CC BY
6
ння каких-либо летучих веществ из парафина (см. рисунок, <?). При газохроматографическом исследовании образцов с покрытием обнаружен только 1 компонент (4), принадлежащий канифоли (см. рисунок, е, г). В тех же условиях анализа при исследовании бумаги (подложки) не обнаружено никаких летучих веществ (см. рисунок, ж). В паровоздушной смеси над гранулами миравитена Д-47-ХА также не найдено летучих веществ, и хроматограмма пара не отличалась от хроматограммы контрольной пробы (см рисунок, з).
Исходя из условий хроматографического анализа и природы исследуемых образцов, найденные компоненты можно отнести к кислородсодержащим соединениям с температурой кипения до 150°С. Эти вещества, вероятно, являются компонентами или примесями эфира канифоли (смоляные кислоты, нейтральные вещества канифоли и др.), содержание которых может достигать 10%. Однако, как было указано выше, глицериновый эфир канифоли малотоксичен и в композиции термоклея его не более 32%. Поэтому эфир канифоли может быть ис!Тользован в термоклее.
Результаты санитарно-химических исследований показывают, ч-сб термоклей марки ТК-2П имеет удовлетворительные органолептические и санитарно-химические свойства.
Однако препятствием для широкого применения клея в пи-«
щевой промышленности является наличие в его составе парафина, не разрешенного Минздравом СССР для контакта с пищевыми продуктами. Основную опасность парафинов для здоровья человека представляют полициклнчс-скне ароматические углеводороды (ПАУ), являющиеся канцерогенными веществами.
Таким образом, термоклей марки ТК-2П может быть рекомендован для склеивания книг, бумаги, картона и т.п., а при условии применения в составе клея парафина «пищевых» марок — для склеивания и в качестве покрытия тары для сухих, сыпучих и водосодержащих (с влажностью до 15%) пищевых продуктов.
Учитывая дефицитность парафина «пищевых» марок, предлагаем определять ПАУ в соответствии с ГОСТом 23683—79 не только в парафине указанных марок, но и в высокоочищениом техническом парафине. При условии отсутствия ПАУ последний можно рекомендовать для использования в композициях клеев и покрытий в количестве не более 20—30 %.
Литература. Гуричева 3. Г.. Бойкова 3. К.. Петрова Л. И — Гиг. и сан., 1973, № 9, с. 99—100. Петрова Л. И., Гуричева 3. Г., Бойкова 3. К. — Пласт, массы, 1973, № 3, с. 62—65.
Поступила 12.11.82
УДК 615.285.7.015.46:612.017.1/.076.9
С. Д. Жамсаранова, Д. Б. Бадмаева, Т. Д. Сперанская
ДЕЙСТВИЕ ГЕРБИЦИДА 2,4-Д (АМИННОИ СОЛИ) НА ИММУНОЛОГИЧЕСКУЮ РЕАКТИВНОСТЬ ЖИВОТНЫХ
Восточно-Сибирский технологический институт, Улан-Удэ
К числу наиболее распространенных и широко применяемых гербицидов относятся хлорпроизводные фенокси-уксусной кислоты. Высокая фитотоксичность и избирательность действия обусловливают повышенный интерес исследователей к этой группе соединений.
Известно, что химические вещества приобретают анти-генность при комплексированни с белками тканей (А. И. Николаев, и др.). Однако экспериментальные данные об анти-телообразованнн, изменении антигенной структуры, образовании аномальных комплексов гербицид — белок в органах при хроническом отравлении гербицидами отсутствуют.
Целью настоящей работы являлось изучение антитело-образования в организме и выявление образовавшихся антигенов в печени крыс при длительном поступлении малых доз амннной соли 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4-ДА).
Опыты выполнены на беспородных крысах-самцах. Гербицид вводили перорвльно по '/100 с помощью зонда в водном растворе ежедневно в течение 7, 15, 24 и 30 дней. На каждом из этих этапов эксперимента в реакциях связывания комплемента (РСК) и пассивной гемагглютина-ции (РПГА). в реакциях преципитации по Оухтерлони в модификации А. И. Гусева и В. С. Цветкова и иммуно-электрофореза по Грабару в модификации Л. А. Зильбера и V. И. Абелева использовали сыворотки крови крыс и водно-солевые экстракты тканей печени, почек, легких.
Исследования проведены на 160 крысах (25 подопытных и 15 контрольных в каждой серии). Полученные данные обработаны статистически с применением критерия Стьюдента.
Для получения антител к гербициду 2,4-ДА был синтезирован искусственный антиген 2,4-Д — человечий сывороточный альбумин (ЧСА). Один из путей получения конъюгатов 2,4-Д-белок — превращение 2,4-Д в реакци-онноспособный хлорангидрид, который в мягких условиях реагирует с водными растворами белков по свободным аминогруппам лизина. Этот способ мы применяли для ко-валентного связывания 2,4-Д с ЧСА. Полученными конъю-гатами с различным содержанием гаптена на одну молекулу белка-носителя иммунизировали кроликов внутримышечно 25 мг/кг 2 раза в неделю в течение 6 нед (О. Ю. Полевая и соавт.). Более активные иммунные сыворотки были получены при иммунизации конъюгатом, содержащим в своей структуре 6 молекул 2,4-Д на 1 молекулу ЧСА. С целью получения антнсывороток к экстрактам из печени подопытных и контрольных крыс иммунизировали кроликов по методу, описанному ранее (В. В. Сперанский и 3. Ф. Балдаева). Сыворотки крови испытывали в РСК и РПГА. Истощающую дозу антигенов подбирали по методу, предложенному Л. А' Зильбером и Г. И. Абелевым. Экстракты из печени и почек исследовались в реакции нм-муноэлектрофореза с иммунной сывороткой к коньюгату 2,4-Д-ЧСА.
Динамика изменения средних титров антител к антигенам печени подопытных и контрольных крыс представлена на рис. 1 и 2. Достоверное повышение титров антител обнаружено на 15—24-е сутки введения препарата (Р<0,05). Противотканевые антитела к антигенам почек и легких выявлялись так же, как в сыворотке крови подопытных и контрольных крыс. Повышение тигров антител к экстрактам почек и легких в сыворотке крови подопытных
Рис. 1. Изменение средних титров гемагглютннирующих антител к антигенам печени контрольных и подопытных крыс, получавших 2,4-ДА.
По оси абсцисс — день опыта, по оси ординат — средний титр: / — опыт; 2 — контроль.
Рис. 2. Изменение средних титров противотканевых антител, выявленных РСК, к антигенам печени контрольных и подопытных крыс, получавших 2,4-ДА.
Обозначения тс же, что на рис. 1.
крыс наблюдалось к 15—24-му дню затравки. Изменение титров противотканевых антител в сыворотке крови контрольных крыс можно, по-вилимому, объяснить наличием 2,4-Д в кормах.
Таким образом, при длительном отравлении крыс гербицидом 2,4-ДА обнаружено повышение титров гемагглютинирующих и комплементсвязывающих антител в сыворотке крони к 15—24-му дню введения препарата к антигенам всех исследованных органов.
Поскольку пестициды — низкомолекулярные соединения — приобретают антнгенность лишь при связывании с макромолекулами, мы попытались выявить подобные комплексы, содержащие в своей структуре гербицид, в РИГА с иммунной сывороткой кролика против искусственного антигена 2,4-Д-ЧСА. Антисыворотка имела титр антител к 2,4-Д-ЧСА 1:4096, а к белку-носителю—1:128. С целью определения противогаптенных антител ставили реакцию торможения пассивной гемагглютинации. При торможении препаратом в концентрации 0,4 мг/мл титр антител снизился до 1:512.
Результаты исследований тканевых антигенов подопытных и контрольных крыс с иммунной сывороткой свидетельствуют о взаимодействии гербицида с белками печени, почек, легких и образовании комплексных антигенов, выявляемых на 15—24-е сутки эксперимента. Следует отметить, что повышение титра антител и частота положительных реакций к антигенам исследованных органов наблюдались в те же сроки, что и С аутосывороткой крови.
Таким образом, полученные нами результаты указывают на образование комплексов гербицид — белок в органах и тканях крыс,' подвергнутых воздействию 2,4-ДА. Обра-зова тииес^крмд^ексныс антигены индуцируют специфический иммунологический ответ организма; увеличение тнт-
I Н:' I -«ПТИЦ»»'! > ll.ll И" ■ • I
ров антител наблюдается на 15—24-й день введения препарата. При осуществлении этих исследований возникла не. обходимость в более полных сведениях об антигенной структуре тканей при воздействии гербицида. Уже сообща^ лось об изменении антигенной структуры, образовании аномальных антигенов в печени мышей и крыс, получав^ ших канцерогены (Т. А. Коростелева). —
Для выявления аномальных антигенов в печени к^ыс подвергнутых воздействию 2,4-ДА, были получены иммун ные сыворотки против антигенов печени подопытных и конт] рольных крыс (титр антител в РПГА 1 :256).
Сыворотка крови кроликов против тканевых антигенов печени подопытных крыс дает положительную реакцию I иммуноэлектрофорезе по Грабару с экстрактами печеш подопытных и контрольных крыс, а сыворотка крови, ис тощенная экстрактами печени контрольных крыс, образуе-полосы преципитации с экстрактами печени подопытные крыс. Дуги преципитации обнаруживались в области а-, (V у-глобулинов только с экстрактами печени крыс, получав ших гербицид в течение 15 дней. Истощенная сывороткг крови кроликов против антигенов печени подопытных крыс исследована в реакции нммуноэлектрофореза с экстрактами из тканей почек и легких крыс, получавших 2,4-ДА. Ре зультаты свидетельствовали об идентичности аномальны) антигенов, выявляемых в области а-глобулинов в экстрак тах печени с антигенами почек подопытных крыс. В экс трактах из легких крыс, подвергнутых воздействию гер бицида, не обнаружено антигенов, идентичных аномал^ым антигенам печени. Таким образом, аномальные антигень печени, образовавшиеся при поступлении гербицида 2,4-ДА выявляются в области а-, 0- и у-глобулинов. Антигены дающие полосу преципитации в области а-глобулинов, не являются тканеспецифическими, так как содержатся и е экстрактах почек подопытных крыс. Тканевые антигены печени также исследованы с кроличьей иммунной сывороткой к коньюгату 2,4-Д-ЧСА в реакции нммуноэлектрофореза. Экстракты кз печени крыс, подвергнутых воздействик 2,4-ДА, вступали во взимодействие с иммунной сывороткой к 2,4-Д-ЧСА и давали дугу преципитации в области у-глобулинов.
Таким образом, аномальные антигенные комплексы пе-| чени, имеющие в своей структуре гербицид, определялись в области у-глобулинов. Антигены, выявляющиеся в области а- и (^-глобулинов, по-видимому, появляются при изме нении иммунологической специфичности белков организма е результате непосредственного токсического действия гербицида на клетки либо повреждения клетки образующимся на ее поверхности комплексом антитело — антиген (А. И. Николаев). Однако не исключены и другие образования аномальных антигенов, включая н синтез с1е поуо. Данных о химической природе и функциональной роли этих антигенов в литературе нами не найдено.
Следовательно, полученные данные указывают на образование противотканевых антител в сыворотках крови крыс при воздейстнн 2,4-ДА. Наибольший иммунный ответ наблюдался к 15—24-му дню введения препарата. Имму-ноэлектрофоретическнй анализ экстрактов из печени подо-' мытных крыс, получавших 2,4-ДА в течение 15 дней, выявил аномальные антигены в области а-, и углобулинов. Антигены печени, дающие полосу преципитации в области Р- и у_гл°булинов, являются тканеспецифическими. Аномальный антиген, обнаруживаемый в области углобулинов и взаимодействующий с антителами к 2,4-Д-ЧСА, пред-| ставляет собой комплекс гербицид — белок.
Литература. Коростелева Т. А. Об изменении тканевых антигенов в процессе экспериментального канцеро-1
генеза. Л., 1966. Николаев А. И. Иммунные реакции при химиотерапии.
Ташкент, 1969.
Полевая О. Ю.. Данилоча II. П.. Рубцова Е. Р. и —1
Хим.-фарм. ж.. 1977, № 4, с. 3—9.
Поступила 13.12.82
