CC BY
8
© Коллектив авторов, 2023
Владимиров И.С., Жданова А.С., Болашова Е.С., Мухин В.Е., Макаров В.В., Юдин В.С., Краевой С.А.
Динамика и функциональная характеристика антител и В-клеток памяти к 8АК8-СоУ-2 в периферической крови у перенесших СОУГО-19 пациентов за период до 16 месяцев
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Центр стратегического планирования и управления медико-биологическими рисками здоровью» Федерального медико-биологического агентства, 119121, г. Москва, Российская Федерация
Резюме
Введение. Эффективность гуморального иммунного ответа имеет решающее значение для элиминации патогена при респираторных вирусных инфекциях. Гуморальный иммунный ответ на инфицирование организма 8АЯ8-СоУ-2 обеспечивается вовлечением в иммунный процесс В-клеток, что приводит к выработке специфических антител. Однако к настоящему времени все еще недостаточно данных о напряженности гуморального иммунного ответа к вирусу 8АЯ8-СоУ-2 спустя год и более после перенесенной инфекции.
Цель - изучить динамику лабораторных показателей постинфекционного гуморального иммунитета к 8АЯ8-СоУ-2 в течение 16 мес от момента появления симптомов.
Материал и методы. В исследование было включено 15 здоровых добровольцев и 87 пациентов, перенесших СОУГО-19. Переболевшие участники были разделены на 3 обследуемые группы в зависимости от времени, прошедшего с момента появления первых симптомов до момента взятия образцов крови для исследования (от 14 до 500 сут). Для всех образцов было выполнено определение уровня специфических антител к 81-, 82-, КВБ-, М-белкам 8АЯ8-СоУ-2, вирус-нейтрализующей активности и авидности антител, индекса антитело-зависимого клеточного фагоцитоза, а также доли 8- и ИВБ-специфических В-клеток памяти.
Результаты. Показано, что уровень антител к 81-белку и ИВБ-фрагменту незначительно снижается в течение первого года после инфекции, а затем выходит на плато. Уровень антител к М-белку снижается после полугода от проявления симптомов. Показатели авидности антител и антитело-зависимого клеточного фагоцитоза постепенно повышаются в течение всего наблюдаемого периода, в то время как нейтрализующая активность изучаемых сывороток снижается. Также было обнаружено снижение нейтрализующей активности антител для Дельта-варианта 8АЯ8-СоУ-2 в сравнении с диким типом. Доля В-клеток памяти в периферической крови постепенно нарастает с первых дней инфекции, достигает пика примерно к 200 сут для 8-специфических и к 300 сут для ИВБ-специфических клеток, а затем постепенно снижается.
Заключение. Уровень антител в периферической циркуляции и их функциональность являются маркерами эффективности гуморального иммунного ответа на инфекцию 8АЯ8-СоУ-2. Мы показали, что даже через 500 сут от появления симптомов у более чем 2/3 переболевших уровень нейтрализующих антител к 81-белку остается выше протек-тивного порога для варианта Ухань 8АЯ8-СоУ-2. Однако появление вирусных вариантов со сниженной чувствительностью к нейтрализации заставляет осторожно подходить к оценке протективной способности антител.
Ключевые слова: СОУГО-19; гуморальный иммунитет; В-клетки; антитела; вирус-нейтрализация
Статья получена 29.06.2023. Принята в печать 29.08.2023.
Для цитирования: Владимиров И.С., Жданова А.С., Болашова Е.С., Мухин В.Е., Макаров В.В., Юдин В.С., Краевой С.А. Динамика и функциональная характеристика антител и В-клеток памяти к 8АЯ8-СоУ-2 в периферической крови у перенесших СОУГО-19 пациентов за период до 16 месяцев. Иммунология. 2023; 44 (6): 788-801. БО1: Шр§:/АМ.о^/10.33029/0206-4952-2023-44-6-788-801
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Вклад авторов. Все авторы внесли равнозначный вклад в исследование и подготовку статьи к публикации.
Для корреспонденции
Владимиров Иван Сергеевич -аналитик 2-й категории отдела медицинской геномики ФГБУ ЦСП ФМБА России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1435-665X
Vladimirov I.S., Zhdanova A.S., Bolashova E.S., Mukhin V.E., Makarov V.V., Yudin V.S., Kraevoy S.A.
Dynamics and functional characteristics of antibodies and memory B cells to SARS-CoV-2 in peripheral blood from COVID-19 patients for up to 16 months
Centre for Strategic Planning and Management of Biomedical Health Risks of the Federal Medical-Biological Agency, 119121, Moscow, Russian Federation
Abstract
Introduction. The efficiency of the humoral immune response is crucial for pathogen elimination in respiratory viral infections. The humoral response to SARS-CoV-2 infection is achieved by the involvement of B cells in the immune process, leading to the production of specific antibodies. However, there are still insufficient data on the strength of the humoral immune response to SARS-CoV-2 in more than a year after the infection.
Aim - to study the dynamics of post-infection laboratory humoral immunity to SARS-CoV-2 over 16 months after symptoms onset.
Material and methods. 15 healthy volunteers and 87 COVID-19 patients were included in the study. The affected participants were divided into 3 study groups according to the time elapsed from the onset of symptoms to the collection of blood samples for the study (from 14 to 500 days). Specific antibody levels to S1-, S2-, RBD-, N-protein of SARS-CoV-2, virus neutralizing activity and avidity of antibodies, the activity of antibody-dependent phagocytosis and the proportion of S- and RBD-specific memory B cells were determined for all samples.
Results. Antibody levels to S1- and RBD-peptides have been shown to decrease slightly during the first year after infection and then to plateau. Level of N-protein antibodies decreased after six months of symptom onset. The antibody avidity index and antibody-dependent cell phagocytosis gradually increased throughout the observed period, while the neutralizing activity of the sera decreased. A decrease in the neutralizing activity of antibodies for SARS-CoV-2 Delta variant compared to the wild type was also found. The proportion of memory B-cells in peripheral blood gradually increased from the first days of infection, peaked by about 200 days for S-specific cells and by 300 days for RBD-specific cells, and then gradually decreased.
Conclusion. The antibody levels in the peripheral blood and their functionality are markers of the efficacy of the humoral immune response to SARS-CoV-2 infection. We have shown that even after 500 days after symptoms onset more than 2/3 of those who had been infected remained above the protective threshold for neutralizing antibodies to the S1-protein of Wuhan variant of SARS-CoV-2. However, the emergence of viral variants with decreased sensitivity to neutralization makes it necessary to carefully assess the protective capacity of the antibodies.
Keywords: COVID-19; humoral immunity; B cells; antibodies; virus-neutralization
Received 29.06.2023. Accepted 29.08.2023.
For citation: Vladimirov I.S., Zhdanova A.S., Bolashova E.S., Mukhin V.E., Makarov V.V., Yudin VS., Kraevoy S.A. Dynamics and functional characteristics of antibodies and memory B-cells to SARS-CoV-2 in peripheral blood from COVID-19 patients for up to 16 months. Immunologiya. 2023; 44 (6): 788-801. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2023-44-6-788-801 (in Russian)
Funding. The study had no sponsor support.
Conflict of interests. The authors declare no conflict of interests.
For correspondence
Ivan S. Vladimirov -The 2nd Category Analyst of Medical Genetics Dept., CSP of FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1435-665X
Authors' contribution. All authors contributed equally to the research and the preparation of the article for publication.
Введение
Более трех лет прошло с момента возникновения острой респираторной инфекции, вызванной новым коронавирусом SARS-CoV-2 и быстро распространившейся по всему миру [1-3]. По состоянию на сегодняшний день вследствие многочисленных мутаций и
возникновения различных вариантов вируса характер течения СОУШ-19 заметно изменился. Например, было обнаружено, что риск госпитализации при инфицировании Омикрон-вариантом на 15-80 % ниже, чем при инфицировании Дельта-вариантом, вследствие чего последняя волна заболеваний, вызванных
Омикрон-вариантом, характеризуется значительно меньшим числом госпитализаций и смертей, чем предыдущие волны [4]. Тем не менее для многих пациентов из группы риска (имеющих в анамнезе ожирение, сахарный диабет, сердечно-сосудистые заболевания и заболевания легких) COVID-19 по-прежнему ассоциирован с повышенной вероятностью госпитализации и развития серьезных осложнений [5].
Гуморальный иммунный ответ на инфицирование организма SARS-CoV-2 обеспечивается вовлечением в иммунный процесс В-клеток, что приводит к выработке специфических антител против основных антигенных детерминант вируса [6]. Эти антитела играют существенную роль в защите организма, даже если их уровня недостаточно для полной нейтрализации вируса [7]. Антитела участвуют в защите от вирусных заболеваний посредством различных механизмов, опосредованных их Fab- и Fc-участками. Fab-опосре-дованные механизмы включают вирус-нейтрализацию, при которой проникновение вируса в клетку блокируется благодаря стерическим эффектам. Fc-опосредо-ванные механизмы включают активацию комплемента, антитело-зависимую клеточную цитотоксичность (АЗКЦ) и антитело-зависимый клеточный фагоцитоз (АЗКФ) [8].
Среди наиболее иммуногенных белков SARS-CoV-2 выделяют белки шипа (S, Spike) и нуклеокапсида (N, Nucleocapsid), которые чаще всего используются в качестве антигенов в клинических серологических тестах. Белок шипа состоит из двух субъединиц: N-кон-цевая Sl-субъединица содержит рецептор-связывающий домен (RBD), который взаимодействует с рецептором -ангиотензин-превращающим ферментом II (ACE-2) на клетках нижних дыхательных путей. Это взаимодействие определяет конформационное изменение в С-концевой S2-субъединице S-белка, которое опосредует слияние мембран вируса и клетки-хозяина. Белок S, особенно его субъединица S1, обладает высокой иммуногенностью [9]. Белок N, обильно экспрессиру-емый во время инфекции, участвует в транскрипции и репликации РНК, а также в упаковке инкапсидирован-ного генома в вирионы [10]. Однако в экспериментах N-специфические сыворотки не смогли проявить достаточную нейтрализующую активность [11, 12]. Напротив, RBD-специфические нейтрализующие антитела демонстрируют хорошую протективную способность против SARS-CoV-2 [13-16].
К настоящему моменту опубликованы некоторые результаты исследований напряженности и длительности иммунного ответа на SARS-CoV-2 [17-20]. Было показано, что после острой инфекции наблюдается снижение титров нейтрализующих антител в фазе выздоровления в течение 3-8 мес после заражения [21-24]. Результаты исследований демонстрируют, что за первоначальным резким снижением титров антител после естественного заражения следует относительно стабильная поддерживающая фаза, продолжающаяся до 12 мес [24, 25]. Это плато, предположительно, связано
с образованием долгоживущих плазматических клеток, локализованных в костном мозге [26]. Однако к настоящему времени все еще недостаточно данных о напряженности гуморального иммунного ответа к вирусу SARS-CoV-2 спустя год и более после перенесенной инфекции.
Цель данной работы - изучение динамики лабораторных показателей постинфекционного гуморального иммунитета к SARS-CoV-2 в течение 16 мес.
Материал и методы
Участники исследования. Исследование было проведено в соответствии с этическими принципами Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения медицинских исследований с участием человека в качестве субъекта» от 1964 г. с последующими изменениями и дополнениями. Протокол исследования был одобрен Этическим комитетом ФГБУ «ЦСП» ФМБА России. Все участники подписали добровольное информированное согласие на участие в данном исследовании. Забор образцов крови проводился с 20 марта по 30 августа 2021 г.
Критерии включения: в исследование были включены индивидуумы старше 18 лет, не прошедшие вакцинацию, с подтвержденным методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) COVID-19 в анамнезе и не перенесшие повторной инфекции SARS-CoV-2.
Критерии исключения: наличие любого онкологического заболевания в течение 1 года до включения в исследование, наличие в анамнезе системных аутоиммунных заболеваний, первичных иммунодефицитов, ВИЧ-инфекции, гепатитов В и С, сифилиса, беременности и периода кормления грудью.
Получение мононуклеарных клеток периферической крови. Образцы периферической крови человека были получены посредством процедуры венепункции с использованием коммерческих систем BD Vacutainer (Beckton Dickinson, США) с K3EDTA в качестве антикоагулянта. Мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) выделяли методом центрифугирования в градиенте плотности с помощью раствора фиколла плотностью 1077 г/л (ПанЭко, Россия) при 450 g 20 мин. Полученные МКПК дважды отмывали в 10 мл фосфатно-солевого буфера (ФСБ) и криоконсервиро-вали в клеточной среде RPMI-1640 (ПанЭко, Россия) с добавлением 20 % фетальной бычьей сыворотки (Capricorn Scientific, Германия) и 10 % диметилсульфоксида (Sigma-Aldrich, США). Хранили в парах жидкого азота при температуре -178 °C. Для проведения экспериментальных работ клетки размораживали на водяной бане при 37 °C и отмывали от криоконсервирующей среды в 10 мл RPMI-1640.
Получение образцов сыворотки крови. Образцы сыворотки крови были получены посредством венепункции с использованием коммерческих систем BD Vacutainer (Beckton Dickinson, США) с активатором свертывания и разделительным гелем. После проце-
дуры забора крови пробирки центрифугировали при 1000 g 10 мин. Полученные образцы сыворотки али-квотировали и хранили при -80 °С до момента анализа.
Определение уровня антител к SARS-CoV-2 методом мультиплексного анализа. Для определения наличия антител IgG к антигенам SARS-CoV-2 в образцах сыворотки крови человека использовали набор реагентов SARS-CoV-2 Antigen Panel 1 IgG (Merck Millipore, Германия) и проточный флуориметр-анализатор FlexMap 3D (Luminex Corporation, США) в соответствии с инструкциями производителей.
Определение авидности антител к SARS-CoV-2. Для определения авидности антител методом иммуно-ферментного анализа (ИФА) использовали набор реагентов «SARS-CoV-2-ИФА-IgG-плюс» (ООО «Меди-палтех», Россия). Анализ проводили в соответствии с инструкцией производителя. Для определения индекса авидности антител IgG каждый образец сыворотки крови человека исследовали в дубликатах в двух параллельных лунках. При этом антитела, специфические к SARS-CoV-2, связывались с рекомбинантными антигенами на твердой фазе, образуя комплексы «антиген-антитело». После отмывки несвязавшихся антител в контрольные лунки (ФБ-лунки) вносили фосфатный буфер, а в исследуемые (ДР-лунки) - денатурирующий раствор (4М раствор мочевины), который вызывал диссоциацию комплексов антител с антигеном. Дальнейшие шаги были стандартными для методики ИФА и включали инкубацию образовавшихся комплексов с конъюгатом антител к IgG человека с пероксидазой, отмывку, добавление раствора субстрата пероксидазы с хромогеном и остановку реакции стоп-реагентом. После измерения оптической плотности в двухволновом режиме (450/620-700 нм) индекс авидности определяли по формуле:
ИА = (ОПДР /ОПФЬ ) • 100 %,
4 ДР-лунка ФЬ-лунка7
где ОПДР-лунка - ОП образца, обработанного денатурирующим раствором, ОПфБ-лунка - ОП образца в лунке с фосфатным буфером.
Антитело-зависимый клеточный фагоцитоз. Определение антитело-зависимой клеточной фагоцитарной активности проводилось методом проточной цитометрии. В качестве фагоцитирующих клеток использовалась клеточная линия THP-1, которая экс-прессирует множество Fc-рецепторов, включая ингиби-рующие, активирующие, а также рецепторы с высокой и низкой аффинностью [27]. В качестве субстрата для фагоцитоза использовались флуоресцентные нейтрави-диновые частицы FluoSpheres™ NeutrAvidin™-Labeled Microspheres, 1.0 цш, 580/605 (Invitrogen, США).
Флуоресцентные нейтравидиновые частицы инкубировали с биотинилированным рекомбинантным S-белком (вариант Ухань) в течение 12 ч при 4 °C. После отмывки от антител частицы инкубировали с предварительно инактивированными сыворотками в течение 2 ч на термошейкере при 37 °C. После этого отмытые
иммунные комплексы «нейтравидиновая сфера - антитело» переносили в культуру клеток THP-1 и инкубировали при 37 °C, 5 % CO2 в течение 12 ч. По окончании инкубации клетки отмывали и фиксировали в 4 % растворе формальдегида. Затем оценивали долю клеток, содержащих флуоресцентные частицы, а также медианное значение их флуоресценции (MFI) на проточном цитометре CytoFlex LX (Beckman Coulter, США). Расчет индекса антитело-зависимой фагоцитарной активности производился по формуле [28, 29]:
% фагоцитировавших клеток х
MFI фагоцитировавших клеток .
Индекс АЗКФ =—ф—иооо--
Суррогатная вирус-нейтрализация (sVNT). Для
определения суррогатной нейтрализующей активности антител использовали набор реагентов «SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test (sVNT) Kit» (ProteoGenix, Франция). В качестве твердой фазы использовали 96-луночные планшеты с адсорбированным рекомбинантным S-белком (варианты Ухань и Дельта). Анализ проводили в соответствии с инструкцией производителя.
Определение доли антиген-специфических B-кле-ток памяти. Анализ антиген-специфических B-клеток памяти осуществляли с помощью наборов реагентов SARS-CoV-2 Spike B Cell Analysis Kit и SARS-CoV-2 RBD B Cell Analysis Kit (Miltenyi Biotec, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. Данные наборы позволяют выявлять SARS-CoV-2-специфичес-кие B-клетки путем связывания SARS-CoV-2-специфи-ческих белков с соответствующим антиген-специфическим B-клеточным рецептором (BCR) на B-клетках, циркулирующих в периферической крови человека.
Для проведения теста исследуемые МКПК инкубировали в присутствии биотинилированных S-белка или RBD-фрагмента в течение 15 мин при 4 °C. Одновременно производили окрашивание моноклональными антителами к поверхностным маркерам для обнаружения B-клеток памяти. После инкубации и отмывки фосфатно-солевым буфером добавляли конъюгаты стрептавидина с флуоресцентными метками. Клетки инкубировали 10 мин при 4 °C и отмывали фосфатно-солевым буфером. Анализ выполняли на проточном цитометре CytoFlex LX (Beckman Coulter, США). Стратегия гейтирования представлена на рис. 1. В ходе анализа определяли долю антиген-специфических B-клеток памяти среди всех B-клеток в образце.
Статистическая обработка данных. Для оценки силы связи между признаками использовали коэффициент корреляции Пирсона, статистически значимым считалось p < 0,05. Степени корреляции были обозначены в соответствии со следующими критериями шкалы Чеддока: слабая/отсутствует - от 0 до 0,29; умеренная -от 0,3 до 0,49; заметная - от 0,5 до 0,69; высокая - от 0,7 до 0,89; сильная - от 0,9 до 1,0.
- 1000-
800-
[Ungated] CD45 PB450-A/SSC-A
Э
-1 AAA
[CD45+] FSC-A/SSC-A
э
1 nnn
[Лимфоциты] 7AAD PC5.5-A/SSC-A
600-
-A C-
400
200-
102
103
104
CD45 PB450-A
105
106
200
400 FSC-A
600 800
1000
-1000 0 10002000
105 106
7AAD PC5.5-A
[Жизнеспособные клетки] CD27 PC7-A/CD19 KO525-A
-1000 0
-2000 -1(
CD45 PB450-A
Strep APC-A
1000 2000 CD27 PC7-A
4
10
(х103)
Рис. 1. Стратегия гейтирования для определения антиген-специфических В-клеток памяти
На двумерной диаграмме CD45/боковое светорассеяние выделены CD45+-лейкоциты (А), среди них по прямому/боковому светорассеянию выделен регион лимфоцитов (Б). Из региона лимфоцитов с помощью 7-AAD (7-аминоактиномицина D, красителя для идентификации нежизнеспособных клеток) отобраны жизнеспособные клетки (В), среди которых выделены В-лимфоциты (Г). Антиген-специфические В-лимфоциты выделены как дважды позитивная популяция (Д). Она отображена на двумерной диаграмме (Е), где определен регион CD19+CD27+-В-клеток памяти.
Для оценки значимости полученных различий между группами использовался критерий Краскела-Уоллиса. Статистически значимым считалосьp < 0,05. Для статистических расчетов и построения диаграмм использовалось ПО GraphPad Prism 9.3.1 (Dotmatics, США).
Результаты
Клиническая характеристика групп
В исследование было включено 15 здоровых добровольцев (группа сравнения), не имеющих в анамнезе COVID-19, и 87 пациентов, перенесших COVID-19. Переболевшие участники были разделены на 3 исследуемые группы в зависимости от времени, прошедшего с момента появления первых симптомов до момента взятия образцов крови для исследования (сут после инфекции, СПИ): группа 1 (от 14 до 70 сут), группа 2 (от 121 до 285 сут), группа 3 (от 315 до 500 сут). Подробная характеристика групп представлена в табл. 1.
Оценка взаимосвязи различных факторов гуморального ответа на 8АЯ8-СоУ-2
Для оценки взаимосвязи между признаками были рассчитаны коэффициенты корреляции Пирсона и построена корреляционная матрица (рис. 2). Выявлена сильная степень взаимосвязи между уровнями анти-81-и анти-ЯВБ-антител (г = 0,95, p < 0,001, ДИ 0,92-0,97), высокая между уровнями анти-81- и анти-82-антител (г = 0,77, p < 0,001, ДИ 0,92-0,97) и уровнями анти-82-и анти-ЯВБ-антител (г = 0,81, p < 0,001, ДИ 0,71-0,88); зависимость между уровнями всех исследуемых анти-8-и анти-Ы-антител была менее выраженной, но заметной (рис. 3). Обнаружен высокий уровень корреляции между авидностью антител и временем с момента появления первых симптомов (г = 0,74, p < 0,001, ДИ 0,560,86). Также обнаружена заметная отрицательная корреляция между нейтрализующей активностью сывороток и авидностью антител. Индекс АЗКФ имел заметную корреляцию с уровнями анти-82- и анти-ЯВБ-антител.
Таблица 1. Характеристика исследуемых групп
Признак Группа сравнения(n = 15) Группа 1 (n = 20) Группа 2 (n = 32) Группа 3 (n = 35)
Возраст, Me [Q1-Q3] 53,0 [43,0-57,0] 53,5 [41,3-65,0] 55,5 [42,8-60,8] 38,0 [30,0-48,0]
Пол, муж, абс. (%) 8 (53 %) 7 (35 %) 12 (38 %) 14 (40 %)
СПИ, Me [Q1-Q3] - 20 [17,0-22,8] 208 [171,3-235,3] 403 [381,0-430,0]
СПИ - сутки после инфекции.
Ат-Sl Ат^2 Ат-RBD Ат-N sVNT (Ухань) sVNT (Дельта) Авидность АЗКФ В-кл-S В-кл-RBD СПИ
1,00 0,77 0,95 0,60 0,53 0,29 0,10 0,42 -0,15 0,10 -0,20
0,77 1,00 0,81 0,57 0.38 0,16 0,13 0,57 -0,13 0,05 -0,12
0,95 0,81 1,00 0,58 0,46 0,16 0,08 0,52 -0,17 0,03 -0,14
0,60 0,57 0,58 1,00 0,56 0,30 -0,42 0,34 -0,08 -0,14 -0,48
0,53 0,38 0,46 0,56 1,00 0,66 -0,54 0,10 0,05 0,03 -0,46
0,29 0,16 0,16 0,30 0,66 1,00 -0,64 -0,13 0,12 0,04 -0,46
0,10 0,13 0,08 -0,42 -0,54 -0,64 1,00 0,44 -0,29 0,13 0,74
0,42 0,57 0,52 0,34 0,10 -0,13 0,44 1,00 0,16 0,14 0,24
-0,15 -0,13 -0,17 -0,08 0,05 0,12 -0,29 0,16 1,00 0,01 -0,04
0,10 0,05 0,03 -0,14 0,03 0,04 0,13 0,14 0,01 1,00 0,19
-0,20 -0,12 -0,14 -0,44 -0,46 -0,46 0,74 0,24 -0,04 0,19 1,00
-S -S
тА- т-А
D N ь) а) ть Ф
B - н т ст К
RB т на ь со КЗ
-R А ха ел но АЗ
Ат- (У е(Д идн А
А NT T( Ави
О S eg с
S о
Сильная
Высокая
Заметная
Умеренная
Слабая/отсутствует
Умеренная отрицательная
Заметная отрицательная
Рис. 2. Корреляционная матрица и полученные коэффициенты корреляции Пирсона для исследуемых признаков. Цветовая кодировка отражает оценку полученных коэффициентов в соответствии со шкалой Чеддока
Ат-S1/S2/RBD/N - уровни антител к S1/S2/RBD/N-белкам соответственно; sVNT (Ухань/Дельта) - суррогатная вирус-нейтрализация для вариантов Ухань/Дельта соответственно; АЗКФ - антитело-зависимый клеточный фагоцитоз; В-кл-S/RBD - содержание антиген-специфических В-клеток памяти к S/RBD соответственно; СПИ - сутки после инфекции.
э
82 %
65 %
1000 т.
U 100 Г
10 п 1 0,1
°д д ? А о А о о» 4 Z------л~"#а~Оо-д—
о А о д 0
о □ екд а, п □ тЗп ^
69 %
°о о о о
да£ д
До______ уровень
для анти-S1-антител
э
1000!
100-
Нейтрализующий м
И 10^
-fe-
1-
0,1
****
I-1
** ns
б А
ns I-1
ns ns
i?
й
Ш
0 100 200 300 400
Сутки после инфекции
OS1 -Д-RBD -QS2 ЛТ-N
500
ns I-1
ns ns
S1 S2 RBD
Антигенная специфичность
N
□ Груненш □группа 1 □Группа 2 □Группа 3
Рис. 3. Зависимость уровней специфических антител от времени, прошедшего с момента появления симптомов Отображены все наблюдаемые события, построена регрессионная модель, обозначен нейтрализующий уровень анти-Б1-анти-тел и доля имеющих его участников в каждой из групп (А). Обнаружено статистически значимое снижение уровня анти-Б1-антител в группах 2 (р = 0,002) и 3 (р < 0,0001) относительно группы 1 (Б). КП - коэффициент позитивности.
ns
ns ns
Э
100
80-
I 60-
40-
20-
100 -80 -60 -40 -20 0
-©- Ухань
И Дельта
н
д
К -Д- Индекс
2 авидности
в
к
д
и
о
100 200 300 400 Сутки после инфекции
500
Э
3 2
у
100
80
60
40
20
Группа 1 Группа 2 Группа 3
3 2
у
100-,
80-
60-
40-
20-
100 1
80
н 60
д и
ав
ска 40
к 20 -
Группа 1 Группа 2 Группа 3
Ухань
Дельта
Ухань Дельта
Группа 1 Группа 2 Группа 3
0
0
0
кк-кк
кккк
0
0
Рис. 4. Результаты определения нейтрализующей активности сывороток и авидности антител с течением времени Построены регрессионные модели изменения нейтрализующей активности сывороток и индекса авидности (А). Авидность антител достоверно увеличивается (Б), а нейтрализующая способность достоверно снижается (В) в исследуемых группах с увеличением времени. Нейтрализующая активность сывороток в отношении Дельта-варианта SARS-CoV-2 достоверно ниже, чем для вируса дикого типа (Г).
Динамика изменения уровня антител к различным антигенам SARS-CoV-2
Динамика изменения уровня сывороточных ]£0 к 8АЯ8-СоУ-2 была оценена у 87 пациентов в течение 16 мес с момента появления первых симптомов заболевания. По результатам мультиплексного анализа была построена регрессионная модель изменения уровней антител к четырем различным эпитопам вируса 8АЯ8-СоУ-2 в сыворотке переболевших индивидуумов с течением времени. Результаты представлены на рис. 3. Было обнаружено, что с увеличением времени, прошедшего от манифестации заболевания, уровень специфических медленно снижается. Однако следует отметить, что это снижение достаточно неравномерно. Например, постепенное снижение уровня антител к 81-белку и ИВБ-фрагменту продолжалось примерно до 300 сут и затем выходило на плато, в то время как уровень антител к 82-белку практически не изменялся. Уровень антител к Ы-белку, напротив, прогрессивно снижался в течение всего срока наблюдения (рис. 3А). При сравнении уровней специфических антител к различным вирусным антигенам в трех временных точках (между исследуемыми группами) обнаружено статистически
значимое снижение уровня антител к 81-белку 8АЯ8-СоУ-2 в группах 2 ф = 0,002) и 3 ф < 0,0001) относительно группы 1 (рис. 3Б).
Мы оценивали доли участников с защитным уровнем анти-81-антител в каждой исследуемой группе. Уро-вень серопротективности был определен с помощью линейной регрессионной модели, разработанной ранее для данного набора реагентов [30]. Было обнаружено, что в группе 1 количество участников с достаточным для нейтрализации уровнем анти-81-антител составило 82 %, в группе 2 - 65 % и в группе 3 - 69 % (см. рис. 3 А).
Динамика изменения нейтрализующей способности и авидности антител к SARS-CoV-2
Изучено изменение нейтрализующей способности антител и их авидности с течением времени. Результаты представлены на рис. 4. Можно отметить, что нейтрализующая активность сывороток пациентов с течением времени снижается, в то время как авидность антител растет (рис. 4А). Сравнив нейтрализующую активность между исследуемыми группами, мы обнаружили статистически значимое снижение нейтрализующей активности сывороток: для дикого варианта 8АЯ8-СоУ-2 она снизилась в среднем на 29,7 % ^ < 0,0001) от
Рис. 5. Оценка антитело-зависимого клеточного фагоцитоза в группах переболевших СОУГО-19
Повышение антитело-зависимой фагоцитарной активности с увеличением времени с момента появления симптомов заболевания (А). Обнаружено достоверное повышение антителозависимой фагоцитарной активности между группами 1 и 3, а также между группами 2 и 3 (Б).
группы 1 к группе 3, а для Дельта-варианта - на 23,9 % (р < 0,0001) (рис. 4В). Также при сравнении исследуемых групп обнаружено достоверное (р = 0,0002) повышение авидности антител (рис. 4Б). Кроме того, изучена эффективность антител в нейтрализации 8АЯ8-СоУ-2 дикого типа в сравнении с Дельта-вариантом. Мы показали, что эффективность нейтрализации Дельта-варианта вируса достоверно ниже, чем дикого типа во всех исследуемых группах (рис. 4Г).
Динамика изменения антитело-зависимой фагоцитарной активности
В исследуемых группах была проведена оценка АЗКФ, результаты представлены на рис. 5. Можно заметить, что с увеличением времени после перенесенной
инфекции индекс АЗКФ увеличивается (рис. 5А). Проведя сравнение исследуемых групп между собой, мы обнаружили статистически достоверное увеличение индекса АЗКФ между группами 1 и 3 (р = 0,0001), а также между группами 2 и 3 (р = 0,01) (рис. 5Б).
Динамика изменения доли антиген-специфических В-клеток памяти к различным антигенным детерминантам 8АЯ8-СоУ-2
Была проведена оценка изменения доли антиген-специфических анти-8- и анти-RBD-В-клеток памяти в периферической крови. Результаты представлены на рис. 6. Мы обнаружили, что доля В-клеток памяти к 8АЯ8-СоУ-2 в периферической крови постепенно нарастает с первых недель инфекции, достигая пика
0,8-,
(U «
g m
я ^
Я к
^ в
в F
Ü В
1аЛ
н о § Н
СЗ о «
§ ч
0,0
OS RBD
о о
100
Сутки после инфекции
%
о
о ° о □
□ о о о
о п п пп 0° ° о о □ Q3 □ о о □ □О п°
и# u п Пп гП п u П о □ 8п —. сР
200 300 400 500
w и
* 2
0,6
а ил
в °
и ^
0,4
¥ 2 I Э 0,2
в из
то § н
та о
о
Ч
0,0
S-белок
i
I.
сл
э
0,3-
га и
и
5 0,2-
е
gm
я 5
я в еи
13 р ¥ ° в ü е
из
то
rt с «
ло
ч
0,1
0,0
RBD-фрагмент
ns
cX
1Л
<5- <5
Рис. 6. Определение динамики и доли антиген-специфических В-клеток памяти в группах переболевших СОУГО-19 Зависимость доли антиген-специфических анти-8- и анти-КБО-В-клеток памяти от времени, прошедшего с момента появления симптомов заболевания (А). Обнаружены статистически значимые различия в содержании В-клеток памяти, специфических к Б-белку (Б) и КБО-фрагменту (В) между группой сравнения и группами переболевших СОУЮ-19.
»As
ÄÄ
АтгкА
ns
ns
0
примерно к 200 сут для S-специфических и к 300 сут для RBD-специфических клеток, а затем постепенно снижается (рис. 6 А, Б).
Обсуждение
Гуморальный иммунный ответ и выработка антител имеют решающее значение для элиминации патогена, формирования иммунной памяти и предотвращения повторной инфекции. К настоящему времени имеющиеся данные о том, как долго сохраняются вирус-специфические антитела и какой уровень антител связан с иммунной защитой от COVID-19, недостаточно систематизированы. Более того, при сравнении результатов исследований следует проявлять осторожность, поскольку для оценки гуморального иммунитета используются различные лабораторные методы, основанные на определении как уровня антител к различным вирусным антигенам, так и их функциональных характеристик.
В данной работе мы провели оценку гуморального иммунного ответа у 87 переболевших SARS-CoV-2 пациентов в период от 14 до 500 сут после появления симптомов заболевания. С помощью корреляционного анализа мы охарактеризовали зависимость уровня и функциональной активности специфических антител от времени, прошедшего с момента заболевания, а также их взаимосвязь между собой. Полученные результаты демонстрируют, что уровни антител к различным вирусным антигенам в сыворотке крови снижаются с течением времени, однако динамика этого процесса зависит от их антигенной специфичности. Это согласуется с опубликованными ранее результатами [31, 32] и может быть связано с различиями в молекулярной структуре S- и N-белков и их содержании в вирусной частице. В большинстве исследуемых образцов мы не наблюдали снижения уровня антител ниже порога детекции.
Определение способности антител нейтрализовать заражение вирусом клеток-мишеней в условиях in vitro является «золотым стандартом» оценки протективных свойств сыворотки [33]. Однако использование этого теста на SARS-CoV-2 требует обеспечения условий работы с возбудителями II группы патогенности. В суррогатном тесте нейтрализации используются рекомбинантный S-белок вируса SARS-CoV-2 и конъю-гированный с пероксидазой хрена рецептор ACE-2, что позволяет выполнять данный анализ в исследовательских и клинических лабораториях. Мы показали, что со временем вследствие снижения уровня антител нейтрализующая способность сывороток ожидаемо снижается в отношении как дикого штамма (Ухань), так и Дельта-варианта SARS-CoV-2, что также было описано ранее
■ Литература
1. Zhou P., Yang X.L., Wang X.G., Hu B., Zhang L., Zhang W., Si H.R., Zhu Y., Li B., Huang C.L., Chen H.D., Chen J., Luo Y., Guo H., Jiang R.D., Liu M.Q., Chen Y., Shen X.R., Wang X., Zheng X.S., Zhao K., Chen Q.J., Deng F., Liu L.L., Yan B., Zhan F.X., Wang Y.Y., Xiao G.F., Shi Z.L. A pneumonia outbreak associated with a new Coronavirus of
[34, 35]. Авидность антител, напротив, значительно возрастает с течением времени, что объясняется известными процессами их адаптации к вирусным антигенам (аффинное созревание). Это также объясняет наблюдаемое увеличение антитело-зависимой клеточной фагоцитарной активности.
В отличие от плазматических клеток, секретиру-ющих антитела, В-клетки памяти являются долгожи-вущим клоном лимфоцитов и обеспечивают быстрый вторичный гуморальный ответ при повторном контакте с антигеном [36-38]. В нашем исследовании доля 8-специфических В-клеток памяти достигает пика к 200 сут от появления первых симптомов, и затем постепенно снижается к 500 сут до исходных значений, что не противоречит уже опубликованным данным [39-41].
Данная работа демонстрирует, что иммунная память в виде функционально активных антител и В-клеток памяти сохраняется до 500 сут после перенесенной инфекции. В то же время глобальное распространение варианта Омикрон показало, что факт наличия антител у индивидуумов, перенесших ранее СОУГО-19, вызванного другими вариантами вируса 8ЛЯ8-СоУ-2, снижает, но не исключает вероятность повторного развития заболевания. Более того, изучение нейтрализующей активности антител показало значительное снижение способности к нейтрализации варианта Омикрон 8ЛЯ8-СоУ-2 образцами сывороток, полученных от переболевших другими вариантами вируса (Бета и Дельта) [42-44]. Таким образом, в оценке рисков повторного заражения, эффективности вакцинации и мониторинге эпидемиологической ситуации в первую очередь следует ориентироваться не на уровень или факт наличия антител, а на их функциональную активность в отношении антигенов актуального штамма 8ЛЯ8-СоУ-2.
Заключение
Уровень антител в периферической циркуляции и их функциональность являются маркерами эффективности гуморального иммунного ответа на инфекцию 8ЛЯ8-СоУ-2. Мы показали, что даже через 500 сут от появления симптомов у более чем 2/3 переболевших образцы сывороток проявляют нейтрализующую активность в отношении 81-белка вируса 8ЛЯ8-СоУ-2 варианта Ухань. Однако появление новых вирусных вариантов заставляет осторожно подходить к оценке протективной способности антител, выработанных при ранее перенесенных заболеваниях или вакцинации препаратами на основе 8-белка вируса 8ЛЯ8-СоУ-2 варианта Ухань. Дальнейшее изучение гуморального иммунного ответа на 8ЛЯ8-СоУ-2 является важным в контексте возможных пандемий в будущем.
probable bat origin. Nature. 2020; 579 (7798): 270-3. DOI: https://doi. org/10.1038/s41586-020-2012-7
2. Wu F., Zhao S., Yu B., Chen Y.M., Wang W., Song Z.G., Hu Y., Tao Z.W., Tian J.H., Pei Y.Y., Yuan M.L., Zhang Y.L., Dai F.H., Liu Y., Wang Q.M., Zheng J.J., Xu L., Holmes E.C., Zhang Y.Z. A new corona-
virus associated with human respiratory disease in China. Nature. 2020; 579 (7798): 265-9. DOI: https://doi.org/10.1038/s41586-020-2008-3
3. Wang C., Horby P.W., Hayden F.G., Gao G.F. A novel Coronavirus outbreak of global health concern. Lancet. 2020; 395 (10223): 470-3. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)30185-9
4. Christie B. COVID-19: Early studies give hope omicron is milder than other variants. BMJ. 2021; 375: n3144. DOI: https://doi.org/10.1136/ bmj.n3144
5. O'Hearn M., Liu J., Cudhea F., Micha R., Mozaffarian D. Coronavirus disease 2019 hospitalizations attributable to cardiometabolic conditions in the United States: a comparative risk assessment analysis. J. Am. Heart Assoc. 2021; 10 (5): e019259. DOI: https://doi.org/10.1161/ JAHA.120.019259
6. Андреев И.В., Нечай К.О., Андреев А.И., Зубарева А.П., Есаулова Д.Р., Аленова А.М., Николаева И.А., Чернявская О.П., Ломоносов К.С., Шульженко А.Е., Курбачева О.М., Латышева Е.А., Шартанова Н.В., Назарова Е.В., Романова Л.В., Черченко Н.Г., Смирнов В.В., Аверков О.В., Мартынов А.И., Вечорко В.И., Гуди-ма Г.О., Кудлай Д.А., Хаитов М.Р., Хаитов Р.М. Поствакцинальный и постинфекционный гуморальный иммунный ответ на инфекцию SARS-CoV-2. Иммунология. 2022; 43 (1): 18-32. DOI: https://doi. org/10.33029/0206-4952-2022-43-1-18-32
7. Guo L., Ren L., Yang S., Xiao M., Chang D., Yang F., Dela Cruz C.S., Wang Y., Wu C., Xiao Y., Zhang L., Han L., Dang S., Xu Y., Yang Q.W., Xu S.Y., Zhu H.D., Xu Y.C., Jin Q., Sharma L., Wang L., Wang J. Profiling Early humoral response to diagnose novel coronavirus disease (COVID-19). Clin. Infect. Dis. 2020; 71 (15): 778-85. DOI: https://doi. org/10.1093/cid/ciaa310
8. Yaugel-Novoa M., Bourlet T., Paul S. Role of the humoral immune response during COVID-19: guilty or not guilty? Mucosal Immunology. 2022; 15 (6): 1170-80. DOI: https://doi.org/10.1038/s41385-022-00569-w
9. Woo P.C., Lau S.K., Wong B.H., Tsoi H.W., Fung A.M., Kao R.Y., Chan K.H., Peiris J.S., Yuen K.Y. Differential sensitivities of severe acute respiratory syndrome (SARS) coronavirus spike polypeptide enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and SARS coronavirus nucleo-capsid protein ELISA for serodiagnosis of SARS coronavirus pneumonia. J. Clin. Microbiol. 2005; 43 (7): 3054-8. DOI: https://doi.org/10.1128/ JCM.43.7.3054-3058.2005
10. Chang C.K., Sue S.C., Yu T.H., Hsieh C.M., Tsai C.K., Chiang Y.C., Lee S.J., Hsiao H.H., Wu W.J., Chang W.L., Lin C.H., Huang T.H. Modular organization of SARS coronavirus nucleocapsid protein. J. Biomed. Sci. 2006; 13 (1): 59-72. DOI: https://doi.org/10.1007/s11373-005-9035-9
11. Agnihothram S., Gopal R., Yount B.L. Jr., Donaldson E.F., Menachery V.D., Graham R.L., Scobey T.D., Gralinski L.E., Deni-son M.R., Zambon M., Baric R.S. Evaluation of serologic and antigenic relationships between middle eastern respiratory syndrome coronavirus and other coronaviruses to develop vaccine platforms for the rapid response to emerging coronaviruses. J. Infect. Dis. 2014; 209 (7): 995-1006. DOI: https://doi.org/10.1093/infdis/jit609
12. Zhao J., Zhao J., Mangalam A.K., Channappanavar R., Fett C., Meyerholz D.K., Agnihothram S., Baric R.S., David C.S., Perlman S. Airway memory CD4(+) T cells mediate protective immunity against emerging respiratory coronaviruses. Immunity. 2016; 44 (6): 1379-91. DOI: https://doi.org/10.1016/j.immuni.2016.05.006
13. Ju B., Zhang Q., Ge J., Wang R., Sun J., Ge X., Yu J., Shan S., Zhou B., Song S., Tang X., Yu J., Lan J., Yuan J., Wang H., Zhao J., Zhang S., Wang Y., Shi X., Liu L., Zhao J., Wang X., Zhang Z., Zhang L. Human neutralizing antibodies elicited by SARS-CoV-2 infection. Nature. 2020; 584 (7819): 115-9. DOI: https://doi.org/10.1038/s41586-020-2380-z
14. Piccoli L., Park Y.J., Tortorici M.A., Czudnochowski N., Walls A.C., Beltramello M., Silacci-Fregni C., Pinto D., Rosen L.E., Bo-wen J.E., Acton O.J., Jaconi S., Guarino B., Minola A., Zatta F., Sprugas-ci N., Bassi J., Peter A., De Marco A., Nix J.C., Mele F., Jovic S., Rodriguez B.F., Gupta S.V., Jin F., Piumatti G., Lo Presti G., Pellanda A.F., Biggiogero M., Tarkowski M., Pizzuto M.S., Cameroni E., Havenar-Daugh-ton C., Smithey M., Hong D., Lepori V., Albanese E., Ceschi A., Bernas-coni E., Elzi L., Ferrari P., Garzoni C., Riva A., Snell G., Sallusto F., Fink K., Virgin H.W., Lanzavecchia A., Corti D., Veesler D. Mapping neutralizing and immunodominant sites on the SARS-CoV-2 spike receptor-binding domain by structure-guided high-resolution serology. Cell. 2020; 183 (4): 1024-42.e21. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.09.037
15. Астахова Е.А., Бязрова М.Г., Миляев С.М., Сухова М.М., Михайлов А.А., Морозов А.А., Прилипов А.Г., Филатов А.В. Анализ
методом проточной цитометрии антител против шиповидного белка SARS-CoV-2 в сыворотке вакцинированных добровольцев. Иммунология. 2022; 43 (4): 447-57. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-4-447-457
16. Хаитов Р.М., Скворцова В.И., Хаитов М.Р. Биомедицинская безопасность: иммуногенетика и коронавирусная инфекция. 2022; Москва : ГЭОТАР-Медиа, 352 с. ISBN: 978-5-9704-7382-5.
17. To K.K., Tsang O.T., Leung W.S., Tam A.R., Wu T.C., Lung D.C., Yip C.C., Cai J.P., Chan J.M., Chik T.S., Lau D.P., Choi C.Y., Chen L.L., Chan W.M., Chan K.H., Ip J.D., Ng A.C., Poon R.W., Luo C.T., Cheng V.C., Chan J.F., Hung I.F., Chen Z., Chen H., Yuen K.Y. Temporal profiles of viral load in posterior oropharyngeal saliva samples and serum antibody responses during infection by SARS-CoV-2: an observational cohort study. Lancet Infect. Dis. 2020; 20(5): 565-74. DOI: https://doi. org/10.1016/S1473-3099(20)30196-1
18. Peiris J.S., Chu C.M., Cheng V.C., Chan K.S., Hung I.F., Poon L.L., Law K.I., Tang B.S., Hon T.Y., Chan C.S., Chan K.H., Ng J.S., Zheng B.J., Ng W.L., Lai R.W., Guan Y., Yuen K.Y. Clinical progression and viral load in a community outbreak of coronavirus-associated SARS pneumonia: a prospective study. Lancet. 2003; 361 (9371): 1767-72. DOI: https://doi.org/10.1016/s0140-6736(03)13412-5
19. Андреев А.И., Андреев И.В., Нечай К.О., Есаулова Д.Р., Баклакова О.С., Вечорко В.И., Шиловский И.П., Кофиади И.А., Гудима Г.О., Мартынов А.И., Смирнов В.В., Кудлай Д.А., Хаитов М.Р. Взаимосвязь между возрастом и напряженностью поствакцинального гуморального иммунного ответа у лиц, ранее переболевших COVID-19. Иммунология. 2022; 43 (5): 583-92. DOI: https://doi. org/10.33029/0206-4952-2022-43-5-583-592
20. Нечай К.О., Андреев А.И., Андреев И.В., Есаулова Д.Р., Баклакова О.С., Шадыжева М.Б., Романова Л.В., Гегечкори В.И., Черченко Н.Г., Вечорко В.И., Кофиади И.А., Гудима Г.О., Мартынов А.И., Смирнов В.В., Кудлай Д.А., Хаитов М.Р. Динамическая оценка напряженности иммунного ответа на SARS-CoV-2-инфекцию и иммунизацию против COVID-19 вакциной «Спутник V». Иммунология. 2023; 44 (2): 157-66. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2023-44-2-157-166
21. Röltgen K., Powell A.E., Wirz O.F., Stevens B.A., Hogan C.A., Najeeb J., Hunter M., Wang H., Sahoo M.K., Huang C., Yamamoto F., Manohar M., Manalac J., Otrelo-Cardoso A.R., Pham T.D., Rustagi A., Rogers A.J., Shah N.H., Blish C.A., Cochran J.R., Jardetzky T.S., Zehn-der J.L., Wang T.T., Narasimhan B., Gombar S., Tibshirani R., Na-deau K.C., Kim P.S., Pinsky B.A., Boyd S.D. Defining the features and duration of antibody responses to SARS-CoV-2 infection associated with disease severity and outcome. Sci. Immunol. 2020; 5 (54): eabe0240. DOI: https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abe0240
22. Sakharkar M., Rappazzo C.G., Wieland-Alter W.F., Hsieh C.L., Wrapp D., Esterman E.S. et al. Prolonged evolution of the human B cell response to SARS-CoV-2 infection. Science immunology. 2021; 6 (56): eabg6916. DOI: https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abg69
23. Seow J., Graham C., Merrick B., Acors S., Pickering S., Steel K.J.A., Hemmings O., O'Byrne A., Kouphou N., Galao R.P., Betan-cor G., Wilson H.D., Signell A.W., Winstone H., Kerridge C., Huet-tner I., Jimenez-Guardeño J.M., Lista M.J., Temperton N., Snell L.B., Bisnauthsing K., Moore A., Green A., Martinez L., Stokes B., Honey J., Izquierdo-Barras A., Arbane G., Patel A., Tan M.K.I., O'Connell L., O'Hara G., MacMahon E., Douthwaite S., Nebbia G., Batra R., Martinez-Nunez R., Shankar-Hari M., Edgeworth J.D., Neil S.J.D., Malim M.H., Doores K.J. Longitudinal observation and decline of neutralizing antibody responses in the three months following SARS-CoV-2 infection in humans. Nat. Microbiol. 2020; 5 (12): 1598-607. DOI: https://doi.org/10.1038/ s41564-020-00813-8
24. Закурская В.Я., Сизякина Л.П., Харитонова М.В., Шлык С.В. Динамика специфического гуморального ответа у пациентов, перенесших COVID-19. Иммунология. 2022; 43 (1): 71-7. DOI: https://doi. org/10.33029/0206-4952-2022-43-1-71-77
25. Petersen M.S., Hansen C.B., Kristiansen M.F., Fjallsbak J.P., Larsen S., Hansen J.L., Jarlhelt I., Pérez-Alós L., Steig B.Á., Christiansen D.H., Möller L.F., Stram M., Andorsdóttir G., Gaini S., Weihe P., Garred P. SARS-CoV-2 natural antibody response persists for at least 12 months in a nationwide study from the Faroe Islands. Open Forum Infect Dis. 2021; 8 (8): ofab378. DOI: https://doi.org/10.1093/ofid/ofab378
26. Turner J.S., Kim W., Kalaidina E., Goss C.W., Rauseo A.M., Schmitz A.J. et al. SARS-CoV-2 infection induces long-lived bone marrow
plasma cells in humans. Nature. 2021; 595 (7867): 421-5. DOI: https://doi. org/10.1038/s41586-021-03647-4
27. Forrester M.A., Wassall H.J., Hall L.S., Cao H., Wilson H.M., Barker R.N., Vickers M.A. Similarities and differences in surface receptor expression by THP-1 monocytes and differentiated macrophages polarized using seven different conditioning regimens. Cell Immunol. 2018; 332: 58-76. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cellimm.2018.07.008
28. Ackerman M.E., Moldt B., Wyatt R.T., Dugast A.S., McAnd-rew E., Tsoukas S., Jost S., Berger C.T., Sciaranghella G., Liu Q., Irvine D.J., Burton D.R., Alter G. A robust, high-throughput assay to determine the phagocytic activity of clinical antibody samples. J. Immunol Methods. 2011; 366 (1-2): 8-19. DOI: https://doi.org/10.1016/j. jim.20https://doi.org/10.12.016
29. Darrah P. A., Patel D.T., De Luca P.M., Lindsay R.W., Davey D.F., Flynn B.J., Hoff S.T., Andersen P., Reed S.G., Morris S.L., Roederer M., Seder R.A. Multifunctional TH1 cells define a correlate of vaccine-mediated protection against Leishmania major. Nat. Med. 2007; 13 (7): 843-50. DOI: https://doi.org/10.1038/nm1592
30. Фролова Л.В., Земский П.Ю., Митрофанов С.И., Мухин В.Е., Шпакова Т.А., Казакова П.Г., Ахмерова Ю.Н., Буланова Н.В., Голуб-никова Л. А., Грамматикати К.С., Жданова А.С., Мкртчян А. А., Сергеев А.П., Снигирь Е.А., Фелиз Н.В., Макаров В.В., Юдин В.С., Кескинов А.А., Краевой С.А., Юдин С.М., Скворцова В.И. Методика оценки уровня IgG-антител к различным белкам SARS-CoV-2 с помощью мультиплексного иммунофлуоресцентного анализа. Иммунология. 2023; 44 (1): 109-19. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2023-44-1-109-119
31. Alfego D., Sullivan A., Poirier B., Williams J., Adcock D., Letovsky S. A population-based analysis of the longevity of SARS-CoV-2 antibody seropositivity in the United States. EClinicalMedicine. 2021; 36: 100902. DOI: https://doi.org/10.1016/j.eclinm.2021.100902
32. Rosati M., Terpos E., Ntanasis-Stathopoulos I., Agarwal M., Bear J., Burns R., Hu X., Korompoki E., Donohue D., Venzon D.J., Dimo-poulos M.A., Pavlakis G.N., Felber B.K. sequential analysis of binding and neutralizing antibody in COVID-19 convalescent patients at 14 months after SARS-CoV-2 infection. Front. Immunol. 2021; 12: 793953. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2021.793953
33. Pieri M., Infantino M., Manfredi M., Nuccetelli M., Grossi V., Lari B., Tomassetti F., Sarubbi S., Russo E., Amedei A., Benucci M., Cas-prini P., Stacchini L., Castilletti C., Bernardini S. Performance evaluation of four surrogate Virus Neutralization Tests (sVNTs) in comparison to the in vivo gold standard test. Front. Biosci. (Landmark Ed). 2022; 27 (2): 74. DOI: https://doi.org/10.31083/j.fbl2702074
34. Planas D., Veyer D., Baidaliuk A., Staropoli I., Guivel-Benhas-sine F., Rajah M.M., Planchais C., Porrot F., Robillard N., Puech J., Prot M., Gallais F., Gantner P., Velay A., Le Guen J., Kassis-Chikhani N., Edriss D., Belec L., Seve A., Courtellemont L., Pere H., Hocqueloux L., Fafi-Kremer S., Prazuck T., Mouquet H., Bruel T., Simon-Loriere E., Rey F.A., Schwartz O. Reduced sensitivity of SARS-CoV-2 variant Delta to antibody neutralization. Nature. 2021; 596 (7871): 276-80. DOI: https:// doi.org/10.1038/s41586-021-03777-9
35. Rosati M., Terpos E., Agarwal M., Karalis V., Bear J., Burns R., Hu X., Papademetriou D., Ntanasis-Stathopoulos I., Trougakos I.P., Dimo-poulos M.A., Pavlakis G.N., Felber B.K. Distinct neutralization profile of spike variants by antibodies induced upon SARS-CoV-2 infection or vaccination. Am. J. Hematol. 2022; 97 (1): E3-E7. DOI: https://doi. org/10.1002/ajh.26380
36. Seifert M., Küppers R. Human memory B cells. Leukemia. 2016; 30 (12): 2283-92. DOI: https://doi.org/10.1038/leu.2016.226
37. Byazrova M.G., Kulemzin S.V., Astakhova E.A., Belovezhets T.N., Efimov G.A., Chikaev A.N., Kolotygin I.O., Gorchakov A.A., Taranin A.V., Filatov A.V. Memory B cells induced by Sputnik V vaccination produce SARS-CoV-2 neutralizing antibodies upon ex vivo restimulation. Front. Immunol. 2022; 13: 840707. DOI: https://doi.org/10.3389/ fimmu.2022.840707
38. Astakhova E.A., Byazrova M.G., Yusubalieva G.M., Kulemzin S.V., Kruglova N.A., Prilipov A.G., Baklaushev V.P., Gorchakov A.A., Tara-nin A.V., Filatov A.V. Functional profiling of in vitro reactivated memory B cells following natural SARS-CoV-2 infection and Gam-COVID-Vac vaccination. Cells. 2022; 11 (13): 1991. DOI: https:// doi.org/10.3390/cells11131991
39. Hartley G.E., Edwards E.S.J., Aui P.M., Varese N., Stojanovic S., McMahon J., Peleg A.Y., Boo I., Drummer H.E., Hogarth P.M., O'Hehir R.E., van Zelm M.C. Rapid generation of durable B cell memory to SARS-CoV-2 spike and nucleocapsid proteins in COVID-19 and convalescence. Sci. Immunol. 2020; 5 (54): eabf8891. DOI: https://doi. org/10.1126/sciimmunol.abf8891
40. Rodda L.B., Netland J., Shehata L., Pruner K.B., Morawski P.A., Thouvenel C.D., Takehara K.K., Eggenberger J., Hemann E.A., Waterman H.R., Fahning M.L., Chen Y., Hale M., Rathe J., Stokes C., Wrenn S., Fiala B., Carter L., Hamerman J.A., King N.P., Gale M. Jr., Campbell D.J., Rawlings D.J., Pepper M. Functional SARS-CoV-2-specific immune memory persists after mild COVID-19. Cell. 2021; 184 (1): 169-83.e17. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.11.029
41. Gaebler C., Wang Z., Lorenzi J.C.C., Muecksch F., Finkin S., Tokuyama M., Cho A., Jankovic M., Schaefer-Babajew D., Oliveira T.Y., Cipolla M., Viant C., Barnes C.O., Bram Y., Breton G., Hägglöf T., Mendoza P., Hurley A., Turroja M., Gordon K., Millard K.G., Ramos V., Schmidt F., Weisblum Y., Jha D., Tankelevich M., Martinez-Delgado G., Yee J., Patel R., Dizon J., Unson-O'Brien C., Shimeliovich I., Robbia-ni D.F., Zhao Z., Gazumyan A., Schwartz R.E., Hatziioannou T., Bjork-man P.J., Mehandru S., Bieniasz P.D., Caskey M., Nussenzweig M.C. Evolution of antibody immunity to SARS-CoV-2. Nature. 2021; 591 (7851): 639-44. DOI: https://doi.org/10.1038/s41586-021-03207-w
42. Planas D., Saunders N., Maes P., Guivel-Benhassine F., Planchais C., Buchrieser J., Bolland W.H., Porrot F., Staropoli I., Lemoine F., Péré H., Veyer D., Puech J., Rodary J., Baele G., Dellicour S., Raymena-nts J., Gorissen S., Geenen C., Vanmechelen B., Wawina-Bokalanga T., Martí-Carreras J., Cuypers L., Sève A., Hocqueloux L., Prazuck T., Rey F.A., Simon-Loriere E., Bruel T., Mouquet H., André E., Schwartz O. Considerable escape of SARS-CoV-2 Omicron to antibody neutralization. Nature. 2022; 602 (7898): 671-5. DOI: https://doi.org/10.1038/s41586-021-04389-z
43. Cao Y., Wang J., Jian F., Xiao T., Song W., Yisimayi A., Huang W., Li Q., Wang P., An R., Wang J., Wang Y., Niu X., Yang S., Liang H., Sun H., Li T., Yu Y., Cui Q., Liu S., Yang X., Du S., Zhang Z., Hao X., Shao F., Jin R., Wang X., Xiao J., Wang Y., Xie X.S. Omicron escapes the majority of existing SARS-CoV-2 neutralizing antibodies. Nature. 2022; 602 (7898): 657-63. DOI: https://doi.org/10.1038/s41586-021-04385-3
44. Byazrova M., Yusubalieva G., Spiridonova A., Efimov G., Mazurov D., Baranov K., Baklaushev V., Filatov A. Pattern of circulating SARS-CoV-2-specific antibody-secreting and memory B cell generation in patients with acute COVID-19. Clin. Transl. Immunology. 2021; 10 (2): e1245. DOI: https://doi.org/10.1002/cti2.1245
■ References
1. Zhou P., Yang X.L., Wang X.G., Hu B., Zhang L., Zhang W., Si H.R., Zhu Y., Li B., Huang C.L., Chen H.D., Chen J., Luo Y., Guo H., Jiang R.D., Liu M.Q., Chen Y., Shen X.R., Wang X., Zheng X.S., Zhao K., Chen Q.J., Deng F., Liu L.L., Yan B., Zhan F.X., Wang Y.Y., Xiao G.F., Shi Z.L. A pneumonia outbreak associated with a new coronavirus of probable bat origin. Nature. 2020; 579 (7798): 270-3. DOI: https://doi. org/10.1038/s41586-020-2012-7
2. Wu F., Zhao S., Yu B. , Chen Y.M., Wang W., Song Z.G., Hu Y., Tao Z.W., Tian J.H., Pei Y.Y., Yuan M.L., Zhang Y.L., Dai F.H., Liu Y., Wang Q.M., Zheng J.J., Xu L., Holmes E.C., Zhang Y.Z. A new corona-virus associated with human respiratory disease in China. Nature. 2020; 579 (7798): 265-9. DOI: https://doi.org/10.1038/s41586-020-2008-3
3. Wang C., Horby P.W., Hayden F.G., Gao G.F. A novel coronavirus outbreak of global health concern. Lancet. 2020; 395 (10223): 470-3. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)30185-9
4. Christie B. Covid-19: Early studies give hope omicron is milder than other variants. BMJ. 2021; 375: n3144. DOI: https://doi.org/10.1136/ bmj.n3144.
5. O'Hearn M., Liu J., Cudhea F., Micha R., Mozaffarian D. Coronavirus disease 2019 hospitalizations attributable to cardiometabolic conditions in the United States: a comparative risk assessment analysis. J Am Heart Assoc. 2021; 10 (5): e019259. DOI: https://doi.org/10.1161/JAHA.120.019259
6. Andreev I.V., Nechay K.O., Andreev A.I., Zubaryova A.P., Esau-lova D.R., Alenova A.M., Nikolaeva I.A., Chernyavskaya O.P., Lomono-
sov K.S., Shulzhenko A.E., Kurbacheva O.M., Latysheva E.A., Sharta-nova N.V., Nazarova E.V., Romanova L.V., Cherchenko N.G., Smir-nov V.V., Averkov O.V., Martynov A.I., Vechorko V.I., Gudima G.O., Kudlay D.A., Khaitov M.R., Khaitov R.M. Post-vaccination and postinfection humoral immune response to the SARS-CoV-2 infection. Immu-nologiya. 2022; 43 (1): 18-32. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-1-18-32 (in Russian)
7. Guo L., Ren L., Yang S., Xiao M., Chang D., Yang F., Dela Cruz C.S., Wang Y., Wu C., Xiao Y., Zhang L., Han L., Dang S., Xu Y., Yang Q.W., Xu S.Y., Zhu H.D., Xu Y.C., Jin Q., Sharma L., Wang L., Wang J. Profiling early humoral response to diagnose novel coronavirus disease (COVID-19). Clin Infect Dis. 2020; 71 (15): 778-85. DOI: https:// doi.org/10.1093/cid/ciaa3https://doi.org/10
8. Yaugel-Novoa M., Bourlet T., Paul S. Role of the humoral immune response during COVID-19: guilty or not guilty? Mucosal Immunology. 2022; 15 (6): 1170-80. DOI: https://doi.org/10.1038/s41385-022-00569-w
9. Woo P.C., Lau S.K., Wong B.H., Tsoi H.W., Fung A.M., Kao R.Y., Chan K.H., Peiris J.S., Yuen K.Y. Differential sensitivities of severe acute respiratory syndrome (SARS) coronavirus spike polypeptide enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and SARS coronavirus nucleo-capsid protein ELISA for serodiagnosis of SARS coronavirus pneumonia. J Clin Microbiol. 2005; 43 (7): 3054-8. DOI: https://doi.org/10.1128/ JCM.43.7.3054-3058.2005
10. Chang C.K., Sue S.C., Yu T.H., Hsieh C.M., Tsai C.K., Chiang Y.C., Lee S.J., Hsiao H.H., Wu W.J., Chang W.L., Lin C.H., Huang T.H. Modular organization of SARS coronavirus nucleocapsid protein. J Biomed Sci. 2006; 13 (1): 59-72. DOI: https://doi.org/10.1007/s11373-005-9035-9
11. Agnihothram S., Gopal R., Yount B.L. Jr., Donaldson E.F., Menachery V.D., Graham R.L., Scobey T.D., Gralinski L.E., Deni-son M.R., Zambon M., Baric R.S. Evaluation of serologic and antigenic relationships between middle eastern respiratory syndrome corona-virus and other coronaviruses to develop vaccine platforms for the rapid response to emerging coronaviruses. J Infect Dis. 2014; 209 (7): 995-1006. DOI: https://doi.org/10.1093/infdis/jit609
12. Zhao J., Zhao J., Mangalam A.K., Channappanavar R., Fett C., Meyerholz D.K., Agnihothram S., Baric R.S., David C.S., Perlman S. Airway Memory CD4(+) T Cells Mediate protective immunity against emerging respiratory coronaviruses. Immunity. 2016; 44 (6): 1379-91. DOI: https://doi.org/10.1016/j.immuni.2016.05.006
13. Ju B., Zhang Q., Ge J., Wang R., Sun J., Ge X., Yu J., Shan S., Zhou B., Song S., Tang X., Yu J., Lan J., Yuan J., Wang H., Zhao J., Zhang S., Wang Y., Shi X., Liu L., Zhao J., Wang X., Zhang Z., Zhang L. Human neutralizing antibodies elicited by SARS-CoV-2 infection. Nature. 2020; 584 (7819): 115-9. DOI: https://doi.org/10.1038/s41586-020-2380-z
14. Piccoli L., Park Y.J., Tortorici M.A., Czudnochowski N., Walls A.C., Beltramello M., Silacci-Fregni C., Pinto D., Rosen L.E., Bo-wen J.E., Acton O.J., Jaconi S., Guarino B., Minola A., Zatta F., Sprugas-ci N., Bassi J., Peter A., De Marco A., Nix J.C., Mele F., Jovic S., Rodriguez B.F., Gupta S.V., Jin F., Piumatti G., Lo Presti G., Pellanda A.F., Biggiogero M., Tarkowski M., Pizzuto M.S., Cameroni E., Havenar-Daugh-ton C., Smithey M., Hong D., Lepori V., Albanese E., Ceschi A., Bernas-coni E., Elzi L., Ferrari P., Garzoni C., Riva A., Snell G., Sallusto F., Fink K., Virgin H.W., Lanzavecchia A., Corti D., Veesler D. Mapping neutralizing and immunodominant sites on the SARS-CoV-2 spike receptor-binding domain by structure-guided high-resolution serology. Cell. 2020; 183 (4): 1024-42.e21. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.09.037
15. Astakhova E.A., Byazrova M.G., Milyaev S.M., Sukhova M.M., Mikhailov A.A., Morozov A.A., Prilipov A.G., Filatov A.V. Flow cyto-metric assay for the detection of anti-SARS-CoV-2 Spike antibodies in serum of vaccinated volunteers. Immunologiya. 2022; 43 (4): 447-57. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-4- 447-457 (in Russian)
16. Khaitov R.M., Skvortsova V.I., Khaitov M.R. Biomedical safety: immunogenetics and coronavirus infection. 2022; Moscow: GEOTAR-Media, 352 p. ISBN: 978-5-9704-7382-5. (in Russian)
17. To K.K., Tsang O.T., Leung W.S., Tam A.R., Wu T.C., Lung D.C., Yip C.C., Cai J.P., Chan J.M., Chik T.S., Lau D.P., Choi C.Y., Chen L.L., Chan W.M., Chan K.H., Ip J.D., Ng A.C., Poon R.W., Luo C.T., Cheng V.C., Chan J.F., Hung I.F., Chen Z., Chen H., Yuen K.Y. Temporal profiles of viral load in posterior oropharyngeal saliva samples and serum antibody responses during infection by SARS-CoV-2: an observational cohort study. Lancet Infect Dis. 2020; 20 (5): 565-74. DOI: https://doi. org/10.1016/S1473-3099(20)30196-1
18. Peiris J.S., Chu C.M., Cheng V.C., Chan K.S., Hung I.F., Poon L.L., Law K.I., Tang B.S., Hon T.Y., Chan C.S., Chan K.H., Ng J.S., Zheng B.J., Ng W.L., Lai R.W., Guan Y., Yuen K.Y. Clinical progression and viral load in a community outbreak of coronavirus-associated SARS pneumonia: a prospective study. Lancet. 2003; 361 (9371): 1767-72. DOI: https://doi.org/10.1016/s0140-6736(03)13412-5
19. Andreev A.I., Andreev I.V., Nechay K.O., Esaulova D.R., Bakla-kova O.S., Vechorko V.I., Shilovskiy I.P., Kofiadi I.A, Gudima G.O., Martynov A.I., Smirnov V.V., Kudlay D.A., Khaitov M.R. Correlation between age and the intensity of the post-vaccination humoral immune response in individuals passed COVID-19. Immunologiya. 2022; 43 (5): 583-92. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-5-583-592 (in Russian)
20. Nechay K.O., Andreev A.I., Andreev I.V., Esaulova D.R., Bakla-kova O.S., Shadyzheva M.B., Romanova L.V., Gegechkori V.I., Cherchenko N.G., Vechorko V.I., Kofiadi I.A., Gudima G.O., Martynov A.I., Smirnov V.V., Kudlay D.A., Khaitov M.R. Dynamic assessment of the intensity of the immune response to SARS-CoV-2 infection and immunization against COVID-19 with the vaccine «Sputnik V». Immunologiya. 2023; 44 (2): 157-66. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2023-44-2-157-166 (in Russian)
21. Röltgen K., Powell A.E., Wirz O.F., Stevens B., Hogan C.A., Najeeb J., Hunter M., Wang H., Sahoo M.K., Huang C., Yamamoto F., Manohar M., Manalac J., Otrelo-Cardoso A.R., Pham T.D., Rustagi A., Rogers A.J., Shah N.H., Blish C.A., Cochran J.R., Jardetzky T.S., Zeh-nder J.L., Wang T.T., Narasimhan B., Gombar S., Tibshirani R., Na-deau K.C., Kim P.S., Pinsky B.A., Boyd S.D. Defining the features and duration of antibody responses to SARS-CoV-2 infection associated with disease severity and outcome. Sci. Immunol. 2020; 5 (54): eabe0240. DOI: https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abe0240
22. Sakharkar M., Rappazzo C.G., Wieland-Alter W.F., Hsieh C.L., Wrapp D., Esterman E.S., et al. Prolonged evolution of the human B cell response to SARS-CoV-2 infection. Science immunology. 2021; 6 (56): eabg6916. DOI: https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abg69
23. Seow J., Graham C., Merrick B., Acors S., Pickering S., Steel K.J.A., Hemmings O., O'Byrne A., Kouphou N., Galao R.P., Betan-cor G., Wilson H.D., Signell A.W., Winstone H., Kerridge C., Huet-tner I., Jimenez-Guardeno J.M., Lista M.J., Temperton N., Snell L.B., Bisnauthsing K., Moore A., Green A., Martinez L., Stokes B., Honey J., Izquierdo-Barras A., Arbane G., Patel A., Tan M.K.I., O'Connell L., O'Hara G., MacMahon E., Douthwaite S., Nebbia G., Batra R., Martinez-Nunez R., Shankar-Hari M., Edgeworth J.D., Neil S.J.D., Malim M.H., Doores K.J. Longitudinal observation and decline of neutralizing antibody responses in the three months following SARS-CoV-2 infection in humans. Nat Microbiol. 2020; 5 (12): 1598-607. DOI: https://doi.org/10.1038/ s41564-020-00813-8
24. Zakurskaya V.Ya., Sizyakina L.P., Kharitonova M.V., Shlyk S.V. Dynamics of specific humoral response in COVID-19 patients. Immunologiya. 2022; 43 (1): 71-7. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-1-71-77 (in Russian)
25. Petersen M.S., Hansen C.B., Kristiansen M.F., Fjallsbak J.P., Larsen S., Hansen J.L., Jarlhelt I., Perez-Alos L., Steig B.A., Christiansen D.H., Möller L.F., Stram M., Andorsdottir G., Gaini S., Weihe P., Garred P. SARS-CoV-2 natural antibody response persists for at least 12 months in a nationwide study from the Faroe Islands. Open Forum Infect Dis. 2021; 8 (8): ofab378. DOI: https://doi.org/10.1093/ofid/ofab378
26. Turner J. S., Kim, W., Kalaidina E., Goss C.W., Rauseo A.M., Schmitz A.J., et al. SARS-CoV-2 infection induces long-lived bone marrow plasma cells in humans. Nature. 2021; 595 (7867): 421-5. DOI: https://doi. org/10.1038/s41586-021-03647-4
27. Forrester M.A., Wassall H.J., Hall L.S., Cao H., Wilson H.M., Barker R.N., Vickers M.A. Similarities and differences in surface receptor expression by THP-1 monocytes and differentiated macrophages polarized using seven different conditioning regimens. Cell Immunol. 2018; 332: 58-76. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cellimm.2018.07.008
28. Ackerman M.E., Moldt B., Wyatt R.T., Dugast A.S., McAnd-rew E., Tsoukas S., Jost S., Berger C.T., Sciaranghella G., Liu Q., Irvine D.J., Burton D.R., Alter G. A robust, high-throughput assay to determine the phagocytic activity of clinical antibody samples. J Immunol Methods. 2011; 366 (1-2): 8-19. DOI: https://doi.org/10.1016/j. jim.2010.12.016
29. Darrah P.A., Patel D.T., De Luca P.M., Lindsay R.W., Davey D.F., Flynn B.J., Hoff S.T., Andersen P., Reed S.G., Morris S.L., Roederer M.,
Seder R.A. Multifunctional TH1 cells define a correlate of vaccine-mediated protection against Leishmania major. Nat Med. 2007; 13 (7): 843-50. DOI: https://doi.org/10.1038/nm1592
30. Frolova L.V., Zemsky P.U., Mitrofanov S.I., Mukhin V.E., Shpa-kova T.A., Kazakova P.G., Akhmerova Yu.N., Bulanova N.V., Golubniko-va L.A., Grammatikati K.S., Zhdanova A.S., Mkrtchian A.A., Sergeev A.P., Snigir E.A., Feliz N.V., Makarov V.V., Yudin V.S., Keskinov A.A., Krae-voy S.A., Yudin S.M., Skvortsova V.I. Methodology for evaluation of the level of IgG antibodies against different SARS-CoV-2 proteins using multiplex immunofl uorescence analysis. Immunologiya. 2023; 44 (1): 109-19. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2023-44-1-109-119 (in Russian)
31. Alfego D., Sullivan A., Poirier B., Williams J., Adcock D., Letovsky S. A population-based analysis of the longevity of SARS-CoV-2 antibody seropositivity in the United States. EClinicalMedicine. 2021; 36: 100902. DOI: https://doi.org/10.1016/j.eclinm.2021.100902
32. Rosati M., Terpos E., Ntanasis-Stathopoulos I., Agarwal M., Bear J., Burns R., Hu X., Korompoki E., Donohue D., Venzon D.J., Dimo-poulos M.A., Pavlakis G.N., Felber B.K. Sequential analysis of binding and neutralizing antibody in COVID-19 convalescent patients at 14 months after SARS-CoV-2 infection. Front Immunol. 2021; 12: 793953. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2021.793953
33. Pieri M., Infantino M., Manfredi M., Nuccetelli M., Grossi V., Lari B., Tomassetti F., Sarubbi S., Russo E., Amedei A., Benucci M., Casp-rini P., Stacchini L., Castilletti C., Bernardini S. Performance evaluation of four surrogate Virus Neutralization Tests (sVNTs) in comparison to the in vivo gold standard test. Front Biosci (Landmark Ed). 2022; 27 (2): 74. DOI: https://doi.org/10.31083/j.fbl2702074
34. Planas D., Veyer D., Baidaliuk A., Staropoli I., Guivel-Benhas-sine F., Rajah M.M., Planchais C., Porrot F., Robillard N., Puech J., Prot M., Gallais F., Gantner P., Velay A., Le Guen J., Kassis-Chikhani N., Edriss D., Belec L., Seve A., Courtellemont L., Péré H., Hocqueloux L., Fafi-Kremer S., Prazuck T., Mouquet H., Bruel T., Simon-Lorière E., Rey F. A., Schwartz O. Reduced sensitivity of SARS-CoV-2 variant Delta to antibody neutralization. Nature. 2021; 596 (7871): 276-80. DOI: https:// doi.org/10.1038/s41586-021-03777-9
35. Rosati M., Terpos E., Agarwal M., Karalis V., Bear J., Burns R., Hu X., Papademetriou D., Ntanasis-Stathopoulos I., Trougakos I.P., Dimo-poulos M.A., Pavlakis G.N., Felber B.K. Distinct neutralization profile of spike variants by antibodies induced upon SARS-CoV-2 infection or vaccination. Am J Hematol. 2022; 97 (1): E3-E7. DOI: https://doi. org/10.1002/ajh.26380
36. Seifert M., Küppers R. Human memory B cells. Leukemia. 2016; 30 (12): 2283-92. DOI: https://doi.org/10.1038/leu.2016.226
37. Byazrova M.G., Kulemzin S.V., Astakhova E.A., Belove-zhets T.N., Efimov G.A., Chikaev A.N., Kolotygin I.O., Gorchakov A.A., Taranin A.V., Filatov A.V. Memory B cells induced by Sputnik V vaccination produce SARS-CoV-2 neutralizing antibodies upon ex vivo restimulation. Front Immunol. 2022; 13: 840707. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2022.840707
Сведения об авторах
Владимиров Иван Сергеевич - аналитик 2-й категории отд. медицинской геномики ФГБУ ЦСП ФМБА России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1435-665X
Жданова Анастасия Сергеевна - аналитик 2-й категории отд. анализа и прогнозирования медико-биологических рисков здоровью ФГБУ ЦСП ФМБА России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-8613-1738
Болашова Екатерина Сергеевна - аналитик отд. медицинской геномики ФГБУ ЦСП ФМБА России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0009-0001-3820-2105
38. Astakhova E.A., Byazrova M.G., Yusubalieva G.M., Kulem-zin S.V., Kruglova N.A., Prilipov A.G., Baklaushev V.P., Gorcha-kov A.A., Taranin A.V., Filatov A.V. Functional profiling of in vitro reactivated memory B cells following natural SARS-CoV-2 infection and Gam-COVID-Vac vaccination. Cells. 2022; 11 (13): 1991. DOI: https:// doi.org/10.3390/cells11131991
39. Hartley G.E., Edwards E.S.J., Aui P.M., Varese N., Stojano-vic S., McMahon J., Peleg A.Y., Boo I., Drummer H.E., Hogarth P.M., O'He-hir R.E., van Zelm M.C. Rapid generation of durable B cell memory to SARS-CoV-2 spike and nucleocapsid proteins in COVID-19 and convalescence. Sci Immunol. 2020; 5 (54): eabf8891. DOI: https://doi.org/10.1126/ sciimmunol.abf8891
40. Rodda L.B., Netland J., Shehata L., Pruner K.B., Morawski P.A., Thouvenel C.D., Takehara K.K., Eggenberger J., Hemann E.A., Waterman H.R., Fahning M.L., Chen Y., Hale M., Rathe J., Stokes C., Wrenn S., Fiala B., Carter L., Hamerman J.A., King N.P., Gale M. Jr., Campbell D.J., Rawlings D.J., Pepper M. Functional SARS-CoV-2-Specific Immune Memory Persists after Mild COVID-19. Cell. 2021; 184 (1): 169-83.e17. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.11.029
41. Gaebler C., Wang Z., Lorenzi J.C.C., Muecksch F., Finkin S., Tokuyama M., Cho A., Jankovic M., Schaefer-Babajew D., Olivei-ra T.Y., Cipolla M., Viant C., Barnes C.O., Bram Y., Breton G., Häg-glöf T., Mendoza P., Hurley A., Turroja M., Gordon K., Millard K.G., Ramos V., Schmidt F., Weisblum Y., Jha D., Tankelevich M., Martinez-Delgado G., Yee J., Patel R., Dizon J., Unson-O'Brien C., Shimeliovich I., Robbia-ni D.F., Zhao Z., Gazumyan A., Schwartz R.E., Hatziioannou T., Bjork-man P.J., Mehandru S., Bieniasz P.D., Caskey M., Nussenzweig M.C. Evolution of antibody immunity to SARS-CoV-2. Nature. 2021; 591 (7851): 639-44. DOI: https://doi.org/10.1038/s41586-021-03207-w
42. Planas D., Saunders N., Maes P., Guivel-Benhassine F., Planchais C., Buchrieser J., Bolland W.H., Porrot F., Staropoli I., Lemoine F., Péré H., Veyer D., Puech J., Rodary J., Baele G., Dellicour S., Rayme-nants J., Gorissen S., Geenen C., Vanmechelen B., Wawina-Bokalanga T., Martí-Carreras J., Cuypers L., Sève A., Hocqueloux L., Prazuck T., Rey F. A., Simon-Loriere E., Bruel T., Mouquet H., André E., Schwartz O. Considerable escape of SARS-CoV-2 Omicron to antibody neutralization. Nature. 2022; 602 (7898): 671-5. DOI: https://doi.org/10.1038/s41586-021-04389-z
43. Cao Y., Wang J., Jian F., Xiao T., Song W., Yisimayi A., Huang W., Li Q., Wang P., An R., Wang J., Wang Y., Niu X., Yang S., Liang H., Sun H., Li T., Yu Y., Cui Q., Liu S., Yang X., Du S., Zhang Z., Hao X., Shao F., Jin R., Wang X., Xiao J., Wang Y., Xie X.S. Omicron escapes the majority of existing SARS-CoV-2 neutralizing antibodies. Nature. 2022; 602 (7898): 657-63. DOI: https://doi.org/10.1038/s41586-021-04385-3
44. Byazrova M., Yusubalieva G., Spiridonova A., Efimov G., Mazurov D., Baranov K., Baklaushev V., Filatov A. Pattern of circulating SARS-CoV-2-specific antibody-secreting and memory B-cell generation in patients with acute COVID-19. Clin Transl Immunology. 2021; 10 (2): e1245. DOI: https://doi.org/10.1002/cti2.1245
Authors' information
Ivan S. Vladimirov - the 2nd Category Analyst, Medical Genomics Dept., CSP of FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1435-665X
Anastasia S. Zhdanova - the 2nd Category Analyst, Dept. of Analysis and Forecasting of Biomedical Health Risks, CSP of FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-8613-1738
Ekaterina S. Bolashova - Analyst, Medical Genomics Dept., CSP of FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0009-0001-3820-2105
Мухин Владимир Евгеньевич - канд. мед. наук, зам. начальника отд. анализа и прогнозирования медико-биологических рисков здоровью ФГБУ ЦСП ФМБА России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-8973-7890
Макаров Валентин Владимирович - канд. биол. наук, начальник отд. анализа и прогнозирования медико-биологических рисков здоровью ФГБУ ЦСП ФМБА России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-9495-0266
Юдин Владимир Сергеевич - канд. биол. наук, начальник отд. медицинской геномики ФГБУ ЦСП ФМБА России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-9199-6258
Краевой Сергей Александрович - д-р мед. наук, первый зам. генерального директора ФГБУ ЦСП ФМБА России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1775-9235
Vladimir E. Mukhin - PhD, Deputy Head of the Dept. of Analysis and Forecasting of Biomedical Health Risks, CSP of FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-8973-7890
Valentin V. Makarov - PhD, Head of the Dept. of Analysis and Forecasting of Biomedical Health Risks, CSP of FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-9495-0266
Vladimir S. Yudin - PhD, Head of the Medical Genomics Dept., CSP of FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-9199-6258
Sergey A. Kraevoy - MD, 1st Deputy General Director, CSP of FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1775-9235
