CC BY
71
МИКРОБИОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014
УДК 618.3-06:616.98:578.825.11]-078.33
Т.И. Долгих, С.В. Баринов, Т.В. Кадцына
ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ АНТИТЕЛ К АННЕКСИНУ И К В2-ГЛИКОПРОТЕИНУ ДЛЯ ВЕРИФИКАЦИИ АКТИВНОГО ТЕЧЕНИЯ ГЕРПЕСВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ У БЕРЕМЕННЫХ
цНИЛ, кафедра акушерства и гинекологии № 2 ГБОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия» Минздрава РФ, 644043, Омск
Проведен анализ гемостазиологических и иммунологических изменений при реактивации герпесвируснъх инфекций во время беременности. Показано формирование патологической тромбинемии, активации внутрисосудистого свертывания крови, увеличение факторов, приводящих к повреждению эндотелия при активном течении герпесвирусной инфекции, повышающее риск развития акушерской патологии. Антитела к в-гликопротеину класса IgM и антитела к аннексину классов IgM, IgG могут выступать в качестве диагностических признаков активации герпесвирусной инфекции во время беременности.
Ключевые слова: герпесвирусные инфекции; беременность; диагностика антитела к аннексину; антитела к в2-гликопротеину.
T.I. Dolgikh, S.V Barinov, T. V. Kadtsyna
THE DIAGNOSTIC VALUE OF ANTIBODIES TO ANNEXIN AND B2-GLYCOPROTEIN FOR VERIFICATION OF ACTIVE COURSE OF HERPESVIRAL INFECTIONS OF PREGNANT WOMEN
The Omsk state medical academy of Minzdrav of Russia, 644043 Omsk, Russia
The article deals with results of analysis of hemostasiological and immunological alterations under reactivation of herpesviral infections during pregnancy. The formation of pathological thrombinemia, activation of intra-vascular blood clotting, increasing of factors resulted in damage of endothelium under active course of herpesviral infection and increasing risk of development of obstetric pathology are demonstrated. The antibodies to B2-glycoprotein class IgM and antibodies to annexin class IgM, IgG can be operated as diagnostic signs of activation of herpesviral infection during pregnancy.
Keywords: herpesviral infection, pregnancy, diagnostic, antibodies to B2-glycoprotein
Введение. Во время беременности на фоне гестационной иммуносупрессии увеличивается риск активации хронических вирусных инфекций, что приводит к развитию акушерских осложнений, в частности потери плода [2, 4-7, 11, 12]. Манифестация гестационных осложнений вследствие реактивации герпесвирусов может быть результатом взаимного влияния инфекционного фактора и генетического фактора тромбофилий, что определяет выбор тактики ведения женщины и объем лечебно-профилактических мероприятий [1, 3, 4, 8-10]. Вследствие малосимптомного течения диагностика внутриутробной инфекции во время беременности представляет значительные трудности [3].
Целью настоящей работы явилась оптимизация диагностики активации герпесвирусов на основе анализа гемоста-зиологических и иммунологических показателей.
Материалы и методы. Проведено закрытое проспективное исследование случай-контроль. Основную группу (I) составили 30 беременных в возрасте от 18 до 35 лет с реактивацией герпесвирусных инфекций, вызываемых вирусом простого герпеса - ВПГ, цитомегаловирусом - ЦМВ, вирусом Эпштейна-Барр - ВЭБ. Контрольную группу (II) составили 10 женщин с латентным течением герпесвирусных инфекций. Критерием исключения из исследования являлось наличие молекулярно-генетических маркеров тромбофилии, инфек-
Для корреспонденции:
Долгих Татьяна Ивановна, д-р мед. наук, проф., зав. ЦНИЛ Адрес: 644070, Омск, ул. 20 лет РККА, 15 E-mail: dolgih-ti@mail.ru
ций, передаваемых половым путем, а также аутоиммунной патологии, предшествующей наступлению беременности.
У всех пациенток получено информированное письменное согласие на участие в исследовании.
Реактивация герпесвирусной инфекции подтверждалась детекцией ДНК вирусов методом ПЦР с использованием наборов «АмплиСенс» (ФГУН Центрального научно-исследовательского института эпидемиологии, Москва), наличием специфических IgM, IgA, авидности IgG антител от 40 до 60% методом ИФА (наборы производства компании «Euroimmun AG», Германия).
Факторы, приводящие к повреждению эндотелия (антитела классов IgM и IgG к Р2-гликопротеину-1 и к ан-нексину), определены методом ИФА (на тест-системах «Enzymimmunoassay Anti-tissue Transglutaminase screen» и «Enzymimmunoassay Anti-annexinV IgG/IgM» компании «Orgentec», Германия). Волчаночный антикоагулянт выявлялся в скрининговых и противовесных тестах с проведением коррекционной и подтверждающей проб с использованием реагентов ООО фирмы «Технология - Стандарт» (Россия).
Исследование системы гемостаза, проведенное на селективном анализаторе - коагулометре «Amelung AMAX Destiny Plus», включало изучение прокоагулянтного звена (активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ); протромбинового времени (ПВ) по Квику, концентрации фибриногена); тромбоцитарного звена (количества тромбоцитов в периферической крови на автоматическом счетчике тромбоцитов; агрегации тромбоцитов на лазерном агрегоме-тре «Биола» (Россия) с индуктором агрегации - раствором аденозиндифосфата (АДФ), адреналина); антикоагулянтного
МИКРОБИОЛОГИЯ
звена (активности антитромбина-Ш). Определение тромбофилического состояния крови основывалось на выявлении маркеров тромбинемии (D-димера количественным методом на наборах компании «Technoclone», Австрия), растворимых фибрин- мономерных комплексов в фенантролиновом тесте с использованием реагентов ООО фирмы «Технология - Стандарт» (Россия). Анализ данных осуществлялся с использованием лабораторной информационной системы «Алтэй» (Москва), интегрированной в авторскую программу для ЭВМ «Статистический анализ клинико-лабораторных данных для прогнозирования риска развития патологии R_MED» (Свидетельство о государственной регистрации программы для ЭВМ № 2011614225 от 30 мая 2011 г) [13]. Уровень значимости различий величин сравниваемых групп при условии нормального распределения определяли с использованием двухвы-борочного /-теста для групп с разными дисперсиями, при ненормальности распределения использовался критерий Манна-Уитни. Для анализа номинальных данных применяли критерий Фишера и %2 Пирсона.
Результаты и обсуждение. Основная и группа контроля сопоставимы по возрасту, социальным группам, акушерскому анамнезу. Основная часть женщин принадлежала возрастным группам 20-24 года - 18 (45%), 25-29 лет - 22 (55%). Первобеременными были 14 (35%) женщин, 26 (65%) - по-вторнобеременными, из которых 7 (17,5%) имели в анамнезе искусственное прерывание беременности.
Сравниваемые группы достоверно не различались по экс-трагенитальной патологии. Несколько чаще в первой группе (23,5%) по сравнению со второй (9,3%) встречались заболевания мочевыделительной системы, а также заболевания щитовидной железы - 13,7 и 4,6% соответственно.
В структуре гинекологической заболеваемости в группе беременных 1-й группы основное место занимали перенесенные генитальные инфекции (ИППП), хронические воспалительные заболевания матки и придатков и бесплодие в анамнезе. Частота встречаемости хронических воспалительных процессов гениталий (хронический эндометрит, сальпингоофорит, бактериальный вагинит) у беременных основной группы в 2 раза выше (20 и 10% соответственно (p = 0,81)), инфекции, передающиеся половым путем (ИППП) в анамнезе - в 3 раза чаще (30 и 10% соответственно
Гемостазиологические и иммунологические параметры в сравниваемых группах
Показатель 1-я группа 2-я группа Р
Ме (1 кв.; 3 кв.) Ме (1 кв.; 3 кв.)
АПТВ, с 36,45 (33,0; 40,0) 33,5 (33,0; 35,0) 0,038
ПТВ, с 12,3 (3,8; 4,7) 12,2 (12,0; 13,0) 0,05
ТВ, с 16,05 (14,4; 17) 16,2 (16,0; 17,0) 0,05
Фибриноген, г/л 4,3 (3,8; 4,7) 4,14 (3,4; 4,6) 0,05
АТ III, % 97 (92; 106) 98 (92; 100) 0,05
РФМК, мг/100 мл 11,2 (10,0; 13,0) 8,4 (6,0; 11,0) 0,011
Д-димер, нг/мл 420 (387; 477) 260 (220; 261) 0,001
Агрегация с АДФ-индуктором, % 68,33 (61,0; 76,0) 56,2 (47,0; 65,0) 0,024
Агрегация с адреналин-индуктором 66,51 (60,5; 70,2) 57,8 (56,0; 61,0) 0,010
Агрегация с ристомицин-индуктором 93,6 (89; 97,25) 96,83(89,25; 105,8) 0,05
At к ßj-гликопротеину IgM 7,881 (2,225; 11,75) 2,7 (1,4; 3,3) 0,05
At к ßj-гликопротеину IgG 12,96 (9; 16) 6,5 (5,0; 8,0) 0,007
At к аннексину IgM 4,562 (3,2; 5,5) 3,1 (2,6; 3,2) 0,005
At к аннексину IgG 6,71 (5,15; 8,5) 5,0 (4,0; 5,3) 0,008
(р = 0,40)). При обследовании во время данной беременности ИППП выявлено не было.
При анализе течения беременности установлено, что достоверных различий группы по наличию преэклампсии не имели. Реактивация вирусной инфекции в 1-й группе зарегистрирована в I триместре у 8 (26,6%), во II - у 18 (60%), в III - 4 (13,3%). При этом у 22 женщин отмечена активация инфекции, вызываемая одним герпесвирусом: ВПГ в 36,6%, ЦМВ в 6,7%, ВЭБ в 30%. У 8 женщин имела место реактивация одновременно двух герпесвирусов: ВПГ + ВЭБ (в 6,7%), ЦМВ + ВЭБ (в 6,7%), ЦМВ + ВПГ (в 13,3%). Обращает на себя внимание достоверно более частая регистрация ОРВИ у женщин 1-й группы - 16 (53,3%) в сравнении со 2-й - 2 (20%) (р = 0,001). Следует отметить тенденцию к частому выявлению косвенных маркеров внутриутробных инфекций при ультразвуковом исследовании в первой группе, таких как изменение количества околоплодных вод (33,3%; р = 0,09), нарушение плодово-плацентарного кровотока (26,7%;р > 0,05), рецидивирующая угроза прерывания беременности с формированием ретрохориальной гематомы (11 (42,3 %) против 2 (20%); р < 0,05).
Проведена оценка гемостазиологических и иммунологических данных у беременных сравниваемых групп во II три-
3 4 5 6 7 Антитела к аннексину IgM
600500-
œ 400-
Ч 300 H
200100-
д=0,784 р=2,16е-06
н-1-1-1-г
3 4 5 6 7 Антитела к аннексину IgM
Рис. 1. Корреляционная зависимость АПТВ и уровня антител к аннексину класса IgM.
Рис. 2. Корреляционная зависимость уровня Д-димеров и антител к аннексину класса IgM.
500-
CL 400-<в S s
Ч 300 4
200-
'CD
г=0,857 р=2е-08
-1-1-1-
5 10 15
Антитела к В2-гликопротеину IgM
Рис. 3. Корреляционная зависимость уровня Д-димеров и антител к р2-гликопротеину класса IgM.
местре (см. таблицу).
Анализ полученных данных показал, что значение активированного парциального тромбопластинового времени достоверно удлинялось в 1-й группе в сравнении со 2-й на фоне повышения уровня антител к аннексину IgM (r = 0,71) (рис. 1). Указанные изменения свидетельствуют о циркуляции иммунного антикоагулянта при активации инфекции с образованием повышенного количества антител к эндотелиальным компонентам. Достоверно более частое выявление факторов, приводящих к повреждению эндотелия (антитела к в2-гликопротеину IgM, IgG, к аннексину IgM, IgG) у беременных 1-й группы может свидетельствовать о кофакторной природе антифосфолипид-ных антител, синтезируемых в ответ на вирусное воздействие.
Патологическая тромбинемия наблюдалась при наличии активного течения герпесвирусных инфекций, что подтверждалось повышением уровня следующих показателей: Д-ди-меры 420 (387; 477) нг/мл, РФМК 11,2 (10,0; 13,0) мг/100 мл в сравнении с группой контроля, где уровень Д-димеров составил 260 (220; 261) нг/мл, а РФМК 8,4 (6,0; 11,0) мг/100 мл (р < 0,001 иp = 0,011 соответственно). При этом повышение уровня антител классов IgM к аннексину и к в2-гликопротеину сопряжено с повышением уровня патологической тромбине-мии (r = 0,78 и r = 0,86 соответственно) (рис. 2, 3). Указанные данные являются подтверждением развития тромбинемии и изменения внутрисосудистого свертывания крови при активном течении герпесвирусных инфекций.
Выявлено достоверное повышение показателей индуцированной агрегации с АДФ-, адреналин-индукторами в основной группе в сравнении с контролем при подтверждении активного течения вирусной инфекции. Данные изменения указывают на выраженное повышение агрегационной активности тромбоцитов при активном течении герпесви-русных инфекций.
Заключение. На основании полученных данных мы полагаем, что формирование патологической тромбинемии, активация внутрисосудистого свертывания крови, увеличение факторов, приводящих к повреждению эндотелия, наблюдается при активном течении герпесвирусной инфекции, что определяет риск развития акушерской патологии. Лабораторные маркеры эндотелиопатии (антитела к аннексину и ß2-гликопротеину) могут выступать в качестве диагностических признаков активации и прогностических критериев текущей инфекции во время беременности.
ЛИТЕРАТУРА
1. Буданов П.В., Стрижаков А.Н. Этиология, патогенез, диагностика и лечение внутриутробной инфекции. Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. 2010; 9 (3): 61-71.
2. Долгих Т.И., Равдугина Т.Г., Запарий Н.С., Тирская Ю.И., Кадцына Т.В., Белкова Т.Н. и др. Герпесвирусные инфекции и перинатальная патология: Методические рекомендации. Омск; 2011. 54 с.
3. Долгих Т.И., Баринов С.В., Кадцына Т.В., Басин Б.Л. Комбинированная форма тромбофилии на фоне герпесвирусной инфекции в генезе синдрома привычной потери плода. Российский иммунологический журнал. 2012; 6 (1-2): 49-50.
4. Макацария А.Д., Долгушина Н.В. Антифосфолипидный синдром - иммунная тромбофилия в акушерстве и гинекологии. М.: Триада-Х; 2007.
5. Радзинский В.Е., Димитрова В.И., Майскова И.Ю. Неразвивающаяся беременность. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2009.
6. Сидельникова В.М. Привычная потеря беременности. М.: Триада Х; 2005.
7. Сидорова И.С., Шешукова Н.А. Неразвивающаяся беременность. Гинекология. 2006; 8 (3): 4-7.
8. Al-Adnani M., Sebire N.J. The role of perinatal pathological examination in subclinical infection in obstetrics. Best Pract. Res. Clin. Obstet. Gynaecol. 2007; 21 (3): 505-21.
9. Condeiro A. Burkitt's lymphoma related to Epstein-Barr virus infection during pregnancy. Arch. Gynecol. Obstet. 2009; 280 (2): 297-300.
10. Eskild A., Bruu A.L., Jenum P. Epstein-Barr infection during pregnancy and the risk of adverse pregnancy outcome. Br. J. Obstet. Gynaecol. 2005; 112 (12): 1620-4.
11. Garland S.M. Mechanisms, organisms and markers of infection in pregnancy. J. Reprod. Immunol. 2002; 57: 169-83.
12. Regan L., Rai R. Thrombophilia and pregnancy loss. J. Reprod. Immunol. 2002; 55 (2): 163-80.
13. R: A language and environment for statistical computing. R Foundation for Statistical Computing. R Development Core Team. Vienna, Austria. 2010.
REFERENCES
1. Budanov P. V., Strizhakov A.N. The etiology, pathogenesis, diagnostics and treatment of intrauterine infection. Voprosy ginekologii, akusherstva iperinatologii. 2010; 9 (3): 61-71 (in Russian).
2. Dolgikh T.I., Ravdugina T.G., Zapariy N.S., Tirskaya Yu.I., Kadtsyna T.V., Belkova T.N. Herpes virus infection and perinatal pathology: methodical recommendations. Omsk; 2011. 54 p. (in Russian).
3. Dolgikh T.I., Barinov S.V., Kadtsyna T.V., Basin B.L. Combined form of thrombophilia against herpes virus infection in the genesis of the familiar syndrome of fetal loss. Rossiyskiy immunologicheskiy zhurnal. 2012; 6 (1-2): 49-50 (in Russian).
4. Makatsariya A.D., Dolgushina N.V. Antiphospholipid Syndrome - Immune thrombophilia in Obstetrics and Gynecology. Moscow: Triada-X; 2007 (in Russian).
5. Radzinskiy V.E., Dimitrova V.I., Mayskova I.Yu. Non-developing pregnancy. Moscow: GEOTAR-Media; 2009 (in Russian).
6. Sidel'nikova V.M. The usual pregnancy loss. Moscow: Triada-X; 2005 (in Russian).
7. Sidorova I.S., Sheshukova N.A. Non-developing pregnancy. Ginekologiya. 2006; 8 (3): 4-7 (in Russian).
8. Al-Adnani M., Sebire N.J. The role of perinatal pathological examination in subclinical infection in obstetrics. Best Pract. Res. Clin. Obstet. Gynaecol. 2007; 21 (3): 505-21.
9. Condeiro A. Burkitt's lymphoma related to Epstein-Barr virus infection during pregnancy. Arch. Gynecol. Obstet. 2009; 280 (2): 297-300.
10. Eskild A., Bruu A.L., Jenum P. Epstein-Barr infection during pregnancy and the risk of adverse pregnancy outcome. Br. J. Obstet. Gy-naecol. 2005; 112 (12): 1620-4.
11. Garland S.M. Mechanisms, organisms and markers of infection in pregnancy. J. Reprod. Immunol. 2002; 57: 169-83.
12. Regan L., Rai R. Thrombophilia and pregnancy loss. J. Reprod. Immunol. 2002; 55 (2): 163-80.
13. R: A language and environment for statistical computing. R Foundation for Statistical Computing. R Development Core Team. Vienna, Austria. 2010.
Поступила 25.07.13
