CC BY
9
УДК 615.285.7.015.44:612.6.052
Р. А. Рязанова, Т. В. Гафурова
ДЕЙСТВИЕ РОМУЦИДА НА СОМАТИЧЕСКИЕ И ПОЛОВЫЕ КЛЕТКИ МЫШЕЙ
Московский НИИ гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана
Синтез новых пестицидов, рекомендуемых для применения в сельском хозяйстве, обусловливает необходимость своевременного проведения исследований по оценке их биологического действия.
Ромуцид — диэтиловый эфир м-нитрофенилгидрозоно-мезоксалевой кислоты — новый фунгицид, предназначенный для борьбы с мучнистыми гриба"миТ Эмпирическая формула СиН^ЫОб. Мол. масса 309,3.
Целью настоящей работы явилось изучение возможного мутагенного действия ромуцида, выявление его потенциальной опасности для человека.
Экспериментальные исследования проведены на мышах линии ВАЬВ/с методами хромосомного анализа на клетках костного мозга [3] и доминантных летальных мутаций (ДЛМ). Параллельно производился количественный подсчет клеток сперматогенного эпителия подопытных животных [1, 2]. Действие ромуцида изучалось при однократном введении его в дозах 200, 800, 80, 8, 0.8 мг/кг, что соответствует '/г, '/б, '/бо, '/воо и '/вооо ЬО50. Каждая опытная группа включала 6 животных. В клетках костного мозга каждой подопытной мыши анализировали не менее 100 метафаз.
Как видно из табл. 1, ромуцид в дозах '/2, и '/50 ЬО50 индуцирует нарушения хромосом, составившие 8,65, 9,8, 8,79 % против 3,35 % в контроле.
При действии ромуцида в дозе '/500 ЬО50 количество хромосомных нарушений снижалось, хотя разница в сравнении с показателями контрольной группы была еще значимой, и только в дозе 0,8 мг/кг ('/5000 ЬО50) количество нарушений хромосом в опытной группе соответствовало контрольному уровню
Среди хромосомных аберраций наибольший процент составляли одиночные фрагменты, относящиеся к нарушениям хроматидного типа. Наряду с этим регистрировались парные фрагменты и метацентрические образования хромосомного происхождения.
Следовало ожидать, что действие ромуцида на половые клетки мышей подчиняется зависимости доза—эффект. Однако анализ фактических данных показывает парадоксальную ответную реакцию организма. При действии ро-
Таблица I
Цитогенетическое действие ромуцида на клетки костного мозга мышей (при однократном введении)
Виды нарушений Общее количество нарушении
ГС -в- фра гменты
Доза, мг/кг н V а. н X
о с: у однно1 ные 3 о. СЗ н . абс. %
3 с 7. и:
2000 ('/21Л}И) 800 (1/5Щ0) 80 С/» ЬШ 8 (1/5„„ ЬПГ,0) 0,8 (»/зооо ЬО50) 578 632 808 556 724 44 42 43 20 18 4 11 19 8 2 9 6 12 3 50 62 71 40 21 8,65±1 ,37* 9,8±1,4* 8,79:Ы,01* 7,2±1 ¡1* 2,9±0,6
Контроль 775 15 2 3 26 3,35+0,65
муцида в дозах 80 и 8 мг/кг ('/50 и '/500 ЬО50) отмечалось повышение количества сперматоцитов и сперматид по сравнению с 'аналогичными показателями при его действии в дозах 2000 и 80 мг/кг ('/г и '/5 1Л}5о)- Количество сперматогоний при действии ромуцида в дозах 80 и 0,8 мг/кг, наоборот, уменьшалось и составляло соответственно 73,7±9,8 и 90,3± 12,7 против 141,3± 14,7 в контроле (табл. 2).
Сравнительная оценка действия ромуцида на соматические и половые клетки свидетельствует о преимущественной чувствительности последних. Для подтверждения сделанного предположения были проведены дополнительные исследования по оценке действия ромуцида на половые клетки подопытных животных методом ДЛМ.
Животным в течение 2 мес вводилц препарат в дозах
Таблица 2
Изменение морфофункциональных показателей сперматогенеза у мышей при однократном введении ромуцида (количество клеток сперматогенного эпителия • Ю6)
О Я]
сГ п
= ГС
I- *
о о
= с (- & и« е;
н к ^
О * Н
о = с =
и =
а
а О
«з
с < О х
'/2 1£>5о (2000 мг/кг)
М 101,2 12,7 16,3 4,2 87,3
±т 15,3 2,58 7,38 0,91 13,7
/ 1,86 0,1 1,19 1,68 0,9
/5 (800 мг/кг)
М 129 12,6 15,6 5,6 105
±т 22,9 3,48 5,51 1,04 12,5
0,46 0,11 1,35 0,76 0,12
221,7 18,2 1,36
240,5 26,76 0,77
'150 ¿Аю (80 мг/кг)
П р и м е ч а н и е. Здесь и в табл. 2: звездочка — достоверные изменения но сравнению с контролем (Р<0,05).
М 73,7 19,5 26,7 7,2 87,3 214,3
±т 9,88 6,04 5,14 1,14 10,2 16,2
3,52* 0,8 3,05* 0,2 1,02 2,86*
'/50 0 (8 мг1кг)
м 111,2 20,8 18,2 6,4 98 254,6
±т 94,8 3,2 3,3 1,88 3,99 13,6
1 1,48 0,79 1,22 0,2 0,31 0,43
М 90,3 И ,8 6,2 6,2 127,3 244,2
±т 12,7 2,41 1,83 1,48 7,9 11,3
/ 2,5* 1,24 0,29 0,28 1,9 0,74
Контроль
М 141,3 13,3 7,6 6,8 102 270,9
±т 14,73 4,82 1,82 1,15 9,81 28,12
Таблица 3 Частота доминантных летальных мутаций (в %)
Показатель
Количество погибших эмбрионов: до имплантации после имплантации Выживаемость эмбрионов Отношение числа забеременевших самок к числу скрещиваемых, %
'/50, '/500 и '/бооо 1^50. В конце эксперимента подопытных самцов спаривали с интактными самками в соответствии
1 :3. Подсадку производили в течение 6 нед для оценки функционального состояния клеток сперматогенного эпителия на различных стадиях сперматогенеза. О степени мутагенной активности судили по частоте ранней и поздней гибели плодов. Для этого на 19-й день беременности самок вскрывали и подсчитывали количество живых, мертвых, резорбированных эмбрионов, желтых тел беременности. По формулам [2] вычисляли в процентах общее количество погибших эмбрионов, а также количество эмбрионов, погибших в пред- и постимплантационный период. Учитывали процент эффективных скрещиваний (отношение > беременных самок в каждой группе к числу скрещиваемых).
Установлено, что гибель эмбрионов отмечалась в основном в доимплантационный период почти во все сроки скрещивания животных. Наиболее значимые изменения этого показателя регистрировались при действии ромуцида в дозе '/5000 ЬО50. Так, при анализе эмбрионального материала, полученного от интактных самок, скрещенных с подопытными самцами, количество погибших эмбрионов
составило 28,3 % против 18,4 % в контроле. При действии препарата в дозах 80 и 8 мг/кг этот показатель составил соответственно 22,8 и 17,6 % (табл. 3).
Процент погибших эмбрионов в период после имплантации при действии ромуцида в дозах 80 и 0,8 мг/кг был почти одинаковым и составлял соответственно 2,5 и 2,8 против 1,7 в контроле. Низкая выживаемость эмбрнонов наблюдалась также при действии препарата в дозе
0.8.мг/кг (68,9 °/о против 79,9 % в контроле). Мутагенный эффект по частоте ДЛМ проявлялся в основном на ранних постмейотических стадиях сперматогенеза (стерматнды и сперматоцпты).
При оценке эффективных скрещиваний отмечалось значительное снижение числа забеременевших самок по отношению к числу скрещиваемых, наиболее выраженное при действии ромуцида в дезе '/soo LD50 (22,5 % против 92,5 % в контроле).
Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о большей чувствительности половых клеток мышей к действию ромуцида по сравнению с соматическими и необходимости комплексной оценки мутагенного эффекта с использованием генетических и цитогенетнческих методов исследования.
По специфическому мутагенному действию пороговая доза ромуцида установлена на уровне 0,8 мг/кг, что ниже порога общеклннн'-'еского действия (8 мг/кг). При введении соответствующего коэффициента запаса эта доза была использована для гигиенической регламентации содержания ромуцида в объектах окружающей среды.
Литература
1. Иванов 10. В., Доброславская Т. J1.// Гиг. и сан.— 1979. — № 2, — С. 19—24.
2. Малашенко А. М„ Егорова И. К. // Генетика. — 1968. — № I, — С. 21—24.
3. Ford Е. Н„ WooUarn D. //.//Exp. Cell Res.— 1963. — Vol. 32. — P. 320-326.
Поступила 15.01.86
УДК 614.77:615.285.71-074
10. Н. Талакин, Н. Ф. Мотузинский, Л. Т. Волошина ГИГИЕНИЧЕСКОЕ НОРМИРОВАНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ДИУРОНА
В ПОЧВЕ
Донецкий медицинский институт им. М. Горького
^ В связи с накоплением и циркуляцией средств химнче-~ ской защиты растений в окружающей среде все большее значение приобретает проблема их безопасного применения [1, 2, 5]. В современной литературе отсутствуют сведения о нормировании предельно допустимого содержания гербицида днурона в почве.
Диурон — мало растворимое в воде (42 мг/л) кристаллическое светло-серое вещество со слабым запахом. Температура плавления 158—159 °С. Выпускается в виде смачивающегося порошка, содержащего 80 % активного вещества.
Диурон предназначается для борьбы с однолетними злаковыми и двудольными сорняками на посевах хлопчатника, в семечковых цитрусовых садах, виноградниках и ягодных насаждениях, на чайных плантациях.
Целью настоящей работы являлось гигиеническое обоснование ПДК днурона в почве. Исследования выполнены в лабораторных и натурных условиях с использованием химических, физико-химических, бактериологических и статистических методов.
Для определения диурона в объектах окружающей среды (вода, почва, воздух, растения) использован метод тонкослойной хроматографии [4]. Выделение из почвы и под-
счет микроорганизмов выполнены в соответствии с «Методическими указаниями по санитарно-микробиологическому исследованию почв» [3|.
Первым этапом разработки норматива было изучение стабильности диурона в почве. Экспериментальные исследования проводили на почвах легкого механического состава (дерново-слабоподзолнстой и дерново-подзолистой) при различных значениях рН. В почву вносили препарат в количестве 50 мг/кг. Процент разрушения днурона в 1-е сутки составил 12, поэтому остаточные количества препарата определяли на 1, 10, 20, 30, 60 и 120-е сутки. На основании данных, полученных при определении остаточных количеств диурона в почве, рассчитан период полного разрушения этого гербицида (Тот). Оказалось, что диурон наиболее длительно сохраняется в щелочной среде, при этом Т99=1000 сут. Применение препарата в значительных количествах может приводить к загрязнению объектов окружающей среды, в первую очередь почвы. В связи с этим для применения в сельском хозяйстве диурона необходимо нормирование его в ночве.
При изучении влияния днурона на микрофлору и биологическую активность почвы были проведены исследования в лабораторных условиях на черноземной, суглинистой
