CC BY
34
против неродственных лиц) до 1,0 % (полусиблинги, дуэт) ложноположительных результатов. Доля неопределенных результатов при этом составила от 1,3 % (полные сиблин-ги против неродственных лиц) до 26,2 % (полусиблинги, дуэт).
ВОЛОСЫ КАК ПРЕДМЕТ-НОСИТЕЛЬ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА, ПРИГОДНОГО ДЛЯ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ
И. В. Карасева, О. В. Шапошник, А. Г. Смоляницкий ГКУЗ ЛО «Бюро судебно-медицинской экспертизы», Санкт-Петербург Статья посвящена практике проведениямолеку-лярно-генетических экспертиз, когда объектами экспертизы являются волосы, изъятые в ходе осмотра места происшествия либо полученные при освидетельствовании проходящих по делу лиц. При назначении экспертизы по таким объектам могут быть решены разные задачи: 1) установление генетического профиля биологического материала (клеток эпителия, крови, слюны, спермы) на поверхности волос; 2) определение генетического профиля человека, которому принадлежат волосы-улики. Ключевые слова: волосы-улики, экстрагирование ДНК, ДНК-профиль
При расследовании половых преступлений на экспертизу нередко, кроме мазков и тампонов с материалом жертвы, предметов одежды потерпевших и подозреваемых, доставляются волосы, изъятые при освидетельствовании проходящих по делу лиц, счесы либо срезы лобковых волос жертвы или подозреваемого; как правило, при этом основной задачей является найти чужеродный волос и по нему установить генотип человека. Счесы/ срезы волос могут выступать в качестве носителя чужого материала.
Нами было проведено несколько экспертиз, в которых предметом исследования стали не собственно волосы (корневые отделы), а смывы наложений (клеток крови и эпителия) с предоставленных следствием волос. В этих случаях осуществляется поиск чужеродного биологического материала на волосах хозяина, волосы в данных обстоятельствах являются «предметом-носителем».
Экспертиза № 1, по факту обнаружения трупа женщины с признаками насильственной смерти в виде множественных ножевых ранений и изнасилования. У подозреваемого, кроме срезов ногтевых пластин с обеих рук и смыва с полового члена, был изъят счес волос с лобка. Для установления наличия биологического материала (крови, слюны) на волосах производили экстрагирование биологического материала с волос-улик в универсальном буфере-RSID™ с последующим центрифугированием и получением клеточного осадка. Супернатант использовали для установления природы биологического материала с помощью тест-систем RSro^^lood, RSID™-Saliva (Independent Forensics, США). В результате выявлено присутствие крови человека на волосах. Из следов крови на предоставленном счесе волос из образцов крови подозреваемого и потерпевшей были получены препараты ДНК и проведено их генотипирование. Типирование ДНК проводили с набором реагентов COrDIS Plus, разработанным ООО «ГОРДИЗ» (РФ) и с применением автоматической системы капиллярного электрофореза ABI Prism 310 GA (Applied Biosystems, США). В результате исследования в следах крови на счесе волос с лобка подозреваемого установлено присутствие крови потерпевшей с вероятностью не менее 99,(9)15 %.
Экспертиза № 2. Гражданин П. попал под подозрение в изнасиловании гражданки К. Среди прочих материалов, предоставленных следствием, на экспертизу поступили мазки с содержимым влагалища и прямой кишки потерпевшей, мазок-отпечаток полового члена и срезы лобковых волос подозреваемого. В отпечатке полового члена подозреваемого не оказалось женского генетического материала. При изучении мазков из влагалища было установлено наличие спермы в крайне незначительном количестве, оказавшемся не достаточным для установления генотипа мужского материала. В мазках из прямой кишки жертвы сперматозоиды обнаружены не были. Такие результаты не содержали доказательной базы как о причастности, так и исключении гражданина П. из круга подозреваемых лиц. Результативными оказались исследования внешних биологических следов на срезе лобковых волос гражданина П. При исследовании клеточного осадка, полученного после инкубации в буфере среза волос, был установлен смешанный профиль гражданки Ч. и гражданина П. Таким образом, в рассмотренном случае генетический материал на срезах лобковых волос стал единственным доказательством совершенного преступления.
ВЫВОДЫ
Устоявшейся практикой в случаях расследования преступлений, связанных с половой неприкосновенностью личности, при освидетельствовании проходящих по делу лиц происходит отбор образцов лобковых волос (счесов либо срезов) с последующим назначением молекулярно-генетической экспертизы. Целью исследований является поиск чужеродного биологического материала на волосах жертвы или подозреваемого в преступлении. Молекуляр-но-генетическая экспертиза наложений биологического материала на лобковых волосах подозреваемого или жертвы в случае сексуальных преступлений имеет важное доказательное значение при расследовании. Анализ имеющихся биологических наложений (крови, спермы, слюны, клеток эпителия) на лобковых волосах позволяет успешно идентифицировать преступника.
ВОЛОСЫ-УЛИКИ. ПРАКТИЧЕСКИЕ
РЕШЕНИЯ ЗАДАЧИ_
А. Г. Смоляницкий, И. В. Карасева, А. И. Смоляницкая
ГКУЗ ЛО «Бюро судебно-медицинской экспертизы», г. Санкт-Петербург Доклад касается возможности генотипирования волос-улик, в том числе фрагментов волос без корневых концов. Волосы и фрагменты волос достаточно часто оказываются объектами судебно-медицинской экспертизы, однако отсутствие возможности провести полноценный генетический анализ ведет к утрате доказательной силы данных объектов. В статье приведены примеры экспертиз, в которых от положительного результата генотипирования фрагментов волос зависело наличие или отсутствие существенной доказательной базы в расследовании уголовных дел.
Ключевые слова: волосы-улики, анализ стержня волоса, ДНК-идентификация, STR-типирование, анализ митохондриальной ДНК При расследовании уголовных дел среди поступающих на судебно-медицинскую экспертизу вещественных доказательств достаточно распространены волосы-улики. Волосы могут быть представлены как самостоятельная улика (например, пучок вырванных волос из руки жертвы) либо быть обнаруженными на различных пред-
метах - вещественных доказательствах в результате действий следствия или экспертных поисков. На первом этапе экспертиза волос ставит своей задачей доказательство принадлежности волос человеку и установление их региональной природы.
Вопрос идентификации волос, то есть установления их происхождения от определенного лица, морфологическим исследованием не решается. Такая задача ставится перед молекулярно-генетической экспертизой. Эта экспертиза не является простой, так как даже вырванный волос может не содержать достаточного количества яд-росодержащих клеток, которые необходимы для мультиплексного STR-анализа. Еще меньше шансов предоставляют выпавшие и срезанные волосы. В процессе развития волоса происходит кератинизация эпителиальных клеток и в стержне волоса ядерная ДНК подвергается активной деструкции. Однако в редких случаях процесс деструкции может замедляться, оставляя в стержне волоса достаточное для анализа количество ядерной ДНК. Предполагается, что это связано с экспрессией ДНКазы 1L2, но механизм понижения ее активности не ясен.
Наличие в стержне волоса остатков ядерной ДНК делает перспективными попытки типировать расположенные на хромосомах маркеры. Показано, что для оценки целесообразности типирования стержня волоса может применяться окраска флуоресцентными красителями, такими как Hoechst 33258 или DAPI. Окрашенные ядра в этом случае могут быть визуализированы, количество их оценено и принято решение о рациональности STR-анализа. Если получение профиля ядерных локусов в стержне волоса остается достаточно непростой задачей, то определение митотипа может быть более успешным. Благодаря копийности митохондрий митохондри-альной ДНК в стержне волоса остается достаточно для проведения ее анализа. И хотя особенности наследования митохондриальной ДНК не обеспечивают индивидуализацию на уровне ядерных локусов, выявленный митотип несет весомую информацию и доказательную силу.
Экспертиза № 1 назначена по факту наезда легкового автомобиля на пешехода, двигавшегося по пешеходному переходу. После совершения наезда автомашина покинула место происшествия. Пострадавший мужчина скончался в больнице. В тот же день был обнаружен автомобиль, с ветрозащитного козырька которого изъят пучок фрагментов волос. На экспертизу поступили 30 фрагментов волос с головы человека, отделенные предметом с острым краем, длиной до 1,5 см. Требовалось установить принадлежность данных волос пострадавшему мужчине. Фрагменты волос отмывались в деионизованной воде и 95о-м этиловом спирте, были объединены по 10 штук в пробирку (объекты № № 1, 2, 3). Фрагменты лизировали в течение 18 часов при 56 °C с протеиназой К (к/к 0,3 мкг/мкл) и 0,039 М дитиотреитолом. Далее проводили депротеини-зацию (фенол: фенол/хлороформ: хлороформ) и концентрировали ДНК изопропиловым спиртом в присутствии ацетата натрия. Количественная оценка и качественный анализ полученных препаратов ДНК проводились методом полимеразной цепной реакции с применением наборов реагентов «Quantifiler Human DNA Quantification Kit» производства Applied Biosystems, США. Концентрация препаратов составила 0,06 нг/мкл, 0,03 нг/мкл и 0,02 нг/мкл. Все три объекта генотипированы по комплексу STR-систем, получен полный профиль каждого из объектов исследования. Сравнительный анализ генотипа фрагментов волос с генотипом потерпевшего мужчины выявил их идентичность. В результате проведения экспертизы фрагментов волос получены доказательства участия
автомобиля в данном дорожно-транспортном происшествии.
В экспертизе № 2 также необходимо было идентифицировать единичные волосы из салона автомобиля. Водитель автомобиля обвиняется в совершении столкновения с двумя мотоциклами со смертельным исходом для обоих водителей мотоциклов. По версии находившейся в автомобиле женщины Л., за рулем автомобиля был незнакомый ей мужчина, покинувший место происшествия. Для уточнения местонахождения в автомобиле гражданки Л. следствием представлены на исследование шесть волос с подголовника переднего пассажирского сидения автомашины. Все волосы длиной от 2,0 до 2,7 см имели ороговевшие колбовидные луковицы без влагалищных оболочек. Генетическому анализу были подвергнуты 3 волоса. Концентрация аутосомной ДНК составила от 0,003 до 0,006 нг/мкл. Попытка установить 8ТЯ-профиль не привела к положительному результату. Для анализа гипервариабельных последовательностей митохондриальной ДНК применяли набор реагентов М1ТОРЬБХ производства ООО «Гордиз», РФ. Для трех волос установлены одинаковые митотипы, отличающиеся от митотипа гражданки Л.
ВЫВОДЫ
Таким образом, исходя из собственного опыта работы и ряда литературных данных может быть предложен алгоритм работы с волосами-уликами.
• По возможности проводить 8ТК.-анализ волос-улик, в том числе не имеющих корневого конца, а только стержневую часть. Оценка шансов установить 8ТК.-профиль может быть осуществлена измерением концентрации хромосомной ДНК с помощью ПЦР в реальном времени и использованием технологии флуоресцентной окраски волоса для визуализации ядросодержащих клеток.
• Наиболее перспективным подходом для анализа волос-улик является установление статуса митохондриаль-ной ДНК - митотипа. Необходимо учитывать особенности матрилинейного наследования митохондриального генома.
ЦЕЛЕСООБРАЗНОСТЬ ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК
ИЗ БОЛЬШОГО ОБЪЕМА МАТЕРИАЛА.
СЛУЧАИ ИЗ ПРАКТИКИ_
А. А. Ермолаева
ГБУЗ ТО «Областное бюро судебно-медицинской экспертизы», Тюмень Доклад освещает различные подходы к выделению ДНК из большого объема материала, такого как тампоны и смывы, на примерах из судебно-медицинской экспертной практики.
Ключевые слова: выделение ДНК, большой объем материала, половые преступления В настоящее время молекулярно-генетическое исследование стало одним из важнейших методов судебно-медицинской экспертизы. Так, только в Тюменском областном бюро его доля в период с 2014 до 2019 год выросла в 2 раза. Широкое внедрение генетического метода исследования позволяет сокращать сроки расследования преступлений, повышать их раскрываемость и избегать следственных ошибок.
Между тем ряд вопросов, возникающих в практике судебно-медицинского эксперта, нуждается в обсуждении. Одним из них является вопрос о количестве материала, который следует взять на исследование. В случае, когда эксперту предоставлено предельно малое количество материала, эта проблема не актуальна, так как однозначно возникает необходимость полного уничтожения объекта
