CC BY
395. Lyuk, E. Preservatives in the food industry. Properties and application / per. s nem.; E Lyuk, M. Yager, SPb.: GIORD, 1998. - 256 p.
6. Microbiological spoilage of food / K. V. Blekberna. - SPb.: Professiya, 2008. - 784 p.
7. Olefirova, A.P. Organoleptic evaluation of food: a study guide / A.P. Olefirova. - Ulan-Ude: Izd-voVSGTU, 2005,- 192 p.
8. On the state of sanitary and epidemiological well-being of the population in the Russian Federation in 2016: State Report. - M.: Federal Service for Supervision of Consumer Rights Protection and Human Weil-Being, 2017. - 220 p.
9. Polyakova, I.V. Study of the effectiveness of cold sterilization of fish preserves by electronic radiation depending on dosimetric parameters of radiation / I.V. Polyakova, V.O. Kobyalko, V.Ya. Sarukhanov et al. // Radiation and Risk. - 2017. - № 2. - P. 97-106.
10. Priputnevich, T.V. Using MALDI-TOF methods of mass spectrometry and quantitative PCR for rapid diagnosis of septic conditions / T.V. Priputnevich, A.R. Melkumyan, O.V. Burmenskaya et al. // Clinical Microbiology and Antimicrobial Chemotherapy. - 2014. - Vol. 16. - № 1. - P. 4-9.
11. Radiation technologies in agriculture and food industry / pod obsch. red. G.V. Kozmina, S.A. Geraskina, N.I. Sanzharovoy. - M., Obninsk: Informpoligraf, 2015. - 400 p.
12. Jos, H.J. Microbial and biochemical spoilage of foods: an overview / H.J. Jos, Huis int Veld // International Journal of Food Microbiology. - 1996. - Vol. 33 - P. 1-18.
13. Kume, T. Status of food irradiation in the world / T. Kume, M. Furuta, S. Todorikis et al. // Radiation Physics and Chemistry. - 2009. - Vol. 73. - P. 222-226.
14. Piper, P.W. Yeast superoxide dismutase mutants reveal a pro-oxidant action of weak organic acid food preservatives / P. W. Piper // Free Radic. Biol. Med. - 1999. - Vol. 27 - P. 1219-1227.
УДК 619:616.981.42:576.807.7 DOI 10.33632/1998-698X.2019-5-23-28
ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ПРИВИТОГО ВАКЦИНОЙ ИЗ ШТАММА 82, И ЕЕ ЗНАЧЕНИЕ В ОБЩЕЙ СИСТЕМЕ МЕР БОРЬБЫ С ДАННЫМ ЗАБОЛЕВАНИЕМ
Косарев М.А. - кандидат биологических наук, Фомин A.M. - доктор ветеринарных наук, профессор, Сафина Г.М. - кандидат ветеринарных наук, Григорьева С.А. - младший научный сотрудник, Тухватуллина Л.А. - младший научный сотрудник
ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (420075, г. Казань Научный городок - 2, e-mail: vnivi @ mail, ru)
В изучении бруцеллезной инфекции в Российской Федерации достигнуты значительные успехи. Оздоровлены от этого зооантропоноза ряд регионов, однако, несмотря на имеющиеся достижения, бруцеллез до сих пор наносит большой экономический ущерб животноводству. В настоящее время широко применяют вакцину из слабоагглютиногенного штамма В. abortus 82. Однако до настоящего времени не решена проблема дифференциации больных бруцеллезом от вакцинированных животных. Учитывая важность и актуальность данной проблемы, продолжаются исследования по изысканию методов проведения дифференциации больных бруцеллезом крупного рогатого скота от вакцинированных. Для решения поставленной задачи получали антигены из различных штаммов бруцеллВ. abortus 19 и 99 (S-форма), 82(^Я-форма) и R-1096 (R-форма) и изучали их динамику антителообразования в РА и РСКу животных, привитых различными вакцинами,и исследовали иммунопатогенез у животных. Результаты изучения иммуногенеза, привитых вакциной из штамма 82, и патогенеза при заражении вакцинированного поголовья, а также итоги исследований больных бруцеллезом животных в стадах крупного рогатого скотапротив бруцеллеза, сформулировали принципы дифференциациипривитого и непривитого скота с использованием набора препаратов ФЦТРБ-ВНИВИ. Применение набора
позволяло установить истинную эпизоотическую ситуацию по бруцеллезу в том или ином хозяйстве и в необходимых случаях начинать ранние дифференциально-диагностические исследования спустя 1,5 месяца после применения вакцины из штамма 82, что способствовало своевременному удалению больных животных и ускорению оздоровления стада.
Ключевые слова: бруцеллез, крупный рогатый скот, слабоагглютиногенная вакцина, дифференциальная серологическая диагностика, набор препаратов
Для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота в настоящее время широко применяют сухую живую вакцину из слабоагглютиногеиного штамма 82. Основным преимуществом данного биопрепарата перед вакциной из штамма 19 является ее слабая агглютиногенность при достаточно выраженных иммуногенных свойствах.
Об этом свидетельствуют сообщения и других исследователей [1,4], которые также установили слабые антигенные свойства вакцины из штамма 82, выраженность которой имела прямую зависимость от возраста прививаемых животных. Синтез агглютининов и комплемент связывающих веществ, по их данным, после ревакцинации прекращается у телок к 2-м месяцам, а у коров - к 3-м. Синтез Я-антител к Я-антигснам был значительно активнее.
Авторы отмечают также, что применение вакцины из штамма 82 облегчило поствакцинальную диагностику бруцеллеза, но не решило проблемы дифференциации больных бруцеллезом от вакцинированных животных. У некоторых особей в отдаленные сроки появляются поствакцинальные антитела в диагностических титрах, особенно в РСК.
Поэтому необходимо изыскать дополнительные методы объективной оценки эпизоотического состояния стад, в которых постоянно выявляются положительно реагирующие животные. Кроме того, исследователи подчеркивают, что в отдаленные сроки после прививки (1-2 года) антитела выявлялись лишь у животных в неблагополучных стадах. Вопрос отличия поствакцинальных реакций от постинфекционных стал одной из трудноразрешимых проблем [2, 3, 5, 6]. Учитывая важность и актуальность данной проблемы, в ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» продолжаются исследования по изысканию методов дифференциации больно-гобруцеллезом крупного рогатого скота от привитого вакциной из штамма 82.
Материал и методы. Для решения поставленной задачи получали бруцеллезные антигены из штаммов 19 и 99 (8-форма), 82 (8Я-форма) и Я-1096 (Я-форма). при этом испытали различные методы. С помощью полученных 8-, 8Я- и Я-антигснов изучали динамику антителообразования в РА и РСК у морских свинок, кроликов и крупного рогатого скота, привитых вакцинами из штаммов 19, 82 и Я-1096. Далее исследовали иммунопатогенез у животных, привитых, а затем зараженных культурой вирулентного штамма бруцелл и наоборот, вначале зараженных, а затем привитых вакцинами.
Производственное испытание антигенов проводили на крупном рогатом скоте, привитом вакциной из штамма 82, в благополучных и неблагополучных хозяйствах. Ставили классические реакции РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном и РСК с Я-антигеном с целью дифференциации больных бруцеллезом животных от здоровых для отличия поствакцинального аборта от постинфекционного.
Результаты исследований. С целью получения антигенов для РСК испытали различные методы, в частности механического разрушения микробной клетки, замораживания и оттаивания, обработки спиртом, формалином, детергентами, ультразвуковой дезинтеграции.
В результате установили, что для производства антигенов из 8-форм бруцелл пригодны практически все перечисленные способы, часть из них не подходит для изготовления антигенов из 8Я-форм. а для получения бруцеллезного Я-антигсна пригодным оказался лишь способ ультразвуковой дезинтеграции взвеси бруцелл штамма Я-1096 с последующим центрифугированием дезинтеграта для освобождения от клеточных элементов. Данный диагностикум оказался специфичным (улавливал в сыворотках крови Я-антитсла и не взаимодействовал с 8-антителами), достаточно активным, не обладал антикоплементарными свойствами и
гемотоксичностью. Разработали методики контроля его активности и стандартизации.
Изучение динамики антителообразова-ния у морских свинок, кроликов и крупного рогатого скота, привитых вакцинами из штаммов 19, 82 и Я-1096. а затем зараженных культурой вирулентного штамма бруцелл, и наоборот, показало следующее.
У животных, привитых вакциной из штамма 19, и у контрольных зараженных, образуются в крови 8-антитела. У привитых вакциной из штамма Я-1096 - Я-антитсла. а у привитых вакциной из штамма 82 - 8- и Я-антитела. Динамика образования и высота титров тех или иных антител после введения вакцины из штамма 82 зависит от вида животного, а в пределах вида от возраста на момент вакцинации. Так, у морских свинок 8-антитела или вообще не обнаруживаются, или бывают в невысоких титрах и непродолжительное время. У кроликов период синтеза 8-антител несколько продолжительней, чем у морских свинок. Телята, привитые вакциной из штамма 82 в 4-5-ти месячном возрасте, слабо реагируют в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном и недолго (2-3 недели). У телок, ревакцинированых через 10 месяцев, и у коров 8-антитела обнаруживаются до 2-3-х месяцев, но не у всех животных.
Я-антитсла у всех видов животных и в любом возрасте обнаруживаются более длительное время и в высоких титрах. При заражении животных, привитых вакциной из штамма 82, было отмечено, что, если животное противостояло заражению, то оно не реагировало с 8-антигеном. При прорыве иммунитета в сыворотке крови появлялись 8-и Я- антитела. При вакцинации больного бруцеллезом скота обнаруживалось только антитела. Обобщив результаты изучения иммуногенеза у животных, привитых вакциной из штамма 82, и патогенеза при заражении вакцинированного поголовья, а также итоги исследований больных бруцеллезом животных в стадах крупного рогатого скота, привитого и непривитого против бруцеллеза, сформулировали принципы дифференциальной диагностики.
1. У здоровых животных после введения вакцины из слабоагглютиногенного штамма 82 синтез 8-антител непродолжительный и их титр сравнительно невысокий.Я-антиге-ном эти антитела не выявляются, они обнару-
живаются единым бруцеллезным антигеном. В норме, при исследовании животных в сроки, определенные наставлением по применению вакцины, они реагируют отрицательно с биофабричными8-диагнос-тикумами. R-антитела у здоровых животных образуются более длительное время после вакцинации, единым бруцеллезным антигеном они не выявляются, но обнаруживаются R-антигеном.
2. У больных бруцеллезом животных (не привитых вакциной из штамма 82), как правило, синтезируется только S-антитела, улавливаемые в серологических реакциях биофабричными S-диагностикумами, и не вступающие в реакцию с R-антигеном.
3. Если под вакцинацию попадают больные бруцеллезом животные, то в их организме R-антитела также не синтезируются, и они реагируют только с S-диагностикумами.
4. При прорыве иммунитета у привитого скота в сыворотке крови обнаруживаются S-и R- антитела, но, как правило, титр S-анти-тел выше титра R-антител.
Данные выводы подтверждены при исследовании сывороток крови крупного рогатого скота из различных хозяйств Самарской области. У одного животного в одном хозяйстве реакции являются поствакцинальными, ибо они не реагируют в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном, а показывают положительный результат в РСК с R-антигеном в титре 1:20++ и выше. У других животных этого же хозяйства реакции обусловлены воздействием возбудителя бруцеллеза на их организм до введения вакцины из штамма 82, т.е., вакцину вводили больным животным, вакцинный штамм не прижился в их организме и в результате коровы показывают положительный результат с единым бруцеллезным антигеном в РА в титрах от 100 до 200 МЕ или в РСК от 1:10 до 1:20 и отрицательный в РСК с R-антигеном. Прорыв иммунитета произошел и у коров в другом хозяйстве, так как они реагировали с S- и R-антигенами, но в более высоких титрах антител с единым бруцеллезным антигеном, титры в РА 200 МЕ, в РСК 1:160++ у одной, у другой 1:320++, а с R-антигеном соответственно 1:40 ++++, 1:20++.
Для подтверждения специфичности R-антигена, правильности наших заключений о характере реакций мы проводили исследования абортировавших от бруцеллеза живот-
ных в индивидуальном секторе, при появлении бруцеллеза в общественном секторе на непривитом скоте, многократные последовательные исследования одних и тех же ревакцинированных вакциной из штамма 82 животных в динамике, ставили кольцевую
реакцию с молоком, проводили диагностический убой животных.
Так, при исследовании абортировавших от бруцеллеза животныхбыли обнаружены очень высокие титры РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном (таблица 1).
Таблица 1 - Результаты изучения специфичности бруцеллезного Я-антигсна ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» с сыворотками крови крупного рогатого скота, не привитого вакциной из штамма 82, абортировавшего от бруцеллеза в хозяйстве Самарской области.
№ животных Единый бруцеллезный антиген РСК с R-
п/п PA (ME) РСК антигеном
1 800 320 Отр.
2 1600 640 Отр.
3 400 80 Отр.
4 200 20 Отр.
5 1600 80 Отр.
6 3200 1280 Отр.
7 1600 40 Отр.
Из данных таблицы 1 видно, что ни одно животное не дало положительную РСК с R-антигеном. Однакорова была диагностирована нами при дифференциальном исследовании как подозрительная в заражении возбудителем бруцеллеза: с единым бруцеллезным антигеном РА 50 ME, РСК 1:20, РСК с R-антигеном 1:5, РБП с биофабричным антигеном отрицательная, с антигеном из штамма 99 - положительная. Животные этого стада были ревакциниро-ваны дважды в течение года вакциной из штамма 82. Тем не менее, вакцинный штамм не прижился в организме этого животного, от которого при бактериологическом исследовании на 27-е и 30-е сутки со дня посева выделили культуру полевого штамма вида В. abortus из подчелюстного и заглоточного лимфоузлов. Культура была проверена по всем тестам, в т.ч. ее ввели морским свинкам в дозе 1млн.м.к. (согласно методике ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по дифференциации культур вакцинного штамма 82 от полевых). Обе морские свинки давали РА с единым бруцеллезным антигеном в титре 160 ME, РСК - 1:40, а РСК с R-антигеном 1:5, что подтверждает эпизоотический характер выделенной культуры.
Раннее исследование коровчерез 45 суток после ревакцинации вакциной из штамма 82было произведено нами в одном стаде. Проверили 413 голов. Из них РА была положительной лишь у одной, не совпадаю-
щая с РСК, т.е. в это время РА у ревакцинированных коров в основном уже выпадает. По РСК реагировало 103 головы (25 % от исследованных). Всех их раститро-вали в РСК с R-aнтигeнoм. Установили 14 больных.
Анализ результатов дифференциально-диагностических исследований на бруцеллез сывороток крови крупного рогатого скота с применением набора препаратов ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» в ветеринарных лабораториях Самарской области показал, что применение данного набора определить истинную эпизоотическую ситуацию по этому заболеванию в том или ином регионе. Исходя из этого с использованием набора положительно реагирующие пробы были подвергнуты дифференциальному исследованию. В результате было выявлено 52,7% больных бруцеллезом животных от положительно реагирующих и 0,58% от всех исследованных. Использование набора препаратов при дифференциации поствакцинальных абортов от постинфекционных показало, что при бруцеллезном аборте животное реагирует положительно по РА и (или) РСК с единым бруцеллезным антигеном при отрицательных показателях РСК с R-aнтигeнoм. Но, если титр реакций с единым антигеном очень высокий, то животное могут реагировать в низком титре и в РСК с R-aнтигeнoм (на привитом поголовье). При поствакцинальном аборте,
напротив, животные реагируют положительно в РСК с Я-антигеном, при отрицательных результатах в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном. При очень высоком титре РСК с Я-антигеном (1:160 -1:640) животные реагируют в небольших разведениях серологических реакций с единым бруцеллезным антигеном.
Следует отметить, что при постинфекционном аборте у скота, не прививавшегося вакциной из штамма 82, даже при очень высоких титрах РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном, РСК с Я-антигс-ном всегда была отрицательной.
Заключение. В ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» получен набор препаратов для дифференциальной серологической диагностики бруцеллеза у крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82.
Применение набора при серологических исследованиях в ветеринарных лабораториях в общей системе мер борьбы с данным заболеванием позволило установить истинную эпизоотическую ситуацию по бруцеллёзу в том или ином районе и в результате оперативно спланировать специальные ветеринарные мероприятия.
Использование набора позволяло в необходимых случаях начинать ранние дифференциально-диагностические исследования спустя 1,5 месяца после применения вакцины из штамма 82 способствовало своевременному удалению больных животных и ускорению оздоровления стада. Эти исследования позволяют сохранить значительное количество здорового скота с поствакцинальными реакциями от сдачи на мясокомбинат.
Литература
1.Аракелян, П.К. Оптимизация мероприятий при бруцеллезе сельскохозяйственных животных в современных условиях / П.К. Аракелян, С.К. Димов. // Ветеринария. - 2013. - № 4. - С. 23-27.
2. Гордиенко, Л.Н. Оценка иммунного статуса импортного крупного рогатого скота, оздоровливаемого от бруцеллеза / Л.Н. Гордиенко, Куликова Е.В., Гайдуцкая Г.М. и др. // Ветеринария. - 2017. - №2. - С.19-22.
3. Наставление по диагностики бруцеллеза животных. - Министерство сельского хозяйства Российской Федерации, Москва, - 2004. - 63с.
4. Салмаков, К.М. Бруцеллез животных и его специфическая профилактика / К.М. Салмаков, А.М.Фомин // Ветеринарный врач. - 2005. - №1. - С.44-47.
5.Сафина, Г.М. Определение оптимальных иммунизирующих доз различных противобруцеллезных вакцин на морских свинках / Г.М Сафина., A.M. Фомин, P.P. Хабибуллин, Н.Ю. Федорова // Мат. международ, научно-практич. конф. посвящ. 65-летию ветер, науки Кубани. -Краснодар. -2011 .-4.2. -С. 140-145.
6. Сафина, Г.М. Апробация новой системы специальных противобруцеллезных мероприятий на заключительном этапе оздоровления хозяйств от бруцеллеза крупного рогатого скота / Г.М Сафина, A.M. Фомин, М.А. Косарев // Ветеринарный врач. - 2017. - №4. - С.12-16.
DIFFERENTIAL SEROLOGICAL DIAGNOSIS OF BRUCELLOSIS IN CATTLE VACCINATED WITH STRAIN 82 AND ITS IMPORTANCE IN THE COMPLEX SYSTEM OF DISEASE-CONTROL PLANNING
Kosarev M.A. - Candidate of Biological Sciences, Fomin A.M. - Doctor of Veterinary Sciences, Professor, Safina G.M. - Candidate of Veterinary Sciences, Grigorieva S.A. - Junior Researcher Scientist, Tukhvatullina L A. - Junior Researcher Scientist
FSBSI "Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety", (420075, Kazan, Nauchnyi gorodok - 2, e-mail: vnivi @mail.ru)
A significant progress has been achieved in the studying of brucellosis infection in the Russian Federation. A number of regions have recovered from thezooanthroponosis, however, despite the achievements: brucellosis still causes great economic damage to livestock. Currently, the weakly agglntinogenic strain B. abortus 82 vaccine is widely used. However, to date, the problems of
differentiation of patients with brucellosis from vaccinated animalshas still not been resolved. Considering the importance and relevance of this problem, research is continuing to find methods for differentiationthe cattle of brucellosis fromvaccinated cattle. To solve the problem, antigens were obtained from various strains B. abortus 19 and 99 (S-form), 82 (SR-form) and R-1096 (R-form) and the dynamics of antibody formation in RA and RSCin animals vaccinated with different vaccines, andimmunopathogenesis in animalswere studied. The results of the study of immunogenesis in animals vaccinated with strain 82 and pathogenesis at infection of vaccinated livestock, and the residís of studies of brucellosis animals in herds of cattleagainst brucellosis, formulated the principles of differentiationvaccinated and not vaccinated using the kit produced by FCTRB-RSVI. The application of the kit will allow to establish the true epizootic situation for brucellosis in a particular economy and, if necessary, to begin early differential diagnostic studies in 1.5 months after the use of the vaccine from strain 82, which contributed to the timely removal of sick animals and accelerate the recover}' of the herd.
Keywords: brucellosis, cattle, weakly agglutinogens vaccine, differential serological diagnosis, diagnostic kit
References
1. Arakelyan, P.K. Optimization of measures for brucellosis of farm animals in modern conditions / P.K. Arakelyan, S.K. Dimov // Veterinary science. - 2013. - №4. - P.23-27.
2. Gordicnko. L.N. Evaluation of the immune status of imported brucellosis cattle / L.N. Gordienko, E.V. Kulikova, G.M. Gaiduckaya et. al. // Veterinary science. - 2017. - №2. - P. 19-27.
3. Manual on the diagnosis of animal brucellosis. - Ministry of Agriculture of the Russian Federation, Moscow, 2004. - 63s.
4. Salmakov, K M. Animal brucellosis and its specific prophylaxis / K M. Salmakov, A.M. Fomin // Veterinarny vrach. - 2005. - № 1. - P. .44-47.
5. Safina, G.M. Determination of optimal immunizing doses of various anti-brucellosis vaccines in guinea pigs / G.M.Safina., A.M. Fomin, R.R. Khabibullin, N.Yu. Fedorova // Mat. international scientific and practical conf. initiation 65th anniversary of the wind. Science of the Kuban.-Krasnodar.-2011 .-Ch.2.-P.140-145.
6. Safina, G.M. Testing a new system of special anti-brucellosis measures at the final stage of farm rehabilitation from cattle brucellosis / G.M. Safina, A.M. Fomin, M.A. Kosarev // Veterinarny vrach. -2017. - №4. -P. 12-16.
УДК 619:616.995.132(470.31) DOI 10.33632/1998-698X.2019-5-28-32
СОВРЕМЕННАЯ СИТУАЦИЯ ПО ТРИХИНЕЛЛЕЗУ В ЦЕНТРАЛ ЬНОМ НЕЧЕРНОЗЕМЬЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Крючкова Е.Н. - доктор ветеринарных наук, Абалихин Б.Г. - доктор ветеринарных наук, профессор, Соколов Е.А. - кандидат ветеринарных наук
ФГБОУ ВО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия им. Д.К. Беляева» (153012, г. Иваново, ул. Советская, 45, e-mail: krjuchkovae@mail.ru)
В работе приводятся сведения о распространении трихинеллеза у диких животных на
территориях Ивановской, Владимирской, Костромской, Ярославской, Тверской, Смоленской, Московской областей в период 1998 — 2018 гг.. Всего исследованию подвергнуто 495 животных, в том числе 99 барсуков лесных куниц — 96, американских норок — 107, европейских норок — 25, хорей лесных — 48, выдр — 11, горностаев — 2, ласок — 8, бобров — 4, белок — 4, волков — 14, лисиц — 29, енотовидных собак — 23, медведей — 7, кабанов — 13, рысей — 5. Исследования показали, что трихинеллез среди диких животных в Центральном районе Нечерноземной зоны РФ имеет довольно широкое распространение. Из 16 видов исследованных животных 10
