CC BY
26
липидных фракций, содержащихся в указанных средах человека.
Всего проведен анализ 100 проб пота и крови от 50 доноров. Для анализа полученных при помощи химической экстракции проб использовали ТСХ и хромато-масс-спектрометрию для оценки примесей и дальнейшей оценки липидных фракций. Для контроля использовали эталоны сфингомиелина (Sigma, США).
Во всех полученных пробах имеются запаховых следы человека. При помощи хромато-масс-спектрометрии в них установлено присутствие незначительного количества примесей одинакового состава (следовые количества примесей, присутствующих в используемых растворителях и воспринятые растворителями с поверхностей полимерных пробирок и шприцов). Для объектов, частично подвергшихся высокотемпературному воздействию, получены данные о следовом количестве продуктов пиролиза (38 %) или об их полном отсутствии (62 %).
В результате исследования нами установлено, что во всех пробах отсутствуют жирные кислоты, триглице-риды, холестерин, сквалены.
Для аналитической ТСХ использовались пластины Merck (Германия). Первое элюирование проводили в стандартной системе для обнаружения всех классов липидов хлороформ: метанол: вода (65:25:4), после получения данных о наличии сфинголипидов применяли вторую систему элюирования толуол: метанол (7:3), что позволило их разделить в 90 % случаев на три фракции, в 5 % - на четыре, в 2 % - на пять и в 3 % - на две фракции. Для анализа проводили сравнение с эталонами сфингомиелина (Sigma, США) и качественные реакции с нингидрином, реагентами Васьковского и Драгендорфа.
ВЫВОДЫ
1. За индивидуальный запах человека отвечают полярные липиды, относящиеся к классу сфинголипидов, а именно церамиды.
2. Впервые в мировой практике инструментальным методом определен диагностический признак наличия за-паховых следов человека как биологического вида.
3. Разработанный метод химической экстракции позволяет эффективно очищать запаховые пробы и значительно расширяет возможности использования ольфак-торного экспертного метода по отношению к объектам биологического происхождения.
■ ВЫЯВЛЕНИЕ ИНДИВИДУАЛЬНОГО ЗАПАХА ЧЕЛОВЕКА В ФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕНТАХ ЕГО КРОВИ И ИСКУССТВЕННОЙ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ СРЕДЕ RPMI 1640 & HEPES_
П. Б. Панфилов, З. Ю. Панфилова, Ю. С. Фиронова
ФГКУ ЭКЦ МВД России, Москва В серии опытов российскими учеными (Т. Ф. Моисеева и др.) было установлено, что за индивидуальный запах человека отвечают вещества липидной природы. Для изучения класса этих веществ впервые в научной практике были изучены форменные элементы крови, а также сама культуральная среда, в которую помещались лимфоциты, на наличие пахучих компонентов, определяющих личный запах человека.
Ключевые слова: ольфакторный метод, культу-ральная среда, запаховые следы, липиды, индивидуальный запах, лимфоциты, эритроциты Источник «личного запаха», рассматриваемый ранее российскими учеными как стабильные вещества липид-ной природы, оставался неопределенным. По этой при-
чине в настоящем исследовании были изучены форменные элементы крови, а также сама культуральная среда, в которую помещались лимфоциты, на наличие пахучих компонентов, определяющих личный запах человека.
Для исследования было отобрано шесть доноров, у которых из вены были получены образцы крови в количестве 5 мл без добавления антикоагулянтов, после чего указанные образцы перемешивали с физраствором и пропускали полученную смесь через лейкофильтр, центрифугировали в пробирках типа «Эппендорф». Осажденные эритроциты отбирались и промывались от плазмы крови несколько раз физраствором. Контроль за целостностью клеток осуществляли наблюдением под микроскопом. Далее эритроциты помещали в условия вакуума, после чего снова контролировали их целостность до ее полного исчезновения. Как только целых клеток не оставалось, содержимое на предметных стеклах помещали в прибор для осуществления сбора запаховых проб известным в экспертной практике криогенно-ваку-умным способом.
Для выделения лимфоцитов применяли стандартную методику с использованием фиколл-урографина, полученные и отмытые клетки помещали в культураль-ную среду К.РМ1 1640 с НЕРЕ8 и разведенным в ней глу-таматом. После этого полученные пробирки помещали в термостат с температурой 36,6 оС. При этом для эксперимента было создано две группы лимфоцитов в куль-туральной среде, где в первой они активно делились и насыщали раствор (что контролировали при помощи камеры Горяева), а во второй - находились в стабильном состоянии, не меняя численного состава. Контроль за процессами жизнедеятельности в исходных средах осуществляли каждые 3 часа. Далее, отделив лимфоциты при помощи лейкофильтра, культуральную среду выливали на стерильный хлопковый сорбент, сами же клетки промывали физраствором несколько раз; полученные с ними фильтры просушивали, после чего раздельно собрали запаховые пробы с фильтров (с осажденными там лимфоцитами), а также с культуральной среды.
По полученным запаховым пробам с эритроцитов, лимфоцитов и культуральной среды проводили диагностические и идентификационные ольфакторные исследования, по результатам которых во всех пробах выявлены запаховые следы человека, происходящие от доноров.
ВЫВОДЫ
1. Клеточное содержимое эритроцитов и лимфоцитов является источником пахучих веществ, отвечающих за индивидуальный запах человека.
2. Индивидуализирующие субъекта пахучие вещества остаются в процессе жизнедеятельности и сигнализации лимфоцитов независимо от того, происходит ли их деление или нет.
ДИНАМИКА СОХРАННОСТИ ИНДИВИДУАЛЬНОГО ЗАПАХА ЧЕЛОВЕКА В ОБРАЗЦАХ ТРУПНОЙ КРОВИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СПОСОБОВ ИХ ЗАБОРА_
П. Б. Панфилов, З. Ю. Панфилова, Ю. С. Фиронова
ФГКУ ЭКЦ МВД России, Москва Индивидуализирующие компоненты, отвечающие за личный запах человека, генетически детерминированы и постоянно находятся в составе его пота и крови. Выявлена зависимость качества представляемых на ольфакторное исследование образцов трупной крови от способа их забора.
Ключевые слова: экспертиза запаховых следов I
человека, индивидуальный запах, трупная кровь,
ольфакторный метод
Личный запах в образцах трупной крови устойчиво присутствует до 48 часов (от момента смерти до забора образца методом венепункции с дальнейшим высушиванием при комнатной температуре), но в экспертной практике установлено, что до 70 % представленных образцов трупной крови остаются неинформативны и непригодны для ольфакторного исследования.
Для данного исследования было отобрано шесть трупов (три мужчины и три женщины) с временным интервалом от момента смерти до забора образцов до 12 часов. Отбор материала производился в помещении морга при комнатной температуре (18-20 оС).
Перед забором образцов трупы подвергались патоло-гоанатомической процедуре по методике, предложенной Р. Вирховом. После удаления органов из грудной и брюшной полостей мерным цилиндром в количестве 36 мл отбирали трупную кровь, скопившуюся в освободившихся полостях.
У трупа мужчины под № 6 наблюдалось свертывание крови с образованием плотного сгустка непосредственно в момент забора биологического материала.
Полученный материал от каждого из отобранных трупов в количестве 3 мл выливали на стерильную марлевую салфетку и сушили при комнатной температуре, а затем упаковывали в бумажные конверты. Оставшиеся 33 мл распределяли поровну в 11 пробирок с закупоривающими крышками (по 3 мл в каждой), которые транспортировали в ольфакторную лабораторию.
В ольфакторной лаборатории образцы хранились при температуре 18-20 оС. Через каждые 4 часа содержимое одной из пробирок выливалось на стерильную марлевую салфетку, высушивалось по аналогии и упаковывалось в бумажный конверт с советующими пояснительными надписями.
В пяти из шести полученных образцов трупной крови содержались запаховые следы человека как биологического вида (83 % от общего числа экспериментально полученных образцов трупной крови).
Далее исследовались запаховые пробы, полученные из образцов трупной крови с избранным временным интервалом (4, 8 и 12 часов) в условиях in vitro при температуре 18-20 оС. В результате исследования процент сохранности индивидуального запаха в образцах составил 60 %, 20 % и 0 % соответственно.
ВЫВОДЫ
При проведении патологоанатомического вскрытия стандартным методом в образовавшихся полостях трупная кровь активно взаимодействует с кислородом и подвергается окислительным реакциям, что было отмечено у мужского трупа под № 6 и снизило на начальном этапе процент качественности отобранных образцов на 17 % по сравнению с забором образцов трупной крови из вены, где выявление ольфакторной индивидуальности возможно до 48 часов.
Как показали проведенные эксперименты, на пригодность (качественность) образцов трупной крови к оль-факторному исследованию существенно влияет своевременность ее просушивания после отбора образца крови из трупа.
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ И СПЕЦИФИЧНОСТЬ
ИССЛЕДОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОГО
РОДСТВА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПАНЕЛИ
ИЗ 23 АУТОСОМНЫХ STR-МАРКЕРОВ_
В. В. Заварин1, В. И. Ильина1, М. Н. Петушков2, Е. В. Красоткин1, Т. С. Макарова1, А. Г. Семиходский1 1ООО «Медикал Геномикс», Тверь 2ФГБОУ ВО «Тверской государственный университет», Тверь Доклад посвящен аналитическим характеристикам молекулярно-генетического метода установления биологического родства с использованием 23 аутосомных STR-локусов, тестирование которых в настоящее время рутинно осуществляется экспертными лабораториями в Российской Федерации. Ключевые слова: аутосомные STR-маркеры, по-пуляционная генетика, установление биологического родства
Действующая редакция стандартов AABB по установлению биологического родства содержит новое требование, согласно которому в случае исследования в формате дуэт сиблингового родства, родства ребенок - бабушка/ дедушка, ребенок - тетя/дядя в заключении эксперта необходимо приводить оценку доли индивидуумов, состоящих в биологическом родстве, для которых результат исследования будет неопределенным, либо в пользу биологического родства, либо против биологического родства. В связи с этим целью настоящей работы стала оценка с помощью симуляционного исследования чувствительности и специфичности установления сиблингового родства в европеоидной популяции Российской Федерации с использованием панели из 23 аутосомных STR-марке-ров (D3S1358, vWA, D16S539, CSF1PO, TPOX, D8S1179, D21S11, D18S51, D2S441, D19S433, TH01, FGA, D22S1045, D5S818, D13S317, D7S820, D10S1248, D1S1656, D12S391, D2S1338, D6S1043, Penta D, Penta E).
Было обследовано 1118 неродственных друг другу индивидуумов, принадлежащих к европеоидной популяции России. Аллельные частоты, популяционно-стати-стические параметры и параметры, характеризующие дискриминирующий потенциал каждого локуса, были определены с использованием программы STRAF v1.0.5. Симуляционное исследование проводили с использованием программного пакета Familias v3.2.2. Были проанализированы следующие сценарии: полусиблинги против неродственных лиц (дуэт; с участием одного либо обоих биологических родителей); полные сиблинги против неродственных лиц; полные сиблинги против полусиблин-гов (дуэт; с участием биологического родителя). Доля истинно положительных и ложноположительных результатов вычислялась с использованием порогового значения отношения правдоподобия Likelihood Ratio (LR), равного 10. Доля истинно отрицательных и ложноотрица-тельных результатов вычислялась с использованием порога LR, равного 0,1.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Из 1000 симуляций истинного родства LR>10 имели от 72,7 % (полусиблинги, дуэт) до 98,6 % (полные сиблин-ги против неродственных лиц) симуляций. Доля ложно-отрицательных результатов составила от 0,3 % (полные сиблинги против неродственных лиц) до 1,7 % (полусиб-линги, дуэт), доля неопределенных результатов составила от 1,1 % (полные сиблинги против неродственных лиц) до 25,6 % (полусиблинги, дуэт). Симуляция альтернативной гипотезы дала от 72,8 % (полусиблинги, дуэт) до 98,5 % (полные сиблинги против неродственных лиц) истинно отрицательных результатов и от 0,2 % (полные сиблинги
