Научная статья на тему 'Чувствительность и специфичность исследования биологического родства с использованием панели из 23 аутосомных STR-маркеров'

Чувствительность и специфичность исследования биологического родства с использованием панели из 23 аутосомных STR-маркеров Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

CC BY
290
48
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
АУТОСОМНЫЕ STR-МАРКЕРЫ / ПОПУЛЯЦИОННАЯ ГЕНЕТИКА / УСТАНОВЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОГО РОДСТВА

Аннотация научной статьи по прочим медицинским наукам, автор научной работы — Заварин Владислав Владимирович, Ильина Виктория Игоревна, Петушков Михаил Николаевич, Красоткин Евгений Витальевич, Макарова Татьяна Сергеевна

Доклад посвящен аналитическим характеристикам молекулярно-генетического метода установления биологического родства с использованием 23 аутосомных STR-локусов, тестирование которых в настоящее время рутинно осуществляется экспертными лабораториями в Российской Федерации.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по прочим медицинским наукам , автор научной работы — Заварин Владислав Владимирович, Ильина Виктория Игоревна, Петушков Михаил Николаевич, Красоткин Евгений Витальевич, Макарова Татьяна Сергеевна

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Текст научной работы на тему «Чувствительность и специфичность исследования биологического родства с использованием панели из 23 аутосомных STR-маркеров»

Ключевые слова: экспертиза запаховых следов I

человека, индивидуальный запах, трупная кровь,

ольфакторный метод

Личный запах в образцах трупной крови устойчиво присутствует до 48 часов (от момента смерти до забора образца методом венепункции с дальнейшим высушиванием при комнатной температуре), но в экспертной практике установлено, что до 70 % представленных образцов трупной крови остаются неинформативны и непригодны для ольфакторного исследования.

Для данного исследования было отобрано шесть трупов (три мужчины и три женщины) с временным интервалом от момента смерти до забора образцов до 12 часов. Отбор материала производился в помещении морга при комнатной температуре (18-20 оС).

Перед забором образцов трупы подвергались патоло-гоанатомической процедуре по методике, предложенной Р. Вирховом. После удаления органов из грудной и брюшной полостей мерным цилиндром в количестве 36 мл отбирали трупную кровь, скопившуюся в освободившихся полостях.

У трупа мужчины под № 6 наблюдалось свертывание крови с образованием плотного сгустка непосредственно в момент забора биологического материала.

Полученный материал от каждого из отобранных трупов в количестве 3 мл выливали на стерильную марлевую салфетку и сушили при комнатной температуре, а затем упаковывали в бумажные конверты. Оставшиеся 33 мл распределяли поровну в 11 пробирок с закупоривающими крышками (по 3 мл в каждой), которые транспортировали в ольфакторную лабораторию.

В ольфакторной лаборатории образцы хранились при температуре 18-20 оС. Через каждые 4 часа содержимое одной из пробирок выливалось на стерильную марлевую салфетку, высушивалось по аналогии и упаковывалось в бумажный конверт с советующими пояснительными надписями.

В пяти из шести полученных образцов трупной крови содержались запаховые следы человека как биологического вида (83 % от общего числа экспериментально полученных образцов трупной крови).

Далее исследовались запаховые пробы, полученные из образцов трупной крови с избранным временным интервалом (4, 8 и 12 часов) в условиях in vitro при температуре 18-20 оС. В результате исследования процент сохранности индивидуального запаха в образцах составил 60 %, 20 % и 0 % соответственно.

ВЫВОДЫ

При проведении патологоанатомического вскрытия стандартным методом в образовавшихся полостях трупная кровь активно взаимодействует с кислородом и подвергается окислительным реакциям, что было отмечено у мужского трупа под № 6 и снизило на начальном этапе процент качественности отобранных образцов на 17 % по сравнению с забором образцов трупной крови из вены, где выявление ольфакторной индивидуальности возможно до 48 часов.

Как показали проведенные эксперименты, на пригодность (качественность) образцов трупной крови к оль-факторному исследованию существенно влияет своевременность ее просушивания после отбора образца крови из трупа.

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ И СПЕЦИФИЧНОСТЬ

ИССЛЕДОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОГО

РОДСТВА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПАНЕЛИ

ИЗ 23 АУТОСОМНЫХ STR-МАРКЕРОВ_

В. В. Заварин1, В. И. Ильина1, М. Н. Петушков2, Е. В. Красоткин1, Т. С. Макарова1, А. Г. Семиходский1 1ООО «Медикал Геномикс», Тверь 2ФГБОУ ВО «Тверской государственный университет», Тверь Доклад посвящен аналитическим характеристикам молекулярно-генетического метода установления биологического родства с использованием 23 аутосомных STR-локусов, тестирование которых в настоящее время рутинно осуществляется экспертными лабораториями в Российской Федерации. Ключевые слова: аутосомные STR-маркеры, по-пуляционная генетика, установление биологического родства

Действующая редакция стандартов AABB по установлению биологического родства содержит новое требование, согласно которому в случае исследования в формате дуэт сиблингового родства, родства ребенок - бабушка/ дедушка, ребенок - тетя/дядя в заключении эксперта необходимо приводить оценку доли индивидуумов, состоящих в биологическом родстве, для которых результат исследования будет неопределенным, либо в пользу биологического родства, либо против биологического родства. В связи с этим целью настоящей работы стала оценка с помощью симуляционного исследования чувствительности и специфичности установления сиблингового родства в европеоидной популяции Российской Федерации с использованием панели из 23 аутосомных STR-марке-ров (D3S1358, vWA, D16S539, CSF1PO, TPOX, D8S1179, D21S11, D18S51, D2S441, D19S433, TH01, FGA, D22S1045, D5S818, D13S317, D7S820, D10S1248, D1S1656, D12S391, D2S1338, D6S1043, Penta D, Penta E).

Было обследовано 1118 неродственных друг другу индивидуумов, принадлежащих к европеоидной популяции России. Аллельные частоты, популяционно-стати-стические параметры и параметры, характеризующие дискриминирующий потенциал каждого локуса, были определены с использованием программы STRAF v1.0.5. Симуляционное исследование проводили с использованием программного пакета Familias v3.2.2. Были проанализированы следующие сценарии: полусиблинги против неродственных лиц (дуэт; с участием одного либо обоих биологических родителей); полные сиблинги против неродственных лиц; полные сиблинги против полусиблин-гов (дуэт; с участием биологического родителя). Доля истинно положительных и ложноположительных результатов вычислялась с использованием порогового значения отношения правдоподобия Likelihood Ratio (LR), равного 10. Доля истинно отрицательных и ложноотрица-тельных результатов вычислялась с использованием порога LR, равного 0,1.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Из 1000 симуляций истинного родства LR>10 имели от 72,7 % (полусиблинги, дуэт) до 98,6 % (полные сиблин-ги против неродственных лиц) симуляций. Доля ложно-отрицательных результатов составила от 0,3 % (полные сиблинги против неродственных лиц) до 1,7 % (полусиб-линги, дуэт), доля неопределенных результатов составила от 1,1 % (полные сиблинги против неродственных лиц) до 25,6 % (полусиблинги, дуэт). Симуляция альтернативной гипотезы дала от 72,8 % (полусиблинги, дуэт) до 98,5 % (полные сиблинги против неродственных лиц) истинно отрицательных результатов и от 0,2 % (полные сиблинги

против неродственных лиц) до 1,0 % (полусиблинги, дуэт) ложноположительных результатов. Доля неопределенных результатов при этом составила от 1,3 % (полные сиблин-ги против неродственных лиц) до 26,2 % (полусиблинги, дуэт).

ВОЛОСЫ КАК ПРЕДМЕТ-НОСИТЕЛЬ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА, ПРИГОДНОГО ДЛЯ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ

И. В. Карасева, О. В. Шапошник, А. Г. Смоляницкий ГКУЗ ЛО «Бюро судебно-медицинской экспертизы», Санкт-Петербург Статья посвящена практике проведениямолеку-лярно-генетических экспертиз, когда объектами экспертизы являются волосы, изъятые в ходе осмотра места происшествия либо полученные при освидетельствовании проходящих по делу лиц. При назначении экспертизы по таким объектам могут быть решены разные задачи: 1) установление генетического профиля биологического материала (клеток эпителия, крови, слюны, спермы) на поверхности волос; 2) определение генетического профиля человека, которому принадлежат волосы-улики. Ключевые слова: волосы-улики, экстрагирование ДНК, ДНК-профиль

При расследовании половых преступлений на экспертизу нередко, кроме мазков и тампонов с материалом жертвы, предметов одежды потерпевших и подозреваемых, доставляются волосы, изъятые при освидетельствовании проходящих по делу лиц, счесы либо срезы лобковых волос жертвы или подозреваемого; как правило, при этом основной задачей является найти чужеродный волос и по нему установить генотип человека. Счесы/ срезы волос могут выступать в качестве носителя чужого материала.

Нами было проведено несколько экспертиз, в которых предметом исследования стали не собственно волосы (корневые отделы), а смывы наложений (клеток крови и эпителия) с предоставленных следствием волос. В этих случаях осуществляется поиск чужеродного биологического материала на волосах хозяина, волосы в данных обстоятельствах являются «предметом-носителем».

Экспертиза № 1, по факту обнаружения трупа женщины с признаками насильственной смерти в виде множественных ножевых ранений и изнасилования. У подозреваемого, кроме срезов ногтевых пластин с обеих рук и смыва с полового члена, был изъят счес волос с лобка. Для установления наличия биологического материала (крови, слюны) на волосах производили экстрагирование биологического материала с волос-улик в универсальном буфере-RSID™ с последующим центрифугированием и получением клеточного осадка. Супернатант использовали для установления природы биологического материала с помощью тест-систем RSro^^lood, RSID™-Saliva (Independent Forensics, США). В результате выявлено присутствие крови человека на волосах. Из следов крови на предоставленном счесе волос из образцов крови подозреваемого и потерпевшей были получены препараты ДНК и проведено их генотипирование. Типирование ДНК проводили с набором реагентов COrDIS Plus, разработанным ООО «ГОРДИЗ» (РФ) и с применением автоматической системы капиллярного электрофореза ABI Prism 310 GA (Applied Biosystems, США). В результате исследования в следах крови на счесе волос с лобка подозреваемого установлено присутствие крови потерпевшей с вероятностью не менее 99,(9)15 %.

Экспертиза № 2. Гражданин П. попал под подозрение в изнасиловании гражданки К. Среди прочих материалов, предоставленных следствием, на экспертизу поступили мазки с содержимым влагалища и прямой кишки потерпевшей, мазок-отпечаток полового члена и срезы лобковых волос подозреваемого. В отпечатке полового члена подозреваемого не оказалось женского генетического материала. При изучении мазков из влагалища было установлено наличие спермы в крайне незначительном количестве, оказавшемся не достаточным для установления генотипа мужского материала. В мазках из прямой кишки жертвы сперматозоиды обнаружены не были. Такие результаты не содержали доказательной базы как о причастности, так и исключении гражданина П. из круга подозреваемых лиц. Результативными оказались исследования внешних биологических следов на срезе лобковых волос гражданина П. При исследовании клеточного осадка, полученного после инкубации в буфере среза волос, был установлен смешанный профиль гражданки Ч. и гражданина П. Таким образом, в рассмотренном случае генетический материал на срезах лобковых волос стал единственным доказательством совершенного преступления.

ВЫВОДЫ

Устоявшейся практикой в случаях расследования преступлений, связанных с половой неприкосновенностью личности, при освидетельствовании проходящих по делу лиц происходит отбор образцов лобковых волос (счесов либо срезов) с последующим назначением молекулярно-генетической экспертизы. Целью исследований является поиск чужеродного биологического материала на волосах жертвы или подозреваемого в преступлении. Молекуляр-но-генетическая экспертиза наложений биологического материала на лобковых волосах подозреваемого или жертвы в случае сексуальных преступлений имеет важное доказательное значение при расследовании. Анализ имеющихся биологических наложений (крови, спермы, слюны, клеток эпителия) на лобковых волосах позволяет успешно идентифицировать преступника.

ВОЛОСЫ-УЛИКИ. ПРАКТИЧЕСКИЕ

РЕШЕНИЯ ЗАДАЧИ_

А. Г. Смоляницкий, И. В. Карасева, А. И. Смоляницкая

ГКУЗ ЛО «Бюро судебно-медицинской экспертизы», г. Санкт-Петербург Доклад касается возможности генотипирования волос-улик, в том числе фрагментов волос без корневых концов. Волосы и фрагменты волос достаточно часто оказываются объектами судебно-медицинской экспертизы, однако отсутствие возможности провести полноценный генетический анализ ведет к утрате доказательной силы данных объектов. В статье приведены примеры экспертиз, в которых от положительного результата генотипирования фрагментов волос зависело наличие или отсутствие существенной доказательной базы в расследовании уголовных дел.

Ключевые слова: волосы-улики, анализ стержня волоса, ДНК-идентификация, STR-типирование, анализ митохондриальной ДНК При расследовании уголовных дел среди поступающих на судебно-медицинскую экспертизу вещественных доказательств достаточно распространены волосы-улики. Волосы могут быть представлены как самостоятельная улика (например, пучок вырванных волос из руки жертвы) либо быть обнаруженными на различных пред-

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.