Научная статья на тему 'Испытание рнга с молоком при дифференциальной поствакцинальной диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота'

Испытание рнга с молоком при дифференциальной поствакцинальной диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

CC BY
517
94
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
КРУПНЫЙ РОГАТЫЙ СКОТ / БРУЦЕЛЛЕЗ / ВАКЦИНЫ / ИММУНИЗАЦИЯ / ДИАГНОСТИКА / АНТИГЕНЫ / АНТИТЕЛА / CATTLE / BRUCELLOSIS / VACCINES / IMMUNIZATIONS / DIAGNOSIS / ANTIGENS / ANTIBODIES

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Дегтяренко Л. В., Карлова М. Ю., Скляров О. Д., Хатько Н. Ф.

Исследования проведены с целью изучения возможности и целесообразности применения нового эритро-цитарного диагностикума при постановке реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с молоком крупного рогатого скота, иммунизированного противобруцеллезной вакциной из штамма B. abortus 82. При обследовании 196 коров с заболеваниями молочной железы маститами в клинической и субклинической формах установлено, что РНГА с молоком специфичная реакция, которая обеспечивает получение отрицательных результатов. Изучение молока в РНГА от 69 глубокостельных коров на бруцеллезную инфекцию показало также возможность использования теста при проведении диагностических исследований. При обследовании 2694 коров благополучных и 1643 животных неблагополучных по бруцеллезу хозяйств установлена целесообразность применения РНГА с молоком при контроле эпизоотической обстановки по бруцеллезу и оздоровлении неблагополучных хозяйств через 1 месяц и последующие сроки после иммунизации коров вакциной из штамма B. abortus 82. В благополучных хозяйствах у коров получены отрицательные результаты РНГА с молоком, в неблагополучных антитела в молоке определяли у 0,6.14,4 % коров. При исследовании молока коров неблагополучных по бруцеллезу гуртов отмечена более высокая чувствительность РНГА, в сравнении с кольцевой реакцией (КР) с молоком (реагировало соответственно 2,4 и 1,9 % животных), при этом показания КР и РНГА с молоком совпадали в 83,9 % случаев. В отдельных неблагополучных по бруцеллезу гуртах доля коров, реагирующих в РНГА с молоком, колебалась от 0,2 до 5,1 %. Достоверность показаний РНГА при исследовании коров неблагополучных по бруцеллезу хозяйств подтверждена путем проведения серологических исследований комплексом РА+РСК+РНГА+РИД, бактериологическим и ПЦР методами

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Дегтяренко Л. В., Карлова М. Ю., Скляров О. Д., Хатько Н. Ф.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

IHA TEST WITH MILK IN THE DIFFERENTIAL POSTVACCINATION DIAGNOSIS BRUCELLOSIS CATTLE

The studies were conducted to study the feasibility of applying the new formulation in erythrocyte diagnosticum for conduction of RIGA with milk of cattle immunized with a vaccine prepared from strain antibrucellar B. abortus 82. There was revealed in a study of 196 cows with mastitis breast diseases in clinical and subclinical form that RIGA with milk is specific reaction, since there was get negative results. The study of milk in RIGA from 69 cows on deep in calf on brucellosis infection also was showed the possibility of applying the test for diagnostic studies. The feasibility of using RIGA with milk in the control of epizootic situation of brucellosis and rehabilitation of disadvantaged farms in 1 month and subsequent periods after immunization of cows vaccine strain of B.abortus in the survey found 82 cows in 2694 and 1643 favored animals with brucellosis disadvantaged farms. In the prosperous farms of cows found to be negative RIGA with milk, a dysfunctional antibodies in milk was determined in 0,6-14,4% of cows. There was set a higher sensitivity compared to RIGA and RT with milk in the study of milk from cows in 1643 unfortunate of brucellosis herds, there was reacted respectively 2.4 and 1.9% animal, and the testimony of the RT and RIGA with milk coincided in 83.9% of cases. In some disadvantaged brucellosis herd of cows in the percentage of reacting with RIGA milk ranged from 0.2 to 5.1%. The credibility of RIGA with milk in the study of cows disadvantaged farms with brucellosis confirmed by conducting serology complex RA + RCF + RIGA + RID, bacteriological and PCR techniques.

Текст научной работы на тему «Испытание рнга с молоком при дифференциальной поствакцинальной диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота»

Существенное преимуществом КР над комплексом Противоэпизоотическая и противоэпидемическая роль РА, РСК и РИД - возможность беспрепятственного ис- КР с молоком резко возрастает, когда ее используют в

пользования даже в ранние сроки (с 14 сут.) после не- систематических исследованиях, начиная с 14 сут. до

однократной иммунизации живой слабоагглютиногенной 6 мес. после иммунизации (реиммунизации) живой

противобруцеллезной вакциной без опасности поствак- слабоагглютиногенной бруцеллезной вакциной, а далее

цинальных реакций (серологические методы можно исполь- в комплексе с РА, РСК - до получения отрицательного

зовать не менее чем через 1,5 мес. после иммунизации). результата с изоляцией и убоем реагирующих животных.

Литература.

1. Fleischhauer O. Die Abortus-Bang-Ring probe (ABR) zur Teststelling von Bang verdachigen vollmilch Probe // Berl. Tierars Wochenschr. - 1937. - № 53. - P. 527-530.

2. Sutra L. Caffin J.P. Dubray C. Role of milk immunoglobulins in the Brucells MilkRing Test// Vet. Microbiolog. - 1986.-№ 12. - P. 359-366.

3. Morgan W. Richarde R. The diagnosis control eradication of bovine brucellosis in Great Britain// Vet. Rec.. - 1974. - Vol.94, 22. - P. 510-517.

4. Карташова В.И., Архангельский И.И. Ускоренные методы исследования сборного молока от больных бруцеллезом коров // Ветеринария. - 1965. - № 10. - С.92-93.

5. Морякова О.И., Касьянов А.Н. Рационализация технологии постановки кольцевой реакции при массовых исследованиях молока на бруцеллез // Тр. ВИЭВ. - М, 1961. - Т. 2б. - С. 348. - 351.

6. Триленко П.А. Испытание кольцевой реакции при диагностике бруцеллеза // Ветеринария. - 1951. - № 8. - С. 59-61.

7. Изучение значимости методов серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота / А.А. Новицкий, Л.В. Дегтяренко Т.Г. Попова, Г.В. Разницына, П.К. Аракелян, С.А. Власова // Инфекционная патология животных: Сб.науч.тр. Юбилейный вып./РАСХН, Сиб. отд-ние.-ВНИИБТЖ.-Омск,2001. - С.44-51.

8. Косилов И.А., Аракелян П.К., Димов С.К., Хлыстунов А.Г. Бруцеллез сельскохозяйственных животных / под ред. И.А. Косилова. - Новосибирск, 1999.-344 с.

9. Попова Т.Г. Специфичность и чувствительность серологических методов исследования молока // Бруцеллез сельскохозяйственных животных: Сб.науч.тр. ВНИИБТЖ/ВАСХНИЛ. - Омск, 1989.-С.40-44.

10. Попова Т.Г. Кольцевая реакция с молоком как дополнительный метод диагностики бруцеллеза у коров, ревакцини-рованных вакциной из штамма 82 // Методы профилактики и диагностики бруцеллеза с.-х. животных: Сб.науч.тр.ВНИИБТЖ/ РАСХН Сиб.отд.-ние.-Новосибирск,1991.-С.20-23.

11. Дифференциальная вакцинированных и больных бруцеллезом животных / В.М. Чекишев, Ш.Р. Файзрахманов, Б.А. Киселев, М.Л. Филлипенко, О.А. Колганова, А.Г. Хлыстунов, С.К. Димов, В.В. Якомов, А.А. Новицкий, Т.Г. Попова //Ветери-нария.-1993.-№ 8.-С.25-32.

12. Попова Т.Г., Новицкий А.А. Роль кольцевой реакции с молоком в диагностике бруцеллеза у коров //Актуальные проблемы бруцеллеза и туберкулеза животных: Сб.науч.тр. ВНИИБТЖ/ РАСХН Сиб. Отд.-ние.-Омск, 2000.-С.270-276.

diagnostic significance of milk ring test in cattle brucellosis

T.G. Popova, P.K. Arakelyan, A.A. Novitskij, S.K. Dimov, A.S. Dimova

Summary. It are reflects research materials in the period from 1987 to 2010 in the article. It is installed unsuitable udder secretions of deep in-calf cows for research at the RT to the diagnosis of brucellosis in cows with a period of more than 7 months of pregnancy. The positive RT don’t blind with mastitis in respect of its impact on the specificity of its indicators. 8,3 % samples coincided with a positive RT (including a dilution of 1:2-2, at a dilution of 1:32 - 6) of the 96 positive samples with dimastin from cows disadvantaged populations. It’s possible to recommend it as a differential method for distinguishing infected from vaccinated patients strain B.abortus 82. The use of even low doses of the vaccine strain agglutinogens B.abortus 19 for cows such features are not enabled.

After artificial infection virulent culture B.abortus are showed that the RT with milk was positive in 90% of the cows already in 9 day, whereas complement-fixing substance (CFT) and agglutinins (RT) were recorded in all animals only the 21 days.

There are showed research results that the ring reaction with milk is a specific highly sensitive method, that revealing the initial stage disease brucellosis of animal. It is a differential test in the early stages after reimmunization cattle, and it is used in later periods, at 6 months after revaccination in conjunction with other serological reactions, which makes it possible to shorten the waiting time improvement of disadvantaged farms of 2 or more times.

Key words: oattle, cows, brucellosis, diagnosis, rapid method, milk, ring test, colored antigen.

УДК 619:616-07:616.981.42:636.22/28

ИСПЫТАНИЕ РНГА С МОЛОКОМ при дифференциальной поствакцинальной ДИАГНОСТИКЕ БРУЦЕЛЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Л.В. ДЕГТЯРЕНКО, доктор ветеринарных наук, зав. сектором

М.Ю. КАРЛОВА, кандидат ветеринарных наук, младший научный сотрудник

ВНИИБТЖ Россельхозакадемии

О.Д.СКЛЯРОВ, доктор ветеринарных наук, зав. отделом

ФГУ ВГНКИ

Н.Ф. ХАТЬКО, кандидат ветеринарных наук

ГУОО «Омская областная ветеринарная лаборатория»

Е-таИ^пИЫд@ттЬ1ег.ш

Резюме. Исследования проведены с целью изучения возможности и целесообразности применения нового эритро-цитарного диагностикума при постановке реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с молоком крупного рогатого скота, иммунизированного противобруцеллезной вакциной из

штамма B. abortus 82. При обследовании 196 коров с заболеваниями молочной железы маститами в клинической и субклинической формах установлено, что РНГА с молоком

- специфичная реакция, которая обеспечивает получение отрицательных результатов. Изучение молока в РНГА от 69 глубокостельных коров на бруцеллезную инфекцию показало также возможность использования теста при проведениидиа-гностических исследований. При обследовании 2694 коров благополучных и 1643животных неблагополучных по бруцеллезу хозяйств установлена целесообразность применения РнГа с молоком при контроле эпизоотической обстановки по бруцеллезу и оздоровлении неблагополучных хозяйств через 1 месяц и последующие сроки после иммунизации коров вакциной из штамма B. abortus 82. В благополучных хозяйствах у коров получены отрицательные результаты РНГА с молоком, в неблагополучных антитела в молоке определяли у 0,6...14,4 % коров. При исследовании молока коров неблагополучных по бруцеллезу гуртов отмечена более высокая чувствитель-

ность РНГА, в сравнении с кольцевой реакцией (КР) с молоком (реагировало соответственно 2,4 и 1,9 % животных), при этом показания КР и РНГА с молоком совпадали в 83,9 % случаев. В отдельных неблагополучных по бруцеллезу гуртах доля коров, реагирующих в РНГА с молоком, колебалась от 0,2 до 5,1 %. Достоверность показаний РНГА при исследовании коров неблагополучных по бруцеллезу хозяйств подтверждена путем проведения серологических исследований комплексом РА+РСК+РНГА+РИД, бактериологическим и ПЦР методами. Ключевые слова: крупный рогатый скот, бруцеллез, вакцины, иммунизация, диагностика, антигены, антитела.

В последние десятилетия в РФ достигнуты значительные успехи в борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота, оздоровлены отдельные области и республики, но вместе с тем почти во всех федеральных округах, кроме Северо-Западного, сохраняются неблагополучные пункты и ежегодно появляются новые.

Для эпизоотического контроля за благополучием по бруцеллезу крупного рогатого скота необходимы диагностические средства и методы, которые обеспечивают своевременную и объективную постановку диагноза, позволяют при оздоровлении неблагополучных пунктов на фоне применения противобруцеллезных вакцин проводить достоверную дифференциацию больных животных от здоровых, реагирующих на вакцину.

Изыскание эффективных экспресс-методов выявления бруцеллезных антител в молоке крупного рогатого скота, как наиболее доступном материале для про-вендения исследований, имеет большое практическое значение в целях упрощения диагностики, особенно в зонах, свободных от этого заболевания.

За рубежом и в РФ для определения бруцеллезных антител в молоке у непривитых животных применяют кольцевую реакцию (КР), которую, по мнению многих ученых, можно считать высокочувствительным и специфичным тестом [1, 2 и др.]. К недостаткам этого экспресс-метода следует отнести нестабильность показаний и возможность неспецифических реакций у здоровых животных, поскольку на показатели КР влияют такие факторы как жирность и кислотность молока, а также маститы у коров [3, 4 и др.].

Во ВНИИБТЖ и ИЭСиДВ была разработана КР с молоком для исследования крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма B. abortus 82, доказана ее диагностическая и противоэпизоотическая эффективность [5,6], но реакцию официально не применяют в ветеринарной практике.

В результате изыскания более перспективных экспресс-методов диагностики бруцеллезных антител в молоке крупного рогатого скота мы совместно с сотрудниками ИЭСиДВ успешно апробировали реакцию непрямой геммаглютинации (РНГА) с коммерческим эритроцитарным бруцеллезным антигеном, используемым в медицинской практике, в хозяйствах с различной эпизоотической обстановкой по бруцеллезу [7]. При этом установлена целесообразность применения теста на непривитом или иммунизированном вакциной из штамма B. abortus 82 крупном рогатом скоте при контроле эпизоотической обстановки по бруцеллезу в стадах и оздоровлении неблагополучных хозяйств. Однако из-за отсутствия производства отечественного бруцеллезного эритроцитарного диагностикума и этот тест не нашел широкого применения.

В 2006 г был внедрен в ветеринарную практику бруцеллезный эритроцитарный диагностикум для РНГА, который мы разработали совместно с ДагЗНИВИ и ВГНКИ [8]. Согласно наставлению его применяют при

исследовании сыворотки крови непривитого или иммунизированного противобруцеллезными вакцинами крупного рогатого скота.

Цель наших исследований - изучение возможности и целесообразности применения нового эритроцитарного диагностикума при постановке РНГА с молоком крупного рогатого скота, иммунизированного противо-бруцеллезной вакциной из штамма B. abortus 82.

В задачи исследований входило: изучение специфичности РНГА с молоком и определение ее диагностической ценности при исследовании молока коров из хозяйств с различной эпизоотической обстановкой на бруцеллез.

Условия, материалы и методы. При изучении специфичности РНГА с молоком определяли влияние на показания теста маститов, в том числе обусловленных глубокой стельностью.

С этой целью в двух благополучных по бруцеллезу хозяйствах обследовали 518 непривитых противобруцеллезными вакцинами коров, из которых 437 находились в состоянии лактации, 69 были глубокостельными, от 12-и коров исследовали молозиво.

Диагностику мастита у животных проводили при постановке пробы с мастидином.

Определение специфичности и диагностического титра РНГА при исследовании молока с бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом осуществляли при обследовании 2694-х коров, привитых вакциной из штамма B. abortus 82, из семи благополучных по бруцеллезу хозяйств Омской области в сроки от 1 до 18 месяцев после иммунизации.

Чувствительность РНГА с бруцеллезным эритроцитарным антигеном изучали при исследовании молока от коров, привитых вакциной из штамма B. abortus 82, через 1, 2, 5, 6 месяцев после ревакцинации в двух неблагополучных по бруцеллезу гуртах (СПК «Нива» и СПК «Комсомольское») Омской области.

Выяснение эпизоотической опасности животных, положительно реагировавших в РНГА с молоком, проводили при постановке биопробы на морских свинках, а также исследованием молока методом ПЦР на базе Омской областной ветеринарной лаборатории. Для этого было отобрано пять непривитых противобруцеллезными вакцинами коров частного сектора, неблагополучного по бруцеллезу крупного рогатого скота, с различным сочетанием иммунологических реакций, молоком которых инфицировали 15 морских свинок.

Постановку РА, РСК, РНГА и РИД с сывороткой крови, КР с молоком от непривитых коров осуществляли по общепринятым методикам.

Результаты и обсуждение. При изучении возможности использования РНГА с молоком от лактирующих коров с заболеванием молочных желез маститом у 196-и (44,9 %) животных диагностировали мастит в клинической и субклинических формах. Положительные показатели КР с молоком установлены у 5,0 % коров с наличием маститов, тогда как при использовании РНГА результаты во всех случаях были отрицательными.

Исследование молока от 69-и коров, находившихся в «запуске», в 95,7 % случаев показало наличие маститов, причем позитивные результаты КР с молоком диагностировали у 18-и животных (27,3 %). Наиболее специфичными были показания РНГА. При исследовании молока глубокостельных коров гемагглютинины обнаружены лишь в одном случае в разведении молока 1:50.

Неспецифические показатели КР с молоком установлены при исследовании молозива у 8,3 % животных, а результаты РНГА оставались отрицательными.

Таблица 1. Результаты исследования молока от коров, привитых вакциной из штамма 82, в неблаго-

получных по ^ бруцеллезу гуртах

Название хозяйства Срок после вакци- нации (мес.) Число проб Реагировало положительно Совпали показатели КР и РНГА Реагировали только в РНГА

КР с молоком РНГА с молоком

всего 1:50 1:100 1:200 и выше

гол. % гол. % гол. % гол. % гол. % гол. % гол. %

СПК «Комсо-

мольское» 1 375 12 3,2 11 2,9 2 0,5 6 1,6 3 0,8 8 66,6 3 0,8

ЗАО «Нива» 2 118 12 10,2 17 14,4 1 0,8 9 7,6 7 5,9 12 100,0 5 5,1

-//- 5 637 5 0,8 8 1,3 3 0,5 3 0,5 2 0,3 4 80,0 4 0,5

-//- 6 513 2 0,4 3 0,6 - - 3 0,6 - - 2 100,0 1 0,2

Всего 1643 31 1,9 39 2,4 6 0,4 21 1,3 12 0,7 26 83,9 13 0,8

В случае изучения молока от 2694-х здоровых коров, привитых вакциной из штамма B. abortus 82, в ранние (1.. .2 мес.) и отдаленные (18 мес.) сроки после иммунизации результаты КР с молоком были отрицательными.

При исследовании молока в разведении 1:50 в РНГА с бруцеллезным эритроцитарным антигеном положительный результат диагностировали у пяти коров (0,2 %), в разведении молока 1:100 показатели РНГА были отрицательными.

При исследовании 1643-х проб молока от животных, привитых вакциной из штамма B. abortus 82, в неблагополучных по бруцеллезу гуртах с помощью испытуемого эритроцитарного бруцеллезного антигена диагностировали 39 (2,4 %) положительно реагирующих коров (табл. 1), в КР с молоком - 31 (1,9 %).

Необходимо отметить, что показания КР и РНГА с молоком совпадали в 83,9 % случаях, только с помощью РНГА установлено из общего количества исследованных проб 13 положительно реагирующих особей (0,8 %). В отдельных гуртах доля животных, реагирующих только в РНГА с молоком, колебалась от 0,2 до 5,1 %.

Сопоставляя результаты изучения уровня гемагглю-тининов в молоке коров, привитых вакциной из штамма B. abortus 82, в благополучных и неблагополучных по бруцеллезу гуртах, мы установили, что у здоровых животных гемагглютинины в разведении молока 1:50 регистрируются только у 0,2 % особей, тогда как у больных бруцеллезом коров их определяли в титре 1:100 и выше у 84,0 % от общего количества реагировавших в РНГА.

Сравнение показателей РНГА и КР с молоком, РА, РСК и РНГА с сывороткой крови при обследовании коров, иммунизированных вакциной из штамма 82, в неблагополучных по бруцеллезу гуртах (табл. 2) показало, что из 25-и животных с положительным результатами РНГА с молоком в разведениях 1:50.1:800 у 10 коров (40,0 %) диагностировали агглютинины в сыворотке крови, причем у 90,0 % особей их определяли в высоких титрах (200 МЕ.800 МЕ).

Из числа животных, реагировавших в РСК, высокие титры (1:20.1:80) отмечены у 11 голов (64,7 %), у которых обнаруживали гемагглютинины в разведениях молока от 1:100 до 1:800 (табл. 2). Гемагглютинины в сыворотке крови диагностировали у 15 коров (60,0 %), из них высокие титры (1:400.1:1600) определяли у 13 (86,7 %) голов. У всех животных с позитивными результатами в РНГА с сыворотками крови в молоке регистрировали гемагглютинины. Результаты РИД были позитивными у 10-и животных (40,0 %), причем в сыворотке крови у них определяли в высоких титрах антитела в РА, РСК, РНГА, в молоке - гемагглютинины.

Из общего количества коров с положительными результатами РНГА с молоком (25) бруцеллезные антитела в сыворотке крови комплексом РА+РСК+РНГА+РИД диагностировали у 16-и животных (64,0 %), что подтверждает достоверность испытуемого теста.

Положительные результаты КР с молоком были получены у 15-и коров (60,0 %), агглютинины определяли в титре от 1:4 до 1:64. Положительные результаты КР и РНГА с молоком совпали в 100,0 % случаев.

Таблица 2. Соотношение иммунореакций у коров, привитых вакциной из штамма 82, из неблаго-

получных по бруцеллезу гуртов

Инвентарный номер животных Результаты исследования

молока сыворотки крови

КР РНГА РА РСК РНГА \РИД

2202 1:10 1:200 - 1 10 - -

5626 1:4 1:100 50МЕ 1:5 1:800 -

3805 1:32 1:400 - - - -

3655 - 1:400 - 1 :10 1:400 -

3908 1:8 1:200 200МЕ 1:20 1:800 -

5107 1:4 1:100 - - - -

6144 - 1:100 400МЕ 1 :40 1:800 +

5257 - 1:100 200МЕ 1 :40 1:1600 +

5750 1:64 1:200 400МЕ 1 :40 1:3200 +

2204 - 1:100 - 1 :20 1:200 +

4617 1:8 1:100 200МЕ 1 :80 1:3200 +

5311 1:16 1:100 200МЕ 1 :40 1:1600 +

3717 — 1:100 800МЕ 1 :40 1:6400 +

4618 1:8 1:50 400МЕ 1 :40 1:3200 +

5391 1:32 1:400 400МЕ 1 :80 1:3200 +

5315 1:16 1:800 - 1 :40 1:400 +

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

2205 - 1:100 - 1:5 1:200 -

4411 1:4 1:100 - - - -

2214 1:8 1:50 - - - -

3521 - 1:50 - - - -

3929 - 1:400 - - - -

5301 - 1:50 - - - -

3425 1:4 1:100 - - - -

2506 - 1:100 - - - -

9610 1:32 1:100 - 1 10 1:400 -

Важно отметить, что из общего количества обследованных животных бруцеллезные антитела при помощи КР и РНГА обнаруживали в молоке только у 9-и коров (36,0 %), что показывает необходимость использования тестов с молоком при оздоровлении неблагополучных по бруцеллезу пунктов для своевременного и эффективного удаления источников инфекции.

При изучении эпизоотической опасности животных, в сыворотке крови которых диагностировали гемагглютинины, в случае ее исследования с единым бруцеллезным антигеном в РА+РСК реагировало 100,0 % животных, в РНГА гемагглютинины обнаружены у 80,0 % голов. Из числа коров, реагировавших в РНГА с молоком, в 75,0 % случаев отмечали высокие титры гемагглютининов (1:800) и пре-ципитины при исследовании сыворотки крови (табл. 3).

Положительный результат биопробы на морских свинках получен у коровы №4, из патологического материала морских свинок, инфицированных биоматериалом от нее, выделили культуру, которая идентифицирована как эпизоотический штамм бруцелл. Животное, от которого выделена культура бруцелл, положительно реагировало в РНГА в разведении молока 1:800, кроме того в молоке с помощью КР определяли и агглютинины в титре 1:4.

Таблица 3. Результаты иммунологических исследований коров, реагиро вавших положительно в РНГА

Порядковый номер коров Результаты исследования Выделена культура

сыворотки крови молока

РА (МЕ) РСК - S РНГА РИД КР РНГА ПЦР

1 - 1:20 1:800 + 1:2 1:100 + -

2 50 1:10 1:800 + - 1:50 + -

3 - 1:10 1:100 - - - + н/и

4 100 1:80 1:800 + 1:8 1:800 + +

5 - 1:10 - - - 1:50 + н/и

При исследовании методом ПЦР генетический материал микроорганизмов рода Brucella был обнаружен в образцах молока от всех коров, что подтверждает достоверность результатов РНГА с молоком и доказывает эпизоотическую опасность животных, положительно реагирующих с испытуемым бруцеллезным эритроцитарным антигеном.

Выводы. РНГА с молоком с новым эритроцитарным бруцеллезным диагностикумом - специфичная реакция, на показания которой не влияют заболевания лактирующих коров маститами в клинической и субклинической формах. Тест можно использовать при обследовании коров на бруцеллезную инфекцию в любом физиологическом состоянии.

Диагностическим титром РНГА при исследовании молока от коров из благополучных по бруцеллезу хо-

зяйств целесообразно считать разведение 1:100, в котором произошла гемагглютинация эритроцитов с оценкой реакции три и четыре креста.

В связи с низкой долей животных, реагирующих в РНГА с молоком в титре 1:50 в благополучных по бруцеллезу хозяйствах, мы считаем целесообразным при оздоровлении неблагополучных стад оценивать их как больных бруцеллезом.

Животные, реагирующие в РНГА с молоком с новым бруцеллезным эритроцитарным антигеном, представляют эпизоотическую опасность, о чем свидетельствует положительная биопроба на морских свинках с изоляцией культуры бруцелл и ПЦР с помощью выделения у 100,0 % коров ДНК рода Brucella.

РНГА с молоком целесообразно применять при контроле эпизоотической обстановки по бруцеллезу и оздоровлении неблагополучных хозяйств через 1 месяц и последующие сроки после иммунизации коров вакциной из штамма B. abortus 82.

Литература.

1. КосиловИ.А., АракелянП.К, ДимовС.К.,ХлыстуновА.Г. Бруцеллезсельскохозяйственныхживотных/Новосибирск, 1999. -344с.

2. Логинов, Ф.С. Быстрый метод обнаружения бруцеллезныхагглютининов в молоке коров//Ветеринария. - 1978. - №6. - С. 50-51.

3. Лазарев Н.П. Кольцевая реакция с молоком и сывороткой крови для диагностики бруцеллеза // Ветеринарии.. - 1968.

- № 4. - С. 98-99.

4. Морякова О.И., Касьянов А.Н. Рациональная техника постановки кольцевой реакции при массовых исследованиях молока на бруцелле // Тр. ВИЭВ. - Москва, 1961. - Т. 26. - С. 348-351.

5. Косилов И.А., Димов С.К., Дегтяренко Л.В. Диагностическая эффективность кольцевой реакции с молоком при бруцеллезе у коров, привитых вакциной из штамма 82//Вопр. эпизоотологии, диагностики и мероприятия по ликвидации туберкулеза и бруцеллеза животных. - Новосибирск,1987. - №1. - С.87-91.

6. Гольцов А.С. Кольцевая реакция с молоком при ранней диагностике бруцеллеза у коров, реиммунизированных вакциной из штамма 82 // Пути совершенствования профилактики и диагностики бруцеллеза сельскохозяйственных животных.

- 0мск,1990. - С. 39-42.

7. Дегтяренко Л.В., Ощепков В.Г., Димов С.К., Димова А.С. Концептуальная схема оптимизации диагностики болезней, вызываемых у животных бруцеллами, и результаты ее практической реализации // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. - 2005. - №1. - С. 84-90.

8. Инструкция по применению набора для серологической диагностики бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). - Москва, 2006. - 11с.

IHA TEST wITH MILK IN THE DIFFERENTIAL PoSTVAccINATIoN DIAGNoSIS BRucELLoSIS OATTLE L.V. Degtyarenko, M.Y. Karlova, o.D. Sklarov, N.F. Khatko .

Summary. The studies were conducted to study the feasibility of applying the new formulation in erythrocyte diagnosticum for conduction of RIGA with milk of cattle immunized with a vaccine prepared from strain antibrucellar B. abortus 82. There was revealed in a study of 196 cows with mastitis breast diseases in clinical and subclinical form that RIGA with milk is specific reaction, since there was get negative results. The study of milk in RIGA from 69 cows on deep in calf on brucellosis infection also was showed the possibility of applying the test for diagnostic studies. The feasibility of using RIGA with milk in the control of epizootic situation of brucellosis and rehabilitation of disadvantaged farms in 1 month and subsequent periods after immunization of cows vaccine strain of B.abortus in the survey found 82 cows in 2694 and 1643 favored animals with brucellosis disadvantaged farms. In the prosperous farms of cows found to be negative RIGA with milk, a dysfunctional antibodies in milk was determined in 0,6-14,4% of cows. There was set a higher sensitivity compared to RIGA and RT with milk in the study of milk from cows in 1643 unfortunate of brucellosis herds, there was reacted respectively 2.4 and 1.9% animal, and the testimony of the RT and RIGA with milk coincided in 83.9% of cases. In some disadvantaged brucellosis herd of cows in the percentage of reacting with RIGA milk ranged from 0.2 to 5.1%. The credibility of RIGA with milk in the study of cows disadvantaged farms with brucellosis confirmed by conducting serology complex RA + RCF + RIGA + RID, bacteriological and PCR techniques.

Key words: cattle, brucellosis, vaccines, immunizations, diagnosis, antigens, antibodies.

УДК 619:616-074:616.982.2+636.22/.28

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ЛАБОРАТОРНОй ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЁЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Л.А. ТАЛЛЕР, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник

В.Г. ОЩЕПКОВ, доктор ветеринарных наук, главный научный сотрудник

Е.Ю. СЕКИН, кандидат ветеринарных наук, зав. лабораторией

Т.А. ЯНЧЕНКО, младший научный сотрудник

А.Д. СЛЕПЧЕНКО, младший научный сотрудник ВНИИ бруцеллеза и туберкулеза животных Рос-сельхозакадемии

E-mail: [email protected]

Резюме. Исследования проводили с целью разработки комбинированного метода ускоренной бактериальной диагностики туберкулеза с использованием модифицированных

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.