных препаратов за животными наблюдали в течение 48 ч. Оценку интенсивности реакции осуществляли по Weigle [11]. Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью компьютерной программы «Стат-граф». Достоверность различий оценивали по t-критерию Стьюдента.
Результаты и обсуждение
Изучение локальной токсичности
При введении вакцины «Мелавак» в концентрации 1x107 кл/мл кроликам местно-раздражающего действия не выявлено. Однако при введении вакцины в концентрации 1x108 кл/мл у кроликов отмечена местно воспалительная реакция, проявляющаяся в отеке и гиперемии и обратимая на 7-й день. При в/к многократном введении вакцины «Ме-лавак» крысам наблюдали умеренную местную воспалительную реакцию на 1-е сутки. На 75-е сутки макроскопических и микроскопических изменений в коже и в подкожной клетчатке отмечено не было.
Исследование «острой»токсичности
Выявлено кратковременное достоверное снижение температуры тела на 2,3 и 2,1 °С через 3 ч после введения вакцины только у мышей при применении «Мелавака» в дозах, превышающих предполагаемую дозу для человека соответственно в 1000 и 100 раз.
Выявлено дозозависимое обратимое увеличение количества лейкоцитов в периферической крови мышей и крыс.
У мышей увеличение количества лейкоцитов в 2,5 раза наблюдалось на 1-й и 3-й часы после введения в дозах, превышающих предполагаемую дозу для человека в 1000 раз.
При введении вакцины в дозах, превышающих предполагаемую дозу для человека в 100 и 10 раз, наблюдалось увеличение количества лейкоцитов в 2 раза только через 3 ч с восстановлением во всех группах к 7-м суткам наблюдения (табл. 1).
У крыс увеличение количества лейкоцитов в 1,3 раза наблюдалось через 3 ч только в дозе, превышающей предполагаемую дозу для человека в 100 раз, с восстановлением до исходного уровня через 24 ч (табл. 2).
При проведении аутопсии крыс на 30 сутки наблюдения зафиксирована очаговая гиперпигментация (меланоз) в подкожной клетчатке в местах внутрикожного введения вакцины (рис. 1).
Других изменений со стороны органов и тканей не отмечено.
При гистологическом исследовании кожи из участков меланоза в подкожной клетчатке обнаружены скопления тучных клеток и концевые отделы потовых желез.
Наблюдавшаяся очаговая гиперпигментация в местах в/к введения вакцины «Мелавак» могла быть обусловлена несколькими причинами:
1. Возможностью влияния облучения на меланомные клетки, используемые для вакцинации, в результате чего при разрушении in vivo меланин выходит в ткани, окрашивая их.
2. Активацией синтеза меланина факторами микроокружения.
3. Миграцией пигмента в составе макрофагов в ходе воспалительной реакции.
Исследование «хронической □ токсичности
Установлено, что вакцина «Мелавак» при ежедневном в/к введении крысам в течение 7 дней во всех исследованных дозах не влияет на общее состояние и поведенческие реакции животных, не изменяет функционального состояния почек, сердца, не оказывает влияния на гематологические показатели периферической крови и не изменяет функции желудочно-кишечного тракта.
Выявлено, что вакцина «Мелавак» при ежедневном многократном введении крысам оказывает дозозависимое влияние на функции печени, увеличивая активность ЛДГ, АЛТ и АСТ в 2 раза, и действует на углеводный обмен, повышая содержание глюкозы в сыворотке крови животных в 2,5 раза (табл. 3).
Наблюдаемые изменения со стороны печени животных могут быть связаны с известным токсическим действием секретируемого ГМ-КСФ, а также с действием других цитокинов, поступающих с опухолевой клеточной массой [1].
На аутопсии у крыс обнаружено дозозависимое увеличение регионарных паховых лимфатиче-
ских узлов примерно в 1,5 раза и уменьшение массы печени в 1,5-2 раза. В остальных органах и тканях животных визуальных патологических изменений не отмечено.
При исследовании туморогенности вакцины «Мелавак» на 4-й день после введения у 4 из 11 иммунодефицитных мышей под кожей на месте инокуляции клеточной суспензии визуализировались светлые плоские пятна площадью 9-16 мм2, которые в последующие дни уменьшались и полностью исчезали к 14-м суткам.
На аутопсии у 6 мышей со стороны подкожной клетчатки в месте инокуляции обнаруживали лишь следы подкожного введения вакцины в виде незначительных плоских рубчиков или участка васкуляризации.
У остальных 5 мышей, умерщвленных позднее, в том числе в конце опыта (63-и сутки) на месте инокуляции изменений кожи и подкожной ткани не было, опухоли не обнаружены.
Вакцина «Мелавак» не вызвала развития меланом у всех 11 животных до 63 суток наблюдения (рис. 2).
При макроскопическом и гистологическом исследованиях внутренних органов и головного мозга мышей метастазы или другие опухолевые поражения не обнаружены.
При подкожном введении мышам жизнеспособных опухолевых клеток линии Mel Kor на 4 день наблюдения под кожей в месте инокуляции клеточной суспензии у 7 из 11 мышей визуализировались светлые плоские пятна, которые со временем увеличивались в объеме и к 14 дню наблюдения у всех 11 мышей этой группы появились опухолевые узелки объемом от 144 мм3 до 266 мм3 (рис. 3).
При гистологическом исследовании все опухоли представляли собой образования солидного строения и по морфологическим признакам соответствовали меланоме.
При макроскопическом и гистологическом исследовании внутренних органов и головного мозга метастазы не обнаружены.
При изучении аллергизирующего действия вакцины выявлено, что у всех групп животных после введения разрешающей дозы вакцины в отличие от животных, получивших СКРС, внешних проявлений аллергизирующего действия не наблюдали. Выявлена только слабая аллергическая реакция, которая выражалась в кратковременном понижении температуры тела на 1,2 °С у морских свинок, получивших 10-кратную терапевтическую дозу вакцины «Мелавак».
Таким образом, на основании полученных данных установлено, что вакцина «Мелавак» обладает слабыми аллергенными свойствами (табл. 4).
Заключение
В результате изучения локальной токсичности вакцины «Мелавак» при однократном и многократном в/к введении животным выявлена обратимая местная воспалительная реакция, интенсивность которой зависит от концентрации. При изучении «острой» токсичности установлено, что при однократном п/к и в/к введении вакцина «Мелавак» в диапазоне доз, превышающих предполагаемую дозу для человека в 1000-10 раз (мыши) и в 100-10 раз (крысы), хорошо переносится животными.
Иллюстрации 1-3 см. на стр. V
Изменение общего числа лейкоцитов (тыс/мм3) в периферической крови мышей (СВА/СУВ1Л,|)Р| после однократного внутрикожного введения вакцины «Мелавак»___
Доза (кл/кг) Сроки наблюдения
0 1 час 3 часа 1 сутки 2 сутки 7 сутки
206,0хЮ7 10,7±2,0 35,6±7,7** 32,5±6,8** 17,0±4,8 20,9±3,1 15,7±3,3
20,6хЮ7 10,7±2,0 16,1±3,7 29,6±6,5* 20,5±3,8 24,9±3,1 10,7±3,3
2,06хЮ7 11,7±0,8 15,0±1,8 25,7±2,7* 17,2±5,7 25,5±3,0 10,4±3,7
0,206хЮ7 10,8±2,3 21,3±2,6* 23,3±4,5 24,4±2,6 23,4±3,3 9,7±2,9
Контроль 10,6±1,5 13,7±1,6 15,7±4,0 16,5±3,8 15,9±3,1 10,1±3,3
Различия с контрольной группой достоверны: *р < 0,05; **р < 0,01.
Таблица 2
Изменение общего числа лейкоцитов (тыс/мм3) в периферической крови неинбредных крыс после однократного внутрикожного введения вакцины «Мелавак»_____
Доза (кл/мл) Сроки наблюдения
0 1 час 3 часа 1 сутки 2 сутки 5 сутки 7 сутки
10,ЗхЮ7 14,7±2,0 12,5±1,6 21,0±2,0* 12,1±1,4 17,9±2,9 14,5±1,9 14,1±1,1
1,03хЮ7 14,7±1,7 14,9±3,1 15,4±1,5 15,7±3,1 18,5±3,9 10,6±2,3 10,9±1,9
ОЛОЗхЮ7 13,8±2,1 10,1±1,4 12,6±1,4 12,7±2,3 13,4±1,3 11,6±2,4 11,7±2,1
Контроль 13,0±1,0 14,0±2,1 15,7±1,8 14,9±1,8 14,3±2,7 11,3±1,8 10,8±1,2
Различия с контрольной группой достоверны: *р < 0,05.
Биохимические показатели активности ферментов и уровня общего билирубина в сыворотке крови неинбредных крыс
после ежедневного в/к введения вакцины «Мелавак» в течение 7 дней______________________________________________________________________________________
Доза, кл./кг Показатели Сроки наблюдения (сутки опыта)
1 21 75 120
ІО.ЗхІО7 Билирубин О., мкмоль/л 1,0±0,2 1,2±0,2 з±о 1,7±0,1
1,03x10' 0,5±0,4 1,9±0,4 з±о 1,3±0,3
Контроль 0,9±0,2 1,3±0,5 2,5±0,9 1,5±0,5
10,3x10' AJ1T, ед/л 37,2±1,2 47,2±5,2 48,4±5,5 80,5±25,4*
1,03x10' 40,1±4,4 40,8±4,4 71,7±9,4 88,5±66,9
Контроль 41,1±3,1 41,1±3,1 42,8±5,0 30,6±3,9
10,3x10' ACT, ед/л 146±16 139±18 89±6 243±92**
1,03x10' 128±13 127±11 99±16 153±62
Контроль 120±10 120±10 106±2 76±3
10,3x10' ЛДГ, ед/л 1848±421** 1570±421* 441±50 1461±798
1,03x10' 797±78 768±78 466±189 1596±625
Контроль 707±Ю6 681±Ю6 690±15 666±147
10,3x10' ЩФ, ед/л 316±43 216±43 137±11 117±30
1,03x10' 389±57 289±57 187±32 107±10
Контроль 385±131 285±131 162±6 118±29
10,3x10' Глюкоза, ммоль/л 6,5±0,4 9,2±3,5 12,7±3,8 7,5±1,1
1,03x10' 4,7±0,9 10,1±3,2 14,1±3,2* 6,8±2,3
Контроль 5,1±0,4 6,2±4,0 5,6±4,3 6,8±1,8
Различия с контрольной группой достоверны *р < 0,05; **р < 0,01.
Таблица 4
Реакция активной анафилаксии после применения вакцины «Мелавак» морским свинкам_____________________________________________________________________
№ С енсибилизация Разрешение Оценка реакции
Реакция/всего животных Интенсивность по \Veigle
1 вакцина «Мелаваю> 3,0хЮб кл./кг/48чхЗраза вакцина «Мелавак» 9,0хЮб кл./кг 7/10 слабая
2 вакцина «Мелаваю> 0,30хЮ6 кл./кг/48чхЗраза вакцина «Мелавак» 0,9хЮб кл./кг 0/10 нет
3 0,9 %-ный раствор ЫаС1 вакцина «Мелавак» 9,0хЮб кл./кг 0/5 нет
4 0,9 %-ный раствор №С1 0,9 %-ный раствор №С1 0/5 нет
5 СКРС СКРС 9/10 сильная
Проведенные исследования по «хронической» токсичности в дозах, превышающих предполагаемую дозу для человека в 100—10 раз, выявили, что вакцина «Мелавак» дозозависимо влияет на функции печени, увеличивает активность ЛДГ, АЛТ и АСТ, а также повышает содержание глюкозы в сыворотке крови животных. Вакцина «Мелавак» не влияет на общее состояние и поведение животных, не изменяет морфофункционального состояния почек, сердца, желудочно-кишечного канала и не оказывает влияния на показатели периферической крови.
Вакцина «Мелавак» в отличие от опухолевой клеточной линии Mel Kor не обладает туморогенным действием. Вакцина «Мелавак» обладает слабыми аллергенными свойствами.
Таким образом, проведенные токсикологические исследования показали, что вакцина «Мела-вак» безопасна при однократном и многократном внутрикожном применении лабораторным животным разных видов и может быть рекомендована в качестве терапевтической противоопухолевой вакцины для клинической апробации.
Работа выполнена при финансовой поддержке Правительства Москвы в рамках Научно-технической Программы «Разработка и внедрение в медицинскую практику новых методов и средств диагностики и лечения онкологических и других заболеваний».
Литература
1. Граноцит. - Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России. - М.: АстраФармСервис, 2009.
- С. Б-506-Б-507.
2. Михайлова И. Н., Лукашина М.И., Барышников А.Ю. и др. Клеточные линии меланомы - основа для создания противоопухолевых вакцин // Вестник РАМН. - 2005. - № 7. - С. 37-40.
3. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ под ред. Р.У. Хабриева. 2 изд. перераб. и доп. - М.: Медицина, 2005. - С.13-23; 41-69; 170204.
4. FDA Guidance for Human Somatic Cell Therapy and Gene Therapy. - 1998.- ( FDA [21CFR ch ( 4 - 1 -02 Edition) Part 58 ] ).
5. Greten T.F., Jaffee E.M. Cancer vaccines // J. Clin. Oncol. -1999. - Vol.17(3). - Р. 1047-60.
6. Nemunaitis J., Nemunaitis J. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor gene-transfected autolo-
gous tumor cell vaccine: focus[correction to focous] on non-small-cell lung cancer // Clin Lung Cancer. -2003. - Vol. 5(3). - Р. 148-57.
7. Nemunaitis J. GVAX (GMCSF gene modified tumor vaccine) in advanced stage non small cell lung cancer // J. Control Release. - 2003. - Vol. 91(1-2). - P. 225-31.
8. Parmiani G., Rodolfo M., Melani C. Immunological gene therapy with ex vivo gene-modified tumor cells: a
critique and a reappraisal // Human Gene Therapy. - 2000. - Vol. 11. - Р. 1269-75.
9. Simons J. W., Sacks N. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-transduced allogeneic cancer cellular immunotherapy: the GVAX vaccine for prostate cancer // Urol. Oncol. - 2006. - Vol. 24(5). - P. 41924.
10. Soiffer R., Lynch T., Mihm M. et al. Vaccination with irradiated autologus melanoma cells engineered to secrete human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor generates potent antitumor immunity in patients with metastatic melanoma // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - Immunology. - 1998. - Vol. 95. - Р. 13141-6.
11. Weigle W.O., Cochrane G., Dixon F.L. Anaphylactogenic Properties of Soluble Antigen-Antibody Complexes in the Guinea Pig and Rabbit // J. Immunol. - 1960. - Vol. 95. - P. 5.
Издание 2-е, переработанное и дополненное
ЭНЦИКЛОПЕДИЯ
КЛИНИЧЕСКОЙ
ОНКОЛОГИИ
Готовится к печати Издательская группа РОНЦ
Рисунки к статье Н.П. Ермаковой и соавт. «ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ТОКСИЧНОСТИ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ВАКЦИНЫ [МЕЛАВАК В
Рис. 1. Очаговая гиперпигментация (меланоз) в подкожной Рис. 3. Опухолевые узлы, развившиеся у мышей Balb/c клетчатке крыс в местах внутрикожного введения вакцины. nude на 14 день после инокуляции неинактивирован-
ных опухолевых клеток линии Mel Kor.
Рис. 2. Участки кожи мышей Balb/c nude после введения вакцины «Мелавак». Микрофото иллюстрируют отсутствие опухолей:
А - мононуклеарная (макрофагальная) инфильтрация в сосочковом слое дермы;
Б - повышенная макрофагальная реакция в фиброзном тяже (в фасции);
В - соединительно-тканная клеточная реакция сосочкового слоя дермы и вокруг сосудов в подкожной клетчатке;
Г - участок утолщения кожи;
Д, Е - очажок детрита и макрофагов замурован в фиброзном тяже (в фасции);
Окраска гематоксилином и эозином. А, Б, В, Г, Д — (*100); Е — (*400).
