CC BY
53
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
низмов особое внимание уделяется провоспалительным цитокинам, которым отводится основная роль в осуществлении бидиректоральной связи между нервной и иммунной системами организма.
Целью исследования явилось изучение уровня ТЫБа и 1БЫу у детей с эпилепсией при ДЦП. Обследовано 85 детей в возрасте до 5 лет. Из них 48 детей с ДЦП и 37 детей с эпилепсией на фоне ДЦП. 19 практически здоровых детей составили контрольную группу. Патология ДЦП и эпилепсии устанавливалась на основании клинико-инструмен-тальных, анамнестических, генеалогических, биохимических методов исследования. Уровень ТЫБа и 1БЫу определяли в сыворотке периферической крови и в спиномозговой жидкости (СМЖ) методом ИФА (ООО «Цитокин», Россия).
Анализ результатов, полученных при изучении содержания TNFа выявил некоторое различие: в сыворотке периферической крови у детей с ДЦП уровень ТЫБа в 2,8 раза выше контрольных значений (Р < 0,001). В то время как у детей с эпилепсией при ДЦП он составил в среднем 36,4±1,04 пг/мл, что достоверно выше значений контрольной группы (Р < 0,05), но ниже значений детей с ДЦП в 2 раза (Р < 0,01).
Установлено, что ТЫБа ответственен за прогрессирующее повреждение нейронов и является важным пусковым фактором в нейропротективной интервенции после острого периода повреждения мозга. Показано, что ТЫБа имеет отношение к повреждению миелина и олигодендроцитов, может вызвать артериальную гипотензию ишемических повреждений вещества мозга. Вместе с тем высокая концентрация этого цитокина может играть регулирующую роль. Возможно, повышенный уровень ТЫБа у детей с ДЦП связан с влиянием перенесенной гипоксии. При изучении уровня 1КЫу в сыворотке крови было выявлено достоверное его снижение по сравнению с данными контрольной группы (22,3±1,8 пг/мл) (Р < 0,05). Причем более глубокий дефицит наблюдался у детей с эпилепсией на фоне ДЦП (Р < 0,01).
Уровень цитокинов в спинномозговой жидкости у детей с ДЦП показали, что присоединение эпилепсии способствует повышенному уровню TNFa (Р < 0,05) и дефициту интерферона-у (Р < 0,05).
О дивиации цитокинового профиля по пути ТЫ-типа (провоспалительного) можно судить по содержанию интерферона-у. Участие цитокинов в повреждении белого вещества мозга и убыли нейронов представляется закономерным, если учесть, что цитокины активно индуцируют апоптоз. Проникшие в нервную систему активированные Т-клетки, вторично активированные макрофаги и клетки микроглии выделяют провоспалительные цитокины, что ведет к развитию ограниченной воспалительной реакции. В этих очагах начинают продуцироваться антитела против собственного миелина (антимиелиновые антитела), концентрация которых быстро возрастает за счет системно образующихся через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ). Начинается процесс гибели олигодендроглиоци-тов. Увеличивается проницаемость ГЭБ, что способствует усилению аутоиммунных реакций. По данным некоторых авторов была гипотеза, что повышенный уровень провоспалительных цитокинов может быть предиктором развития эпилепсии. Кроме того, было высказано предположение, что повышенные уровни провоспалительных цитокинов могут вызвать повреждение нейронов в течение всей жизни.
ДИСФУНКЦИЯ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ И ОТВЕТ НА СТРЕСС У ДЕТЕЙ С РАССТРОЙСТВАМИ АУТИСТИЧЕСКОГО СПЕКТРА
Бурмистрова А.Л., Филиппова Ю.Ю., Тимофеева А.В.
ФГБОУ ВО «Челябинский государственный университет», Челябинск, Россия
Введение. Аутизм — это расстройство развития нервной системы, которое характеризуется тяжелыми и устойчивыми нарушениями социального взаимодействия и стереотипным поведением. Этиология расстройств аутистического спектра (РАС) не известна, и, вероятно, включает в себя сложные взаимодействия между генетическими, эпигенетические и экологическими факторами (Iwata K., 2011). В настоящее время считается, что иммунная дисфункция может способствовать прогрессии РАС, однако механизмы такого воздействия остаются не изученными (Napolioni V., 2013).
Цель. Определить профиль цитокинов: IL-6, TNFa, IL-1ß, IL-10, и уровень гормонов стресса: кортизола, адренокортикотропного гормона (АКТГ), в плазме крови детей с РАС.
Материалы и методы. В исследование были включены 20 мальчиков с РАС, находящихся на реабилитации в социально-реабилитационном центре «Здоровье» г. Челябинска. Отбор детей проводился врачом — психиатром центра «Здоровье» на основании клинического диагноза и анамнеза заболевания. Для оценки клини-ко-динамических характеристик состояния были использованы оценочные шкалы CARS (Childhood Autism Rating Scale) и CARS2-HF. В зависимости от возраста дети были разделены на 2 группы: дошкольники (3-6 лет) — 11 человек и дети младшего школьного возраста (7 — 11 лет) — 9 человек. В качестве группы контроля было обследовано 16 мальчиков с типичным развитием соответствующего возраста. Работа одобрена этическим комитетом Челябинского государственного университета (протокол № 1 от 16.05.2016.). У всех родителей получено информированное согласие на участие в исследовании.
Уровень цитокинов: IL-6, TNFa, IL-1ß, IL-10 (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск) и гормонов: кортизола (ООО «Хема», Москва) и АКТГ (Biomerica, Германия) определяли в плазме крови здоровых детей и детей с РАС методом твердофазного иммуноферментного анализа согласно инструкциям производителей. Для оценки значимости межгрупповых различий использовали критерий Краскела—Уоллиса с апостериорными парными сравнениями по Коноверу—Инману. Различия считали статистически значимыми при p < 0,05.
Результаты. Нами обнаружено, что дети с РАС дошкольного возраста имели статистически значимо высокие уровни IL-1ß в плазме крови по сравнению со здоровыми детьми того же возраста. Различий в уровнях IL-6, TNFa и IL-10 между группами здоровых детей и детей с РАС не выявлено (см. табл.).
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунологические проблемы в педиатрии Immunological problems in pediatrics
ТАБЛИЦА. ОСОБЕННОСТИ ЦИТОКИНОВОГО ПРОФИЛЯ И ОТВЕТА НА СТРЕСС У УСЛОВНО ЗДОРОВЫХ ДЕТЕЙ И ДЕТЕЙ С РАС (К ТЕЗИСАМ БУРМИСТРОВОЙ А.Л. И ДР.)
Показатель Здоровые дети дошкольники пг/мл Дети с РАС дошкольники пг/мл Здоровые дети школьники пг/мл Дети с РАС школьники пг/мл
IL-6 3,24 (2,89-3,96) 2,85 (2,32-5,15) 2,87 (2,30-3,41) 2,72 (2,34-3,41)
TNFa 2,14 (1,53-2,88) 2,55 (1,58-3,46) 2,05 (1,58-2,46) 2,32 (1,86-2,69)
IL-1 ß 2,72 (1,59-3,55) 4,38* (3,10-7,19) 3,53 (2,30-4,15) 2,63 (2,11-3,64)
IL-10 11,84 (8,64-12,80) 9,27 (6,46-24,34) 6,97 (3,87-9,87) 6,11 (5,38-7,03)
кортизол 725 (450-1460) 450 (270-1300) 1425 (880-2080) 590 (305-1350)
АКТГ 4,09 (0,01-15,54) 21,32* (11,56-175,68) 9,86 (0,01-16,98) 24,22* (13,60-164,42)
Примечание. Данные представлены в виде медианы и 25-75 квартилей; * — различия между здоровыми и больными детьми.
Известно, что IL-1ß участвует в регуляции гомеостаза синаптической пластичности в гипокампе (Ashwood Р., 2011), а также в активации гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси (ГГН-оси), которая является основой для эмоций и социальных взаимодействий, нарушенных при аутизме (Gadek-Michalska A., 2012; Hamza R.T, 2010). Поэтому мы определили уровни кортизола и АКТГ в плазме крови детей с типичным развитием и индивидуумов с РАС. Нами обнаружены большие межиндивидуальные различия в уровнях этих гормонов, независимо от возраста и наличия/отсутствия РАС. Несмотря на это, концентрация АКТГ в плазме крови детей с РАС в обеих возрастных группах была статистически значимо повышена по сравнению с аналогичным показателем здоровых детей. Уровень кортизола не имел значимых различий, но наблюдалась тенденция к его снижению у индивидуумов с РАС (см. табл.). Наши данные согласуются с данными Hamza R.T. et al. (2010), о низких базовых уровнях кортизола и высоких — АКТГ в сыворотке крови детей с аутизмом, что может свидетельствовать о дисфункции ГГН-оси. Предлагаемые механизмы такой дисфункции могут включать нарушения: в доставке АКТГ к рецепторам коры надпочечников, в биосинтезе кортизола, или в ингибировании отрицательной обратной связи между кортизолом и АКТГ.
Заключение. Таким образом, нами обнаружено повышение уровней IL-1 ß и АКТГ в плазме крови детей с РАС, что может свидетельствовать об участии дисфункций иммунной системы и ГГН-оси в патофизиологии аутизма.
CD3+CD294+ ЛИМФОЦИТЫ КАК МАРКЕРЫ Тх2 И Тс2 ИММУННОГО ОТВЕТА
Бычкова Н.В.1, Синельникова Н.А.2, Чиненова Л.В.1, Калинина Н.М.1
1ФГБУ«Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины им. А.М. Никифорова» МЧС России, Санкт-Петербург, Россия 2 Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет, Санкт-Петербург, Россия
Популяция Т-лимфоцитов, экспрессирующих молекулу CRTH2 (CD294), является гетерогенной и состоит из Т-хелперов 2 и Т-цитотоксических 2, характеризует-
ся определенным профилем внутриклеточных цитоки-нов (синтез IL-4, IL-5, IL-13 и отсутствие синтеза IFNy), а также совокупной экспрессией хемокиновых рецепторов CCR3 и CCR4.
Цель. Оценить количество CD3+CD294+ лимфоцитов в периферической крови у пациентов с аллергическими и аутоиммунными заболеваниями.
В проведенное исследование включены пациенты с атопическим дерматитом (АД) (n = 82, возраст 3,5±3 года), спонтанной (СК) (n = 32, возраст 8,5±0,9 лет) и смешанной крапивницей с преобладанием индуцированных форм (ИК) (n = 30, возраст 11,8±0,9 лет), рассеянным склерозом (РС) (n = 27, возраст 37±10 лет). Группы сравнения — условно здоровые взрослые (n = 13, возраст 38±10 лет), условно здоровые дети (n = 9, возраст 9±3 лет). Идентификация CD3+CD294+ лимфоцитов проведена с использованием набора Allergenicity kit (BECKMAN-COULTER, USA) методом проточной цитометрии (FC 500, BECKMAN-COULTER, USA). В сыворотке крови пациентов определен уровень общего иммуноглобулина Е (Immulite, USA).
Популяция CD3+CD294+ была значительно меньше у детей, чем у взрослых, и составила в группе здоровых детей 0,3±0,05% от лимфоцитов, у пациентов с ИК 0,5±0,05%, СК - 0,7±0,05% (р < 0,05), АД - 1,2±0,06% (р < 0,01). В группе здоровых взрослых лимфоциты CD3+CD294+ составили 0,6±0,06%, у пациентов РС -1,4±0,06% (р < 0,01). Выявлена прямая достоверная корреляционная зависимость между количеством лимфоцитов CD3+CD294+ и содержанием IgE в сыворотке крови в группах пациентов с АД (R = 0,6, р < 0,01), СК (R = 0,5, р < 0,05), РС (R = 0,6, р < 0,05), что подтверждает способность Т-хелперов 2 индуцировать синтез IgE плазматическими клетками. Среди Т-лимфоцитов молекула CRTH2 преимущественно экспрессируется на CD4+ лимфоцитах, что свидетельствует о Тх2 типе иммунного ответа. В нашем исследовании у одного взрослого пациента с псориазом и выраженной лекарственной аллергией выявлено 19,5% CD3+CD8+CD294+ клеток при преобладании в крови популяции CD3+CD8+ (ИРИ 0,5). Иммунный ответ у пациента проходил по Тх2 типу, что подтверждается высокими уровнями спонтанной продукции и содержания в сыворотке интерлейкина 4 при нормальном уровне интерферона-у. Иммунный ответ протекал в сочетании с повышенным относительным количеством CD3+CD8+ и CD3+CD8+CD294+.
